Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Farelerde analjezik etkiyi incelemek için modifiye edilmiş bir inflamatuar ağrı modeli

3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/66701

⸱

15 Kasım 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Key Laboratory of Molecular Pharmacology and Drug Evaluation, Ministry of Education, Collaborative Innovation Center of Advanced Drug Delivery System and Biotech Drugs in Universities of Shandong, Yantai University, 2Department of Neurosurgery, The Third Hospital of Hebei Medical University

Bu makalede

Özet

Burada, analjezik etkiyi değerlendirmek için her iki arka pençe karragenan enjeksiyonu ile modifiye edilmiş bir inflamatuar ağrı modeli sunuyoruz.

Özet

Sıcak plaka testi, farelerde inflamatuar ağrı üzerindeki analjezik etkileri değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Yaygın olarak kullanılan bir inflamatuar ağrı modeli, bir arka pençede intraplantar karragenan enjeksiyonu ile indüklendi. Bununla birlikte, laboratuvarımızdan elde edilen bulgular, tek arka pençe İrlanda yosunu enjeksiyonu olan farelerin, sıcak plaka testi sırasında termal nosisepsiyondan kaçınmak için pençelerini kaldırdığını gösterdi. Bu yanıt nedeniyle, önceki enjeksiyon yöntemi termal ağrı eşiğini doğru bir şekilde yansıtamaz. Bu nedenle, bu sorunu önlemek için yeni bir yöntem araştırdık. Bu çalışmada, inflamatuar ağrı modelini oluşturmak için her iki arka pençeye İrlanda yosunu enjekte ederek önceki yöntemi değiştirdik. Sonuçlar, İrlanda yosunu ile her iki arka pençe enjeksiyonunun hassas olduğunu ve sıcak plaka testini kullanırken tek arka pençe enjeksiyonundan daha iyi bir inflamatuar ağrıyı indüklemek için daha iyi bir yöntem olduğunu gösterdi. Bu bulgulara dayanarak, her iki arka pençe veya tek arka pençe İrlanda yosunu enjeksiyonu olan farelerin intragastrik olarak selekoksib (30 mg / kg) ile tedavi edildiği daha ileri deneyler tasarladık. Sıcak plaka testinin sonuçları, selekoksibin farelerde termal ağrı eşiğini her iki arka pençe İrlanda yosunu enjeksiyonu ile arttırdığını, ancak tek arka pençe İrlanda yosunu enjeksiyonu olan farelerde olmadığını gösterdi. Özetle, analjezik etkiyi değerlendirmek için bir inflamatuar ağrı modelini indüklemek için üstün bir yöntem geliştirdik.

Giriş

Ağrı dünya çapında bir halk sağlığı sorunudur. Zararlı termal, mekanik veya kimyasal stimülasyon ile tetiklenir. Etik kaygılar nedeniyle insanlarda ağrı çalışmaları yapmak zordur. Bu nedenle, hayvan ağrı modellerini kullanmak, ağrı mekanizmalarını ve araştırma tedavilerini anlamak için anahtar bir yaklaşımdır1. Sıcak plaka testi, termal nosisepsiyon ve hiperaljezi2'nin değerlendirilmesi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Şu anda, sıcak plaka testi için kullanılan enflamatuar ağrı modeli, bir arka pençede intraplantar bir İrlanda yosunu enjeksiyonu ile indüklenmektedir. Örneğin, rotigotin yüklü mikrokürelerin antinosiseptif etkisini araştırmak için, tek bir arka pençe enjeksiyonu3 ile bir hayvan enflamatuar ağrı modeli hazırlandı. Katekol-o-metil-transferaz inhibitörlerinin farelerde termal nosisepsiyon üzerindeki etkilerini değerlendirmek için, sağ arka pençe4'ün plantar bölgesine karagenan uygulandı. Posidonia oceanica (L.) Delile ekstraktının analjezik rolünü araştırmak için, farelerde sağ arka pençe5'e intraplantar karagenan enjeksiyonu ile inflamatuar bir ağrı modeli hazırlandı. Bununla birlikte, laboratuvarımızdan elde edilen bulgular, tek arka pençe İrlanda yosunu enjeksiyonu yapılan bir farenin, termal nosisepsiyondan kaçınmak için pençesini kaldıracağını ve bu da hayvanın sıcak plaka testinde bir termal uyarana tepkisini yanlış bir şekilde uzattığını gösterdi. Bu nedenle, tek arka pençe İrlanda yosunu enjeksiyonu ile inflamatuar ağrı modelinin termal ağrı eşiğini doğru bir şekilde yansıtamadığını varsaydık. Bu nedenle, modifiye edilmiş bir inflamatuar ağrı modeli oluşturmak için her iki arka pençeye İrlanda yosunu enjekte ederek yöntemi optimize ettik.

Her iki arka pençe İrlanda yosunu enjeksiyonuna maruz kalan farelerin, aynı anda her iki arka pençe için termal uyarandan kaçınmanın bir yolu yoktu. Ağrı eşiği, farenin sıcak plakaya yerleştirilmesinden farenin her iki arka pençesini yalamasına kadar geçen süre olarak tanımlandı. Sonuçlar, modifiye inflamatuar ağrı modelinin nosiseptif sıcaklık eşiğini değerlendirmek için daha uygun olduğunu doğruladı. Bu, analjezik ilaçların araştırılması ve geliştirilmesi için sıcak plaka testinin etkinliğini artırabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Deney protokolü, Yantai Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı (No. YTDX20220425). Prosedürler, Laboratuvar Hayvanlarının Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Yönergelerini takip etti.

1. Hayvanlar

  1. Deneyler için 20-25 g ağırlığında ICR dişi fareler kullanın.
  2. Deneylere başlamadan önce hayvanların 3 gün boyunca deney odasının ortamına alışmalarına izin verin.
  3. Deney odasını 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngüsüyle koruyun ve farelere suya ve yemeğe ücretsiz erişim sağlayın.

2. İrlanda yosunu çözeltisinin hazırlanması

  1. 0.1 g İrlanda yosunu ağırlığında. Bir tüpe 10 mL sterilize normal salin ekleyin.
  2. Tüpe 0.1 g İrlanda yosunu ekleyin ve tüpü 30 saniye boyunca girdaplayın.
  3. % 1 sterilize edilmiş İrlanda yosunu çözeltisini toplayın.
  4. Deneylerden önce İrlanda yosunu çözeltisini hazırlayın.

3. İrlanda yosununun intraplantar enjeksiyonu

  1. % 1 İrlanda yosunu çözeltisini enjekte etmek için bir şırınga (0.05 mL, 29G x 1/2 inç, 0.33 mm × 12.7 mm) kullanın.
  2. İrlanda yosunu çözeltisini şırıngaya çekmeden önce çalkalayın. Şırıngada kabarcık olmadığından emin olun.
  3. Enjeksiyon bölgesini (arka pençe)% 75 alkolle dezenfekte edin.
  4. 30 μL 6,7% 1 İrlanda yosunu çözeltisini deri altından arka pençenin plantar yüzeyine enjekte edin. Kontrol grubu fareleri için 30 μL normal salin enjekte edin.
    1. İğneyi çapraz olarak yukarı doğru arka pençe ayak pedine sokun. Şırınganın stabilitesini koruyun.
    2. Enjeksiyondan sonra, şırıngayı yavaşça çekin ve sızıntıyı önlemek için enjeksiyon bölgesine 2 saniye boyunca bastırın.

4. Sıcak plaka testi

  1. Plantar içi enjeksiyondan 3 saat sonra sıcak plaka testini yapın.
  2. Sıcak plakanın yüzeyini temizleyin ve dezenfekte edin.
  3. Sıcak plaka aparatını çalıştırın. Sıcaklık Modu düğmesine tıklayın. Sıcaklığı 55 ± 0.2 °C'ye ayarlamak için SABİT düğmesine tıklayın.
  4. Denemeyi başlat düğmesini ve ardından REACH'i tıklayın. Konaklama kabından bir fare alın. Yavaşça gövdesini kavrayın. Fareyi sıcak plakanın ortasına yerleştirin. BAŞLAT'a tıklayın.
  5. Isı stimülasyonuna yanıt olarak sol arka pençeyi (tek arka pençe enjeksiyonlu fareler için) veya arka pençeyi (her iki arka pençe enjeksiyonlu fareler için) yalama süresini gözlemleyin ve kaydedin. Sıcak plaka ekranında süreyi görmek için sıcak plakanın pedalına basın. Ağrı eşiğini, fareyi sıcak plakaya yerleştirmekten arka pençeyi yalamaya kadar geçen süre olarak tanımlayın.
  6. Sıcak plaka testi60 için 4,8,9 sn sınırı belirleyin. Sınıra ulaşılırsa 60 s'lik bir ağrı eşiği kaydedin.
    NOT: Önceki fareden kalan koku nedeniyle olası sapmayı önlemek için bir sonraki fareyi yerleştirmeden önce sıcak plaka aparatını %75 alkolle temizleyin.

5. 1.5 mg / mL selekoksib süspansiyonunun hazırlanması

  1. 200 mg selekoksib içeren 1 kapsül alın. Kapsülün içeriğini alın ve bir toz haline getirin.
  2. % 0.5 sodyum karboksimetil selüloz ekleyin. Son hacim 13.3 mL'dir. Bu, selekoksibin mağaza süspansiyonudur.
  3. Mağaza süspansiyonu selekoksibinden 1 mL alın. 1.5 mg / mL selekoksib süspansiyonu elde etmek için 9.0 mL %0.5 sodyum karboksimetil selüloz ekleyin.
  4. Farelere intragastrik olarak 0.2 mL / 10 g selekoksib süspansiyonu uygulayın.
    NOT: 20-25 g ağırlığındaki fareler için 4,0-4,5 cm uzunluğunda gavaj iğnesi seçin.

6. Modifiye inflamatuar ağrı modelinin değerlendirilmesi

  1. ICR dişi farelerini rastgele üç gruba ayırın: kontrol, model ve selekoksib grupları.
  2. 30 μL% 1 İrlanda yosunu çözeltisini, arka pençenin plantar yüzeyine deri altına enjekte edin (tek arka pençe veya her iki arka pençe). Kontrol grubu fareleri için 30 μL normal salin enjekte edin.
  3. İrlanda yosunu veya normal salin enjeksiyonundan sonra tedaviyi hemen uygulayın. Selekoksib grubundaki fareler için intragastrik olarak selekoksibi 30 mg / kg'lık bir dozda uygulayın. Kontrol ve model gruplarındaki fareler için intragastrik olarak% 0.5 sodyum karboksimetil selüloz uygulayın.
  4. İrlanda yosunu enjeksiyonundan 3 saat sonra sıcak plaka testini (bölüm 2) yapın.

7. İstatistiksel yöntemler

  1. Deneysel sonuçları ortalama ± standart sapma olarak sunun. Kolmogorov-Smirnov istatistiksel uyum iyiliği testi ile bir normallik dağılımı testi yapın.
  2. Eşlenmemiş bir t-testi kullanarak iki grup arasındaki karşılaştırmayı analiz edin. Tek yönlü bir varyans analizi ve ardından Dunnett'in testini kullanarak çoklu grup karşılaştırmaları yapın. P < 0.05 değerini istatistiksel olarak anlamlı olarak düşünün.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

İnflamatuar ağrı modellerinde ağrı eşiği
Tek arka pençe İrlanda yosunu enjeksiyonu ile inflamatuar ağrı modelinin ağrı eşiği 32.23 ± 11.11 s iken, kontrol grubunun ağrı eşiği 27.73 ± 7.08 s idi. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, tek arka pençe enjeksiyon modelinin ağrı eşiği anlamlı bir azalma göstermedi (p > 0.05, Şekil 1A). Her iki arka pençe karragenan enjeksiyonu ile inflamatuar ağrı modelinin ağrı eşiği 21.84 ± 5.63 s iken, kontrol grubunun ağrı eşiği 28.21 ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Ağrı, doku hasarı veya yaralanma ile tetiklenen koruyucu bir tepkidir. Bununla birlikte, yaşam kalitesi üzerinde de olumsuz bir etkisi vardır10. Bu nedenle, etkili analjeziklerin geliştirilmesi ve ağrı mekanizmalarının araştırılması aktif araştırma alanları olmaya devam etmektedir. Ağrıyı değerlendirme yöntemleri analjezik ilaçların geliştirilmesinde anahtar rol oynamaktadır. İrlanda yosununun tek arka pençe enjeksiyonu, sıcak plaka testi için klasik bir yöntemdir...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek herhangi bir potansiyel çatışan çıkarı yoktur.

Teşekkürler

Liwen Bianji'den (Edanz) (www.liwenbianji.cn) Dr. Lesley McCollum'a, bu el yazmasının bir taslağının İngilizce metnini düzenlediği için teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AL204 elektronik dengeYuheng Battery Co., Ltd YH-400A
KarboksimetilselülozTianjin Chemical Co., Ltd 
CarrageenanSigma, MO, ABD29H0715
CelecoxibPfizer Inc.
Sıcak plaka UGO Ltd. Co, İtalyaPB-200 
ICR dişi farelerJinan Pengyue & nbsp; Co., Ltd.
Normal tuzlusu Kelun Pharmaceutical Co., Ltd 
202103268142838SCXK20220007H51021157

Kaynaklar

  1. Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Front Mol Neurosci. 10, 284(2017).
  2. Menéndez, L., Lastra, A., Hidalgo, A., Baamonde, A. Unilateral hot plate test: a simple and sensitive method for detecting central and peripheral hyperalgesia in mice. J Neurosci Methods. 113 (1), 91-97 (2002).
  3. Li, T., et al. Rotigotine-loaded microspheres exerts the antinociceptive effect via central dopaminergic system. Eur J Pharmacol. 910, 174443(2021).
  4. Kambur, O., et al. Inhibitors of catechol- O -methyltransferase sensitize mice to pain. Br J Pharmacol. 161 (7), 1553-1565 (2010).
  5. Micheli, L., et al. Efficacy of Posidonia oceanica extract against inflammatory pain: In vivo studies in mice. Mar Drugs. 19 (2), 48(2021).
  6. McCarson, K. E. Models of inflammation: Carrageenan- or complete Freund's adjuvant (CFA)-induced edema and hypersensitivity in the rat. Curr Protoc Pharmacol. 70, 5.4.1-5.4.9 (2015).
  7. Fehrenbacher, J. C., Vasko, M. R., Duarte, D. B. Models of Inflammation: Carrageenan- or Complete Freund's Adjuvant (CFA)-Induced Edema and Hypersensitivity in the Rat. Curr Protoc Pharmacol. Chapter 5 (Unit 5.4), (2012).
  8. Asl, M. K., Nazariborun, A., Hosseini, M. Analgesic effect of the aqueous and ethanolic extracts of clove. Avicenna J Phytomed. 3 (2), 186-912 (2013).
  9. Wang, Y. Analgesic effects of glycoproteins from Panax ginseng root in mice. J Ethnopharmacol. 148 (3), 946-950 (2013).
  10. Zia, F. Z., et al. Are psychedelic medicines the reset for chronic pain? Preliminary findings and research needs. Neuropharmacology. 233, 109528(2023).
  11. Sałat, K., Furgała, A., Sałat, R. Evaluation of cebranopadol, a dually acting nociceptin/orphanin FQ and opioid receptor agonist in mouse models of acute, tonic, and chemotherapy-induced neuropathic pain. Inflammopharmacology. 26 (2), 361-374 (2018).
  12. Wang, J., et al. Anti-inflammatory and analgesic actions of bufotenine through inhibiting lipid metabolism pathway. Biomed Pharmacother. 140, 111749(2021).
  13. Gong, L., et al. Antinociceptive and anti-inflammatory potentials of Akebia saponin D. Eur J Pharmacol. 845, 85-90 (2019).
  14. Deng, J., et al. Comparison of analgesic activities of aconitine in different mice pain models. PloS One. 16 (4), e0249276(2021).
  15. Penn, N. W. Potentiation of morphine analgesic action in mice by beta-carotene. Eur J Pharmacol. 284 (1-2), 191-193 (1995).
  16. Akkol, E. K., Güvenç, A., Yesilada, E. A comparative study on the antinociceptive and anti-inflammatory activities of five Juniperus taxa. J Ethnopharmacol. 125 (2), 330-336 (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Sıcak Plaka TestiKarrajenan EnjeksiyonuTermal Ağrı EşiğiHer İki Arka Pençe EnjeksiyonuTek Arka Pençe EnjeksiyonuSeleksoksib TedavisiAğrı Eşiği ÖlçümüICR Fareler
Farelerde analjezik etkiyi incelemek için modifiye edilmiş bir inflamatuar ağrı modeli
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.