Burada, marmoset sendromunun (WMS, inflamatuar bağırsak hastalığı (IBD) benzeri hastalık olarak da bilinir) traneksamik asit ile israf edilmesi için modifiye tedavi yöntemlerini açıklıyoruz. Ayrıca terapötik ajanların oral, subkutan ve intravenöz olarak nasıl uygulanacağını da sunuyoruz.
Yöntem makalesi
Marmoset Sendromunun Traneksamik Asit ile Zayıflatılmasında Tedavi Yöntemlerinin Modifikasyonu ve Destekleyici Önlemler
Bu makalede
Özet
Özet
Tutsak adi marmoset (Callithrix jacchus) kolonilerinde ciddi bir hastalık olan marmoset sendromu (WMS), yüksek mortalite oranı ile ilişkilidir. WMS'nin spesifik nedeni hala belirsizdir ve az sayıda etkili tedavi vardır. Daha önce, WMS için yararlı bir tedavi olarak destekleyici önlemler içeren bir traneksamik asit tedavisi bildirmiştik. Bu çalışmada, modifiye edilmiş yöntemi tarif ediyoruz: haftada beş kez deri altından 0.1 mL %5 traneksamik asit, haftada üç kez intravenöz olarak 2.0 mL amino asit formülasyonu, haftada üç kez deri altından 0.1 mL vitamin formülasyonu ile 5.0 mL Ringer laktat kombinasyonu ve haftada beş kez 0.1 mL demir formülasyonunun oral yoldan uygulanması. Ayrıca, çözeltinin, hayvanı kısıtlamanın bir ucu ile safen ven yoluyla intravenöz olarak nasıl uygulanacağını ve ayrıca oral ve deri altı uygulama için ayrıntılı yöntemleri de açıklıyoruz. Modifiye edilmiş yöntemler, orijinal WMS tedavi yöntemiyle karşılaştırılabilir verimliliğe sahiptir.
Giriş
Marmoset israf sendromu (WMS), tutsak yaygın marmoset kolonilerine özgü ciddi bir hastalıktır. Başlıca semptomlar kilo kaybı, azalmış kas kütlesi, anemi, hipoalbüminemi ve kronik enterittir 1,2,3,4. Bazı çalışmalar, ötenazi uygulanan tutsak marmosetlerin %60,5'inde kronik enterit5 kanıtı olduğunu ve ölümlerin %31-44'ünün bu hastalığı içerdiğinibildirmiştir 6. Bu hastalığın yüksek prevalansı, etkin tedavisini gerekli kılmıştır.
2016 yılında, destekleyici önlemleri olan traneksamik asidin WMS7 için etkili bir tedavi olduğunu bildirmiştik. Ek olarak, WMS'den etkilenen marmosetlerin bağırsak protein kaybı bu tedavi ile önemli ölçüde azalmıştır8. Orijinal tedavi protokolü kesinlikle etkili olmasına rağmen, biraz yüksek miktarda intravenöz enjeksiyon, yüksek dozda vitamin formülasyonu ve günlük kısıtlama içeriyordu. Marmosetler elle yakalamaya ve kısıtlamaya duyarlı olduğundan, bu eylemler daha az sıklıkta olmalıdır. Bu nedenle, bazı modifikasyonlarla hayvanlar için ağır yükü azaltmayı hedefledik.
Bu yazıda, modifiye edilmiş yöntemler sunulacaktır: haftada 5 kez seyreltilmemiş traneksamik asidin deri altı enjeksiyonu (haftada 7 kez 5 kat seyreltilmiş traneksamik asit çözeltisinin intraperitoneal enjeksiyonu yerine), intravenöz enjeksiyon için 2.0 mL amino asit formülasyonu (3.0 mL yerine), deri altı enjeksiyon için 0.1 mL vitamin formülasyonu (0.5 mL yerine), ve demir formülasyonunun haftada 5 kez oral yoldan uygulanması (haftada 7 kez yerine).
Protokol
Bu çalışma, RIKEN (Saitama, Japonya) Hayvan Deneyleri Komitesi'nin onayı (W2023-2-041) ile gerçekleştirilmiştir ve Hayvanlar Kullanılarak Yapılan Deneyler için Kurumsal Yönergelere uygun olarak yürütülmüştür. Bu çalışmada altı adet dişi marmoset (2-6 yaş) kullanılmıştır.
1. Tedaviye başlama kriterleri
- Aşağıdaki kriterlerden herhangi biri gözlendiğinde tedaviye başlayın: i) vücut ağırlığının < 300 g veya ayda vücut ağırlığında >20 g'lık bir azalma; ii) hipoalbüminemi (serum albümin < 3.8 g / dL); iii) anemi (hematokrit <% 35); iv) Clostridium difficile, enteropatojenik Escherichia coli veya bağırsak protozoası olmayan kronik ishal; ve v) kas kütlesinde belirgin bir azalma.
NOT: WMS'nin eşlik ettiği dehidrasyon ve müteakip hemokonsantrasyon nedeniyle, etkilenen hayvanlarda serum albümin ve hematokrit değerleri yapay olarak yükseltilebilir.
2. Oral uygulama
- 0.1 mL demir formülasyonunu ( Malzeme Tablosuna bakınız) bir parça pandispanya ile karıştırın.
- Püreyi işlenmiş marmosete verin.
NOT: İşlem görmüş marmosetin püreyi tamamen yuttuğundan emin olun.
3. Deri altı uygulama
- Kuyruğunu nazikçe tutarak WMS'den etkilenen marmoseti ev kafesinde yakalayın.
- Diğer elinizle hayvanın üst vücudunu arkadan tutun.
- Hayvanı tedavi odasına getirin.
- Hayvanın asistanın göğsüne veya koluna yapışmasına izin verin.
- Hayvanın sırt bölgesini alkollü bir bezle temizleyin.
- 0.1 mL traneksamik asit (% 5 çözelti, Malzeme Tablosuna bakınız) haftada 5 kez 26 G'lık bir iğne kullanarak deri altından sırta enjekte edin.
- Haftada 3 kez 26 G'lik bir iğne kullanarak deri altına 0.1 mL vitamin formülasyonu (Malzeme Tablosuna bakınız) ile 5.0 mL Ringer laktatını (Malzeme Tablosuna bakınız) enjekte edin.
NOT: Her enjeksiyon 1 dakika içinde her farklı noktada yapılmalıdır.
4. Amino asit formülasyonunun intravenöz uygulaması
- Kuyruğunu nazikçe tutarak WMS'den etkilenen marmoseti ev kafesinde yakalayın.
- Diğer elinizle hayvanın üst vücudunu arkadan tutun.
- Hayvanı tedavi odasına getirin.
- Asistanın her iki kolun tabanını tutarak hayvanın üst vücudunu tutmasını ve diğer eliyle her iki bacağın tabanını tutarak alt vücudunu tutmasını sağlayın. Asistandan, bükülmesini önlemek için hayvanın alt vücudunu kısıtlayan başparmağını hayvanın dizinin ön tarafına yerleştirmesini isteyin.
- Hayvanın buzağısını alkollü bir bezle temizleyin.
- Haftada üç kez 27 G'lik bir kelebek iğne kullanarak safen ven yoluyla intravenöz olarak 2.0 mL amino asit formülasyonunu ( Malzeme Tablosuna bakınız) enjekte edin.
NOT: Enjeksiyon 2 dakikaya kadar mümkün olduğunca yavaş yapılmalıdır. - Enjeksiyondan sonra, asistandan kanama durana kadar bölgeye emici pamukla bastırmasını isteyin.
5. Vücut ağırlığı ölçümü
- Tedaviden sonra (intravenöz ve/veya deri altı enjeksiyon), vücut ağırlığını izlemek için hayvanı haftada bir kez bir taşıma kutusu ile tartın.
NOT: Vücut ağırlığı yiyeceğin varlığından etkilendiği için marmoseti yaklaşık olarak aynı anda tartın.
6. Tam kan sayımı (CBC) analizi ve serum kimyası testleri
- Kuyruğunu nazikçe tutarak WMS'den etkilenen marmoseti ev kafesinde yakalayın.
- Diğer elinizle hayvanın üst vücudunu arkadan tutun.
- Hayvanı tedavi odasına getirin.
- Asistanın her iki kolun tabanını tutarak hayvanın üst vücudunu tutmasını ve diğer eliyle her iki bacağın tabanını tutarak alt vücudunu tutmasını sağlayın.
- Uygulayıcıdan hayvanın kısıtlanmamış bacağını tutmasını isteyin.
- Hayvanın kasık bölgesini alkollü bir bezle temizleyin.
- Ayda 26 G'lik bir iğne kullanarak femoral venden 0.4 mL kan toplayın.
- Hematokrit de dahil olmak üzere CBC analizi için 0.05 mL kan örneği kullanın.
- Kan örneğinin geri kalanını oda sıcaklığında 1 saat bekletin ve 1.800 × g'da 20 dakika santrifüjleyin.
- Serumu albümin de dahil olmak üzere kimya testleri için kullanın.
NOT: Kan örneğinin hacmi, serum kimyası testi için parametre sayısını en aza indirerek azaltılabilir. Kan örneğinin hacmini bireysel marmosetin durumuna göre ayarlayın.
Sonuçlar
Modifiye tedavi yöntemleri, WMS'den etkilenen marmosetlerde hematokrit (Şekil 1A), serum albümini (Şekil 1B) ve vücut ağırlığının (Şekil 1C) artmasına neden oldu. Tedavi öncesi ve sonrası arasında hematokrit (P < 0.05, Wilcoxon eşleştirilmiş çiftler işaretli sıra testi), serum albümini (P < 0.05, Wilcoxon eşleştirilmiş çiftler işaretli sıra testi) ve vücut ağırlığı (P < 0.05, Wilcoxon eşleştirilmiş çiftler işaretli sıra testi) açısından anlamlı farklılıklar görüldü.
Tedavinin görünüm üzerindeki etkileri de gözlendi. Şekil 2, WMS'den etkilenen bir marmosetin görünümünü göstermektedir. Tedavi öncesi tabefaksiyon, kemerli sırt, pürüzlü kürk (Şekil 2A) ve alopesi (Şekil 2B) gözlenirken, tedavi sonrası anormal bir görünüm görülmedi (Şekil 2C,D).
Şekil 1: Modifiye tedaviyi alan bir marmosette hematokrit, serum albümini ve vücut ağırlığındaki değişiklikler (tedavi öncesi ve sonrası). (A) Hematokrit değerleri, (B) serum albümin değerleri ve (C) vücut ağırlığı. Kesikli çizgiler ölçüt değerlerini gösterir. Kısaltmalar: Htc = hematokrit; Alb = serum albümini; BW = vücut ağırlığı. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: WMS'den etkilenen marmosetin temsili görünümü. (A) Ön tedavi hayvanının görünümü: tabefaksiyon, kemerli sırt ve kaba kürk gözlenir. (B) Ön tedavi hayvanının kuyruğu: alopesi görülür. (C) Tedavi sonrası hayvanın görünümü. (D) Tedavi sonrası hayvanın kuyruğu. Kısaltma: WMS = israf marmoset sendromu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Tartışma
2016 yılında, destekleyici önlemlerle birlikte traneksamik asidin WMS için etkili bir tedavi olduğunu bildirdik ve bu, glukokortikoidler kullanılmadan WMS tedavisini gösteren ilk rapor oldu. İnsanlarda, glukokortikoidler IBD'nin en etkili tedavisi olarak kabul edilir. Bununla birlikte, en sık kullanılan glukokortikoidlerden biri olan predonizolon, yan etkileri nedeniyle WMS tedavisi için uygun değildir. WMS tedavisi9 için bir glukokortikoid olan budesonid bildirilmiş olsa da, tedavi akut WMS formları olan hayvanlarda nispeten etkisizdi. Traneksamik asit, anti-enflamatuar etkileri olan bir plazmin inhibitörüdür ve orijinal yöntemlerimizde kayda değer bir yan etki görülmemiştir. Bununla birlikte, orijinal tedavi protokolü kesinlikle etkili olmasına rağmen, hayvanlar ve bakıcılar için ağır bir yük getirdi.
Bu çalışmada, hem hayvanın fizyolojik yükünü hem de bakıcıların iş yükünü azaltmak için WMS için modifiye tedavi yöntemleri uygulanmıştır. Modifiye yöntemlerde, traneksamik asidin uygulama yolu değiştirildi (intraperitonealden subkutana), bu da abdominal organların yaralanma riskini azaltmaya katkıda bulundu. Traneksamik asit çözeltisi, kontaminasyon riskini ve hazırlama süresini azaltmak için bu protokolde seyreltilmemiştir. Orijinal yöntemlerde, 3.0 mL amino asit formülasyonu intravenöz olarak enjekte edildi. Bununla birlikte, hacim biraz büyüktü çünkü 5.0 mL / kg'ın bolus10 olarak uygulanması önerilmektedir. Bu nedenle, modifiye edilmiş yöntemlerde hacim azaltıldı.
Bu protokolde kullanılan vitamin formülasyonu B ve C vitaminleri içerir. Orijinal yöntemde, 0.5 mL vitamin formülasyonu 2.5 mg tiamin klorür hidroklorür içerir, bu da laboratuvarda barındırılan sütten kesme sonrası insan olmayanprimatların gereksiniminin 2.5 katıdır. Mevcut yöntemde, 1.0 mg tiamin klorür hidroklorür içeren 0.1 mL vitamin formülasyonu uygulandı. Modifiye edilmiş yöntemlerde demir formülasyonunun ve traneksamik asit çözeltisinin uygulanma sıklığı azaltıldı, bu da hayvanların yanı sıra bakıcılar için yükün azaltılmasına katkıda bulundu.
Temsili Sonuçlar bölümünde yazıldığı gibi, modifiye edilmiş yöntemlerde önemli tedavi etkileri olmuştur. Ortalama tedavi süresi 37.8 ± 25.34 gün idi, bu da orijinal yöntemlerden (56 gün) daha kısaydı. Marmosetler zihinsel strese duyarlı olduğundan, uzun süreli tedaviler hayvan üzerinde iştah azalması gibi tam tersi bir etkiye sahiptir. Bu nedenle, bakıcıların yalnızca her bir parametrenin değerine değil, aynı zamanda hayvanın davranışına da dayanarak tedavinin sonlandırılma zamanına kapsamlı bir şekilde karar vermelerini öneririz.
Açıklamalar
Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu araştırma, Japonya Tıbbi Araştırma ve Geliştirme Ajansı (AMED) tarafından Hastalık Çalışmaları için Entegre Nöroteknolojiler (Brain/MINDS) projesi (Hibe Numarası JP23dm0207001) kapsamında kısmen desteklenmiştir.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1.0 mL Şırınga | Terumo Corporation, Tokyo, Japonya | SS-01T | Traneksamik asidin deri altına enjeksiyonu için |
| 10 mL Şırınga | Terumo Corporation, Tokyo, Japonya | SS-10SZ | Amino asit formülasyonunun intravenöz uygulaması için |
| 26 G İğne | Terumo Corporation, Tokyo, Japonya | NN-2613S | Deri altı enjeksiyon için |
| 27 G Kelebek İğne Tip D | Terumo Corporation, Tokyo, Japonya | SV-27DL | Amino asit formülasyonunun İntravenöz Uygulaması için |
| 5 mL Şırınga | Terumo Corporation, Tokyo, Japonya | SS-05SZ | Ringer laktatının deri altı enjeksiyonu ve Vitamin formülasyonu için |
| Aminoleban Enjeksiyonu | Otsuka Pharma Factory Inc., Tokyo, Japonya | 1942 | Ringer laktat ve Vitamin formülasyonunun |
| C-PARA | Takata Pharma Co., Ltd., Saitama, Japonya | 120-31960-0 | Vitamin formülasyonu |
| FCV Sıvı | Minerva Corporation, Saitama, Japonya | Demir formülasyonu | |
| Lactec Enjeksiyonu | Otsuka Pharma Factory Inc., Tokyo, Japonya | 0714 | Ringer ' S laktat |
| Vazolamin Enjeksiyon | Meiji Seika Pharma Co., Ltd., Tokyo, Japonya | DBASOS | Traneksamik asit |
Kaynaklar
- Baxter, V. K., et al. Serum albumin and body weight as biomarkers for the antemortem identification of bone and gastrointestinal disease in the common marmoset. PLoS ONE. 8 (12), e82747(2013).
- Brack, M., Rothe, H. Chronic tubulointerstitial nephritis and wasting disease in marmosets (Callithrix jacchus). Vet Pathol. 18, Suppl 6 45-54 (1981).
- Chalifoux, L. V., Bronson, R. T., Escajadillo, A., McKenna, S. An analysis of the association of gastroenteric lesions with chronic wasting syndrome of marmosets. Vet Pathol Suppl. 7, 141-162 (1982).
- Logan, A. C., Khan, K. N. Clinical pathologic changes in two marmosets with wasting syndrome. Toxicol Pathol. 24 (6), 707-709 (1996).
- Ludlage, E., Mansfield, K. Clinical care and diseases of the common marmoset (Callithrix jacchus). Comp Med. 53 (4), 369-382 (2003).
- Ross, C. N., Davis, K., Dobek, G., Tardif, S. D. Aging phenotypes of common marmosets (Callithrix jacchus). J Aging Res. 2012, 567143(2012).
- Yoshimoto, T., Niimi, K., Takahashi, E. Curative effects of tranexamic acid with supportive measures on wasting marmoset syndrome. Comp Med. 66 (6), 1-6 (2016).
- Niimi, K., et al. Measurement of the α1-proteinase inhibitor (α1-antitrypsin) of common marmoset and intestinal protein loss in wasting syndrome. Biosci Rep. 39 (7), 20190562(2019).
- Otovic, P., Smith, S., Hutchinson, E. The use of glucocorticoids in marmoset wasting syndrome. J Med Primatol. 44 (2), 53-59 (2015).
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).
- Lewis, S. M., Hotchkiss, C. E., Ullrey, D. E. Chapter 13. Nutrition and nutritional diseases. The Laboratory Primates. Wolfe-Coote, S. , 181-208 (2005).
Yeniden basım ve izinler
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste