Yöntem makalesi

Kemirgen Modellerinde Orta Serebral Arter Oklüzyonu Öncesi Serebral Kan Akışının İzlenmesi için Bir Lazer Doppler Probunun Periorbital Yerleştirilmesi

1.7K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/66839

⸱

22 Kasım 2024

 ,  ,  , 
1College of Nursing, University of Arizona, 2Department of Surgery, College of Medicine, University of Arizona

Bu makalede

Düzeltme bildirimi

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Özet

Burada, geçici MCA oklüzyonu sırasında kan akışını değerlendirmek için lazer Doppler probunun, sıçanlar ve fareler için uygun bir periorbital konum olan orta serebral arterin (MCA) distal bölgesi üzerine kafatasına yerleştirilmesini içeren minimal invaziv bir cerrahi prosedür gösterilmektedir.

Özet

Orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO), kemirgenlerde iskemik inmenin preklinik modellemesi için altın standart yöntemdir. Bununla birlikte, başarılı oklüzyon en yetenekli cerrahi eller tarafından bile garanti edilmez. Hatalar öncelikle filament doğru derinliğe yerleştirilmediğinde ortaya çıkar ve ölüme neden olabilecek enfarktüs veya damar delinmesi durumlarını içerir. Lazer Doppler akış metrisi (LDF), MCAO prosedürü sırasında bölgesel serebral kan akışı (CBF) hakkında gerçek zamanlı geri bildirim sağlayan güvenilir bir tekniktir. Burada, hem farelerde hem de sıçanlarda CBF ölçümü için bir lazer Doppler probunun periorbital yerleştirilmesi için hızlı bir teknik gösteriyoruz. Gerekçemiz, LDF uygulamasını basitleştirmek ve daha iyi cerrahi güvenilirlik için yaygın kullanımı teşvik etmekti. Teknik, kafatası inceltme ve özel ekipman ihtiyacını ortadan kaldırır, dorsal yerleştirme yerine periorbital bölgeye yerleştirme ile verimliliği ve benimseme kolaylığını artırır. Burada açıklanan protokol, cerrahi öncesi hazırlıkları, periorbital Doppler prob yerleştirmeyi ve ameliyat sonrası bakımı kapsar. Temsili sonuçlar, komplikasyonlara yol açan başarısız filament yerleştirme örnekleriyle birlikte, başarılı MCAO ameliyatlarını gösteren temsili LDF izlemelerinin yanı sıra prosedürel unsurların görsel tasvirlerini içerir. Protokol, uygun filament yerleşimini onaylamada LDF'yi gösterir ve alternatif yöntemlere kıyasla basitleştirilmiş bir prosedür sunar.

Giriş

Orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) yöntemi, 1986'da sıçanlara uygulanmak üzere bilim camiasınatanıtıldığından beri kemirgenlerde yaygın olarak kullanılmaktadır 1 1990'da açıklanan Longa adaptasyonu2 ve hemen ardındanfareler için adaptasyonlar 3. Longa'nın yayınında açıklanmamış olmasına rağmen, filament yerleşimini doğrulamak için lazer Doppler akış ölçer (LDF) sinyalinin kullanılması kısa süre sonra literatürde tanımlanmıştır4. MCAO prosedürü sırasında LDF istihdamı literatürde belirgin bir şekilde yer almaktadır, ancak mevcut İnme Klinik Öncesi Değerlendirme Ağlarında (SPAN) Standart Operatif Prosedürlerde (SOP'ler) isteğe bağlı bir adım olarak belirlenmiştir5.

LDF kullanımı, MCAO prosedürü sırasında doğru filament yerleşimini doğrular ve bu nedenle, özellikle ilaç etkinliğini araştırmak için tasarlanmış deneylerde, tasarım titizliğine ve sonraki sonuçlara katkıda bulunur. LDF kullanımı, yanlış filament yerleşiminden kaynaklanan cerrahi hataları azaltır, bu da filament yeterince uzağa yerleştirilmediğinde yaralanma olmaması veya filament çok uzağa yerleştirildiğinde meydana gelen damar delinmesine bağlı hayvan ölümleri gibi ikili bir duruma neden olur. Öte yandan, LDF kullanımı, MCAO prosedürünü takiben yaygın olarak gözlenen enfarktüs boyutu değişkenliği ile ilişkili değildir6. MCAO prosedüründe LDF kullanımı, özellikle sıçanlarda zor ve zahmetli olarak algılanabilir, çünkü kafatası farelere göre daha kalındır ve LDF yerleştirilmeden önce kafatasının inceltilmesi gerekebilir 7,8. Ayrıca, dorsal prob yerleşimi genellikle özel ekipman veya hazırlık gerektiren bazı protokollerle tanımlanır 7,8,9. Bu engellerden herhangi biriyle, filament yerleşimini doğrulamak için LDF'nin uygulanması gerçekleşmeyebilir.

Bu protokolde, hem farelerde hem de sıçanlarda MCAO prosedürü sırasında kan akışının değerlendirilmesi için lazer Doppler probunun kafatasına ve orta serebral arterin distal bölgesi üzerine yerleştirilmesini - bir periorbital yerleştirme - tarif ediyoruz. Gerekçemiz, literatürde 7,8,9,10 bildirilen bazı yöntemlere göre minimal invaziv, hızlı ve lazer Doppler probunun ötesinde kafatası inceltme veya özel ekipman gerektirmemesi açısından birçok avantajı olan bir prosedür geliştirmekti.

Protokol

Bu protokolü göstermek için yetişkin fareler ve sıçanlar kullanıldı (25 g, C57BL / 6J, Jackson Laboratories; 250 g, Sprague Dawley, Envigo). Hayvan işleme ve deneysel işlemler, Arizona Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'ne, ulusal yasalara uygun olarak ve laboratuvar hayvanı bakımı ilkelerine göre ve onay ile gerçekleştirilmiştir11. Sıçanlar ve fareler, yiyecek ve su ad libitum ile 12 saatlik bir aydınlık / karanlık programı (7-7 pm) ile barındırıldı.

1. Ameliyat öncesi hazırlık

NOT: Tipik olarak, bir kemirgende MCAO cerrahisi, kuruma özgü bir IACUC protokolünde belirtildiği gibi, aseptik veya yalnızca uçlu bir cerrahi tekniğin kullanılmasını gerektiren bir hayatta kalma ameliyatı olarak gerçekleştirilir. Bu durumda, cerrah sterilize edilmiş aletler ve malzemelerle yalnızca uçlu bir teknik kullanır.

  1. Cerrahi çalışma yüzeyini ticari dezenfektan ile dezenfekte edin ve otoklavlama ile steril cerrahi alet, örtü, gazlı bez, swab, sütür ve neşter bıçağı paketleri hazırlayın. Mikroskop düğmelerini örtmek ve gıda sınıfı plastik sargı kullanarak örtü yapmak gibi IACUC onaylı tekniklere göre hayatta kalma ameliyatı sırasında steril koşulları koruyun.
  2. Bir seansta birden fazla kemirgen ameliyatı gerçekleştirilirse, prosedürler arasında cerrahi aletleri yeniden sterilize etmek için bir çimlendirici kuru boncuk sterilizatörü kullanın.
  3. Sıçanı veya fareyi bir indüksiyon odasına yerleştirin ve% 3 -% 5 izofluran (kombine %80 hava ve% 20 oksijen karışımı kullanarak 1 L / dak) ile anestezi indükleyin.
  4. Hayvanı odadan tezgaha taşıyın ve anestezi için nosekon (fare: 0,5 L/dk %80/%20 oksijen/hava karışımı; sıçan: 1,5 L/dk %80/%20 oksijen/hava karışımı). Her iki göze de oftalmik merhem sürün ve MCAO ameliyatının yan tarafındaki (genellikle sağda) kulak ve göz yuvası arasındaki boşluğu, makas kullanarak herhangi bir cildi kesmemek için dikkatlice tıraş edin. Sıçanlarda, traş edildiğinde, bıyık çukuru göz yuvası ile kulak arasında yaklaşık olarak ortada görünecektir. MCAO prosedürü9 için gerektiği gibi bölgeleri tıraş etmeye devam edin (bu belgenin kapsamında değildir).
  5. Hayvanı gerektiği gibi hazneye geri koyun veya hazırlanan ameliyat masasının üzerinde 37 °C'ye ısıtılmış bir burun kemiğine taşıyın. Rektal bir termometre yerleştirin. Hayvan, prosedür boyunca ve onaylanmış IACUC protokolüne göre yaklaşık 36 °C ± 1 °C'de tutulmalıdır.
  6. Betadini bir pamuklu çubuğa uygulayın ve cildi dezenfekte edin, cerrahi bölgenin merkezinden dışa doğru spiral çizin. Alkol hazırlama pedi ile silin. Toplam üç döngü için her iki adımı da tekrarlayın. Uygun anesteziyi onaylayın ve işlem sırasında her 15 dakikada bir ayak parmağı tutam reflüsünü kullanarak değerlendirin.

2. Periorbital Doppler probu yerleştirme

  1. Küçük bir makasla, Şekil 2A (fare) ve Şekil 3A'da (sıçan) gösterildiği gibi gözün köşesi ile kulağın kıvrımı arasında dikey bir kesim yapın (fare: ~0,5 cm; sıçan: ~0,7 cm) süper fasya ve alttaki kası ortaya çıkarmak için.
    NOT: IACUC protokol onayına göre ameliyat öncesi ağrıyı tedavi edin.
  2. Keskin forseps ve kavisli makas kullanarak, kafatasına ulaşılana kadar kas tabakasını dikkatlice kesin. Kafatası düz olacak ve forsepsin ucuyla dokunması zor olacaktır. Bu, Şekil 2B'de görselleştirildiği gibi lazer Doppler probunun oturacağı penceredir.
  3. Ortaya çıkan kanı pıhtılaştırmak, pencereyi genişletmek ve kafatasına giden yolu sağlamak için bir forseps koter aleti kullanın.
  4. Pencere açıldıktan sonra, gerektiği gibi fazla kanı çıkarmak için pamuklu çubuklarla kurulayın.
    Fareyi veya fareyi sırtüstü pozisyona getirin.
  5. Herhangi bir cildi veya dokuyu geri çekmek için forseps kullanın ve Doppler probunu, lazer sinyalini engelleyecek cilt veya kas olmadan kafatasına dik olarak dayanacak şekilde periorbital pencereye yerleştirin. Bu bölge, Şekil 1A,B'de gösterildiği gibi distal MCA'nın üzerindedir. Prob yerleşimini laboratuvar bandı ile sabitleyin. Bu protokolde, düz bir probun kullanımı açıklanmaktadır.
    NOT: Ameliyat protokollerinin laboratuvarlar arasında farklılık göstereceğini kabul ediyoruz. Literatürde (bildirildiğinde), bazıları kafatasını ince öğütür, bazıları ise9. Bunun nedeni kafatasının periorbital bölgede daha ince olması olabilir, ancak bu sadece bir spekülasyondur. Deneyimlerimize göre, farelerde ve sıçanlarda öğütme olmadan doğrudan yerleştirme elde edilebilir ve bu protokolde gösterilmiştir.
  6. Monitördeki bağıl kan akışı ölçümlerini uygun yazılımla izleyin (Şekil 2D, Şekil 3C,D). LDF okumaları değişecektir. Bununla birlikte, kan akışı damlalarının tespiti için en uygun aralık >200 perfüzyon ünitesidir (PU).
  7. MCAO cerrahisi9'a geçin (bu makalenin kapsamında değildir). MCAO ameliyatı sırasında, kan akışında ani bir düşüşe (~% 50) neden olması gereken ortak karotis arteri kısaca bağlayarak prob yerleşimini test edin.

3. Doppler probunun çıkarılması ve ameliyat sonrası bakım

  1. MCAO'nun sonunda veya kan akışı okumaları tamamlandığında, lazer Doppler probunu cerrahi pencereden çıkarın. Doppler probu tipik olarak fare MCAO cerrahisi süresince yerinde kalır, çünkü iskemi süreleri genellikle 90 dakikadan azdır. Öte yandan, sıçan MCAO prosedüründe, Doppler probu, filament yerleştirildikten sonra ve iskemi sırasında (tipik olarak 90 dakika >) çıkarılabilir ve daha sonra 2.6 ve 2.7 adımlarını tekrarlayarak reperfüzyonu doğrulamak için periorbital pencereye tekrar yerleştirilebilir.
    NOT: Fare MCAO'dan tipik bir LDF sürekli izlemesi Şekil 4A'da gözlemlenebilir. Bir sıçan MCAO prosedüründen elde edilen tipik LDF izlemeleri Şekil 4B'de gösterilmektedir.
  2. IACUC onaylı lokal anestezik, prospektif insizyon bölgesi boyunca deri altına enjekte edin.
  3. Onaylı IACUC protokolüne göre, emilebilir dikiş ipliği veya cerrahi yapıştırıcı ile standart bir cerrahi düğüm kullanarak cildi 1-2 dikişle kapatın. IACUC protokol onayına göre cerrahi sonrası ağrıyı tedavi edin (ör. bupivakain HCL% 0.5 ve% lidokain% 2, fareler ve sıçanlar için bir kez insizyon). Hayvanlar, sternal yaslanmalarını sürdürebilene kadar gözetimsiz bırakılmamalıdır ve hiçbir hayvan, tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirketine geri gönderilmemelidir.

Sonuçlar

Lazer Doppler probunun MCA bölgesine yerleştirilmesi, Şekil 1'de görsel olarak tasvir edilmiştir, vaskülatür piktografını sunar ve sagital ve dorsal perspektiflerden görsel bir kılavuz görevi görür. Şekil 2 , farede lazer Doppler probu yerleştirme ve sonuçları için kritik adımları özetlemektedir. Şekil 2A , sonraki lazer Doppler probu yerleştirilmesi için gerekli olan dikey insizyon bölgesinde kesikli bir işaretleme ile uyuşturulmuş ve hazırlanmış bir farenin görüntüsünü sunmaktadır. Kafatasına açılan periorbital pencere Şekil 2B'de gösterilmiştir.

Şekil 3, sıçandaki lazer Doppler probu yerleşimini özetlemektedir. Anestezi uygulanmış ve hazırlanmış bir sıçanın görüntüsü, sonraki lazer Doppler probu yerleştirilmesi için gerekli olan dikey insizyon bölgesinde kesikli bir işaretleme ile Şekil 3A'da gösterilmektedir. Periorbital pencere, fareden daha derin olduğu için görüntülenemez. Bu durumda, adım 2.3'te belirtildiği gibi kafatası hissedilebilir. Sırtüstü sıçanlarda periorbital bölgeye yerleştirilen lazer Doppler probu Şekil 3B'de gösterilmiştir.

Fare MCAO prosedürü sırasında tipik bir LDF izlemesi Şekil 4A'da gösterilmiştir. Karotis arter bağlandığında ve filament MCA'nın ostiumuna ilerlediğinde tekrar göreceli serebral kan akışında (CBF) belirgin ve ani bir düşüşle kanıtlandığı gibi başarılı bir iskemi indüksiyonunu gösterir. Reperfüzyonun başlangıcı, izlemenin sonunda gösterilir, karotis arter çözüldüğünde ve filament MCA'dan çekildiğinde tekrar nispi CBF'de belirgin ve ani bir artış ile kanıtlanır. Sıçan MCAO cerrahisi sırasında iskeminin tipik bir LDF okuması, başarılı bir iskemi indüksiyonunu ve ardından reperfüzyon sırasında LDF ölçümü için probun çıkarılmasını ve yeniden yerleştirilmesini gösteren Şekil 4B'de gösterilmektedir. Sıçan cerrahisinde, iskemi süreleri 60 dakikadan fazla olabilir ve hayvanlar iskemi döneminde iyileşebilir ve reperfüzyon için yeniden anestezi uygulanmalıdır. Bu durumda, prob periorbital pencerede yeniden konumlandırılır ve LDF izlemelerine devam edilir. İskemi, karotis arter bağlandığında ve filament MCA ostiumuna ilerlediğinde göreceli CBF'de belirgin ve ani bir düşüş ile izlemede kanıtlanır. Reperfüzyon, ikinci LDF izlemesinde, nispi CBF'de belirgin ve ani bir artış ile kanıtlanır, daha sonra karotis arter çözülür ve yine filament MCA'nın ostiumundan çekildiğinde. Periorbital Doppler, MCA'nın distal dalı üzerinde konumlandırılır ve bu nedenle, Şekil 4'te gösterildiği gibi, MCAO prosedürü sırasında kan akışındaki azalma ile kanıtlandığı gibi, CBF'de gözlenen bir azalma ile MCA'nın kan dağılımı kapsamında konumlandırılır.

Şekil 5'te başarısız MCAO ameliyatlarını örnekleyen LDF izlemelerini gösteriyoruz. Şekil 5A, daha sonra gevşeyen başarılı bir karotis oklüzyonu ve nispi CBF'de yavaş bir düşüş ile işaretlenmiş başarısız bir filament yerleşimi olan bir sıçan ameliyatından elde edilen bir LDF izlemesini özetlemektedir. Bu LDF paterni tipik olarak nekropsi ile doğrulanabilen delikli bir MCA ile ilişkilidir. Bir fare MCAO ameliyatından elde edilen başka bir izleme (Şekil 5B), muhtemelen MCA ostiasındaki filament yerleşiminin tespit edilememesine katkıda bulunan sonuçsuz karotis arter tıkanıklığını aydınlatır. MCA'nın delinmesinden şüphelenildi, çünkü filament hafifçe geri çekildiğinde, göreceli CBF yavaş bir iyileşme gösterdi. Bu örnekler, başarılı ve başarısız MCAO ameliyatlarını belirlemede LDF izlemelerinin kritik rolünü vurgulamakta ve güvenilir deneysel sonuçlar için titiz cerrahi prosedürlerin ve önlemlerin önemini vurgulamaktadır.

figure-results-1
Şekil 1: MCA'ya göre yaklaşık lazer Doppler probu yerleşiminin piktografı. (A) sagital ve (B) dorsal görünümden lazer Doppler prob yerleşiminin şeması. Biorender.com ile oluşturuldu; KT26JWLYF6. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-2
Şekil 2: Farede lazer Doppler probu yerleştirilmesi için ameliyat adımlarının çizimi. (A) Fare sırtüstü pozisyondayken lazer Doppler probu yerleştirilmesi için gerekli dikey insizyonun yerinin görüntüsü. (B) Fariste forseps ve/veya makas ile hazırlanmış periorbital pencere ve kafatası görüntüsü. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-3
Şekil 3: Sıçanlarda lazer Doppler probu yerleştirilmesi için ameliyat adımlarının çizimi. (A) Sıçan sırtüstü pozisyondayken lazer Doppler probu yerleştirilmesi için gerekli olan dikey insizyonun yerinin görüntüsü. (B) Sırtüstü sıçanlarda periorbital bölgeye lazer Doppler probu yerleştirilmesi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-4
Şekil 4: Fare ve sıçanlarda başarılı MCAO prosedürünü doğrulayan LDF izleme örnekleri. (A) Fare MCAO prosedürü sırasında MCA bölgesinin LDF okuması. Bu izleme, 1'in onaylandığını gösterir. kravat ile karotis arter tıkanıklığı; 2. MCA'da filament yerleştirme; 3. 60 dakikalık sürekli iskemi sonrası filament çıkarılması; ve 4. karotis arter çözüldüğünde reperfüzyon. Eleman a. ve b. okuma sırasında karotis çözülüp tekrar bağlandığında Doppler izlemenin nasıl göründüğünü gösterir. Bu teknik, prob yerleşimini doğrulamak için kullanılabilir. (B) Sıçan MCAO prosedürü sırasında MCA bölgesinin LDF okumaları. Fare gibi, bu izleme de 1'in onaylanmasını gösterir. Kravat ile karotis arter tıkanıklığı ve 2. MCA'da filament yerleştirme. Sıçan MCAO prosedüründe, Doppler probu sıklıkla çıkarılır ve hayvan tam iskemi zamanını uyanık ve hareket halinde geçirir. Reperfüzyon için, LDF reperfüzyondan önce yeniden kurulur: 3. filamentin çıkarılmasını onaylar ve 4. karotisin reperfüzyonu tamamlamak için çözüldüğünü doğrular. Hem fare hem de sıçan MCAO prosedürlerinde, doğru filament yerleşimini görselleştirmek için başarılı prob yerleştirmesi kullanılır ve izleme, LDF'de (iskemi için) iki farklı ve ani azalma ve ardından LDF'de iki farklı ve ani artış (reperfüzyon) gösterdiğinde endikedir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-5
Şekil 5: Fare ve sıçanlarda başarısız MCAO prosedürlerini gösteren lazer Doppler akış metrisi izleme örnekleri. (A) Sıçanlarda sonuçsuz bir filament yerleşimini gösteren bir LDF izleme örneği. Karotis bağlanırken (1.), gevşer (2.) ve sonra tekrar bağlanırken (3.), filament MCA Ostia'dayken LDF'de ani bir düşüşten ziyade belirsiz ve yavaş bir düşüş vardır. Bu izleme, delikli bir MCA'yı gösterebilir ve hayvan, reperfüzyonun ilk 24 saatinden sağ çıkamayabilir; Filament perforasyonu nekropsi ile doğrulanabilir. (B) Farede kesin olmayan bir filament yerleşimini gösteren bir LDF izleme örneği. Bu izlemede, karotis bağının kanıtı yetersizdir (1.), ardından MCA ostiasında filament yerleşimi ile LDF'de belirsiz bir düşüş (2.) gelir. Ek olarak, filament hafifçe geri çekildiğinde, göreceli serebral kan akışı yavaş yavaş artmıştır (3.). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışma

MCAO, kemirgenlerde serebral arter oklüzyonu ve reperfüzyonunu modellemek için altın standart prosedürdür ve insan inme patofizyolojisini taklit etmek için kemirgenlerde fokal iskemi indüksiyonunu sağlayan klinik öncesi inme araştırmalarının temel taşı olmuştur. Cerrahlar arası ve hatta cerrah içi önemli değişkenliğe sahip titiz bir cerrahi prosedürdür. LDF uygulamasının değişkenliği azalttığına dair bir kanıt bulunmamakla birlikte, bazı tasarımlarda bilimsel titizliği ve çalışma sonuçlarını iyileştirebilir. Bu, LDF'nin filament yerleşimini doğrulaması ve ameliyat sırasında CBF hakkında gerçek zamanlı bilgi sağlaması ve MCA'nın tıkanmasının meydana gelip gelmediğini doğrulaması nedeniyle gerçekleştirilir. Fare çalışmalarının yaklaşık% 75'i bir lazer Doppler probu12,13 kullanmayı tarif ederken, bu, sıçan çalışmalarının14 meta-analizinde bildirilen bir parametre değildi. LDF'ye sıklıkla kullanılan bir alternatif, işaretli filamentler kullanarak filament yerleştirmesini ölçmek (örneğin, sıçanlarda ortak karotis arter bifurkasyonundan 18-20 mm) veya yerleştirme noktasından çıkıntı yapan kalan filamenti ölçmektir (örn., 10 mm)10. Bununla birlikte, bu alternatif LDF'den daha düşüktür, çünkü filament yerleştirmenin tam derinliği, sıçanın boyutu ve ağırlığı gibi faktörlere ve ayrıca deneyde kullanılan spesifik protokole bağlı olarak biraz değişebilir. Bu tür farklılıklar, damar perforasyonu veya eksik oklüzyon riski göz önüne alındığında, MCAO cerrahisinin tekrarlanabilirliği için önemli hususlardır - her ikisi de olumsuz cerrahi sonuçlardır.

LDF, filament yerleşimini doğrulamak için bir yöntem olmasına ve SPAN tarafından desteklenmesine rağmen, yayınlanan SPAN-SOP5'te gerekli bir adım değildir. Açıklanan protokol, ana prosedür sırtüstü konumlandırılmış bir hayvan üzerinde gerçekleştirildiğinde özel ekipman kullanımı ve kafatasının dorsal bölümlerine zor prob yerleştirilmesi gibi engellerin üstesinden gelir; Bu faktörler genellikle ameliyat sürelerini uzatır. Buna karşılık, bu protokol tek, düz bir lazer Doppler probu ve monitör, periorbital yerleştirme konumu kullanır ve kafatası inceltme yapmaz. Birleştirildiğinde, bu adımlar büyük ölçüde basitleştirilmiş ve kısaltılmış (genellikle 5 dakikadan az) bir prosedürle sonuçlanır - literatürde açıklanan benzer ancak alternatif yöntemlerden önemli bir gelişme 7,8,9,10. Bu protokol gerektiğinde cerrahlar tarafından da uyarlanabilir. Açıklanan tekniklerin sorun gidermesi, özellikle adım 2.8'de kan akışında bir azalma gözlenmezse, probun yeniden konumlandırılmasını gerektirebilir ve içerebilir.

LDF'nin kullanımı, filament yerleşimini doğrulamakla sınırlıdır ve fare ve sıçan yöntemlerinde %>20 olabilen enfarktüs boyutu değişkenliği ile ilişkilendirilmemiştir12,14. Enfarktüs değişkenliği, klinik öncesi inme araştırmalarında uzun süredir devam eden bir sorun olmuştur. Bu artan değişkenlik, insan durumundagözlemlenen enfarktüs boyutlarının çeşitliliğini taklit edebilirken13, uygun şekilde açıklanmadığında, gözlemlenen değişkenlik, uygun şekilde güçlendirilmeyen çalışmalara neden olabilir. Yöntem değişkenliğini öngören tek bir faktör olmamakla birlikte, yerleştirmenin doğrulanması ilaç etkinliği çalışmaları için önemli bir faktördür. Burada tarif edilen protokol, muhtemelen fare MCAO prosedürlerinde zaten kullanılıyor olsa da, literatürde dorsal yerleşimin daha sık tanımları göz önüne alındığında, sıçanlarda yeterince kullanılmayabilir9. Basitleştirilmiş bir lazer Doppler probu yerleşiminin bu tanımının, artan deneysel hassasiyet ve translasyonel alaka düzeyini hedefleyerek klinik öncesi inme araştırma metodolojilerinin iyileştirilmesine katkıda bulunduğuna inanıyoruz.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu araştırma NINDS 1R41NS124450 tarafından finanse edilmiştir. Biyorender: KT26JWLYF6

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
kavisli yaylı makasCastroviejo1501710
forseps #5Güzel bilim araçları11250-20
forseps #5/45Güzel bilim araçları1151-35
Forcepts Koter aracıConmedM18019-01
Laboratuvar bandıFisherbrand Etiketleme Bandı15-950
Lazer Doppler MonitörüMoore Aletleri MOORVMS-LDF
LDF yazılımıWindows veya moorSOFTNA
Fare makasıPhilips NorelcoMG7910
Periflux System 4000, prob 407Perimedekipmanı artık mevcut
streç filmGladpress n seal
Fare makasıosterA5 veya benzeri
Küçük kemirgen anestezisiJD Tıbbiözel sipariş
küçük makasexcelta362 Sissors veya benzeri
Problu sıcaklık izleme sistemiPhysitempTCAT-2AC Kontrol Cihazı
için Perisoftdeğil

Kaynaklar

  1. Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Japanese J Stroke. 20 (1), 84-91 (1986).
  2. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84(1989).
  3. Hata, R., et al. A reproducible model of middle cerebral artery occlusion in mice: hemodynamic, biochemical, and magnetic resonance imaging. J Cereb Blood Flow Metab. 18 (4), 367-375 (1998).
  4. Dirnagl, U., Kaplan, B., Jacewicz, M., Pulsinelli, W. Continuous measurement of cerebral cortical blood flow by laser-Doppler flowmetry in a rat stroke model. J Cereb Blood Flow Metab. 9 (5), 589-596 (1989).
  5. Lyden, P. D., et al. The stroke preclinical assessment network: Rationale, design, feasibility, and stage 1 results. Stroke. 53 (5), 1802-1812 (2022).
  6. Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O. Effect of laser Doppler flowmetry and occlusion time on outcome variability and mortality in rat middle cerebral artery occlusion: inconclusive results. BMC Neurosci. 19 (1), 24(2018).
  7. Spratt, N. J., et al. Modification of the method of thread manufacture improves stroke induction rate and reduces mortality after thread-occlusion of the middle cerebral artery in young or aged rats. J Neurosci Methods. 155 (2), 285-290 (2006).
  8. Watcharotayangul, J., et al. Post-ischemic vascular adhesion protein-1 inhibition provides neuroprotection in a rat temporary middle cerebral artery occlusion model. J Neurochem. 123 Suppl 2 (Suppl 2), 116-124 (2012).
  9. Beretta, S., et al. Optimized system for cerebral perfusion monitoring in the rat stroke model of intraluminal middle cerebral artery occlusion. J Vis Exp. (72), e50214(2013).
  10. Ritter, L. S., Stempel, K. M., Coull, B. M., McDonagh, P. F. Leukocyte-platelet aggregates in rat peripheral blood after ischemic stroke and reperfusion. Biol Res Nursing. 6 (4), 281(2005).
  11. National Research Council. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.. , 8th ed., The National Academies Press. Washington, DC, USA. (2011).
  12. Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O. Method parameters' impact on mortality and variability in mouse stroke experiments: a meta-analysis. Sci Rep. 6, (2016).
  13. Morais, A., et al. Embracing heterogeneity in the multicenter stroke preclinical assessment network (SPAN) trial. Stroke. 54 (2), 620-631 (2023).
  14. Ström, J. O., Ingberg, E., Theodorsson, A., Theodorsson, E. Method parameters' impact on mortality and variability in rat stroke experiments: a meta-analysis. BMC Neurosci. 14, 41(2013).

Yeniden basım ve izinler

Düzeltme


Formal Correction: Erratum: Periorbital Placement of a Laser Doppler Probe for Cerebral Blood Flow Monitoring Prior to Middle Cerebral Artery Occlusion in Rodent Models
Posted by JoVE Editors on 3/18/2025. Citeable Link.

This corrects the article 10.3791/66839

Etiketler

Lazer Doppler AkışmetrisiPeriorbital Prob Yerleşimiİskemik İnme ModeliKemirgen İnme ModeliFilament YerleşimiMikroglia KantifikasyonuReperfüzyon Hasarıİnme Cerrahi Protokolü
Kemirgen Modellerinde Orta Serebral Arter Oklüzyonu Öncesi Serebral Kan Akışının İzlenmesi için Bir Lazer Doppler Probunun Periorbital Yerleştirilmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.