Bu el yazması, postganglionik lomber sempatik nöronların bir fareden cerrahi olarak çıkarılması için bir protokol sunmaktadır. Bu prosedür, distal doku hedeflerinde sempatik innervasyonun rolünü araştırmayı amaçlayan çok sayıda çalışmayı kolaylaştıracaktır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Cerrahi Lomber Sempatektomi
Bu makalede
Özet
Özet
Periferik sinir yaralanmaları sık görülür ve hastaların sadece %10'unda yaralanma sonrası tam fonksiyonel iyileşme sağlanır. Sempatik sinir sistemi, bedensel homeostazın korunmasında birçok kritik rol oynar, ancak nadiren periferik sinir hasarı bağlamında incelenmiştir. Periferdeki distal hedeflerde postganglionik sempatik nöronal fonksiyonların kapsamı şu anda belirsizdir. Periferik hedeflerin sempatik innervasyonunun rolünü daha iyi araştırmak için, cerrahi bir "nakavt" modeli alternatif bir yaklaşım sağlar. Bu kimyasal olarak elde edilebilse de, postganglionik sempatik nöronların kimyasal yıkımı spesifik olmayabilir ve doza bağımlı olabilir. Bir zamanlar küçük hayvanlarda "neredeyse uygulanamaz" olduğu düşünülen farelerde cerrahi lomber sempatektominin kullanılması, arka bacakları innerve eden postganglionik sempatik nöronların spesifik olarak hedeflenmesine izin verir. Bu el yazması, L2-L5 lomber sempatik gangliyonların, arka pençe ter tepkisini ve siyatik sinirdeki sempatik akson sayısını güvenilir bir şekilde azaltan bir sağkalım ameliyatı olarak bir fareden cerrahi olarak nasıl çıkarılacağını açıklamaktadır.
Giriş
Periferik sinir yaralanmaları (PNI'ler) distal doku hedeflerinde nadiren fonksiyonel olarak tam olarak iyileşen motor, duyusal ve sempatik defisitlere yol açabilir1. PNI araştırması genellikle motor ve duyusal yenilenme üzerine odaklanmıştır; Bununla birlikte, sıçan siyatik sinirinin yaklaşık dörtte biri miyelinsiz sempatik aksonlardan oluşur2. Bununla birlikte, periferik dokularda sempatik innervasyonun rolü tam olarak anlaşılamamıştır3. Sempatik sinir sistemi, bedensel homeostazın korunmasında, bağışıklık regülasyonuna, termoregülasyona, vasküler tonusa, mitokondriyal biyogeneze ve daha fazlasın....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneyler, Emory Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı (IACUC protokol numarası PROTO201700371 altında). Bu çalışmada 14 haftalık ve 16-21 g ağırlığında dört yetişkin dişi vahşi tip C57BL / 6J faresi kullanıldı. Burada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanların ayrıntıları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.
1. Ameliyat öncesi hazırlık
- Cerrahi aletleri otoklavlayın: 1 çift keskin makas, 2 ince uçlu cımbız, 1 iğne ucu.
- Bir ısıtma yastığını 37 °C'ye ısıtın ve ameliyat masasının altına yerleştirin.
- Anestezi indüksiyon odası da dahil ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu protokol, postganglionik lomber sempatik nöronların bir fareden cerrahi olarak çıkarılmasını tanımlar. İki fareye lomber sempatiektomi yapıldı ve iki fare kontrol olarak görev yaptı. Başarılı bir cerrahi lomber sempatektomi elde etmek için, Şekil 1'de görüldüğü gibi en azından L2 ve L3 bilateral lomber sempatik gangliyonların yeterli görüntülenmesi sağlanmalıdır. L4 ve L5 gangliyonlarının çıkarılması, alt gövdenin tamamen sempatik denervasyonunu sağlayacaktır; Bununla birlikte, alt gangli.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Lomber sempatik gangliyonlar, birçok kritik karın organının ve büyük damarların arkasında yer alan çok küçük yapılardır. Bu nedenle, bu prosedür önemli bir hassasiyet ve doğruluk gerektirir. Zorluğun çoğu, intraoperatif olarak sempatik gangliyonların tanımlanmasında yatmaktadır. Öğrencinin, bu prosedürü canlı bir farede denemeden önce bir fare kadavrasındaki gangliyonu tanımlayabilmesi önerilir. Bağırsakların saptırılmasından sonra sempatik gangliyonları tanımlarken sorun gidermenin sıklıkla yapılması gerekecektir. Yeter.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, NIH Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüsü tarafından K01NS124912 numaralı ödül altında ve kısmen NIH tarafından finanse edilen Emory Cinsiyet Farklılıklarında Araştırma Mükemmeliyet İhtisas Merkezi U54AG062334 ve Emory Üniversitesi Tıp Bilimcisi Eğitim Programı'ndan gelişimsel bir hibe ile desteklenmiştir. Siyatik sinirleri kesitlere ayırdığı için lisans sonrası David Kim'e ve videonun çekilmesine izin veren stereo mikroskobumuz için bir telefon yuvasını 3D yazdırdığı için araştırma uzmanı HaoMin SiMa'ya teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 5-0 emilebilir sütür | CP Medical | 421A | |
| 5-0 naylon sütür | Med-Vet International | MV-661 | |
| %70 etanol | Sigma-Aldrich | E7023-4L | |
| Anestezi İndüksiyon Odası | Kent Scientific VetFlo | VetFlo-0530XS | |
| Anestezi Buharlaştırıcı | Kent Scientific VetFlo | 13-005-202 | |
| Betadine | HealthyPets | BET16OZ | |
| C57BL / 6J fareler | Jackson Laboratuvarı | # 000664 | |
| Tavuk anti-nörofilament ağır | Abcam | ab72996 | |
| Kriyostat | Leica | CM1850 | |
| Veri Analiz Yazılımı | Prizma | ||
| İnce uçlu cımbız | Dünya Hassas Aletler | 500233 | |
| Floresan mikroskop | Nikon | Ti-E Keçi | |
| anti-tavuk 488 | Invitrogen | A32931 | |
| Keçi anti-tavşan 647 | Invitrogen | A21245 | |
| Isıtma yastığı | Braintree Scientific | 39DP | |
| Görüntü Analiz Yazılımı | Fiji | ||
| Görüntüleme Yazılımı | Nikon | NIS-Elements | |
| Isofluran | Med-Vet International | RXISO-250 | |
| Meloksikam | Med-Vet International | RXMELOXIDYL32 | |
| İğne sürücüsü | Roboz Cerrahi Mağaza | RS-7894 | |
| Normal Keçi Serumu | Abcam | ab7481 | |
| Oftalmik merhem | Refresh | Refresh P.M. | |
| Phox2bCre:tdTomato mutant fareler | Jackson Laboratuvarı | #016223, #007914 | |
| Pilokarpin hidroklorür | Sigma-Aldrich | P6503 | |
| Tavşan anti-tirozin hidroksilaz | Abcam | ab112 | |
| Küçük düz makas | Güzel Bilim Araçları | 14084-09 | |
| Steril pamuklu çubuklar 2x2 | Dynarex | 3252 | |
| Steril pamuk uçlu aplikatörler | Dynarex | 4301 | |
| Steril örtü | Med-Vet International | DR4042 | |
| Steril salin solüsyonu | Med-Vet International | 1070988-BX | |
| ThCre:mTmG mutant fareler | Mutant Fare Kaynak ve Araştırma Merkezleri | suşu #017262-UCD | Jackson Laboratuvarı, suş #007576 |
| ThCre:tdTomato mutant fareler | Avrupa Fare Mutant Arşivi | suşu #00254 | Jackson Laboratuvarı, suş #007914 |
Kaynaklar
- Scholz, T., et al. Peripheral nerve injuries: An international survey of current treatments and future perspectives. J Reconstr Microsurg. 25 (06), 339-344 (2009).
- Schmalbruch, H. Fiber composition of the rat sciatic nerve. Anat Rec. 215
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
