Yöntem makalesi

Allogreft Rejeksiyon Çalışmaları için Hepaticoureerostomi Kullanan Heterotopik Yardımcı Tüm Karaciğer Sıçan Nakli Modeli

1.3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/66516

⸱

8 Mart 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, School of Medicine and Public Health, University of Wisconsin-Madison, 2Department of Surgery, Division of Plastic and Reconstructive Surgery, University of Wisconsin, 3Department of Pathology and Laboratory Medicine, School of Medicine and Public Health, University of Wisconsin-Madison, 4UW Carbone Cancer Center, 5William S. Middleton Memorial Veterans' Hospital

Bu makalede

Özet

Burada tarif edilen sıçan heterotopik yardımcı karaciğer nakli protokolü, hepatik allogreft rejeksiyon mekanizmalarını araştırmak için pratik bir araştırma aracı sunmaktadır. Bu model, sıçanlarda ortotopik karaciğer naklinin cerrahi engellerini ve hayvan stresini hafifletmeye yardımcı olur.

Özet

Küçük hayvan nakli modelleri, klinik öncesi çalışmalarda uygulanabilir terapötik müdahaleleri araştıran organ toleransı çalışmaları için vazgeçilmezdir. Sıçan karaciğer nakli (LTx) protokolleri tipik olarak, alıcıların doğal karaciğerinin çıkarıldığı ve bir donör karaciğeri ile değiştirildiği bir ortotopik model kullanır. Teknik olarak zorlu olan bu cerrahi işlem, ileri mikrocerrahi beceriler gerektirir ve uzun anhepatik ve alt vücut iskemi süreleri ile daha da komplike hale gelir. Bu, anhepatik veya alt vücut iskemi süresi olmadan daha hızlı gerçekleştirilebilen daha az karmaşık bir heterotopik yöntemin geliştirilmesine yol açtı ve alıcı hayvan için ameliyat sonrası stresi azalttı.

Bu heterotopik LTx protokolü iki ana adım içerir: karaciğerin donör sıçandan çıkarılması ve tüm karaciğerin alıcı sıçana nakledilmesi. Donör karaciğerin eksizyonu sırasında, cerrah supra-hepatik vena kava (SHVC) ve hepatik arteri (HA) bağlar. Alıcı tarafta, cerrah sol böbreği çıkarır ve donör karaciğeri portal ven (PV), infra-hepatik vena kava (IHVC) ve safra kanalı böbrek damarlarına bakacak şekilde konumlandırır. Ayrıca, cerrah alıcının renal venini karaciğerin IHVC'si ile uçtan uca anastomoz eder ve bir stent kullanarak PV'yi renal arter ile arteriyalize eder. Safra kanalını alıcının üreterine anastomoz ederek safra drenajı için bir hepaticoureterostomi kullanılır ve safranın mesane yoluyla boşaltılmasına izin verir.

Transplantasyon süresi ortalama 130 dk, soğuk iskemi süresi 35 dk ve sıcak iskemi süresi 25 dk'dan azdı. Sinjeneik nakillerden elde edilen yardımcı karaciğerin hematoksilen ve eozin histolojisi, nakilden 30 gün sonra önemli parankimal değişiklik olmaksızın normal hepatosit yapısı gösterdi. Buna karşılık, nakil sonrası 8 günlük allojenik greft örnekleri, Banff Şeması rejeksiyon aktivite indeksi skoru 9 olan geniş lenfositik infiltrasyon gösterdi. Bu nedenle, bu LTx yöntemi, ortotopik LTx'e alternatif düşük bir morbidite reddetme modelini kolaylaştırır.

Giriş

Küçük hayvan LTx, karaciğer reddi mekanizmalarını araştırmak için paha biçilmez bir modeldir. Sıçanlarda portal ven arteriyalizasyonu ile heterotopik yardımcı karaciğer nakli (HALT-PVA), 1968'de Lee ve Edgington1tarafından, aşılanmış bir yardımcı karaciğeri yeniden vaskülarize etmek için bir alıcının renal venini ve arterini kullandıklarını bildirdiklerinde tanıtıldı. Daha sonra, Hess ve ark.2, donör safra kanalı bağlantısını yeniden yapılandırmanın yanı sıra doğal ve donör karaciğer boyutunu azaltarak doğal ve yardımcı karaciğerler arasındaki fonksiyonel rekabetin azaltılması ile protokolü geliştirdi ve bu da uzun süreli greft sağkalımı ile sonuçlandı. Manşet anastomozu 3,4'ün eklenmesiyle daha fazla iyileştirme yapıldı ve Schleimer ve ark.5, fizyolojik portal akışı elde etmek ve greftin hiper veya hipo-perfüzyonunu önlemek için kan akışını düzenlemek için en uygun stent çapını belirledi. Diğer araştırmacılar, greft kan temini için splenik6 veya ortak iliak7 arteri kullanarak yöntemde önemli değişiklikler geliştirirken, bazıları yardımcı karaciğer greftini sağlamak için sadece venöz kan8 veya hepatik arter9 yoluyla sadece arteriyel kan kullanan modeller geliştirdi.

Bu çalışma, doğal karaciğerden gelen fonksiyonel rekabetin allogreft reddine müdahale etmeyeceğini varsaymıştır, bu nedenle, doğal veya yardımcı karaciğerde herhangi bir boyut azalması içermeyen akış regülasyonlu Schleimer model10'a dayalı bir protokol geliştirdik. Grefti bulmak için alıcının sol tarafı seçildi çünkü alıcının böbrek ve donör karaciğer damarları arasında optimal oryantasyon sağladı. Başlangıçta, hepatikoduodenostomi yoluyla biliyer rekonstrüksiyon girişiminde bulunduk, ancak bu denemeler Schleimer'in "safra drenajının karaciğer transplantasyonunun Aşil topuğu olduğu" iddiasını doğruladı10. Bu, safra kanalının, alıcıların üreteriyle bir stent kullanılarak uçtan uca anastomoz edildiği ve safranın mesane yoluyla boşaltılmasına izin veren yeni bir tekniğin geliştirilmesine yol açtı. Hepatikureterostomi kullanmanın kayda değer bir yararı, greft karaciğer işlevselliğinin idrarı gözlemleyerek günlük olarak izlenebilmesidir; Safra üreten bir karaciğer grefti, idrarı parlak sarı renkte renklendirir. Şekil 1 , HALT-PVA yönteminin şematik genel bakışını temsil etmektedir.

Heterotopik sıçan LTx'e göre önemli bir avantajı, heterotopik alıcılar için daha hızlı ve daha kolay iyileşmeye izin veren herhangi bir anhepatik veya total alt vücut iskemi zamanının olmaması ile ilgilidir. Ek olarak, ortotopik yöntemleri kullanan LTx immünolojik çalışmaları, genellikle deneysel bir son nokta olarak alıcının ciddi şekilde reddedilmesine veya ölümüne dayanır, bu da allogreftin reddedilme nedeniyle çalışmayı durdursa bile hayvanın sağlıklı kaldığı heterotopik nakillerde geçerli değildir. Heterotopik yöntemin bu özelliklerinin her ikisi de, araştırma hayvanlarının yaşadığı acı, ıstırap ve sıkıntıyı en aza indirmek ve refahlarını iyileştirmek için bir çerçeveyi teşvik eden uluslararası 3R'nin girişiminin (Değiştirme, Azaltma ve İyileştirme)11 ilkelerini desteklemektedir.

Burada bildirilen HALT-PVA modeli, klinik öncesi çalışmalarda hepatik allogreft reddi mekanizmalarını araştırmak için pratik ve güvenilir bir yöntemdir. Bu yararlı deneysel teknik, sıçanlarda ortotopik LTx'in önemli cerrahi taleplerinin ve hayvan stresinin üstesinden gelmeye yardımcı olur. Gelecekte, hepatik allogreft reddini baskılamak için yeni hedefler ve terapötik stratejiler araştırırken akut immün rejeksiyon mekanizmalarını araştırmak için bu yöntemi kullanmayı planlıyoruz.

Protokol

Hayvanlar, Wisconsin Üniversitesi (UW)-Madison Tıbbi Araştırma Enstitüsü'ndeki hayvan bakım tesislerinde kurumsal yönergelere uygun olarak belirli patojen içermeyen koşullarda yetiştirildi ve barındırıldı. Çalışma protokolü (No. M006022), UW Tıp ve Halk Sağlığı Okulu'ndaki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı ve tüm hayvanlara etik olarak muamele edildi.

1. Hayvanlar

  1. Donör sıçan olarak 205-235 g ağırlığındaki yetişkin Lewis dişi sıçanları ve 250-280 g ağırlığındaki Lewis erkeklerini kullanın. Alıcı olarak 365-420 g ağırlığındaki yetişkin erkek Lewis ve Brown Norway sıçanlarını kullanın.
  2. Lewis donörlerini Lewis alıcılarına naklederek sinjeneik nakiller gerçekleştirirken, allojenik nakillerde Brown Norway alıcılarına nakledilen Lewis donörleri kullanıldı.
  3. Tüm ameliyatları çift kafalı mikroskop kullanarak iki kişi tarafından gerçekleştirin.

2. Yardımcı karaciğer donörü tedarik prosedürü

  1. Donör sıçanı bir indüksiyon odasında% 5 izofluran inhalasyonu ile uyuşturun. Sıçanın ağırlığını kaydedin ve karnı elektrikli bir kesme makinesiyle tıraş edin.
  2. Fareyi, burnu bir anestezi konisi içinde olacak şekilde ısıtılmış bir ameliyat pedi üzerinde sırtüstü pozisyonda konumlandırın ve uzuvları bantla hareketsiz hale getirin. Karnı% 75 alkolle dezenfekte edin ve% 2'ye düşürün.
  3. Makas kullanarak pubisten ksifoide kadar uzunlamasına bir orta hat derisi ve kas kesisi yapın. Boyuna insizyonun orta noktasına yakın, yanal olarak sola ve sağa uzatın, ardından karın duvarının her iki tarafına ve ksifoid işlemine ekartörler takın.
  4. Nemli pamuklu çubuklar kullanarak, karaciğere bağlı gastro bağları kesmek için yaylı makas kullanırken bağırsakları karnın sol tarafına geri çekin, ardından bağırsakları nemli gazlı bez altında hareketsiz hale getirin. Karaciğeri ılık tuzlu su ile nemlendirilmiş küçük bir steril gazlı bez ile örtün.
  5. Karaciğeri geri çekmek ve falsiform, üçgen, hepatogastrik ve hepatoduodenal bağları incelemek için nemli pamuklu çubuklar kullanın. Daha sonra, bipolar forseps ile koterize edin ve para-özofagus damarlarını sol lateral ve anterior kaudat lob arasında bölün.
  6. Açılı forseps veya iğne tutucular kullanarak, diyaframın altındaki SHVC'nin arkasına diseksiyon yapın, ardından SHVC'nin altına 5-0 ipek sütür geçirin ve daha sonra kullanmak üzere gevşek bir şekilde çift düğüm atın.
  7. İnferior sağ lateral lobu yukarı doğru çekin, bağı kesin ve nemli gazlı bez altında hareketsiz hale getirin. IHVC'yi retroperitoneal dokudan sağ renal ven'e kadar izole edin ve sağ adrenal veni IHVC'ye mümkün olduğunca yakın 6-0 ipek sütür ile bağlayın. Bu damarı daha sonra greft çıkarıldığında bölün.
  8. 27 G'lik bir hidrodiseksiyon iğnesi kullanarak (Şekil 2A), PV'yi çevredeki bağ dokusundan ayırın ve 7-0 ipek sütür kullanarak bağlayarak ve bölerek pilor ve dalak damarlarından ayırın.
  9. İzole edin, 6-0 ipek sütür ile bağlayın ve ortak hepatik arteri PV'nin altından geçtiği yere yakın bir yere bölün.
  10. Safra kanalının etrafındaki yağ dokusunu mümkün olduğunca koruyarak gastroduodenal arterin dallanmasında safra kanalını 5-0 ipek sütür ile bağlayın; Özellikle, toplam uzunluğu mümkün olduğu kadar kısa tutarken safra kanalını uygun hepatik arterden ayırmaktan kaçının.
  11. Yaylı makas kullanarak, ligasyonun proksimalindeki safra kanalının duvarında küçük bir kesi yapın. Safra kanalı lümenine 0,0215 "çapında ve 5 mm uzunluğunda bir poliimid boru stenti yerleştirin ve 6-0 ipek sütürle sabitleyin, sütürün bir ucunu daha sonra kullanmak üzere uzun bırakın. Safra kanalını 5-0 ve 6-0 ligasyonları arasında keserek bölün.
  12. Anastomoz sırasında damarları hizalamaya yardımcı olmak için IHVC ve PV'nin üst tarafını cerrahi bir boya kalemi ile işaretleyin, ardından portal veni mümkün olduğunca karaciğerin distalinde bir mikro damar klempi ile klempleyin.
  13. Mikro kelepçenin proksimalindeki PV'ye 26 G iğneli 20 mL'lik bir şırınga yerleştirin ve karaciğeri 10-15 mL buz gibi soğuk heparinize salin ile perfüze edin; aynı anda, IHVC'yi yaylı makas kullanarak sağ böbrek damarına mümkün olduğunca yakın bölün.
  14. PV'yi mikro klemp proksimaline diseke ederek, daha önce SHVC etrafına yerleştirilmiş 5-0 sütürü sıkarak ve intratorasik vena kava'yı kesmek için diyaframı diseksiyon yaparak yaylı makas kullanarak karaciğeri eksize edin.
  15. Karaciğerin arkasında kalan bağları diseke ederek devam edin ve daha önce bağlanmış adrenal veni bölün. Eksize edilen karaciğeri buz üzerinde soğuk tuzlu suya yerleştirin.

3. Yardımcı karaciğer alıcı nakli prosedürü

  1. Alıcı sıçanı bir indüksiyon odasında% 5 izofluran inhalasyonu ile uyuşturun. Sıçanın ağırlığını kaydedin ve karnı elektrikli bir kesme makinesiyle tıraş edin.
  2. Fareyi, burnu bir anestezi konisi içinde olacak şekilde ısıtılmış bir ameliyat pedi üzerinde sırtüstü pozisyonda konumlandırın ve uzuvları bantla hareketsiz hale getirin. Bir göz kayganlaştırıcı uygulayın, karnı% 75 alkolle dezenfekte edin ve izofluranı% 2'ye düşürün.
  3. Makas kullanarak, pubisten ksifoide uzunlamasına bir orta hat derisi ve kas kesisi yapın, ardından karın duvarının her iki tarafına ekartörler takın.
  4. Nemli pamuklu çubuklar kullanarak, bağırsakları karnın sağ tarafına geri çekin ve nemli gazlı bezle örtün. Mideyi, dalağı ve karaciğeri kaplamak için başka bir nemli gazlı bez uygulayın ve sol böbrek ve böbrek damarlarını açığa çıkarın.
  5. 27 G'lik bir hidrodiseksiyon iğnesi ve künt uçlu forseps kullanarak, sol böbrek damarını böbrek arterinden ayırın, her iki damardan yağ ve bağ dokusunu dikkatlice çıkarın.
  6. Gonadal ve adrenal damarları izole edin ve geçici olarak böbrek damarına proksimalde bağlamak için 6-0 ipek kullanın. Bipolar forseps kullanarak, aort / VC ve böbrek arasındaki renal ven ve arteri izole eden tüm mikro yan dalları koterize edin.
  7. Üreteri alt kutupta 6-0 ipek sütür ile harekete geçirin ve bağlayın. Anastomoz sırasında damarları yönlendirmeye yardımcı olmak için renal ven ve arteri cerrahi bir boya kalemi ile işaretleyin ve bükülme olmadığından emin olun.
  8. Renal arteri ve renal veni, aort ve VC'ye mümkün olduğunca yakın bir mikrodamar klempi ile klempleyin. Renal arteri, damar çatallanmasını hemen geçecek şekilde yaylı makasla kesin ve renal veni VC ile böbrek arasında yaklaşık yarıya kadar bölün. Sol böbreği çevredeki bağ dokusundan mobilize edin ve çıkarın.
  9. Kalan tüm kanı çıkarmak için 27 G'lik bir hidrodiseksiyon iğnesi kullanarak her iki damarı heparinize tuzlu su ile yıkayın.
  10. Yaylı makasla, renal arter çatalının çatalında küçük bir balık ağzı açıklığı açarak huni şeklinde bir açıklık açın ve 26 G'lik bir kateterden kesilmiş 8 mm'lik bir stent yerleştirin (Şekil 2B). Stenti 6-0 ipek sütür ile sabitleyin ve dikişin bir ucunu daha sonra kullanmak üzere uzun bırakın.
  11. Donör karaciğeri tanıtın ve PV, IHVC ve safra kanalı alıcının sol renal venine ve arterine bakacak şekilde konumlandırın. 9-0 naylon sütür kullanarak, IHVC-renal ven bağlantısının zıt taraflarına iki tane askı sütürü takın.
  12. Damarların genişliğini karşılaştırın ve vericinin IHVC'sine benzer bir genişliğe sahip olana kadar böbrek damarının yüzüne yaylı makas kullanarak küçük bir balık ağzı kesisi yapın (Şekil 2C).
  13. 9-0 naylon sütür kullanarak, damarın hem ön hem de arka duvarları boyunca 9 veya 10 çalışan sütür ile karaciğer IHVC'sini böbrek damarına uçtan uca anastomoz edin. Alternatif olarak, bu anastomozu tamamlamak için bir manşet yöntemi kullanın 3,4.
  14. Renal arterin yerleşiminin IHVC'nin altında olduğunu onaylayın (Şekil 2D) ve daha önce renal artere yerleştirilen stenti karaciğer portal venine yerleştirin ve 6-0 ipek sütür ile sabitleyin, sütürün bir ucunu arter üzerindeki karşı ipliğe tutunacak şekilde uzun bırakın. Her birinin stentten kaymasını önlemek için uçları bir araya getirin.
  15. Önce böbrek damarı üzerindeki mikro kelepçeyi çıkarın, ardından böbrek atardamarı üzerindeki mikro kelepçeyi çıkarın.
  16. Karaciğerin reperfüzyonu sırasında, patent anastomozu elde edilene kadar anastomoz bölgesi çevresinde hafif basınç uygulamak için gazlı bez ve pamuklu çubuklar kullanın (Şekil 2D). Daha önce adrenal ve gonadal venlere yerleştirilen geçici ligasyonları çıkarın.
  17. Sol üreterin ucundan yaklaşık 10 mm aşağıya, çevredeki bağ dokusundan dikkatlice hareket ettirin ve önemli miktarda yağ dokusu bağlı bırakın. Yaylı makasla, daha önce yerleştirilen 5-0 ligasyonunun proksimalindeki üreter duvarında küçük bir kesi yapın.
  18. Daha önce safra kanalına takılan poliimid stent, üreter duvarında yapılan küçük kesiye yerleştirin. 6-0 ipek sütürle sabitleyin ve bir ucunu stentin safra kanalı tarafındaki uzun iplikle birbirine bağlayın ve her iki ucu sıkıca birbirine çekin.
  19. Bağırsakları doğal pozisyonlarına geri getirin (Şekil 2E), 2-3 mL tuzlu su ile yıkayın ve 3-0 ipek koşu dikişleri kullanarak karnı iki kat halinde kapatın.
  20. Deri altına 0.1 mg / kg buprenorfin enjekte edin, alıcıyı temiz, ısıtılmış bir kafese koyun ve hayvanı hayvan barınağına geri göndermeden önce 1-2 saat boyunca iyileşmeyi izleyin.

4. Ameliyat sonrası takip

  1. Ameliyattan sonraki 2. günden başlayarak, allojenik nakil alıcılarına her gün deri altına heparin (1 IU / g) enjekte edin.
  2. Ameliyattan sonraki 2. günden başlayarak, sinjeneik nakil alıcılarına her gün deri altına heparin (1 IU / 2 g) enjekte edin.

Sonuçlar

Halen, HALT-PVA protokolünü oluşturmak için 29 çift sıçan, 17 sinjeneik nakil ve 12 allojenik nakil kullanılmıştır. Sinjeneik nakledilen karaciğerler, belirlenen 8 veya 30 günlük deneysel son noktalarına p başarı oranı ile hayatta kalırken, allojenik nakledilen karaciğerler, P başarı oranı ile belirlenen 3 veya 8 günlük son noktalarına kadar hayatta kaldı. Başarısızlıklar, cerrahi komplikasyonlar nedeniyle ölen fareleri ve alıcı hayatta kalsa bile başarısız olan yardımcı karaciğerleri içerir.

Ameliyat süresi ortalama 130 dakika, soğuk iskemi süresi yaklaşık 35 dakika ve sıcak iskemi süresi 25 dakikadan az idi. İntraoperatif herhangi bir komplikasyon olmaması koşuluyla, alıcılar 10-20 dakika içinde uyandı ve aktif hale geldi, 1 saat içinde içmeye ve yürümeye başladı ve 24 saat sonra normal sağlıklı sıçanlar gibi davrandılar.

Sinjeneik karaciğer greftleri transplantasyondan 30 gün sonra mükemmel renk ve safra kanalı açıklığı gösterirken (Şekil 3), Hematoksilen ve eozin (H&E) histolojisi hem 8 günlük hem de 30 günlük zaman noktalarında önemli parankimal değişiklik olmaksızın normal hepatosit yapısı gösterdi (Şekil 4A,B). Sadece 3 gün sonra, allojenik transplantasyonların histolojisi önemli portal inflamasyon gösterirken (Şekil 4C), 8 günlük allojenik greftler geniş lenfositik infiltrasyon ile akut hücresel rejeksiyon gösterdi (Şekil 4D).

Temsili allojenik ve sinjeneik LTx örnekleri, kurul onaylı bir karaciğer patoloğu tarafından değerlendirildi ve reddetme, Banff Şeması reddetme aktivite indeksi (RAI) 12 kullanılarak puanlandı. Patolojik değerlendirmede hem 8 günlük hem de 30 günlük sinjeneik nakillerde Banff RAI 0 ile rejeksiyon saptanmazken, 8 günlük allogreftler Banff RAI skoru 9 ile ciddi şekilde reddedildi (Tablo 1).

figure-results-1
Şekil 1: Sıçan HALT-PVA prosedürünün şematik diyagramı. PV, bir stent kullanılarak sol renal arter ile arteriyel hale getirilir, IHVC sol renal ven'e uçtan uca anastomoz edilir ve safra kanalı bir stent kullanılarak üretere bağlanır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-2
Şekil 2: Cerrahi prosedür. (A) PV'nin hidro-diseksiyonu. PV'yi 27 G'lik bir hidro-diseksiyon iğnesi ile çevredeki bağ dokusundan ayırın. (B) Arteriyel stent yerleştirilmesi. Arteriyel stent, renal arter bifurkasyonunun çatalında kesilen huni şeklinde küçük bir açıklığa yerleştirilir. (C) Böbrek damarının genişletilmesi. Anastomoz için donör IHVC'nin daha geniş genişliğini eşleştirmek için, iki kalış sütürü yerleştirildikten sonra alıcının böbrek damarının yüzüne küçük bir balık ağzı kesisi yapılır. (D) Anastomozdan hemen sonra perfüze karaciğer grefti. Renal arter ve PV bağlantısının renal ven ve IHVC'nin altına konumlandırılması, greft trombozunu önlemek için çok önemlidir. (E) Sıçan HALT-PVA yerinde. Yardımcı karaciğer, bağırsakları geri döndürmeden önce karnın sol duvarına karşı konumlandırılır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-3
Şekil 3: Transplantasyondan 30 gün sonra sinjeneik HALT-PVA. (A) 30 gün sonra, yardımcı karaciğer doğal karaciğere benzer bir renk ve dokuya sahipken, (B) safra kanalı ve PV stent patentli ve sınırsız kalır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-4
Şekil 4: Yardımcı karaciğer greftlerinin histolojisi. Normal hepatosit yapısı sergileyen (A) 8 günlük ve (B) nakil sonrası 30 günlük sinjeneik greftlerin ve (C) 3 günlük ve (D) 8 günlük allojenik greftlerin portal inflamasyon ve lenfositik infiltrasyon gösteren H&E boyaması. Ölçek çubuğu: 50 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Allojenik Tx'lerPortal İltihabıSafra Yolu YaralanmasıVenöz Endo İltihabıBanff RAI
3 günlük (LT-34)2237
3 günlük (LT-38)1001
8 günlük (LT-20)3339
8 günlük (LT-40)3339
Sinjeneik Tx'ler
8 günlük (LT-13)0000
8 günlük (LT-19)0000
30 günlük (LT-28)0000
30 günlük (LT-32)0000

Tablo 1: Banff şeması. Allojenik ve sinjeneik sıçan LTx'lerinin reddetme aktivite indeksi (RAI).

Tartışma

Karaciğer nakli, son dönem karaciğer hastalığı olan hastalar için tek tedavi seçeneğidir ve ABD'de yılda yaklaşık 9.000 LTx gerçekleştirilmektedir13. Ne yazık ki, LTx alıcılarının %25 kadarında immünolojik rejeksiyon görülmektedir ve bu rejeksiyon nakledilen organ ve hasta için zararlıdır14,15. LTx sonrası sonuçları iyileştirmek için, organ reddini incelemek ve reddi azaltmak için stratejiler uygulamak için yenilikçi modellerin geliştirilmesi gerekmektedir.

Ortotopik sıçan karaciğer nakli ile karşılaştırıldığında, mevcut heterotopik modelin kurulması oldukça kolaydır. Teknik zorluk derecesi en iyi, IHVC'nin renal ven'e uçtan uca anastomozları olan prosedürdeki en zor adım dikkate alınarak hesaplanır. Bu bağlantı için kişisel tercihimiz geleneksel dikiş atmak, diğerleri ise manşet sistemini daha uygun bulmaktır 3,4; Her iki durumda da, herhangi bir yöntemle 3 mm'lik bir damarın uçtan uca anastomozu konusunda rahat olan herkes, bu prosedürü gerçekleştirmek için gereken tüm teknik becerilere sahiptir. Çift kafa mikroskobuna erişimimiz olduğu için bu ameliyatları iki kişiyle yapmayı tercih ediyoruz; Ancak, bu protokol solo olarak da gerçekleştirildiği için bu protokolde başarı için bir gereklilik yoktur.

Bu modelin ameliyat sonrası birincil komplikasyonu, üç şey tarafından tetiklenen greft karaciğer trombozudur. İlk olarak, stentin uçlarında kan akışında girdap türbülansına neden olan herhangi bir çapak veya düzensizlik varsa, arteriyel stentin kendisi tromboza neden olabilir. Stent makasla değil keskin bir ustura ile kesilmeli, daha sonra mikroskop altında incelenerek herhangi bir kusur olmadığından emin olunmalıdır. İkincisi, renal arter / PV stent anastomozu renal ven / IHVC anastomozunun üzerine yerleştirilirse, kan akışını kısıtlayacak ve trombozu indükleyecektir. Arteriyel stentin son yerleşimi IHVC'nin altında olmalıdır, bkz. Şekil 2D. Üçüncüsü, anti-koagülan Heparin ile cerrahi sonrası tedavi, allojenik nakillerin trombozunu önlemek için gereklidir, daha düşük bir heparin dozu da sinjeneik greftlerde tromboz riskini ortadan kaldırmak için yararlıdır.

Burada bildirilen sinjeneik greftlere kıyasla allojenik nakiller için daha düşük sağkalım oranı, arteriyel stent trombozunu tetikleyen reddeden yardımcı karaciğerin pro-trombotik doğasını yansıtır. Allojenik nakillerde stentin trombozlaşmasını önleyebilecek bir heparin dozlama şeması bulmak için birkaç girişimde bulunulması gerekti. Başlangıçta, cerrahiden sağ kurtulan ilk 6 allogreft alıcısından, yardımcı karaciğerlerin %50'si tromboz nedeniyle başarısız oldu, ancak heparin dozundaki artışı takiben, sonraki son üç allojenik nakil tromboz olmadan hayatta kaldı. İleriye dönük olarak, etkili bir heparin dozu belirledikten sonra, allojenik nakillerin başarı oranının önemli ölçüde artmasını bekliyoruz. Benzer şekilde, sinjeneik başarısızlıkların çoğu gelişimin erken dönemlerinde meydana geldi ve sinjeneik nakillerin başarı oranının da iyileşmesini bekliyoruz.

Lewis'ten Brown Norway LTx'e akut reddetme modelini kullandık çünkü Brown Norway - Lewis suş kombinasyonu16'yı reddetmez. Bu reddetme modeli ile ortotopik nakil yöntemleri kullanıldığında ve karaciğer reddi meydana geldiğinde, alıcı hayvanların 14 gün içinde ölmeden önce depresif, inaktif hale gelmeleri ve yemek yemeyi bırakmaları nedeniyle ciddi morbidite yaşadıkları dikkat çekicidir16. Bununla birlikte, bu heterotopik LTx modeli ile ölüm bir son nokta olarak kullanılmaz ve morbidite oluşmaz; Hayvan, yardımcı karaciğer tamamen reddedildiğinde bile deney süresince sağlıklı ve aktif kalır. Kuşkusuz, bu heterotopik LTx modeli, alıcı hayvanların yaşadığı acı, ıstırap ve sıkıntıyı en aza indirmeye önemli ölçüde katkıda bulunur.

Normotermik ex vivo karaciğer perfüzyonundaki (NEVLP) son gelişmeler, klinik transplantasyondan önce karaciğerlerin depolanma biçiminde heyecan verici bir gelişmedir 17,18,19. NEVLP sırasında, donör karaciğer transplantasyondan önce terapötik müdahalelere izin veren fizyolojik aktiviteye devam eder20,21. NEVLP ayrıca marjinal organların (yaşlı veya obez donörlerden alınan karaciğerler veya kardiyak ölümden sonra donörlerden temin edilen karaciğerler) canlılığını değerlendirmek için giderek daha fazla kullanılmaktadır22,23. Heyecan verici olmasına rağmen, sadece bir avuç laboratuvar NEVLP 24,25'ten sonra sıçan karaciğeri nakledebildi. Bu muhtemelen hayvan üzerindeki cerrahi stresten ve karaciğerin hem NEVLP hem de transplantasyon için hazırlanmasına yönelik yüksek teknik talepten kaynaklanmaktadır. Buna karşılık, bu yazıda özetlenen heterotopik LTx operatif tekniği teknik olarak daha az talepkardır ve hayvan üzerinde daha az strese neden olur. Bu nedenle, NEVLP'nin küçük hayvan modelleri ve sonraki transplantasyon için uygun bir seçenek olabilir.

Sonuç olarak, gelecekteki transplant reddi çalışmaları için faydalı olabilecek alternatif, düşük morbiditeli bir karaciğer nakli modeli sunuyoruz.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu araştırma, DA'ya verilen Ulusal Sağlık Enstitüsü (NIH) K08AI155816 tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
3-0 İpek SütürEtik SimgeC013D
5-0 İpek kravatlarGüzel Bilim Araçları18020-50
6-0 İpek kravatlarGüzel Bilim Araçları18020-60
7-0 İpek kravatlarTelefleks103'ler
9-0 Poliamid SütürAROSurjiT05A09N10-13Siyah
Bipolar KoterCodman & Shurtleff A.Ş.Sayfa 234
Buprenorfin HCLHospira409201232
Forseps, Adson-BrownGüzel Bilim Araçları11627-1212,5 cm
Pens, Açılı Dumont Güzel Bilim Araçları11253-25Tıbbi #5/45 11 cm
Forseps, Dikiş Bağlama Güzel Bilim Araçları18025-1010 cm
Heparin Sodyum Enjeksiyonu, USBFresenius Kabi50401510 mL başına 10.000 USP birimi
Hidrodiseksiyon KanülüAmbler Cerrahi1021E27 gr
İzofluranDechra Vet. Ürünler17033-091-25
IV KateterKaya2619PUR26 G x 3/4 inç
Manyetik Geri Çekme SistemiGüzel Bilim Araçları18200-50
Mikro KelepçelerGüzel Bilim Araçları18055-056 mm
Mikro KelepçelerGüzel Bilim Araçları18055-064 mm
Mikro Kelepçe AplikatörüGüzel Bilim Araçları18057-1414 cm
Mikro İğne TutucuS& TC-1414 cm
MikroskopZeissEvrensel S3Çift kafa
Oftalmik MerhemPuralube14590500
Poliimidi BoruCole Parmer95820-04Dış Çap 0,0215 inç, İç Çap 0,0195 inç, duvar 0,0010 inç
TuzluBaxter281324%0,9 Sodyum Klorür
Cerrahi Yaylı MakasS& TSDC-15 SerisiKüt 14 cm
Cerrahi Yaylı MakasGüzel Bilim Araçları15021-15Vannas 14 cm

Kaynaklar

  1. Lee, S., Edgington, T. S. Heterotopic liver transplantation utilizing inbred rat strains. Am J Pathol. 52 (3), 649-669 (1968).
  2. Hess, F., Jerusalem, C., Van der Heyde, M. N. Advantages of auxiliary liver homotransplantation in rats. Arch Surg. 104, 76-80 (1972).
  3. Marni, A., Ferrero, M. Heterotopic liver grafting in the rat. A simplified method using cuff techniques. Transplantation. 39 (3), 329-331 (1985).
  4. Kobayashi, E., et al. Auxiliary heterotopic liver transplantation in the rat: a simplified model using cuff technique and application for congenitally hyperbilirubimemic Gunn rat. Microsurgery. 18 (2), 97-102 (1998).
  5. Schleimer, K., et al. Auxiliary liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization offers a successful therapeutic option in acute hepatic failure--investigations in heterotopic auxiliary rat liver transplantation. Transpl Int. 19 (7), 581-588 (2006).
  6. Qiao, J., Han, C., Zhang, J., Wang, Z., Meng, X. A new model of auxiliary partial heterotopic liver transplantation with liver dual artery supply. Exp Ther Med. 9 (2), 367-371 (2015).
  7. Li, J., Ren, J., Zhang, J., Meng, X. A. Modified kidney-sparing portal vein arterialization model of heterotopic auxiliary liver transplantation increases liver IL-6, TNF-α, and HGF levels and enhances liver regeneration: an animal model. BMC Surg. 2, 281-292 (2022).
  8. Ono, Y., et al. Regeneration and cell recruitment in an improved heterotopic auxiliary partial liver transplantation (APLT) model in the rat. Transplantation. 101 (1), 92-100 (2017).
  9. Wang, J., et al. Auxiliary partial liver grafting in rats: effect of host hepatectomy on graft regeneration, and review of literature on surgical technique. Microsurgery. 22 (8), 371-377 (2002).
  10. Schleimer, K., et al. Heterotopic auxiliary rat liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization in acute hepatic failure. J Vis Exp. (91), e51115(2014).
  11. Prescott, M. J., Lidster, K. Improving quality of science through better animal welfare: the NC3Rs strategy. Lab Animal. 46 (4), 152-156 (2017).
  12. Banff schema for grading liver allograft rejection: an international consensus document. Hepatology. 25 (3), 658-663 (1997).
  13. Kwong, A. J., et al. OPTN/SRTR 2020 Annual Data Report: Liver. Am J Transplant. 22, Suppl 2 204-309 (2022).
  14. Nacif, L. S., et al. Late acute rejection in liver transplant: a systematic review. Arq Bras Cir Dig. 28 (3), 212-215 (2015).
  15. Levitsky, J., et al. Acute rejection increases risk of graft failure and death in recent liver transplant recipients. Clin Gastroenterol Hepatol. 15 (4), 584-593 (2017).
  16. Gong, J., Cao, D., Chen, Y., Li, J., Gong, J., Zeng, Z. Role of programmed death ligand 1 and Kupffer cell in immune regulation after orthotopic liver transplantation in rats. Int Immunopharmacol. 48, 8-16 (2017).
  17. Ceresa, C. D. L., Nasralla, D., Coussios, C. C., Friend, P. J. The case for normothermic machine perfusion in liver transplantation. Liver Transpl. 24 (2), 269-275 (2018).
  18. Nasralla, D., et al. A randomized trial of normothermic preservation in liver transplantation. Nature. 557 (7703), 50-56 (2018).
  19. Markmann, J. F., et al. Impact of portable normothermic blood-based machine perfusion on outcomes of liver transplant: The OCS liver PROTECT randomized clinical trial. JAMA Surg. 157 (3), 189-198 (2022).
  20. Goldaracena, N., et al. Anti-inflammatory signaling during ex vivo liver perfusion improves the preservation of pig liver grafts before transplantation. Liver Transpl. 22 (11), 1573-1583 (2016).
  21. Carlson, K. N., et al. Interleukin-10 and transforming growth factor-beta cytokines decrease immune activation during normothermic ex vivo machine perfusion of the rat liver. Liver Transpl. 27 (11), 1577-1591 (2021).
  22. Ig-Izevbekhai, K., Goldberg, D. S., Karp, S. J., Foley, D. P., Abt, P. L. Immunosuppression in donation after circulatory death liver transplantation: Can induction modify graft survival. Liver Transpl. 26 (9), 1154-1166 (2020).
  23. Kageyama, S., et al. Ischemia-reperfusion Injury in allogeneic liver transplantation: A role of CD4 T cells in early allograft injury. Transplantation. 105 (9), 1989-1997 (2021).
  24. Oldani, G., et al. The impact of short-term machine perfusion on the risk of cancer recurrence after rat liver transplantation with donors after circulatory death. PLoS One. 14 (11), e0224890(2019).
  25. Schlegel, A., Graf, R., Clavien, P. A., Dutkowski, P. Hypothermic oxygenated perfusion (HOPE) protects from biliary injury in a rodent model of DCD liver transplantation. J Hepatol. 59 (5), 984-991 (2013).

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

S an Karaci er NakliHeterotopik Nakil ModeliYard mc Karaci er NakliHepatiko reterostomi Tekni iBiliyer DrenajMikrocerrahi BecerileriPortal Ven AnastomozuSo uk skemiLenfositik nfiltrasyon
Allogreft Rejeksiyon Çalışmaları için Hepaticoureerostomi Kullanan Heterotopik Yardımcı Tüm Karaciğer Sıçan Nakli Modeli
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.