Nadiren kullanılan bir elektrofizyolojik kayıt yöntemi olan temel kayıt, geleneksel kayıt yöntemleriyle incelenemeyen tat kodlama özelliklerinin analizine olanak tanır. Temel kayıt, geleneksel elektrofizyolojik yöntemler kullanılarak incelenemeyen hidrofobik uyaranlara verilen tat tepkilerinin analizine de izin verir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Temel Kayıt: Drosophila'da Tat Nöronlarının Tepkilerini Analiz Etmek İçin Bir Teknik
Bu makalede
Özet
Özet
Böcekler, uçlarında gözenekler bulunan tat tüyleri veya sensilla yoluyla dış dünyanın tadına bakarlar. Bir sensillum potansiyel bir besin kaynağı ile temas ettiğinde, besin kaynağından gelen bileşikler gözenekten girer ve içindeki nöronları aktive eder. 50 yılı aşkın bir süredir, bu yanıtlar ipucu kaydı adı verilen bir teknik kullanılarak kaydedilmiştir. Bununla birlikte, bu yöntemin, uyaran temasından önce veya sonra nöral aktivitenin ölçülememesi ve tatların sulu çözeltilerde çözünür olması gerekliliği dahil olmak üzere önemli sınırlamaları vardır. Burada, bu sınırlamaların üstesinden gelen temel kayıt dediğimiz bir tekniği açıklıyoruz. Temel kayıt, uyaran öncesinde, sırasında ve sonrasında tat nöron aktivitesinin ölçülmesine izin verir. Böylece, bir tat uyaranından sonra ortaya çıkan OFF tepkilerinin kapsamlı bir şekilde analiz edilmesini sağlar. Suda çözünürlüğü çok düşük olan uzun zincirli feromonlar gibi hidrofobik bileşikleri incelemek için kullanılabilir. Özetle, temel kayıt, nöronal aktiviteyi ölçmenin bir yolu olarak tek sensillum elektrofizyolojisinin avantajlarını sunar - genetik araçlara ihtiyaç duymadan yüksek uzamsal ve zamansal çözünürlük - ve geleneksel uç kayıt tekniğinin temel sınırlamalarının üstesinden gelir.
Giriş
Drosophilid sinekleri de dahil olmak üzere böcekler, çevrelerinden karmaşık kimyasal bilgiler çıkarmalarını sağlayan sofistike bir tat sistemine sahiptir. Bu sistem, besleyici ve zararlı olanları ayırt ederek çeşitli maddelerin kimyasal bileşimini ayırt etmelerini sağlar 1,2.
Bu sistemin merkezinde, stratejik olarak çeşitli vücut kısımlarına yerleştirilmiş, tat kılları veya sensilla olarak bilinen özel yapılar bulunur. Drosophilid sineklerinde, bu sensillalar, sinek başının 1,2,3,4 ana tat organı olan labellum üzerinde, ayrıca bacaklarda ve kanatla....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Aşağıdaki protokol, Yale Üniversitesi'nin tüm hayvan bakımı yönergelerine uygundur.
1. Sinekler
- Yeni çıkan 10-15 sineği 25 ° C'de ve% 60 bağıl nemde 12:12 saat aydınlık-karanlık döngüsünde taze standart kültür şişelerine yerleştirin.
- 3-7 günlükken sinek kullanın.
2. Kemosensoriyel uyaranlar
- Mevcut en yüksek saflıkta kemosensoriyel uyaranlar elde edin. Kullanana kadar satıcı tarafından tavsiye edildiği şekilde saklayın.
- Kemosensoriyel uyaranları çözün ve su veya parafin yağı gibi arzu edilen, toksik olmayan başka bir çözücü içinde iste....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 4A, bir sensillumdan kaynaklanan spontan sivri uçları göstermektedir. Genliğe dayalı olarak iki sınıfa ayrılırlar, daha büyük sivri uçlar acı bileşiklere duyarlı nörondan ve şekerlere yanıt veren nörondan daha küçük sivri uçlar türetilir. Spike genliği ve fonksiyonel özgüllük arasındaki ilişki, genetik deneyler 4,14,37,38,39 ile doğrulanmıştır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bazı sensilla türlerinden elde edilen kayıtlarda, farklı nöronların sivri uçlarını ayırt etmek zor olabilir. Örneğin, S ve I sensilla'nın şeker nöronları ve mekanosensoriyel nöronları, benzer genliklerde sivri uçlar üretirve bu da onları ayırt etmeyi zorlaştırır 4,14. Çok keskin bir tungsten kayıt elektrodunun kullanılmasının, kayıt elektrodunun akıllıca yerleştirilmesi gibi, mekanosensoriyel nöronun ateşlenmesini azalttığını bulduk. Kayıt elektrodunun sensillum .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Destek için Zina Berman'a, el yazması hakkındaki yorumları için Lisa Baik'e ve tartışma için Carlson laboratuvarının diğer üyelerine teşekkür ederiz. Bu çalışma, H.K.M.D.'ye DC020145 NIH hibesi K01 tarafından desteklenmiştir; ve NIH, JRC'ye R01 DC02174, R01 DC04729 ve R01 DC011697 verir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Mikroskop | Olympus | BX51WI | , 50X objektif (LMPLFLN 50X, Olympus) ve 10X göz mercekleri ile donatılmıştır. |
| Titreşim Önleyici Masa | TMC | 63-7590E | |
| motorlu Mikromanipülatörler | Harvard Aparatı ve Mä rzhä kullanıcı Mikromanipülatörler | Mikromanipülatör PM 10 Piezo Mikromanipülatör | |
| manuel Mikromanipülatörler | Mä rzhä kullanıcı Mikromanipülatörler | MM33 Mikromanipülatör | |
| Manyetik standlar | ENCO | Model #625-0930 | |
| Referans ve kayıt Elektrot Tutucu | Ockenfels Syntech GmbH | ||
| Uyarıcı cam kılcal Tutucu | Ockenfels Syntech GmbH | ||
| Üniversal Tek Uçlu Prob | Ockenfels Syntech GmbH | ||
| 4 KANALLI USB TOPLAMA DENETLEYICISI, IDAC-4 | Ockenfels Syntech GmbH | ||
| Uyaran Kontrol Cihazları | Ockenfels Syntech GmbH | Uyaran Kontrol Cihazı CS 55 | |
| Kişisel Bilgisayar | Dell | Vostro | Dijital toplama sistemi ve yazılımı ile uyumluluğu kontrol edin |
| Tungsten Çubuk | A-M Sistemleri Kedi | # 716000 | |
| Alüminyum Folyo ve / veya Faraday Kafesi | Elektromanyetik gürültü kalkanı | ||
| Borosilikat Cam Kılcal | Damarlar Dünya Hassas Aletler | 1B100F-4 | |
| Pipet Çektirme | Sutter Aleti Şirket | Modeli P-97 Alevli/Kahverengi Mikropipet Çektirme | |
| Stereomikroskop | Olympus | VMZ 1x-4x | Sinek hazırlama için |
| p200 Pipet Uçları | Jenerik | ||
| Mikro yükleyici ipuçları | Eppendorf | E5242956003 | |
| 1 ml Şırınga | Jenerik | ||
| Timsah klipsleri | |||
| Güç Transformatörleri | STACO ENERJI ÜRÜNLERI | STACO 3PN221B | P1000 pipet uçları, esnek plastik boru ve ağdan monte edilmiştir |
| Modelleme Kil | Jenerik | ||
| Forseps | Jenerik | ||
| Plastik Boru | Saint Gobain | Tygon S3 & trade; E-3603 | |
| Standart kültür şişeleri | Archon Scientific | Dar 1 oz polistiren vailler, her biri 10 mL glikoz ortamına sahip, selüloz asetat tapaları ile önceden yüklenmiş | |
| Berberin klorür (BER) | Sigma-Aldrich | Cat# Y0001149 | |
| Denatonium benzoat (DEN) | Sigma-Aldrich | Cat# D5765 | |
| N,N-Dietil-m-toluamid (DEET) | Sigma-Aldrich | Cat# 36542 |
Kaynaklar
- Joseph, R. M., Carlson, J. R. Drosophila chemoreceptors: a molecular interface between the chemical world and the brain. Trends Genet. 31 (12), 683-695 (2015).
- Montell, C. Drosophila sensory receptors-a set of molecular Swiss Army Knives. Genetics.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
