Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

κ-Carrageenan Sub-Microjel Ortamı Kullanılarak Doku Benzeri Yapıların Gömülü Biyobaskısı

2.1K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/66806

⸱

3 Mayıs 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, dikkate değer geri dönüşümlü sıkışma-sıkışma giderme geçiş özellikleri sergileyen yeni bir κ-İrlanda yosunu alt mikrojel süspansiyon banyosunu tanıtmaktadır. Bu özellikler, gömülü 3D biyobaskıda biyomimetik doku ve organların inşasına katkıda bulunur. Kalp/özofagus benzeri dokuların yüksek çözünürlüklü ve hücre büyümesi ile başarılı bir şekilde basılması, yüksek kaliteli biyobaskı ve doku mühendisliği uygulamalarını göstermektedir.

Özet

Granül hidrojel destek banyosu kullanan gömülü üç boyutlu (3D) biyobaskı, biyomimetik iskeleler oluşturmak için kritik bir teknik olarak ortaya çıkmıştır. Bununla birlikte, hassas biyomürekkep birikimini hücre canlılığı ve işlevi ile dengeleyen uygun bir jel süspansiyon ortamının mühendisliği, özellikle istenen viskoelastik özelliklerin elde edilmesinde birçok zorluk ortaya çıkarmaktadır. Burada, yeni bir κ-karagenan jel destek banyosu, homojen alt mikro ölçekli parçacıklar üreten, kullanımı kolay bir mekanik öğütme işlemiyle üretilir. Bu alt mikrojeller, biyomürekkeplerin düzgün bir şekilde birikmesini kolaylaştıran küçük akma gerilimi ve hızlı kesme inceltme özellikleri ile tipik Bingham akış davranışı sergiler. Ayrıca, κ-karagenan mikrojel ağının geri dönüşümlü jel-sol geçişi ve kendi kendini iyileştirme yetenekleri, basılı yapıların yapısal bütünlüğünü sağlayarak, tanımlanmış mimari özelliklere sahip karmaşık, çok katmanlı doku yapılarının oluşturulmasını sağlar. Baskı sonrası, κ-karagenan alt mikrojelleri, basit bir fosfat tamponlu tuzlu su yıkama ile kolayca çıkarılabilir. Hücre yüklü biyomürekkeplerle daha fazla biyobaskı, biyomimetik yapılar içindeki hücrelerin %92 gibi yüksek bir canlılığa sahip olduğunu ve psödopodiyi hızla uzattığını ve ayrıca sağlam proliferasyonu sürdürdüğünü göstermektedir, bu da doku ve organ üretimi için bu biyo-baskı stratejisinin potansiyelini göstermektedir. Özetle, bu yeni κ-İrlanda yosunu alt mikrojel ortamı, mühendislik doku ve organlarının in vitro gelişimi için derin etkiler taşıyan, olağanüstü kalitede gömülü biyo-baskı için umut verici bir yol olarak ortaya çıkmaktadır.

Giriş

Elektro-eğrilmiş lifler, gözenekli süngerler ve polimer hidrojeller dahil olmak üzere doku mühendisliği iskeleleri, hücre büyümesini, doku yenilenmesini ve organ fonksiyonunun restorasyonunu destekleyen yapısal bir çerçeve sağlayarak hasarlı doku ve organların onarımında ve yeniden yapılandırılmasında çok önemli bir rol oynar 1,2,3. Bununla birlikte, geleneksel iskeleler, doğal doku yapılarını doğru bir şekilde kopyalamada zorluklarla karşılaşır ve bu da tasarlanmış ve doğal dokular arasında bir uyumsuzluğa yol açar. Bu sınırlama, kusurlu dokuların verimli bir şekilde iyileşm....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. κ-İrlanda yosunu alt mikrojel süspansiyon banyosunun hazırlanması

  1. 1.000 mL'lik bir cam şişe içinde 500 mL fosfat tamponlu salin (PBS, pH 7.4) çözeltisine 1.75 g κ-İrlanda yosunu tozu ekleyerek 500 mL κ-İrlanda yosunu süspansiyon banyosu (ağırlıkça% 0.35 / hacim) hazırlayın.
  2. Sulu karışımı karıştırmak için cam şişeye 70 mm'lik bir manyetik karıştırma çubuğu yerleştirin. Cam şişe kapağını sıkın ve ardından yarım tur gevşetin.
  3. Cam şişeyi 70 °C'lik bir su banyosuna koyun ve ısıtın. Manyetik karıştırıcıyı 300 rpm hızında açın, şişeyi yerleştirin ve polimer tamamen eriyene kadar karıştırın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Granül κ-İrlanda yosunu jel banyosu, dökme hidrojellerin mekanik olarak partikül bir jel bulamacına ayrılmasıyla oluşturulmuştur. En son çalışma, κ-karragenan parçacıklarının, daha önce literatürde bildirilen mikrojellerin boyutlarından önemli ölçüde daha küçük olan, 1000 rpm mekanik harmanlamada15 tekdüze morfolojilerle yaklaşık 642 ± 65 nm'lik bir ortalama çap sergilediğini göstermiştir 16,17,18

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Biyobaskıda kullanılmak üzere κ-karagenan alt mikrojel süspansiyon banyolarının hazırlanması, elde edilen ortamın biyomürekkepleri desteklemek için istenen özellikleri sergilemesini sağlamak için birkaç kritik adımı içeren, dikkatlice düzenlenmiş bir süreçtir. İlk olarak, κ-İrlanda yosunu tozunun yüksek sıcaklıklarda deiyonize su içinde çözülmesi ve homojen bir karışım oluşturulmasıyla bir κ-karagenan çözeltisi hazırlanır. Çözeltinin konsantras.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların bu yazıda açıklanan ürünlerle ilgili hiçbir mali çıkarı yoktur.

Teşekkürler

Bu araştırma, Ningbo Doğa Bilimleri Vakfı (2022J121, 2023J159), Ningbo Şehri Doğa Bilimleri Vakfı'nın Anahtar projesi (2021J256), Polimerlerin Moleküler Mühendisliği Devlet Anahtar Laboratuvarı Açık Vakfı (Fudan Üniversitesi) (K2024-35) ve Çin'in Zhejiang Eyaleti Aterosklerotik Hastalıklar için Hassas Tıp Anahtar Laboratuvarı (2022E10026) tarafından desteklenmiştir. Ningbo Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi Çekirdek Tesisleri'nin teknik desteği için teşekkür ederiz.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
3D biyoyazıcıÖzel tasarlanmış
4 ',6-Diamidino-2-FenilindolSolarbio Yaşam BilimleriC0065Kullanıma hazır
405 nm UV ışığıEFLXY-WJ01
Hücre SayacıCorningCyto smart 6749
Konfokal lazer tarama mikroskobuLeicaSTELLARIS 5
DMEM yüksek glikozVivaCellC3113-0500Sodyum Pirüvat ve L-Glutamin ile Yüksek Glikoz
Dinamik rotasyonel reometreTA EnstrümanKeşfi HR-20
Özofagus düz kas hücreleriNingbo Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi, Hücre Biyolojisi ve Rejeneratif Tıp Bölümü tarafından sağlanırTavşan özofagusundan alınan birincil hücreler
F9070L
Floresein izotiyosiyanat etiketli phalloidinSolarbio Yaşam BilimleriCA1610300T
Jelatin metakrilatEFLEFL-GM-60%60 ikame
k-İrlanda yosunuAladdinC121013-100gReaktif sınıfı
Lityum Fenil (2,4,6-trimetilbenzoil) fosfinatAladdinL157759-1g365 ~ 405 nm
Canlı-Ölü kitibeyotimeC2015M
Mikroplaka okuyucuPotenovPT-3502B
ParaformaldehitSolarbio Yaşam BilimleriP1110 %4
Penisilin / streptomisinSolarbio Yaşam BilimleriMA0110100 ve akut;
Fosfat tamponlu tuzlu suVivaCellC3580-0500pH 7.2-7.4
İpek fibroin metakrilatEFLEFL-SilMA-001%39 ikame
Triton X-100Solarbio Life ScienceT8200
Tripsin-EDTAVivaCellC100C1%0.25, fenol kırmızısı olmadan
Fetal sığır serumu UE

Kaynaklar

  1. Xu, X., et al. Biodegradable engineered fiber scaffolds fabricated by electrospinning for periodontal tissue regeneration. J Biomater Appl. 36 (1), 55-75 (2021).
  2. Amann, E., et al.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Kappa-Karragenan Mikro jeller3B BiyobasımDoku MühendisliğiGranüler Hidrojel BanyosuBiyomürekkep BiriktirmeMekanik ÖğütmeHücre Yüklü BiyomürekkeplerFotoyapısal Çapraz Bağlanma