Burada, tekrarlayan intratekal ilaç uygulaması için basit, kullanışlı ve güvenilir bir yaklaşımı temsil eden sıçanlarda intratekal kateterizasyon için modifiye edilmiş bir yöntem sunuyoruz.
Yöntem makalesi
Burada, tekrarlayan intratekal ilaç uygulaması için basit, kullanışlı ve güvenilir bir yaklaşımı temsil eden sıçanlarda intratekal kateterizasyon için modifiye edilmiş bir yöntem sunuyoruz.
İntratekal kateterizasyon, hayvan deneylerinde, özellikle nöropatik ağrı üzerinde yaygın olarak uygulanmaktadır. Bununla birlikte, geleneksel yöntemlerin hala çeşitli sınırlamaları vardır. Bazı araştırmacılar geleneksel yöntemleri geliştirmeye çalışmış olsalar da, mevcut yöntemlerin hala değiştirilmesi gerekmektedir. Burada, sıçanlarda intratekal kateterizasyon için modifiye edilmiş bir yöntem sunuyoruz.
Bu yöntemde 20 cm uzunluğunda paslanmaz çelik tel (0,2 mm çapında), 15 cm uzunluğunda plastik PE10 tüp, kendinden yapılmış bir sızdırmazlık kapağı ve 0,3 cm × 0,5 cm antialerjik bant kullanılır. İntratekal kateterizasyon için modifiye edilmiş yöntemimizin birçok avantajı vardır. İlk olarak, PE10 tüpüne paslanmaz çelik bir tel eklenmesi tüpün elastikiyetini arttırır, intratekal kateterizasyonun başarı oranını artırır, operasyon için gereken alan miktarını azaltır ve lomber omurga çevresindeki dokulara verilen zararı en aza indirir. İkincisi, PE10 tüpünün uzunluğu ameliyattan önce belirlenir ve kateter kalma süresi bir haftadan daha uzun olabilir. Üçüncüsü, PE10 tüpü, hayvan hareket ettiğinde tüp hareketini ve geri çekilmeyi önleyen 4 kez şekil-8 sütür ile sabitlenir. Dördüncüsü, PE10 tüpünü kapatmak için kendi kendine yapılan bir sızdırmazlık kapağı kullanılır, bu sadece beyin omurilik sıvısı sızıntısını önlemekle kalmaz, aynı zamanda PE10 tüpünün tekrar tekrar kesilmesi ihtiyacını da azaltır. Son olarak, PE10 tüpünün ekstrakorporeal ucu, hayvan hareket ettiğinde tüpün geri çekilmesini önleyen bir bantla bağlanır.
Bu yöntem, PE10 tüplerinin yaklaşık% 80'i ameliyattan 28 gün sonra bile yerinde kaldığı için sıçanlarda kateterizasyon başarı oranını artırabilir. Bu nedenle, bu modifiye edilmiş yöntem, tekrarlayan intratekal ilaç uygulaması için basit, kullanışlı ve güvenilir bir yaklaşımı temsil edebilir.
Sıçanlarda intratekal kateterizasyon (subaraknoid kateterizasyon olarak da bilinir), intervertebral boşluktan subaraknoid boşluğa bir kateter yerleştirilmesini içeren bir yöntemdir1. İlaçlar kateter yoluyla doğrudan subaraknoid boşluğa enjekte edilir, bu da araştırmacıların kan-beyin bariyerine nüfuz eden ilaçların etkilerini dikkate almadan ilaçların omurilik üzerindeki etkilerini araştırmalarına yardımcı olur 2,3. Ayrıca, merkezi sinir sistemininmikro çevresini araştırmak için intratekal kateterizasyonu takiben beyin omurilik sıvısı toplanabilir 4,5. İntratekal kateterizasyon için şu anda kullanılan yöntem ilk olarak 1976 yılında Yaksh ve Rudy6 tarafından kurulmuş ve o zamandan beri nörobilim, anestezi ve analjezi, omurilik aracılı kardiyovasküler regülasyon ve özellikle nöropatik ağrı alanlarında hayvan deneylerinde yaygın olarak uygulanmaktadır 2,7. Bununla birlikte, bu yöntemin yüksek omurilik hasarı insidansı, subaraknoid kanama, postoperatif duyusal ve motor disfonksiyon, yüksek postoperatif mortalite ve yüksek nörolojik bozukluk riski gibi çeşitli sınırlamaları vardır 4,5,8,9,10 . Bu sınırlamaların üstesinden gelmek amacıyla, 1996'da Størkson ve ark.11 yılında subaraknoid boşluğun lomber boşluklar yoluyla kateterizasyonu önerilmiş ve daha yüksek bir cerrahi sonrası başarı oranı bildirilmiştir. Özellikle, kalıcı kateterin sabitlenmesi bu yöntemde hala bir zorluktur ve hayvan hareketi nedeniyle kateter retraksiyonu yaygındır, bu da intratekal ilaç uygulamasını elverişsiz hale getirir.
Yukarıdaki sınırlamalar nedeniyle, bazı araştırmacılar 12,13,14,15 delme araçlarını, kateterizasyon yöntemlerini ve kateter fiksasyon yöntemlerini geliştirmeye çalışmışlardır, ancak kullanılan boncukların çapının ölçülmesindeki zorluk, tekrarlanan ponksiyonlara duyulan ihtiyaç ve kateterin kısa uzunluğu nedeniyle mevcut yöntemlerin hala değiştirilmesi gerekmektedir. vesaire.11
İntratekal kateterizasyon için lomber yaklaşıma1 ve merkezi ven kateterizasyonu için Seldinger tekniğine16 göre, mevcut yöntemi basitleştirmek için paslanmaz çelik tel, kendi kendine yapılan bir sızdırmazlık başlığı ve antialerjik bir bant kullanan sıçanlarda intratekal kateterizasyon için bir yöntem geliştirdik. Bu yöntem sayesinde, kateter subaraknoid boşluğa kolayca yerleştirilebilir ve farenin arkasına stabil bir şekilde sabitlenebilir ve tekrarlanan intratekal ilaç uygulaması için tekrarlanan ponksiyonlara duyulan ihtiyaç önlenir.
Burada, sıçanlarda intratekal kateterizasyonun başarı oranını artırabilecek ve ilaçların tekrarlayan intratekal uygulaması için basit, kullanışlı ve güvenilir bir yaklaşımı temsil edebilecek modifiye bir yöntem sunuyoruz.
İntratekal kateterizasyon, Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'ndaki tavsiyelere sıkı sıkıya bağlı olarak gerçekleştirildi ve protokol, Çin Deney Hayvanları Etik Kurulu tarafından onaylandı (No. TJBH15523201). Deneyde erkek Sprague-Dawley (SD) sıçanları kullanıldı. Hayvanların acı ve rahatsızlıklarını en aza indirmek için özen gösterildi.
1. Malzeme ve enstrüman hazırlığı
NOT: Başarılı bir intratekal kateterizasyon için materyal ve aletlerin hazırlanması çok önemlidir.
2. Ameliyata hazırlık
3. Cerrahi
4. Lidokain doğrulama deneyi
İntratekal kateterizasyonun başarı oranını en üst düzeye çıkarmak için bu modifiye yöntem için birkaç kritik ipucu vardır. İlk olarak, iki cilalı ucu olan 20 cm uzunluğunda paslanmaz çelik bir tel hazırlanmalı ve destek olarak PE10 tüpüne yerleştirilmelidir. İkinci olarak, operatör L5-6 intervertebral boşluğu bir pamuk top ile temizledikten sonra ters "V" alanını tamamen açığa çıkarmalı ve L5 sırt sürecini dişli forseps ile kaldırırken intervertebral boşluk başka bir forseps ile genişletilmelidir. Üçüncüsü, PE10 tüpü şekil-8 sütür ile dört kez sabitlenmelidir. Son olarak, PE10 tüpünün ekstrakorporeal ucu bir bantla bağlanmalı ve kendi kendine yapılan bir kapakla kapatılmalıdır.
İntratekal kateterizasyonun başarı oranı ve vertebral cisimlerin etrafındaki dokulara verilen hasar, deneysel sonuçların güvenilirliğini önemli ölçüde etkileyebilir15. Bu nedenle, başarı oranını mümkün olduğunca artırmak ve çevre dokulara verilen zararı azaltmak, hayvan modellerinin ve ilgili deneylerin oluşturulmasında çok önemlidir1. Bu modifiye yöntemde, kılavuzluk için PE10 tüpüne paslanmaz çelik bir tel yerleştirilir, bu da tüpün elastikiyetini arttırır ve intratekal kateterizasyonun başarı oranını artırır. Ayrıca, bu modifiye yöntemle ameliyat için gereken alan miktarı azaltılır ve bel omurgası çevresindeki dokulara verilen hasar en aza indirilir, çünkü çevre dokular künt olarak ayrılır, ancak kesilmez. Buna karşılık, daha önce bildirilen yöntem11'de, delme sırasında direnci azaltmak için 20 G'lik bir kılavuz kanül kullanılır ve dokulara zarar verebilecek tekrarlanan delme işlemine sıklıkla ihtiyaç duyulur. Ek olarak, daha önce bildirilen yöntemde, PE10 tüpünün çapını küçültmek için, ılık suya (60 °C) daldırılır ve daha sonra bir uçtan orijinal uzunluğun yaklaşık% 150'sine kadar gerilir, bu da tüp çapının tutarlılığını sağlayamayabilir ve bu nedenle beyin omurilik sıvısının sızmasına neden olabilir, çünkü 20G kılavuz kanülünün çapı, gerilmiş PE10 tüpününkinden yaklaşık iki kat daha büyük veya ona eşittir. Ayrıca, yöntemimizde, bel fonksiyonu büyük ölçüde korunur ve bu da cerrahinin sonraki deneylerin sonuçları üzerindeki etkisini önler. Bu sonuçlar Xu ve ark.2 tarafından bildirilenlerle tutarlıdır.
Daha önce bildirilen yöntem11'de, tüp delinme bölgesinin etrafındaki bölgeye sabitlenirse, PE10 tüpünün uzunluğu yaklaşık 14 cm'dir, ancak kateterin kalma süresi bu koşullar altında genellikle 7 günden daha kısadır (veya tüp sıçan tarafından vücuttan çıkarılır). PE10 tüpünün uzunluğu, tüp boynun arkasına sabitlenmişse yaklaşık 28 cm'dir, bu da yöntemimizde kullanılan PE10 tüpünden (15 cm) önemli ölçüde daha uzundur. Størkson ve ark.11 tarafından bildirilen protokolü takiben boncuklar oluşturulmuş olsa da, bazı tüpler vücuttan çıkarıldı ve tüplerin sadece yaklaşık% 65'i ameliyattan 7 gün sonra hala yerine sabitlendi, bu da sonraki deneylerin sonuçlarını önemli ölçüde etkiledi. Bizim yöntemimizde PE10 tüpü şekil-8 sütür ile 4 kez fikse edilmekte ve PE10 tüpünün ekstrakorporeal ucu bir bant ile bağlanarak yer değiştirme ve retraksiyon ihtimali azaltılmaktadır. Yöntemimizi takiben, ameliyattan 7 gün sonra tüplerin yaklaşık %85'i yerinde kaldı ve ameliyattan 28 gün sonra tüplerin yaklaşık %80'i yerinde kaldı.
Daha önce bildirilen yöntem11'de, intratekal kateterin ekstrakorporeal ucu her ilaç uygulaması için kesilmelidir. Bununla birlikte, ilaçların tekrarlanan intratekal uygulaması, kateterin kalma süresini kısaltabilir ve bu da ilaçların intratekal uygulamasını elverişsiz hale getirir. Bu nedenle, yöntemimizde, günde bir kez etanol ile sterilize edilen PE10 tüpünü kapatmak için kendi kendine yapılan bir kapak kullanılır. Bu sadece beyin omurilik sıvısının sızmasını önlemekle kalmaz, aynı zamanda ilaçların intratekal uygulaması için PE10 tüpünün tekrar tekrar kesilmesi ihtiyacını azaltır ve ilaçların etkili bir şekilde verilmesini sağlar.
Modifiye edilmiş yöntemin ve daha önce bildirilen yöntemin avantajları ve dezavantajları Tablo 1'de özetlenmiştir. İlk olarak, modifiye yöntem için, PE10 tüpünde paslanmaz çelik tel kullanılması, tüpün elastikiyetini arttırır ve intratekal kateterizasyonun başarı oranını iyileştirir, operasyon için gereken alan miktarı azalır ve lomber omurga çevresindeki dokulara verilen hasar en aza indirilir. Daha önce bildirilen yöntemde, direnç hissedilene kadar 20G'lik bir kılavuz kanül yerleştirilir ve sıklıkla tekrarlanan ponksiyona ihtiyaç duyulur, bu da dokularda hasara neden olabilir. Ek olarak, bir uçtaki PE10 tüpü, uzunluğu orijinal uzunluğunun yaklaşık% 150'sine ulaşana kadar gerilir, bu da beyin omurilik sıvısı sızıntısına neden olabilir, çünkü 20G kılavuz kanülünün çapı, gerilmiş PE10 tüpününkinden 2 kat daha büyük veya ona eşittir. İkincisi, modifiye yöntemde, PE10 tüpünün uzunluğu ameliyattan önce belirlenir ve kateterin kalma süresi bir haftadan daha uzun olabilir. Daha önce bildirilen yöntemde, PE10 tüpünün uzunluğu, delinme bölgesinde sabitlenirse yaklaşık 14 cm'dir, ancak kateterin kalma süresi genellikle 7 günden kısadır, çünkü tüp sıçan tarafından vücuttan çekilmeye karşı hassastır; PE10 tüpünün uzunluğu, boynun arkasına sabitlendiği takdirde yaklaşık 28 cm'dir, bu da yöntemimizde kullanılan tüpün uzunluğundan önemli ölçüde daha uzundur. Üçüncüsü, modifiye yöntemde, tüp hareketini ve geri çekilmeyi önlemek için PE10 tüpü 4 kez şekil-8 sütür ile sabitlenir; PE10 tüpünü kapatmak için kendi kendine yapılan bir kapak kullanılır, bu sadece beyin omurilik sıvısının sızmasını önlemekle kalmaz, aynı zamanda PE10 tüpünün tekrar tekrar kesilmesi ihtiyacını da önler. Daha önce bildirilen yöntemde, tutarlı bir çapa sahip boncuklar elde etmek zordur, boncuklar oluşturulduğunda PE10 tüpünün yer değiştirmesi yaygındır ve genellikle PE10 tüpünün tekrar tekrar kesilmesi gerekir. Son olarak, modifiye yöntemde, PE10 tüpünün ekstrakorporeal ucu, tüpün hareket sırasında geri çekilmesini önleyen bir bant ile bağlanır. Bununla birlikte, önceki yöntemde, boncuklar PE10 tüpünün geri çekilmesini güvenilir bir şekilde önleyemez, çünkü tutarlı bir çapa sahip boncuklar elde etmek zordur.
Genel olarak, intratekal kateterizasyon için bu modifiye yöntem aşağıdaki avantajlara sahiptir. İlk olarak, PE10 tüpünde paslanmaz çelik tel kullanılması, tüpün elastikiyetini arttırır ve intratekal kateterizasyonun başarı oranını iyileştirir, operasyon için gereken alan miktarı azalır ve lomber omurga çevresindeki dokulara verilen hasar en aza indirilir, bu da lomber fonksiyonu mümkün olan en üst düzeyde korur ve cerrahinin sonraki deneylerin sonuçları üzerindeki etkisini önler. İkinci olarak, PE10 tüpü şekil-8 sütür ile 4 kez sabitlenir, bu da tüp hareketini ve hareket sırasında geri çekilmeyi önler. Üçüncüsü, PE10 tüpünü kapatmak için kendi kendine yapılan bir sızdırmazlık kapağı kullanılır, bu sadece beyin omurilik sıvısı sızıntısını önlemekle kalmaz, aynı zamanda PE10 tüpünün tekrar tekrar kesilmesi ihtiyacını da önler. Kateterin tekrar tekrar kesilmesi kateteri kısaltabilir ve bu da ilaçların verilmesini elverişsiz hale getirir. Son olarak, PE10 tüpünün ekstrakorporeal ucu, tüpün hareket sırasında geri çekilmesini önleyen antialerjik bir bantla bağlanır.
Bununla birlikte, bu modifiye intratekal kateterizasyon tekniğinde bazı sınırlamalar vardır. İlk olarak, ameliyattan sonra, PE10 tüpünün ekstrakorporeal ucuna zarar vermemek için sıçanların ayrı ayrı (kafes başına bir tane) barındırılması gerekir. İkincisi, sonraki deneylerden önce intratekal lidokain enjeksiyonundan sonra 5-7 gün boyunca iyileşme gereklidir.
Sonuç olarak, intratekal kateterizasyon için bu modifiye edilmiş yöntem, ilaçların tekrarlayan intratekal uygulaması için yararlı bir araç olarak hizmet edebilir ve deneylerin süresini kısaltmak için basit, kullanışlı ve güvenilir bir yol olabilir.
Bu makalenin yazarları, herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan eder.
Bu çalışma, Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 81971042) ve Şanghay Hongkou Bölge Sağlık Komisyonu'nun Kilit Destek Uzmanı Projeleri (No. HKZK2020A06).
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1 cc şırınga | Jiangxi Hongda Medical Equipment Co., Ltd | 1 cc | |
| 22 gauge ve süreler; 1 "iğneler | Jiangxi Hongda Medical Equipment Co., Ltd | 22G | |
| 23 ölçü ve süreler; 1" iğneler | Jiangxi Hongda Medical Equipment Co., Ltd | 23G | |
| 25 & L Hamilton Şırıngalar | Shanghai Bolige Co., Ltd | 0.31mm 25 & L | |
| 4-O MERSILK EMİLMEYEN SÜTÜR | ETİKON | SA83G | |
| 50 mL Corning Santrifüj Tüpleri 3 cm çap | 430820 | CORNING | |
| Epidural kateter ve konektör | Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd | normal tip | |
| Gavage aparatı | Şangay Bolige Co., Ltd | 8 # | |
| PE-10 Mirco Tıbbi Boru | BB31695-PE / 1 | Scientific Commodities, Inc | |
| Neşter kolu ve # 10 bıçaklar | Jiangsu Songxin Medical Equipment Co., Ltd | 125mm | |
| Makas | Jiangsu Songxin Medical Equipment Co., Ltd | 100mm | |
| Sprague-Dawley (SD) sıçanlar | Şangay BK / KY Biotechnology Co., Ltd | Erkek | |
| Paslanmaz çelik tel 0.2 mm çap | Dongguan Jiazhi Metal Ürünleri Teknolojisi ve Tic. Ltd. Şti. | 0,2 mm & nbsp; & kez; 1m | |
| Dişli forseps | Jiangsu Songxin Medical Equipment Co., Ltd | 18cm | |
| URGO ipek bant | URGO | 1.25cm > 9.1m |
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste