Burada, Sanleng Jiashen formülünün ortotopik hepatosellüler karsinomlu BALB/c-nu fareleri üzerindeki terapötik ve vasküler inhibitör etkilerini araştırmak için adım adım protokolü sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Burada, Sanleng Jiashen formülünün ortotopik hepatosellüler karsinomlu BALB/c-nu fareleri üzerindeki terapötik ve vasküler inhibitör etkilerini araştırmak için adım adım protokolü sunuyoruz.
Karaciğer kanserinin ölümcüllüğü ve kimyasal ilaçlara karşı direnç, karaciğer kanseri için geleneksel bitkilerin etkili reçetelerinin araştırılmasını zorunlu kılmıştır. Tekrarlanabilir, manipüle edilmesi kolay ve karaciğer kanserinin patofizyolojik süreçlerini yüksek oranda taklit eden hayvan modelleri, etkili ilaç adaylarının başarılı bir şekilde taranması için ön koşuldur. Bu arada, güvenilir ilaç etkinliği değerlendirme göstergeleri ve araçları da anti-karaciğer kanseri ilaç araştırma ve geliştirmesinin garantisidir.
Sanleng Jiashen formülü, Sparganium stoloni erum, Buch içeren geleneksel Çin tıbbının temsili bir reçetesi. -Jambon. (Sanleng), Panax ginseng C. A. Mey. (ginseng), Rheum officinale Baill. (ravent) ve Ligusticum chuanxiong Hort. (Chuanxiong), karaciğeri beslemek ve ısıyı temizlemek, toksinleri uzaklaştırmak ve karaciğer kanserini tedavi etmek için kan dolaşımını teşvik etmek için reçete edilir. Bu deneysel protokol, liyofilize Sanleng Jiashen formülünün hazırlanmasını ve BALB/c-nu farelerinde in-situ karaciğer kanserinin kuruluş sürecini açıklar. Histopatolojik boyama, kanser belirteçlerinin immünohistokimyasal tespiti, farelerin in vivo görüntülemesi ve civciv embriyosu koryoallantoik membran testi, Sanleng Jiashen formülünün karaciğer kanseri dokusunun malign proliferasyonu üzerindeki inhibisyonu ve anti-anjiyogenez etkisini araştırmak için kullanıldı. Veriler, Sanleng Jiashen formülünün, tümör kütlesi hacminin azalması, patolojik hasarın iyileşmesi ve kanser belirteci ki67'nin daha düşük seviyeleri ile kendini gösteren karaciğer kanseri dokusunun malign proliferasyonuna etkili bir şekilde direnebileceğini göstermektedir.
Anjiyogenezin üstün inhibisyonu ayrıca Sanleng Jiashen formülünün karaciğer kanserinin ilerlemesini ve bozulmasını tedavi etme ve önleme potansiyeline sahip olabileceğini düşündürmektedir. Tüm deney şeması, bir karaciğer kanseri modelinin kurulması ve optimizasyonu için bir referans sağlayan fare karaciğer kanserinin tedavisinde geleneksel Çin tıbbı bileşenlerinin kapsamlı bir sürecini ve ayrıca karaciğer kanserini önlemek ve tedavi etmek için ilaçların araştırılması ve geliştirilmesini göstermektedir.
Karaciğer kanseri, karaciğerden kaynaklanan ölümcül bir kanserdir ve dünya çapında kansere bağlı ölümlerin en yaygın ikinci nedenidir1. Amerika Birleşik Devletleri'nde ve bazı gelişmekte olan ülkelerde karaciğer hastalığı oranları yüksek seviyeler göstermektedir ve 2030 yılına kadar dünya çapında 1 milyondan fazla karaciğer kanseri vakası olabilir2. Sigara, obezite ve alkol gibi sağlıksız yaşam alışkanlıkları ve hepatit B, hepatit C ve diğer virüslerin tahribatı nedeniyle, karaciğer kanserinin görülme sıklığı ve mortalitesiher geçen yıl önemli ölçüde artmıştır. Farklı histolojik özelliklere ve kötü prognoza sahip heterojen bir malign tümör olan karaciğer kanseri, hepatosellüler karsinom, intrahepatik kolanjiokarsinom ve fibrolameller karaciğer kanseri dahil olmak üzere çok geniş bir insidans aralığına sahiptir4. Karaciğer kanseri genellikle ileri bir aşamada teşhis edilir ve birçok ileri hasta radyasyon tedavisi için aday değildir5. Multikinaz inhibitörü sorafenib, ilerlemiş karaciğer kanseri olan hastalar için oldukça kabul gören bir ilaçtır, ancak hastalar genellikle kısa bir süre içinde önemli direnç geliştirir6. Şu anda, sorafenib ile birlikte bağışıklık kontrol noktası inhibitörleri PD-1 ve PD-L1, karaciğer kanseri gelişimini kontrol etmede bir miktar ilerleme kaydetmiştir, ancak terapötik etki hala tartışmalıdır7.
Ortotopik karaciğer kanseri, karaciğer kanserinin erken bir türüdür: kanser hücreleri karaciğer dokusunun etrafına yayılmamıştır veya organlar arası metastaz meydana gelmez ve karaciğerin işlevi büyük ölçüde etkilenmez8. Ortotopik karaciğer kanseri genellikle belirgin rahatsızlık belirtileri göstermediğinden, bazı hastalarda hafif karaciğer ağrısı, yorgunluk ve diğer semptomlar olabilir9. Klinik pratikte, karaciğerin renkli Doppler ultrasonografisi ve gelişmiş bilgisayarlı tomografi incelemesi ile karaciğerde önemli yer kaplayan lezyonlar teşhis edilebilir10. Yayılmamış ve metastaz yapmamış lokal karaciğer kanseri ameliyatla çıkarılabilse de bazı cerrahi riskler ve hastalar için kaçınılmaz psikolojik yük vardır11. Kemoradyoterapi, karaciğer kanseri hücrelerinin tamamını veya bir kısmını öldürebilir ve ilaç kullanan hastalarda uzun süreli immünosupresyon tedavinin etkinliğini etkileyebilir ve diğer hastalıkların riskini artırabilir12. Bu nedenle, erken karaciğer kanserinin önlenmesi ve tedavisi için güvenli ve etkili ilaç tedavisi aramak, karaciğer kanserinin ilerlemesini ve bozulmasını engellemenin anahtarıdır.
Karaciğer kanserini tedavi eden Çin tıbbının prensibi, vücuttaki denge ve uyum kavramına dayanmaktadır. Çin tıbbı, karaciğer kanserini, karaciğeri etkileyen ve Qi olarak bilinen vücut enerjisindeki bir dengesizlik veya uyumsuzluk olarak görür13. Karaciğer kanseri için Çin tıbbı tedavisi, bitkisel ilaç, akupunktur, diyet tedavisi ve yaşam tarzı önerileri dahil olmak üzere çeşitli yaklaşımları içerir. İlke, Qi'nin dengesini yeniden sağlamak, vücudun savunma mekanizmalarını güçlendirmek ve vücudun kendini iyileştirme yeteneğini teşvik etmektir14,15. Geleneksel Çin tıbbında karaciğer kanseri "timpanitler" ve "karaciğer birikimi" kategorisine aittir. "Huangdi'nin İç Kanonu" semptomlarının ayrıntılı bir kaydına sahip olduğu sürece, karaciğer kanserine kan stazı ve Zhengqi eksikliği neden olur ve kan stazının giderilmesi, timpanitlerin ortadan kaldırılması ve anayasanın sağlamlaştırılması için vücut direncinin güçlendirilmesi ile tedavi edilir13. Sanleng hapı, Yuan hanedanlığında ünlü bir doktor olan Luo Tianyi tarafından yazılan "Weisheng Baojian" kitabından kaynaklanmıştır. Üç çeşit ilaçtan oluşur: Sparganium stoloni erum, Buch. -Jambon. (Sanleng), Ligusticum chuanxiong Hort. (Chuanxiong) ve Rheum officinale Baill. (ravent). Bu üç tür ilaç karaciğer meridyenine girebilir ve karaciğer kanserinin tedavisi için terapötik değere sahip olabilir14. Sanleng Jiashen formülü 16 g Sanleng, 16 g Panax ginseng C.A.Mey'den oluşur. (ginseng), 8 g ravent ve 2 g Chuanxiong (Şekil 1), karaciğeri tonlamak, ısıyı temizlemek, toksinleri ortadan kaldırmak ve kan dolaşımını teşvik etmek için reçete edilir. Bu bitkilerin kanser önleyici özelliklere sahip olduğuna ve tümör büyümesini azaltmaya, semptomları hafifletmeye ve genel refahı iyileştirmeye yardımcı olduğuna inanılmaktadır. Önceki in vitro deneylerde, Sanleng Jiashen formülü karaciğer kanseri hücrelerininçoğalmasını engelleyebilir 15. Bununla birlikte, Çin bitkisel bileşiklerinin karaciğer kanseri üzerindeki inhibitör etkisi verimli ve makul bir şekilde nasıl değerlendirilir? Bir BALB/c-nu fare in situ karaciğer kanseri modeli oluşturularak, Sanleng Jiashen formülünün karaciğer kanseri ve anjiyogenez üzerindeki inhibitör etkisi esas olarak küçük hayvan canlı görüntüleme ve civciv embriyosu koryoallantoik membran testi ile araştırıldı.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Spesifik patojen içermeyen, 5 haftalık ve 18-22 g ağırlığındaki BALB/c-nu erkek çıplak fareler, Jilin Üniversitesi Transformasyon Tıp Fakültesi Hayvan Deney Merkezi'nde beslendi; besleme koşulları 22 °C-24 °C ve @-` bağıl nem idi. Deney hayvanı lisans numarası SYXK(Ji) 2018-0006'dır ve deney süreci Jilin Üniversitesi Etik Kurul kural ve düzenlemelerine uygundur ve hayvan etiği onay numarası 20221228-01'dir.
1. Dondurularak kurutulmuş Sanleng Jiashen formülü15'in hazırlanması
2. Lusiferazı stabil bir şekilde ifade eden HCCLM3 hücre hattının inşası16





















Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Şekil 2A'da gösterildiği gibi, BALB / c-nu farelerinin yerinde karaciğer kanseri modelini oluşturduk ve Sanleng Jiashen formülünün antitümör etkisini değerlendirdik. Şekil 2B, Sanleng Jiashen formülünün karaciğer tümörlerinin büyümesini önemli ölçüde baskılayabildiğini göstermektedir. Patolojik sonuçlar, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, model grubundaki tümör odaklarının çevre doku ile açık sınırlara, daha büyük tümör odaklarına, nodüler genişlem...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sanleng Jiashen formülündeki Sanleng, ginseng, ravent ve Chuanxiong'un karaciğer kanseri tedavisi üzerinde farmakolojik etkileri olduğunu çok sayıda kanıt doğrulamıştır. Çalışmalar, Sanleng'in tümör hücresi istilasını ve metastazı önlemek, hücre apoptozunu indüklemek ve hücre döngüsünü ve tümör mikro çevresini düzenlemek için tümör hücrelerinin çoğalmasını ve büyümesini önemli ölçüde engelleyebileceğini göstermiştir20. Sanleng'deki aktif bileşen olan kaempferolün,...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Bu çalışma, Çin Felsefe ve Sosyal Bilimler Vakfı (20VYJ070), Jilin İl Eğitim Departmanı Projesi (JJKH20230963KJ) ve Changchun Çin Tıbbı Üniversitesi'ndeki Xinglin Scholars Mühendislik Projesi'nin İkinci Partisi (QNKXJ2-2021+ZR25) tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 0.25 tripsin çözeltisi | HyClone, Amerika | SH30042.01B | |
| 1 mL tek kullanımlık şırınga | Mingankang Medical Equipment Co., Ltd., Çin | RWSB | |
| %1 Penisilin ve streptomisin çözeltisi | Hyclone, Amerika | SV30010 | |
| 1.5 mL santrifüj tüpü | Corning, Amerika | MCT-150-C-S | |
| 12 cm iğne forseps | Hesdick, Çin | HKQS-211 | |
| 6-0 cerrahi sütürler | Shanghai Jinhuan Medical Equipment Co., Ltd., Şangay, Çin | CR631 | |
| %75 alkol | Sichuan Youbang Enterprise Co., Ltd., Sichuan, Çin | 1.00009E+11 | |
| 96 oyuklu plakalar | NEST, Çin | 701001 | |
| Aseton | Tianjin Dingfu Kimya Genel Tesisi, Tianjin, Çin | GB686-89 | |
| BALB/c-nu erkek çıplak fareler | Pekin Weitonglihua Deneysel Hayvan Technology Co., Ltd., Pekin, Çin | SYXK(Ji) 2018-0006 | |
| Biyolojik doku pişirme makinesi | Leica, Almanya | Leica HI1220 | |
| Hücre kültürü kabı | NEST, Çin | NEST.706001 | |
| Sitrik asit çözeltisi | Wuhan Canos Technology Co., Ltd., Wuhan, Çin | sj1074 | |
| D-lusiferin | Altın Biyoteknoloji > , Çin, Çin | LUCK-100 | |
| DMEM | Hyclone, Amerika | SH30243.01 | |
| Yumurta aydınlatıcı | Shandong Weizhen Kuluçka Ekipmanları Şirketi, Shandong, Çin | WZSDT | |
| Eosin boyama çözeltisi | Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, Çin | 110703061 | |
| Eritromisin göz merhemi | Cisen Pharmaceutical Co., Ltd., Şangay, Çin | H37022025 | |
| Fetal sığır serumu | Clark, Amerika | FB25015 | |
| Tam otomatik akıllı civciv kuluçka makinesi | Shandong Weizhen Kuluçka Ekipmanları Şirketi, Shandong, Çin | 29538 | |
| GFP lentivirüs çözümü | Suzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, Çin | F22AZ | |
| Keçi serumu | Shenyang Wanlei Biotechnology Co., Ltd., Shengyang, Çin | WLA067 | |
| El tipi fare kafatası matkabı | STRONGWT, Çin | 190 | |
| HCCLM3 hücre hattı | WheLab, Şangay, Çin | C1010 | |
| Isıtma yastığı | Zhongke Life Technology Co., Ltd., Hangzhou, Çin | GEJRD-10W | |
| Hematoksilen | Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, Çin | B-YH250-1 | |
| Akıllı kaynatma kabı | Hangzhou Jiuyang yaşam Aletleri Co., Ltd., Hangzhou, Çin | 3003BQ | |
| Ters floresan mikroskobu | Olympus, Japonya | IX73 | |
| ki67 birincil antikor | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, Çin | GB121141-100 | |
| Lodofor dezenfektan | Cofoe Medical Technology Co., Ltd., Hunan, Çin | 202110073 | |
| Luciferase | Suzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, Çin | E26JZ | |
| Matris yapıştırıcı | Corning, Amerika | 356234 | |
| Tıbbi gazlı bez | Yunnan Chenye Biotechnology Co., Ltd., Yunnan, Çin | 71712049971 | |
| Metanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd., Guangdong, Çin | 1.17001.023 | |
| Oftalmik makas | Hesdick, Çin | HKQS-209 | |
| Oftalmik cımbız | Hesdick, Çin | HKCL-20 | |
| Parafin gömme makinesi | Leica, Almanya | ||
| Parafin dilimleme makinesi | Leica, Almanya | Leica CM1950 | |
| Paraformaldehit | Biosharp, Çin | BL539A | |
| PBS tamponu | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, Çin | G2156-1L | |
| Puromycin | Pekin Solarbio Bilim ve Technology Co., Ltd., Pekin, Çin | P8230 | |
| Buzdolabı | Thermo Scientific, Amerika | TDE40086FV-ULTS | |
| Neşter | Hesdick, Çin | HKCL-93 | |
| İkincil antikor | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, Çin | GB23301 | |
| Küçük hayvan canlı görüntüleme sistemi | Kaliper Yaşam Bilimleri, Amerika | IVIS Lumina XR | |
| Sorafenib | Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd., Şangay, Çin | 284461-73-0 | |
| Şeffaf pansuman | 3M, Amerika | 9534HP | |
| Triton X-100 | Pekin Solarbio Bilim & Technology Co., Ltd., Pekin, Çin | T8200 | |
| Vakumlu dondurarak kurutma makinesi | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., Ltd., Ningbo, Çin | sz-10N | |
| Beyaz tüylü tavuk yumurtası | Shandong Haotai Deneysel Hayvan Yetiştirme Co., Ltd., Shandong, Çin | SCXK(Lu) 20180004 | |
| Ksilen | Sigma-Aldrich, Amerika | 534056 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında