Kapasitif Biyosensör Kullanarak Dinamik Çok Parametreli Trombosit Fonksiyon Değerlendirmesi

Summary

Kapasitif bir biyosensör kullanan yeni bir dinamik çok parametreli trombosit fonksiyonel testi için bir protokol burada sunulmaktadır. Fizyolojik alaka düzeyini artırmak için yarı katı bir mikro ortam içinde tasarlanan bu yaklaşım, trombosit sayısına, stimülasyon güçlerine ve aktivasyon yollarına duyarlı üç çıktı parametresi sağlar.

Abstract

Trombositler, yapışma, yayılma, granüler sekresyon, agregasyon ve hücre iskeleti kasılması dahil olmak üzere bir dizi düzenlenmiş yanıt yoluyla kanın pıhtılaşmasında temel bir rol oynar. Bununla birlikte, mevcut tahliller, fizyolojik olmayan koşullar altında trombosit fonksiyonunun kısmi analizi ile sınırlıdır. Bu nedenle, fizyolojik ortamlarda trombosit fonksiyonunun dinamik ve çok yönlü doğasını yansıtan gelişmiş bir test gereklidir. Bu bağlamda, geleneksel tahlillere kıyasla fizyolojik olarak daha ilgili ex vivo yarı sert bir mikro ortamda trombosit fonksiyonu ile ilgili birkaç anahtar parametreyi ölçmek için yeni bir yaklaşım tanıtılmıştır. Bu yöntem, üç farklı okuma yoluyla pıhtılaşma sürecine ilişkin benzersiz bilgiler sağlayan gelişmiş bir elektrikli biyosensör olan membran kapasitans sensörünü (MCS) kullanır. Bu okumalar, trombosit sayısı, stimülasyon yoğunluğu ve spesifik aktivasyon yollarındaki değişikliklere karşı oldukça hassastır. Tamamen elektriksel bir algılama platformu olarak MCS, primer hemostatik fonksiyon bozukluklarını tespit etmek, terapötik tedavilerin etkinliğini değerlendirmek ve trombositlerin hemostaz ve trombozdaki rollerinin daha geniş bir şekilde anlaşılmasını sağlamak için bir tanı aracı olarak önemli bir potansiyel göstermektedir.

Introduction

Özel kan hücreleri olan trombositler, yaralanmayı takiben kanamayı durdurmak için hemostatik yanıtı düzenlemede ve kan damarlarının iyileşmesini kolaylaştırmada çok önemlidir¹. Ek olarak, küresel olarak tromboembolik hastalığa bağlı ölümlerin önde gelen nedenlerinden biri olan trombozda da çok önemli aracılar olarak hizmet ederler 2,3,4,5,6. Vasküler bir yaralanma meydana geldiğinde, trombositler bir dizi karmaşık, düzenlenmiş ve çok aşamalı fonksiyo....

Protocol

Çalışma önerisi, Washington Üniversitesi İç İnceleme Kurulu'ndaki (UW-IRB) İnsan Denekleri Bölümü (HSD) tarafından onaylandı; Çalışma ID: STUDY00005211). Çalışmaya katılan tüm gönüllü denekler yazılı bilgilendirilmiş onam verdiler. Bu çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanların detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Membran kapasitif sensör (MCS) için üretim adımları

NOT: MCS sensörü, geleneksel mikrofabrikasyon teknikleri kullanılarak üretilmiştir. Bu biyosensör, bir üst (T-) ve alt (B-) membran kapasitans çipinden (MCC) oluşuyordu.....

Results

Bu çalışmanın amacı trombosit fonksiyonunun dinamik bir değerlendirmesini yapmaktır. Yukarıda tarif edilen protokolü takiben, c-PRP çözeltisi hazırlandı ve trombositler T-MCC'de Fn kaplı elektrot üzerine tohumlandı. Serbest yüzen trombositler yıkama aşaması ile yıkandı ve bağlı trombositleri aktive etmek için bir agonist eklendi. Ayrıntılı sonuçlar ve tartışma önceki raporumuzda bulunabilir²⁸.

Şekil 4A, önceden belirlenmiş bir trombosit say.......

Discussion

Bu çalışma, tek bir cihazda hem yapışmayı hem de aktivasyon sonrası trombosit dinamiklerini değerlendiren trombosit fonksiyonunu değerlendirmek için yeni bir kapasitans tabanlı yönteme öncülük etti ve böyle bir yaklaşımın ilk bildirilen örneğini işaret etti. Yeni deneysel protokol, bir yıkama prosedürü yoluyla fibrin oluşumu ve plazma pıhtılaşma faktörlerinin etkilerine karşı koymak için nispeten basit bir teknik sunar. Bu, trombosit fonksiyonunu etkileyen çeşitli faktörleri ayırt edebil.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1-Dodekanetiol	Sigma-Aldrich, MO, ABD	471364-100ML	1 mM
200 geçirmez etanol	Sigma-Aldrich, MO, ABD	EX0276-1
3D yazıcı	Shenzhen Creality 3D Technology Co, Ltd.	Ender-3 V3
3D baskı malzemesi	HATCHBOX 3D, CA, U.S.A	3D PLA-1KG-1.75
Adenozin 5′-difosfat	Sigma Aldrich, ABD	01905-250MG-F
ADP Aspirin	Sigma-Aldrich, MO, ABD	A2093-100G
Derin Reaktif İyon Aşındırma	Omega Engineering, Inc.	SPTS Rapier DRIE
Dimetil Sülfoksit	Sigma-Aldrich, MO, ABD	D8418-50ML	DMSO
Yüksek Vakum Biriktirme Sistemleri	CHA ve nbsp;	SEC-600
İnsan Fibronektin	Sigma-Aldrich, MO, ABD	CLS356008-1EA	Fn
KOH	Sigma-Aldrich, MO, ABD	P1767-250G
LCR metre ve nbsp;	Keithley Instruments, Inc., OH, ABD	Keithley EL 4980AL
LCR metre sahipleri	Signatone Corporation, CA, ABD	SCA-50-4
Maske Hizalama Sistemi	ABM, U.S.A, Inc.	ABM / 6/350 / NUV / DCCD / SA
Mikro Konumlandırıcılar	Signatone, CA, ABD	S-725
iğne probu	Signatone Corporation, CA, ABD	SCAT5T-4	12.5 & mu; m yarıçapı
Fosfat Tamponlu Tuzlu	Sigma-Aldrich, MO, ABD	P4474-1L	PBS, pH 7.4
Reaktif İyon Aşındırma	Plazma-Term, ABD	RIE Vision 320
silikon substrat	Gofret World Inc	SKU # 1766
Standart% 3.2 sitrat tüpleri	Tiger Medical, NJ, ABD	Covidien / Kardinal Sağlık 8881340478 Monoject
Trombin	Enzim Araştırma Laboratuvarları, U.S.A	HT 1002a
Ticagrelor	Sigma-Aldrich, MO, ABD	PHR2788-400MG
Tyrode' s tampon	Boston Bioproducts, ABD	BSS-375
UV fotorezist	AZ elektronik malzemeler, NC, ABD	AZ 9260	15um