Bu çalışma iki önemli deneysel teknik sunmaktadır: yara kapanmasını değerlendirmek için bir murin yara modelinin oluşturulması ve hücresel canlılığı korumak için murin derisinden tek hücreli süspansiyonların hazırlanması.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fare Yara Modelleri ve Tek Hücre Süspansiyonlarının Hazırlanması
Bu makalede
Özet
Özet
Akut tam kat deri yaralanmalarının yönetimi klinik uygulamada önemli bir zorluk teşkil etmektedir. Çeşitli hücre popülasyonlarını ve karmaşık yara mikro çevresini içeren yara iyileşmesinin karmaşıklığı, geleneksel deneysel yaklaşımlar kullanılarak tedavi etkilerinin ve bunların etkileşimlerinin değerlendirilmesini zorlaştırır. Tek hücreli transkriptom dizileme teknolojisi, yara iyileşmesi sırasında hücresel fonksiyonların ve mekanizmaların anlaşılmasında devrim yaratmıştır. Bununla birlikte, fare yara modelleri oluşturma metodolojilerindeki değişkenlik, deneysel sonuçları etkileyebilecek kafa karıştırıcı faktörleri ortaya çıkarmaktadır. Ayrıca, fare deri dokularını ayırma süreci, doğru transkriptom dizilimi için yüksek kaliteli tek hücreli süspansiyonlara olan kritik ihtiyacı vurgulayan önemli teknik engeller sunar. Bu nedenle, bu çalışma, sonraki sıralama sonucunu etkileyebilecek değişkenleri ortadan kaldırırken, yara kapanmasındaki değişiklikleri doğru bir şekilde değerlendirmek için fare yara modellerinin yapısını optimize etmeyi amaçlamaktadır. Ek olarak, tek hücreli süspansiyonların hazırlanması, maliyet ve etkinliği optimize etmek için hem enzim hazırlama protokolleri hem de test kiti protokolleri kullanılarak gerçekleştirildi.
Giriş
Fare, insanlara son derece homolog genetik dizilimi, hızlı üremesi, maliyet etkinliği ve yönetilebilir boyutu1 nedeniyle araştırmalarda yaygın olarak tanınan bir hayvan modelidir. Bununla birlikte, fareler ve insanlar arasında cilt yapısında farklılıklar vardır. Fareler, cildin kasılmasına katkıda bulunan ve bu türde yara iyileşmesinde çok önemli bir rol oynayan belirgin bir kutanöz zar tabakasına sahiptir. Buna karşılık, insan yara iyileşmesi öncelikle yeniden epitelizasyon ve granülasyon dokusu oluşumunu içerir1.
Deri yapısındaki bu türler arası farklılıklara rağmen, fare modeli yara onarımı....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm prosedürler, Çin'deki Çin PLA Genel Hastanesi Yedinci Tıp Merkezi'nin Etik Komitesi tarafından onaylandı. 6 haftalık erkek C57/BL6 fareler kullanıldı.
1. Fare yara iyileşme modeli
- Hayvan gruplaması
- Fareleri rastgele deney ve kontrol gruplarına atayın (her biri 6 adet). Ev fareleri, 23-25 °C'de tutulan sıcaklık, %50-60 nem ve 12 saatlik aydınlık-karanlık döngüsü ile belirli bir patojen içermeyen (SPF) hayvan tesisinde.
- Farelere standart yiyeceklere ve otoklavlanmış musluk suyuna sınırsız erişim sağlayın.
- Ameliyat öncesi hazırlık
- Bir sınırlayıcı kulla....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Prosedürün birden fazla varyasyonu araştırılmıştır. Yara iyileşme sürecine minimum düzeyde müdahale ettikleri ve yara bütünlüğünü kaşınma ve dikiş gibi etkilerden korudukları için damgalama protokolleri tercih edilmiştir. Bu yaklaşımın amacı, sonraki sekanslama aşaması için tek hücre düzeyinde gürültü oluşmasını önlemektir. Farelerin her iki yanına yara oluşturulması, fare derisinin doğal elastikiyeti nedeniyle yara alanında belirgin farklılıklara yol açmıştır (Şekil 3A,B). .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Protokolün başarısı için birkaç önemli adım gerekliydi. Bu adımlar, kapsamlı tıraş ve temizlik yoluyla yara bölgesinin hassas bir şekilde hazırlanmasını, belirli boyut ve derinlikte standartlaştırılmış yaralar oluşturulmasını ve enfeksiyonları izlemek ve uygun tedavileri uygulamak için yara sonrası özenli bakımı içeriyordu. Bu prosedürlerin standardizasyonu, deneysel koşullar arasında tutarlılığı sağladı ve böylece sonuçların güvenilirliğini ve tekrarlanabilirliğini artırdı10.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.
Teşekkürler
Bu araştırma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı tarafından finanse edilmiştir (#82373494).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 75 Alcolchol | Liuhe | JIUJING500ML | |
| C57 / BL6J fareler | Charles River Laboratories | ||
| Kollajenaz D + Dispase II | Roche | 11088858001 | |
| Kollajenaz I | Roche | 5349907103 | |
| Kollajenaz IV | Roche | 5267439001 | |
| Pamuklu Çubuklar | Haishi | MIANQIAN | |
| Ölü Hücre Temizleme Kiti | Miltenyi Biotec | 130-090-10 | |
| DNase I | Roche | 10104159001 | |
| gentleMAC Ayrıştırıcı | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
| Tıbbi naylon iplik | Jinlong | HM507 | |
| Çoklu Doku Ayrışma Kiti 1 | Miltenyi Biotec | 130-110-201 | |
| yumruk biyopsi iğnesi | Integra Miltex | ||
| kırmızı kan hücresi lizis çözeltisi | Miltenyi Biotec | 130-094-183 | |
| Cerrahi Makas | Jinglu | JIANDAO | |
| Beyaz vazelin | Shangyuan | BAIFANSHILIN |
Kaynaklar
- Zomer, H. D., Trentin, A. G. Skin wound healing in humans and mice: Challenges in translational research. J Dermatol Sci. 90 (1), 3-12 (2018).
- Wu, J., Landén, N. X. Investigation of skin wound healing using a mouse model. Meth Mol Biol. 2154, 239-247 (....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
