Culex tarsalis sivrisineklerinin insan ellerinde sondalama ve yutma davranışlarının incelenmesi için AC-DC elektropenetrografi

Anastasia M. W. Cooper; Kaitlin Pfeiffer; Kathryn Reif; Kristopher Silver; Dana Mitzel

doi:10.3791/66877

Yöntem makalesi

Culex tarsalis sivrisineklerinin insan ellerinde sondalama ve yutma davranışlarının incelenmesi için AC-DC elektropenetrografi

DOI:

10.3791/66877

⸱

29 Kasım 2024

Anastasia M. W. Cooper¹^,² , Kaitlin Pfeiffer¹ , Kathryn Reif² , Kristopher Silver¹ , Dana Mitzel³

¹Department of Entomology, Kansas State University, ²Department of Pathobiology, Auburn University, ³National Bio and Agro-Defense Facility, USDA Agricultural Research Service

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Culex tarsalis sivrisineklerinin insan elleri üzerindeki sondalama ve yutma davranışlarını AC-DC elektropenetrografi kullanarak incelemek için prosedürler açıklanmıştır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sivrisinekler, insan ve hayvan sağlığını olumsuz yönde etkileyen patojenleri bulaştırır. Kanla besleme biyolojilerinin ve konakçılar ve patojenlerle etkileşimlerinin daha iyi anlaşılması, sivrisinek kaynaklı hastalıkları kontrol etmek için yeni hedefler geliştirmek için kullanılabilir. Ne yazık ki, sivrisineklerin sondalama (yani ısırma) davranışları, konakçı dokuların içinde meydana geldikleri için tam olarak anlaşılamamıştır. Burada, insan elinde sondalama ve yutma sırasında üretilen elektrik sinyallerindeki değişiklikleri kaydederek sivrisinek beslenme davranışlarını dolaylı olarak görselleştirmek ve ölçmek için AC-DC elektropenetrografinin (EPG) kullanılması için invaziv olmayan bir prosedür açıklanmaktadır. İnce altın teller, iletken gümüş yapıştırıcı kullanılarak sivrisineklere tutturulur ve EPG cihazına bağlanır. İnsan konakçı elinde bir substrat voltaj probu tutar. Konakçının kablolu sivrisinek tarafından sondalanması, elektrik devresini tamamlar ve elektrik sinyalleri, daha sonra analiz için ölçülebilen ve numaralandırılabilen "dalga formları" olarak bir bilgisayara kaydedilir. Bu metodoloji, Aedes aegypti ve Culex tarsalis sivrisineklerinin sondalama ve yutma davranışlarını karakterize etmek için kullanılmıştır ve diğer sivrisinek türlerine uygulanabilir. EPG, patojenlerin, böcek ilaçlarının ve diğer faktörlerin sivrisinek besleme davranışları üzerindeki etkilerini incelemek için kullanılabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sivrisinekler, hastalık vektörleri ve rahatsız edici zararlılar olarak rolleri nedeniyle dünya çapında acı ve ekonomik kayba neden olur¹. Anofel sivrisinekleri, dünya çapında yılda tahmini 219 milyon vakaya, 400.000'den fazla ölüme neden olan sıtmayı bulaştırır² ve 12 milyar ABD doları doğrudan maliyet³. Aedes sivrisinekleri, halk sağlığı açısından önemli olan en dikkate değer vektörlerdir, çünkü neredeyse küresel bir varlığa sahiptirler ve Chikungunya, dang humması, lenfatik filaryazis, Rift Vadisi Ateşi, sarı humma ve Zika ajanlarını iletirler, bu da can talep eder, sağlık sistemlerini bunaltır ve kronik ıstırap, yaşam boyu morbidite ve sakatlık ile sonuçlanır⁴^,⁵. Ek olarak, Culex sivrisinekleri hem insan hem de hayvan sağlığını etkileyen at ensefaliti, Japon ensefaliti, lenfatik filaryazis, Saint Louis ensefaliti ve Batı Nil ateşi ajanlarını iletir³^,⁴.

İnsektisit tabanlı yaklaşımlarla vektör kontrolü, vektör kaynaklı hastalıkların küresel olarak kontrol edilmesinde önde gelen yöntemdir⁶^,⁷. Bununla birlikte, sivrisinek kontrolü için mevcut böcek ilaçlarının sayısı sınırlıdır. Buna ek olarak, insektisit direnci birçok türde, özellikle Aedes sivrisineklerinde gelişmekte, vektör kaynaklı hastalıklarla mücadele yeteneğimizi etkilemekte ve yeni kontrol stratejilerine olan ihtiyacı artırmaktadır⁶^,⁸. Sivrisinek biyolojisinin, sivrisinek-konak-patojen etkileşimlerinin ve patojen iletimini düzenleyen süreçlerin daha iyi anlaşılması, vektör kontrolü için yeni araçların geliştirilmesini kolaylaştırabilir⁶.

Konak dokulardaki sondalama ve yutma davranışları patojen iletimini ve hastalık patolojisini etkileyebilir⁹^,¹⁰^,¹¹^,¹². Örneğin, Aedes aegypti yırtılmış damarların dışında toplanan kan yerine doğrudan kılcal damarlardan beslendiğinde daha fazla mikrofilarya yutuldu¹³. Bu nedenle, bu konuyla ilgili temel ve uygulamalı araştırmalar, sivrisinek kontrol stratejilerinin ve patojen bulaşması için diğer karşı önlemlerin geliştirilmesine, iyileştirilmesine ve değerlendirilmesine yardımcı olabilir. Bununla birlikte, konakçının derisinin yüzeyinin altında meydana gelen kriptik kan besleme davranışlarının ayrıntılarında önemli bilgi boşlukları vardır, çünkü bu davranışlar genellikle canlı hayvan modellerinde invaziv prosedürler gerektirir veya şeffaf yapay substratlar veya sıvı diyetler kullanır⁹^,¹¹^,¹⁴^,¹⁵. Non-invaziv elektropenetrografi (EPG; elektriksel penetrasyon grafiği olarak da adlandırılır) teknikleri, bitki patojen iletimi, konukçu bitki direnci ve böcek ilacı etki modları ile ilgili bitki besleyen böceklerin beslenme davranışlarını incelemek için kullanılmıştır, çünkü araştırmacıların konakçı dokular içinde meydana gelen ağız parçası hareketlerini ve davranışlarını dolaylı olarak gözlemlemelerine, kaydetmelerine ve ölçmelerine olanak tanır¹⁰^,¹².

1950'lerden beri, sivrisinekler de dahil olmak üzere kanla beslenen eklembacaklılara elektronik penetrasyon izleme teknikleri uygulanmıştır¹⁶^,¹⁷^,¹⁸^,¹⁹^,²⁰. Bununla birlikte, EPG hiçbir zaman kanla beslenen eklembacaklılar için yaygın olarak benimsenmedi çünkü dalga formlarına karşılık gelen biyolojik aktiviteler hiçbir zaman doğrulanmadı²¹. Ek olarak, ilk aletlerin tasarımları ve elektronikleri, bazı elektrik sinyallerinin aşırı vurgulanmasına, yüksek gürültü-sinyal oranlarına, düşük çözünürlüğe ve dalga biçimlerinin bozulmasına ve omurgalı konakçıların tahrişine neden oldu¹²^,²². Daha yeni bir cihaz olan AC-DC EPG monitör²³, değişken ayarlara ve geliştirilmiş sinyal işlemeye sahiptir, bu da onu kanla beslenen eklembacaklıları kaydetmek ve deneysel korelasyon çalışmalarında dalga formlarının biyolojik kökenlerini deşifre etmek için daha uygun hale getirir¹⁰<^,sup class="xref">12.

EPG için, bir substrat voltaj probu (yani referans elektrodu) aracılığıyla ana bilgisayara bir elektrik sinyali uygulanır. Eklembacaklı bir kayıt elektroduna bağlanır ve konakçıya yerleştirilir. Eklembacaklı ağız kısımlarını (yani stiletleri) konakçıya soktuğunda, elektrik sinyali, sinyal işleme için AC-DC EPG monitörüne iletilir. Elektrik sinyalleri daha sonra bir bilgisayarda, ağız parçası hareketleri, yutma, tükürük salgısı ve patojen edinimi/aşılaması¹⁰^,^{12 gibi belirli davranışlara karşılık gelen "dalga formları" olarak görüntülenir}. Farklı hiyerarşik düzeylerde (aileler, türler ve alt tipler) dalga formları²⁴^,^{25 dalga formlarının süresi ve sayısı ile ilgili sıralı ve sıralı olmayan yanıt değişkenleri} daha sonra türler içinde ve türler arasında meydana gelen beslenme davranışları hakkında fikir edinmek için dalga formlarının sıklığına ve süresine dayalı olarak ve biyotik ve abiyotik faktörlere yanıt olarak hesaplanabilir, konakçılar, patojenler, pestisitler ve çevresel koşullar gibi¹⁰^,¹².

Şimdiye kadar, AC-DC EPG monitörü, Ae'nin yoklama ve yutma davranışlarını karakterize etmek için kullanılmıştır. aegypti²⁶ ve Culex tarsalis<sup class="xref">27 insan eliyle beslenen sivrisinekler ve sığır buzağılarıyla beslenen Dermacentor variabilis ve Amblyomma americanum keneleri²⁸. Ek olarak, bu cihazı kullanarak patojen çalışmalarını kolaylaştırmak için yakın zamanda EPG^{29 için bir fare modeli} geliştirilmiştir. İnsan eli, ilk sivrisinek dalga formu karakterizasyonu için idealdir, çünkü insan konakçılar, sivrisinek sondalamasının yanı sıra diğer davranışları ne zaman hissettiklerini rapor edebilir, bu da dalga formlarının davranışlarla korelasyonunu kolaylaştırır (Tablo 1). Ek olarak, farklı insan popülasyonlarındaki sivrisinekler arasındaki beslenme davranışlarındaki plastisitenin daha iyi anlaşılması, sivrisinekler ve ilettikleri patojenler için daha özel yönetim müdahalelerinin geliştirilmesine katkıda bulunabilir.

Tablo 1: AC-DC EPG kullanılarak insan eli üzerinde Culex tarsalis'ten kaydedilen elektrik sinyallerini sınıflandırmak için kullanılan dalga formu ailelerinin tanımı. Her bir dalga formu ailesine karşılık gelen sondalama aşaması ve biyolojik aktiviteler. Daha fazla bilgi için Cooper et al.^{27'ye bakın}. Kısaltma: AC = alternatif akım, DC = doğru akım, EPG = elektropenetrograf. Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Sivrisinek biyolojisi ve konak-vektör etkileşimlerini incelemek için EPG kullanımını kolaylaştırmak için, Cx. tarsalis sivrisineklerinin AC-DC EPG monitörünü kullanarak insan elindeki beslenme davranışlarını ölçmek için metodoloji burada sunulmaktadır. Bu protokoller, çevrimiçi kaynaklar^{30 bölümünde açıklanan temel AC-DC EPG prosedürleri üzerine kuruludur ve kullanıcıların AC-DC} EPG ve ilgili yazılım^{31 hakkında temel bir çalışma bilgisine sahip olduğunu varsayar}. Belirtilen prosedürler, diğer sivrisinek ve konakçı türler için değiştirilebilir ve sivrisinek besleme davranışlarının hipoteze dayalı araştırmasını kolaylaştırmak için bir temel sağlar.

Tablo 2: Ortak AC-DC EPG terminolojisinin tanımları. Tanımlar, çevrimiçi kaynaklarda verilenlere dayanmaktadır³⁰^,³¹ ve bilimsel literatür³². Kısaltma: AC = alternatif akım, DC = doğru akım, EPG = elektropenetrograf. Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol (IRB-10729), Kansas Eyalet Üniversitesi'ndeki İnsan Araştırmaları için Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB) tarafından onaylanmıştır²⁷ ve yalnızca patojen içermeyen sivrisineklerle kullanılmak üzere tasarlanmıştır. İnsan gönüllüler, çalışmaya katılmak ve verilerini yayınlamak için bilgilendirilmiş onamlarını verdiler. Hayvanlar, insanlar veya biyolojik tehlikelerle herhangi bir çalışmaya başlamadan önce, tüm prosedürlerin uygun kurumsal düzenleyici komiteler veya gözetim kişileri tarafından gözden geçirildiğinden ve onaylandığından emin olun. Bu protokolde kullanılan tüm ekipman ve malzemelerle ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.

1. İlk hazırlık ve kurulum

AC-DC EPG monitörünü (Şekil 1A), Faraday kafesini (Şekil 1B,C) ve yazılımı daha önce açıklandığı gibi kurun³⁰^,³¹ aşağıda açıklanan değişiklikleri kullanarak (adım 1.1.1-1.1.5). Ekipman ve yazılımın kurulumu ve kullanımıyla ilgili adım adım eğitimler için çevrimiçi kaynaklar^{30 adresine bakın}. İstenen kurulumu donanım yönetimi ve dalga biçimi gözden geçirme yazılımında varsayılan olarak kaydedin. Yaygın AC-DC EPG terminolojisinin ve tanımlarının bir listesi için Tablo 2'ye bakın.
1. Bir kafa bağlayıntage amplifier (kafa amp) ve bir alt tabaka voltaj probu kontrol kutusunun Kanal 1'ine.
  NOT: AC-DC monitör aynı anda dört böceği ve konakçıyı barındırabilse bile tek bir kanaldan kayıt yapılır.
2. Kontrol kutusundaki Kanal 1'in açık olduğundan ve anahtar arayüz kutusundaki ilgili Ön-1 ve Sonra-1 kanallarının açık olduğundan emin olun.
  NOT: Kullanılmayan kanallar kapalı kalmalıdır.
3. DI-1 A/D Kartındaki Kanal 3 ve 710'ü (ancak diğerlerini değil) düzeltmeli sinyalleri önceden ve sonra kaydetmek için etkinleştirmek için donanım yönetim yazılımını kullanın.
4. Donanım yönetim yazılımını, düzeltme öncesi ve sonrası düzeltme dalga biçimlerini görüntülemek/üst üste bindirmek için biçimlendirin (örneğin, ön sinyal için 1 = 1 ve son sinyal için 2 = 3).
5. Donanım yönetim yazılımındaki örnekleme hızını kanal başına saniyede 100 örnek olarak ayarlayın (yani, S/s/CHAN: 100).
Böcek saplamaları²⁶^,²⁷^,²⁹^,³⁰:
1. Havyayı, belirli reçine çekirdek lehimi için önerilen sıcaklığa önceden ısıtın.
2. 6 AWG bakır tel rulosunun ucundan ~20 cm plastik kaplamayı sıyırmak için bir tel kesici-sıyırıcı alet kullanın, ancak içindeki bakır tel demetini kesmekten veya işaretlemekten kaçının (Şekil 2A). Ardından, açıkta kalan bakır tel demetini kesin ve tek tek teller halinde çözün (Şekil 2B).
3. Bakır telin bir telini, başın altındaki uygun bir rozet piminin (yani düz üst) şaftının etrafına sarmak için iğne burunlu pense kullanın, böylece bakır telin çoğu pimin başından geçecek şekilde uzanır. Teli yerine sabitlemek için telin kuyruğunu pimin başının üzerine katlayın (Şekil 2C).
  NOT: Kafanın bağlantı noktasına tam olarak oturanları belirlemek için test rozeti pimlerini takın amp (kapatıldığında, fişi çekildiğinde ve 10⁶ Ohm (Ω) olarak ayarlandığında).
4. Rozet piminin şaftını, bakır tel yukarı bakacak şekilde yardımcı eller lehimleme yardımına sıkın. Ardından, rozet pimi ile bakır telin birleşim yerine küçük bir damla (~ 0,2 cm top) suda çözünür akı uygulayın (Şekil 2D).
  DİKKAT: Akı toksiktir ve dikkatli kullanılmalıdır.
5. ~10 cm lehimi açın ve düzeltin. Sıcak havyayı, akı eriyene ve metal sıcak olana kadar birkaç saniye pimin başına karşı tutun. Ardından, lehimin ucunu, lehim eriyene ve bağlantıyı tamamen kaplayana kadar havyanın yanındaki pimin başına bastırın, pimi ve teli bir böcek saplamasına kaynaştırın.
6. Böcek saplaması soğurken havyanın ucunu çelik yünü ve nemli bir süngerle temizleyin.
7. Soğuduktan sonra, böcek saplamasını yardım ellerinden çıkarın. Böcek sapını p etanol ve ardından kalan akıyı gidermek için suyla durulayın. Bakır teli istenen uzunlukta kesin (~3 cm, Şekil 2E).
8. 20-30 böcek saplaması oluşana kadar 1.2.3-1.2.7 adımlarını tekrarlayın.
Bir böcek aspiratörü oluşturun²⁶^,²⁷:
1. Bir cam Pasteur pipetinin ucunu alevden geçirin ve pipeti hafifçe döndürün. Pipetin ucu, böceğin karnına sıkıca oturacak uygun boyutta olana kadar tekrarlayın.
2. Modifiye edilmiş Pasteur pipetinin büyük ucunu cibinlik ile kapatın, ardından doğrudan bir laboratuvar aspiratörüne bağlı silikon boruya yerleştirin ve bir böcek aspiratörü oluşturmak için bağlantıyı elektrik bandıyla sabitleyin (Şekil 2H).
  NOT: Pasteur pipeti ve ağı, farklı boyutlar arasında kolay geçiş için hızlı bir ayırıcı ile donatılmış kısa bir plastik boru parçasına yerleştirilebilir (Şekil 2H).

figure-protocol-1
Şekil 1: İnsan elinde kayıt için AC-DC EPG monitör ekipmanı kurulumu. (A) (1) kontrol kutusu, (2) anahtar arabirim kutusu, (3) güç kaynağı, (4) DI-710 A/D Kartı, (5) bilgisayar, (6) güç regülatörü ve (B) Faraday kafesi (C) bir deveboynu standında bir dijital mikroskop (7), (8) baloncuklu naylon ve hava yastıkları, (9) substrat voltaj probu ve (10) laboratuvar standında kafa aşaması amplifikatörü. Kısaltmalar: AC = alternatif akım, DC = doğru akım, EPG = elektropenetrograf. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-protocol-2
Şekil 2: Sivrisinekleri kablolamak için kayıt elektrotları ve kablolama sırasında sivrisinekleri manipüle etmek için bir böcek aspiratörü. (A) İçerideki bakır tel demetini ortaya çıkarmak için 6 cm plastik kaplama çıkarılmış 20 AWG bakır tel. (B) Bakır tel demetinin tek tek telleri. (C) Telin kuyruğu pimin başının üzerine katlanmış olarak pirinç rozet piminin başının etrafına sarılmış bir bakır tel tel. (D) Lehimlemeye hazırlanırken yardımcı bir lehimleme yardımcısı tarafından tutulan pirinç rozet pimi ve bakır telin birleşim yerinde bir akı damlası. (E) Bakır bir tele lehimlenmiş pirinç çividen yapılmış tamamlanmış bir böcek sapı. (F) Bir böcek sapının bakır telinin ucuna sarılmış ve gümüş yapıştırıcı ile yerine sabitlenmiş altın bir telden yapılmış bir kayıt elektrodu. (G) Kayıt elektrodunun ucundaki altın halkanın yakın çekimi. (H) Dişi hızlı ayırıcı (sağ üst) ile donatılmış laboratuvar aspiratör borusunun yanında, modifiye edilmiş Pasteur pipetleri, cibinlik, plastik boru, elektrik bandı ve erkek hızlı ayırıcılardan yapılmış monte edilmiş (üst) ve demonte edilmiş (alt) bir böcek aspiratörü. Ölçek çubukları = 1 cm (AF), 200 μm (G). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

2. Sivrisineklerin kablolanması

Sivrisinekleri ve gümüş yapıştırıcıyı hazırlayın (EPG'den önceki öğleden sonra/akşam):
1. Cx. tarsalis KNWR suş sivrisineklerini daha önce açıklandığı gibi destekleyin²⁷.
2. Hızlı yetişkin dişi sivrisinekler, eklosyondan 5-17 gün sonra, 8-12 saat boyunca, sondalama oranlarını artırmak için, ancak mortaliteyi önlemek için suya erişime izin verir.
3. Taze gümüş tutkalı hazırlayın²⁶^,²⁷^,²⁸^,²⁹^,³⁰:
  1. 20 mL'lik bir behere 510 mg 4-8 μm gümüş pul ekleyin. Terazinin darasını alın ve gümüş pulun üzerine behere 1.100 mg toksik olmayan okul yapıştırıcısı ekleyin.
  2. Terazinin darasını alın, tutkalın üzerine behere 510 mg 8-10 μm gümüş pul ekleyin ve ardından bir pipet kullanarak 1.000 μL su ekleyin.
  3. Behere yavaşça bir karıştırma çubuğu ekleyin ve karıştırma plakasına yerleştirin. Yavaşça karıştırmaya başlayın, yavaş yavaş 'hızlı' ayara getirin ve 4 dakika karıştırın. Tüm içeriğin dahil edildiğinden emin olun.
  4. Gümüş yapıştırıcıyı 1,5 mL mikrosantrifüj tüplerine aktarmak için bir transfer pipeti (ucu kesilmiş olarak) kullanın.
  5. Gümüş tutkal tüplerinin üst kısımlarını Parafilm ile sarın ve kullanılana kadar tezgah üzerinde saklayın.
    NOT: Gümüş yapıştırıcı 2 güne kadar doğru kıvama sahiptir, ancak kullanmadan önceki akşam taze yapıştırıcı yapılması önerilir³⁰.
Kayıt elektrotlarını hazırlayın²⁶^,²⁷^,²⁹^,³⁰:
1. Kullanmadan önce gümüş yapıştırıcıyı kuvvetlice girdaplayın.
2. Hazırlanan böcek saplarını ve kablolu sivrisinekleri tutmak için bir köpük bloğu taze plastik sargı ile sarın.
  NOT: Köpük, kablolu sivrisineklerin birbirine dokunmadan yüzeyde durmasına izin verecek kadar büyük, ancak bir saklama kutusunun içine sığacak kadar küçük olmalıdır. DİKKAT: Kan beslemesinden sonra salınan boşaltım damlacıkları patojenler içerebilir. Kullandıktan sonra streç filmi/köpük bloğu uygun şekilde atın.
3. Bakır telin üst 1 cm'sini bir jiletle her tarafı parlak olana kadar kazıyarak bakır telin ucundaki kararmayı (ve böcek saplarını yeniden kullanıyorsanız eski gümüş yapıştırıcıyı) çıkarın. Her sivrisinek için bir böcek saplaması ve birkaç ekstra hazırlayın.
4. 0,025 mm çapındaki altın teli 4-5 cm uzunluğunda parçalar halinde kesin. Telin çökmesini önlemek için teli her zaman bantla maskelenmiş kendiliğinden kapanan forsepslerde tutun.
  NOT: Altın telin siyah bir arka plana karşı görülmesi çok daha kolaydır.
5. Altın telin ucunu böcek saplamasının bakır telinin temiz ucu boyunca yerleştirin ve altın teli bakır telin etrafına 3 kez nazikçe sarın.
6. Altın teli yerinde tutmak için gümüş yapıştırıcı uygulamak için bir diseksiyon probu kullanın. Kuyruk veya gevşek uç olmadığından emin olun. Yapıştırıcı kuruyana kadar böcek saplamasını köpüğün içine yerleştirin.
7. Böcek saplamasına bağlı altın teli düzleştirmek ve uzun, yumuşak bir yay haline getirmek için hafifçe vurun (Şekil 2F). Teli istenen uzunlukta (~2,5-3 cm) kesin.
8. Diseksiyon mikroskobu altında çalışarak, altın telin ucunda altın bir halka yapmak için ince uçlu forseps kullanın ve ilmeği aşağıda açıklandığı gibi 90°'lik bir açıyla bükün (adım 2.2.8.1-2.2.8.4; Şekil 2E,F). Altın halkanın tamamen kapalı olduğundan emin olun. Böcek saplamasını köpük bloğa geri koyun.
  1. Baskın olmayan eli kullanarak, böcek sapını pirinç çividen tutun ve altın tel ucu mikroskop aşamasına değecek şekilde tutun. Baskın eli kullanarak, altın telin en ucunu ince uçlu forseps ile kavrayın.
  2. İnce uçlu forsepsleri kullanarak, altın telin ucunu, altın telin yapıştırıldığı yerin yakınındaki böcek saplamasının bakır telinin üzerinden geçirin. İnce uçlu forsepsin ve altın telin ucunu mikroskop aşamasına doğru dokundurun.
  3. Altın tel, ince uçlu forsepsin ucunda küçük bir altın halka oluşturana kadar böcek saplamasını yavaşça çekin (çok sıkı çekmeyin). Altın teli serbest bırakın ve forsepsleri dikkatlice çıkarın.
  4. Böcek saplamasını baskın olmayan elinde tutmaya devam ederken, altın halkayı ince uçlu forseps ile kavrayın, böylece forseps telin boynuna dik bir açıda olur ve forsepsin ucu altın halkanın ortasına yayılır, böylece ilmeğin her iki tarafını da kavrar. İlmek telin boynuna 90°'lik bir açıyla bükülene kadar forsepsleri böcek saplamasından hafifçe döndürürken böcek saplamasını nazikçe çekin (Şekil 2G).
Sivrisineklere kayıt elektrotları takın²⁶^,²⁷^,²⁹^,³⁰ (EPG sabahı):
1. Aç kalan sivrisinekleri CO₂ gazı ile tüm hareketler durana kadar uyuşturun. Sivrisinekleri, karınları araştırmacıya bakacak şekilde anestezi pedinin üzerine sırt üstü yerleştirin.
2. Diseksiyon mikroskobu altına yapışkan tarafı aşağı bakacak şekilde ~2 cm'lik bir laboratuvar bandı yerleştirin. Bandın üzerine 0,5 cm'lik bir damla (~ 10 μL) gümüş yapıştırıcı yerleştirin.
3. Anestezi uygulanmış bir sivrisineğin karnını, emişi yalnızca karnı yerine oturtacak kadar uzun süre kullanarak modifiye edilmiş Pasteur pipetine aspire edin. Sivrisineği aspiratörü kullanarak gümüş yapıştırıcının üzerindeki diseksiyon dürbününün altında tutun.
  NOT: Kanatlar, modifiye edilmiş Pasteur pipetinin ucunun içinde veya dışında olabilir, ancak bunların içinde olması sivrisineklerin düşmesini önlemeye yardımcı olacaktır. Kanatları bükmekten veya zarar vermekten kaçının.
4. Hızlı çalışarak, gümüş tutkalın içine bir minutien pimi batırın ve sivrisineğin pronotumuna (yani göğsün sırt yüzeyine) ince bir tabaka uygulayın. Mümkünse hemen bir sonraki adıma geçin (veya gerekirse sivrisineği yeniden uyuşturun).
  NOT: Kütiküldeki gözeneklerin yapıştırıcı penetrasyonunu sağlamaya yardımcı olmak için pimi ileri geri ovalayarak pronotum üzerindeki pulların çıkarılması önerilir. Sivrisineğin başka herhangi bir yerine yapıştırıcı bulaşmasını önleyin.
5. Kayıt elektrodunun ucundaki altın halkayı hızlı bir şekilde gümüş yapıştırıcıya batırın ve sivrisineğin pronotumundaki gümüş yapıştırıcı noktasına yerleştirin. Pronotuma karşı aynı hizada oturduğundan emin olmak için halkayı ileri geri sallayın. Tutkal kuruyana kadar (~20-25 s) teli tutun.
6. Köpükteki böcek saplamasını, kablolu sivrisinek uyandığında rahatça durmasını sağlayacak bir açıyla değiştirin. Bir sonraki mosquito.
  kablolamaya devam edin NOT: Her kablolama işinin kalitesi hakkında not almanız önerilir.
7. İstenilen sayıda sivrisinek bağlandıktan sonra, köpük bloğu bir saklama kutusuna yerleştirin. Sivrisinekleri kullanana kadar normal yetiştirme koşullarında tutun.

3. EPG kurulumu ve hazırlığı (EPG'den önceki sabah)

Cihaz dengelemesine ve herhangi bir sorun gidermeye izin vermek için kayıttan en az 30 dakika önce AC-DC EPG monitörünü (güç kaynağındaki anahtarı çevirerek) açın.
NOT: Kontrol kutusu ve anahtar arayüz kutusu üzerinde kullanılan kanallar açık bırakılabilir.
Bilgisayarı açın ve donanım yönetim yazılımını açın.
NOT: Sinyaller düz ince çizgiler olarak görünmüyorsa, sorun giderme gereklidir (tartışma bölümüne bakın).
Ekipmanın işlevselliğini doğrulamak için dokunma testi²⁷^,^{30 gerçekleştirin}:
1. Topraklanmış iken (yani, Faraday kafesine çıplak deri ile dokunarak), kafa amfisindeki kadranı çevirin 10⁶ Ω'ye getirin ve bir böcek sapının şaftını porta yerleştirin.
  NOT: Dokunma testinin daha yüksek bir giriş direnci (Ri) seviyesinde yapılması kafaya zarar verebilir amp.
2. Topraklıyken, kafayı açın amp ve böcek saplamasının bakır telini işaret parmağı ile başparmak arasında üç kez sıkıca kavrayın. EPG doğru çalışıyorsa, ekrandaki hem ön hem de son sinyallerde üç büyük tepe noktası görünecektir. Durum böyle değilse, sorun giderme gereklidir (tartışma bölümüne bakın).
Cihaz ayarlarını, aşağıda açıklandığı gibi 150 ^{10 Ω} Ri ile 7-20x donanım kazancı, negatif ofset, yerel taban çizgisi ve 16^{class="xref">27}^,^{30 yazılım kazancı ile 3.4.1-3.3.30 mV alternatif akıma (AC) ayarlayın.}

Kontrol kutusunun Kanal 1'indeki anahtarları ve kadranları kullanarak voltajı, akım türünü, donanım kazancını (aralık, kazanç ve çarpan), ofseti ve taban çizgisini (sıfır) ayarlayın.
NOT: Uygun donanım kazancı ayarı, kablolama işinin kalitesine ve gümüş yapıştırıcıya bağlıdır, bu nedenle sivrisinekten sivrisineğe ve günden güne optimum kazanç ayarlarında değişiklik olması beklenir. Sinyal zirveye ulaşırsa (Tablo 2'de tanımlanır ve Şekil 3A,C'de gösterilmiştir) veya görselleştirilemeyecek kadar küçükse, donanım kazancının kaydın ortasında ayarlanması gerekebilir. Herhangi bir donanım kazancı değişikliği kaydı kalıcı olarak etkileyecektir (Şekil 3A,C'de gösterilmiştir).

Kafa amfisindeki kadranı kullanarak Ri seviyesini ayarlayın.

Donanım yönetim yazılımını kullanarak yazılım kazancını ayarlayın ve ayarlayın (örneğin, ön veya son sinyali seçin ve ardından yazılım kazancını artırmak için sol tıklayın veya yazılım kazancını azaltmak için sağ tıklayın).
NOT: Yazılımda yapılan herhangi bir kazanç değişikliği, kaydı kalıcı olarak ETKİLEMEYECEKTİR.
Donanım yönetim yazılımında yeni bir kayıt ayarlayın, ancak bir sonraki bölümde yer alan 4.3 adımına kadar kayda başlamayın.

4. İnsan elinde EPG²⁶^,²⁷ :

Bilgilendirilmiş onam alındıktan sonra (ev sahibi kurumun IRB'si tarafından belirtildiği gibi), alt tabaka voltaj probunu kavrarken ve başın altında tutarken ev sahibinin bir kolu içeride olacak şekilde Faraday kafesinin yanına oturmasını sağlayın amp.
NOT: Kol, balonlu naylon veya benzeri iletken olmayan bir alt tabaka üzerinde rahatça durmalıdır. El ve alt durum voltaj probu, Faraday kafesine veya kafa amplifikatörüne temas etmemelidir. Hasarı önlemek için, gönüllünün açıldıktan sonra kafa amfisine dokunmaması zorunludur. Kafaya dokunulursa amp yanlışlıkla dokunulursa, işlevselliğini değerlendirmek için yukarıda açıklanan dokunma testini gerçekleştirin.
Ana bilgisayar yerine oturduğunda, kafayı çevirin amp yana doğru. Kablolu bir sivrisineği saklama kutusundan çıkarın ve böcek saplamasının pirinç pimini kafa üzerindeki bağlantı noktasına sokarak cihaza bağlayın. Sivrisinekleri sallandırın.
NOT: Telden ayrılan sivrisinekleri kontrol etmek için yakınınızda p etanol içeren bir sprey şişesi bulundurun.
Donanım yönetim yazılımını kullanarak kaydı başlatın. Sivrisineğin rahatça ayakta durabilmesi ve sondalayabilmesi için kafa amfisini elin üzerine yerleştirin.
Kafayı açın amp topraklıyken açın. 10 dakikalık bir zamanlayıcı başlatın. Problama başarısına yardımcı olmak için ana el konumunu gerektiği gibi ayarlayın.
NOT: Hemen araştırmaya meyilli sivrisinekleri kullanırken, sivrisineği elinizin üzerine yerleştirmeden önce kafa amfisini açın. Sivrisineğin konumunu daha da ayarlamak için böcek sapının bakır telini bükmek için ince bir ahşap dübel veya iletken olmayan boya fırçası sapı kullanılabilir. Deveboynu standı üzerindeki bir büyüteç veya dijital mikroskop, özellikle davranışsal korelasyon çalışmaları için EPG sırasında sivrisineklerin gözlemlenmesine yardımcı olabilir.
Kayıt sırasında ana bilgisayar yanıtları, sivrisinek davranışları, kazanç değişiklikleri vb. ile ilgili zaman damgalı gözlemler (örn. olay işaretçileri) yapmak için donanım yönetim yazılımını kullanın. Her iki sinyalin de ekranda net bir şekilde görünmesini sağlamak için sinyallerin ekrandaki konumunu ve yazılım kazancını gerektiği gibi ayarlayın. Sinyal(ler) zirve yaparsa (Şekil 3A,C ve Tablo 2) veya yazılım kazancı maksimuma çıktığında dalgalar çok küçük görünüyorsa donanım kazancını ayarlayın. Doğrultucu katlanması gözlenirse ofseti ayarlayın (Şekil 3C,C' ve Tablo 2). Bu ayarlamaların nasıl yapılacağına ilişkin ayrıntılı talimatlar için yazılım kılavuzu³¹ ve çevrimiçi kaynaklar^{30 sayfalarına bakın}.
1. Ekrandaki sinyallerin konumunu ayarlamak için ön veya son sinyali seçin (örn.
  1 = 1 veya 2 = 3) ve ardından sinyali ekranda istediğiniz konuma sürükleyin (ideal olarak ekranın ortasına yakın, ancak üst üste binmemelidir).
2. Yazılım kazancını ayarlamak için, adım 3.4.3'te açıklanan donanım yönetim yazılımını kullanın.
3. Donanım kazancını ayarlamak için, kazancı artırmak veya alçaltmak için Kanal 1 için Kazanç Kadranını sırasıyla sağa veya sola çevirerek başlayın. Bu ayarlama, zirveyi ortadan kaldırmak için yeterli değilse (çok yüksek kazanç; Şekil 3A,C) veya sinyalin ayrıntılarının net bir şekilde görselleştirilmesine izin verin (kazanç çok düşük), kazancı daha da ayarlamak için Kanal 1 Aralığını ve Çarpan Anahtarlarını çevirin.
  NOT: Dalga biçimi verilerinin yorumlanmasına yardımcı olmak için donanım kazancının ne zaman ayarlandığını kaydetmek için olay işaretçilerinin kullanılması önerilir.
4. Ofseti ayarlamak için, kontrol kutusundaki Kanal 1 Ofset Anahtarını neg konumuna çevirin, ardından Kanal 1 Ofset Kadranını, ön ve son sinyallerdeki tepe noktaları bilgisayar ekranında aynı yönde oluşana kadar çevirin. Ofset Kadranı çok fazla çevrilirse, son sinyal tekrar dönecektir.
Sivrisinek 10 dakika içinde (veya tanımlanmış başka bir zaman noktasında) araştırma yapmazsa, kafa işaretini kapatın. Sivrisinek zaman işaretinde orta prob ise, kafa amplifikatörünü kapatmadan önce sondalamayı bitirmesine izin verin. Ev sahibinin elini dikkatlice kaldırmasını sağlayın, ardından sivrisinekleri ekli böcek sapıyla çıkarın. Saklama kutusundaki sivrisinekleri değiştirin.
Donanım yönetim yazılımını kullanarak kaydı durdurun/kapatın. Bir sonraki sivrisinek üzerinde EPG ile devam edin (Adım 4.2).
NOT: Her sivrisinekten sonra dosya adını değiştirmeyi unutmayın.
Oturum sonunda kafayı ve güç kaynağını kapatın ve yazılımı kapatın.
Katılımcı Bilgilendirme Beyanını veya benzerini, onaylanmış IRB'de belirtildiği şekilde gönüllü ile birlikte gözden geçirin.
Sivrisinekleri protokol gerekliliklerine göre atın. Plastik sargıyı köpük bloktan çıkarın ve uygun şekilde atın.
Tüm veri toplama işlemleri tamamlandıktan sonra, dalga formlarını gözden geçirin ve ölçün ve verileri daha önce açıklandığı gibi analiz edin²⁴^,²⁵^,²⁶^,²⁷^,²⁹^,³⁰. Dalga biçimi inceleme yazılımını kullanma, dalga biçimlerini gösteren şekiller oluşturma, dalga biçimlerini ölçme, verileri analiz için dışa aktarma, istatistiksel analiz yapma ve yaygın dalga biçimi yanıt değişkenlerinin ayrıntılı bir açıklaması için çevrimiçi kaynaklar

figure-protocol-3
Şekil 3: Zirveye ulaşma, kontrol kutusu kazanç değişiklikleri, düşük kablolamadan kaynaklanan belirsiz voltaj değişiklikleri, doğrultucu katlanması ve gürültü nedeniyle optimal olmayan kayıt örnekleri. Culex tarsalis sivrisineklerinden gelen dalga biçimleri, (A) zirveye çıkma (mavi yatay ok) ve ardından kontrol kutusu kazancı 100x'ten 80x'e, 40x'ten 60x'e 40x'ten 20x'e (turuncu dikey oklar), (B) belirsiz voltaj değişiklikleri ve (C) doğrultucu, ön (kırmızı) sinyale kıyasla son (siyah) sinyalde katlanırken (bkz. dalga formu J, panel C'de gösterilen yakın çekim), hat gürültüsü (yalnızca ön düzeltme (kırmızı) sinyalinde görünen 11 Hz sinüs dalgası, panel C'de gösterilen yakın çekim), zirve (mavi yatay ok) ve 500x'ten 200x'e bir kontrol kutusu kazanç değişikliği (turuncu dikey ok). Dalga biçimi adları her panelin üst kısmında gösterilir. Panel C'nin sağ alt köşesindeki mor oklar, prob tamamlandıktan sonra kafa amplifikatörünün ne zaman kapatıldığını gösterir ve doğrultucu katlama için başka bir örnek sağlar. Panel C'deki ön düzeltme sinyaliyle ilişkili kırmızı yatay çizgiler, zaman damgalı notları kaydetmek için Olay İşaretçilerinin ne zaman kullanıldığını gösterir. Ri seviyeleri, uygulanan sinyaller, zaman ölçekleri ve yazılım kazançları (A) 10⁷ Ω, 150 mV DC, 13.2 s/div, 8x; (B) 10⁷ Ω, 150 mV DC, 4,4 s/div, 128x; ve (C) 10⁷ Ω, 150 mV AC, 7,4 s/div, 2x; (C') 0,2 sn/bölme, 8x. Kısaltmalar: AC = alternatif akım, DC = doğru akım, Ri = giriş direnci, mV = milivolt, Ω = Ohm, s/div = bölme başına saniye. Bu rakam Cooper ve ark.^{27'den alınan verilerle hazırlanmıştır}. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

AC-DC CWP kayıtları Cx. tarsalis sivrisineklerinin insan eliyle kanla beslenmesi (Şekil 4), analiz ve yayın için uygun yorumlanabilir dalga formları oluşturdu²⁷. Yorumlanabilir dalga biçimleri, sıkıştırma (Tablo 2'de tanımlanmıştır) ve yazılım kazancı dalga biçimi inceleme yazılımında ayarlandığında dalga biçimi aileleri (Tablo 1 ve Şekil 4), türler ve alt türler olarak sınıflandırılabilen farklı, ayırt edilebilir tekrar eden desenler içeriyordu²⁷^,³¹. Daha önce Ae. aegypti feeding on human hands'de tanımlanan tüm dalga formu aileleri (J, K, L, M, N) ve tipler (L1, L2, M1, M2), Cx. tarsalis tarafından üretilen dalga formlarında tanımlanmıştır²⁶, burada açıklanan yöntemlerin geçerliliğini doğrulamaktadır. Ek olarak, üç yeni dalga formu tipi (M3, N1, N2) ve L1, L2, M1 ve M2'nin çok sayıda alt tipi tanımlandı²⁷. Ek olarak, ağız parçaları ana bilgisayardan çekildiğinde voltaj düşüşü taban çizgisine geri dönüldü, dalga biçimi ailesi W^{27 olarak adlandırıldı}.

Burada özetlenen prosedürleri takip ederken cihaz ayarlarının (mevcut tip ve Ri seviyeleri) sistematik olarak değiştirilmesi, Cx. tarsalis'in insan eliyle beslenmesi, her dalga formunun elektriksel kökenleri, sivrisinek başına tam ve eksik probların saniye cinsinden ortalama süresi ve böcek başına saniye cinsinden dalga formu süresinin istatistiksel olarak karşılaştırılması (WDI), settings^{27 genelinde böcek başına dalga biçimi olaylarının sayısı (NWEI) ve böcek başına olay başına saniye cinsinden dalga biçimi süresi (WDEI).} Sivrisinekler ayrıca farklı dalga formları sırasında kesintiye uğradı ve hangi dalga formunun kan yutma ile ilişkili olduğunu belirlemek için diseke edildi²⁷. Benzer bir araştırma Ae. aegypti için karşılaştırılabilir metodoloji kullanılarak gerçekleştirilmiştir²⁶.

EPG'nin hassas ve karmaşık doğası nedeniyle, tüm kayıtlar Şekil 4. Zirveye çıkma (Figure 3A,C), donanım kazancı değişiklikleri (Figure 3A,C), düşük kablolama işleri ( Şekil 3B), J dalga biçiminde doğrultucu katlanması (Şekil 3C,C') ve elektriksel gürültü (Şekil 3C,C') zaman zaman dalga formlarını bozdu ve maskeledi, bu da onları yayın kalitesi rakamlarında kullanım için uygun hale getirmedi ve puanlama ve analizi zorlaştırdı. Bu nedenle, kablolama becerilerini mükemmelleştirmek, kazanç ve voltaj ayarlarını optimize etmek, ofseti ayarlamak ve elektriksel gürültüyü kontrol etmek için ön uç çabası önerilir. İlginç bir şekilde, doğrultucu katlanması yalnızca Cx. tarsalis (Şekil 3C,C') için dalga formu ailesi J'de gözlendi ve diğer sivrisinek türleri (Ae. aegypti ve Culex quinquefasciatus) kullanıldığında bile (veriler gösterilmemiştir) ofset başlangıçta ayarlandıktan sonra tekrarlamadı. Ek olarak, sorun giderme, Şekil 3'te (panel C ve C') gösterilen kontrolsüz elektriksel gürültünün hatalı bir Faraday kafesinden kaynaklandığını ortaya çıkardı. Arızalı Faraday kafesinde yapılan kayıtlar hala kullanılabilir durumdaydı, ancak geliştirilmiş bir Faraday kafesi inşa edildiğinde gürültü sorunları çözüldü (Şekil 1B).

Tüm önlemler ve ön uç optimizasyonları alındığında bile, sivrisinek için elektrot bağlantısının kalitesindeki küçük değişiklikler ve sinyali bozan ve sinyal-gürültü oranını değiştiren diğer bilinmeyen faktörler, sinyalin görünür aralıkta olduğundan ve her dalga biçimindeki tepe noktalarının çözünürlüğünün dalga biçimi tanımlama ve karakterizasyonu için yeterli olduğundan emin olmak için kaydın ortasında donanım kazancının ayarlanmasını gerekli kılmıştır. Ne yazık ki, kaydın ortasında donanım kazancının ayarlanması ani voltaj kaymalarına (Şekil 3A, C) neden olabilir, bu da dalga biçimlerini yayın için uygun olmayan ancak yine de (tamamen veya kısmen) ölçüm ve analiz için kullanılabilir hale getirir.

figure-results-1
Şekil 4: 250 mV AC'lik uygulanan bir sinyal kullanılarak 10⁷ Ω'lik bir Ri ile kaydedilen bir insan eli üzerindeki bir Culex tarsalis probundan alınan temsili dalga formları. Aile düzeyinde (NP, J, K, L, M, W) dalga biçimi adları her panelin üst kısmında gösterilir. Alt paneller, panel A'daki belirli bölgelerin büyütülmüş hallerini gösterir. Eklenen paneller, belirtilen bölgelerin büyütülmüş hallerini gösterir. Zaman ölçekleri ve yazılım kazançları (A) 7.0 s/div,16x; (B) 1,0 sn/bölme, 64x; (B') 0,2 sn/bölme, 64x; (C) 1,0 s/div, 64x; (C') 0,2 s/div, 32x; (D) 1,0 sn/bölme, 64x; (D') 0,2 s/div, 64x. Kısaltmalar: AC = alternatif akım, Ri = giriş direnci, mV = milivolt, Ω = Ohm, s/div = bölme başına saniye. Bu rakam Cooper ve ark.^{27'den elde edilen verilerle hazırlanmıştır}. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

AC-DC EPG'yi kullanırken, donanıma zarar vermemek için donanım ve yazılım çalışması³⁰ hakkında temel bir anlayışa sahip olmak ve burada açıklanan protokolleri dikkatlice takip etmek çok önemlidir. En önemlisi, Faraday kafesine topraklanmadıkça, açıldığında kafa amplifikatörüne dokunmaktan kaçının. Faraday kafesinde mümkün olduğunca geriye kayıt yapılması önerilir³⁰. Aşırı ortam elektrik gürültüsü olan bir ortamda kayıt yapılmadıkça, yorumlanabilir dalga formları elde etmek için kafes kapılarının mutlaka kapatılması gerekmez. Faraday kafesinde motorlu hiçbir şey olamaz. Faraday kafesinin düzgün çalışması için yalnızca kafa amplifikatörü aracılığıyla elektriksel olarak topraklanması gerektiğine dikkat etmek önemlidir. Bu, Faraday kafesi tarafından yakalanan elektriğin laboratuvar standına, kafa amplifikatörünün metal kasasına, kablodan kontrol kutusuna akması için iletken bir yol sağlamak üzere standın bir ayağından zımparalanmış boya ile kafa amplifikatörünü metal bir laboratuvar standına bağlayarak gerçekleştirilir. güç kaynağından uygun şekilde topraklanmış bir duvar prizine ve bina topraklaması^{yoluyla toprağa 30}. Çeşitli noktalar arasındaki direnci (iletkenliğin tersi olan) ölçerek kafes içindeki bileşenler arasındaki bağlantının kalitesini kontrol etmek için bir multimetre kullanılabilir. Kapılar kapatıldığında sesin önemli ölçüde azaldığını (veya ideal olarak ortadan kaldırıldığını) doğrulamak için Faraday kafesinin içine kablosuz bir radyo da yerleştirilebilir, bu da Faraday kafesinin havadaki elektrik sinyallerini yeterince yakaladığını doğrular (E. Backus per. Comm.).

Gümüş tutkalın uygun ve standartlaştırılmış olarak hazırlanması ve kayıt elektrotlarının böceklere bağlanması, kullanılabilir kayıtlar elde etmek için kritik öneme sahiptir. Böcek kütikülü bir yalıtkandır ve gümüş tutkal, elektriğin böceğin içinden pronotum^30'un yüzeyindeki altın tele gitmesi için bir yol oluşturmak üzere kütikülün gözeneklerine yeterince nüfuz etmezse bir kapasitör görevi görür. Gümüş yapıştırıcıyı her EPG seansından önce aynı anda hazırlayın, tüpten taze gümüş yapıştırıcı ile çalışın ve kablolama işlemi sırasında sık sık kuvvetli vorteksli gümüş yapıştırıcı ile değiştirin. Altın halkanın göğüs kafesine doğru konumlandırıldığından emin olun, böylece tüm halka kütikül ile temas halinde olur ve güçlü bir elektrik bağlantısı oluşturmaya yardımcı olmak ve ayrıca sivrisineğin telden ayrılmasını ve kaçmasını önlemek için bir tarafa eğilmez veya kalın bir gümüş tutkal ve pul tabakasıyla ayrılmaz.

Burada açıklanan protokoller, farklı sivrisinek türleriyle çalışırken optimize edilmelidir. Belirli bir eklembacaklıya kayıt yapmak için en uygun EPG ayarları (Ri seviyesi, voltaj, akım tipi ve donanım kazancı) deneysel olarak belirlenmelidir^12,30. Ancak ofset ayarlandıktan sonra benzer sivrisineklerle çalışırken yeniden ayarlanmasına gerek kalmayacaktır. Ae. aegypti²⁶ ve Cx. tarsalis²⁷ ile AC-DC EPG için en uygun ayarlar belirlenmiştir. Ek türler için dalga biçimi kitaplıkları (Tablo 2'de tanımlanmıştır), sivrisinekler için EPG'nin benimsenmesini kolaylaştıracaktır. Kanla beslenme davranışı sivrisinek türüne ve anestezi seçimine bağlı olarak farklı şekilde etkilenebileceğinden, ilgili sivrisinek için anesteziyi optimize etmek de gereklidir. Örneğin, Cx. tarsalis CO₂ ile 15 dakikalık anesteziden sonra 4 saatlik bir iyileşme süresi gerektirirken, Ae. aegypti için buzla 15 dakikalık bir anestezi süresinden sonra 15 dakikalık bir iyileşme süresi yeterlidir. Bununla birlikte, Culex tarsalis'in soğuğa maruz kalma ile yıkılması zordur, bu nedenle uzun iyileşme süresine rağmen ağırlıklı olarak CO₂ kullanılır.

AC-DC EPG monitörünün çevrimiçi kaynakları^30,31 inceledikten veya deneyimli bir kullanıcıyla eğitim aldıktan sonra kullanımı kolay olsa da, bazı sorun giderme işlemleri gereklidir. Başlangıçta, yazarın sivrisinek sondalarının EPG kayıtları, ön sinyalde Wayadande ve meslektaşları 26 tarafından gözlemlenmeyen veya rapor edilmeyen beklenmedik bir¹¹ Hz işaret dalgasına sahipti. E. Backus ile yapılan istişare, Faraday kafesinin muhtemelen müdahale eden zemin döngüleri nedeniyle sorun olduğunu gösterdi. Aşağıdaki tablodan izole etmek için lastik ayaklarla desteklenen büyük bir alüminyum zemin plakasına cıvatalanmış bir alüminyum çerçeveye bağlı oldukça iletken bir bakır ekrandan yapılmış yeni bir Faraday kafesi (Şekil 1B), 11 Hz gürültü sinyalini çözdü (Şekil 3C,C'). Ek olarak, bazen, EPG güç kaynağı ilk açıldığında, düzeltme öncesi ve sonrası sinyaller düz, pürüzsüz, ince çizgiler yerine kalın, bulanık çizgiler olarak görünürdü. Bu genellikle cihazı kapatarak ve tüm kablo bağlantılarını kontrol ederek düzeltildi. Bu başarısız olursa, cihazın fişini 1-3 dakika çekmek genellikle yardımcı oldu. Çok nadiren, çalışma sırasında ön ve son sinyaller kalınlaşır ve bulanıklaşır, bu durum cihazı kapatıp farklı bir prize takarak veya EPG'yi duvara bağlamadan önce takmak için bir voltaj regülatörü ve güç düzenleyici kullanarak ele alınır. İdeal olarak, EPG monitörü için özel bir hat, EPG³⁰ ile aynı elektrik devresine takılı buzdolaplarından ve diğer ekipmanlardan kaynaklanan hat gürültüsünü ortadan kaldıracaktır.

Şu anda, sivrisinekleri incelemek için EPG kullanmanın iki ana sınırlaması vardır. İlk olarak, hangi problama davranışlarının dalga formlarına karşılık geldiğini doğrulamak için birkaç korelasyon çalışması yapılmıştır. Her dalga formu ailesi (Tablo 1) ve bazı dalga formu tipleri (M1 ve M2) sırasında neler olduğuna dair güçlü hipotezler olsa da, kan alımının dalga formu ailesi M^26,27 ile ilişkili olması dışında, bu hipotezlerin çok azı deneysel olarak doğrulanmıştır. En önemlisi, tükürük salgısı olaylarına karşılık gelen dalga biçimleri tanımlanmalıdır çünkü tükürükte birçok patojen bulaşır. Tedavi grupları arasındaki dalga formu süresi ve sayılarındaki önemli farklılıkları anlamlı bir şekilde yorumlamak için EPG dalga formlarının sivrisineklerdeki biyolojik aktivitelerle korelasyonu gerekecektir. İkincisi, EPG sırasında sondalama ve yutma oranları beklenenden çok daha düşük olabilir²⁷. Sivrisinekleri tek tek kısa kablolara bağlamak ve onları doğrudan konakçının üzerine yerleştirmek, uzun mesafeli konakçı arama ve sosyal beslenme davranışlarını önleyebilir, bu da araştırma ve yutma davranışlarını etkileyebilir. Doğru şekilde bağlanmış böcekler normal şekilde yürüyebilir ve uçabilir. Yine de sivrisinekler sıklıkla telleri çekerler ve bazen birbirine dolanırlar veya kendilerini doğal olmayan açılarda tutarlar, bu da kablolu olmanın davranışlarını bir dereceye kadar etkilediğini gösterir. Yazarlar, EPG sırasında sondalama oranlarını artırmak için birçok stratejiyi test ettiler ve sivrisinekleri gece boyunca aç bırakmak, yaşlı bireyleri kullanmak, onları ele yerleştirmeden hemen önce insan nefesine maruz bırakmak ve ele insan tükürüğü uygulamak en etkili olanıydı ve ayrıca sivrisineğin sondalama için ideal konumda olduğundan emin olmak için ellerinin pozisyonunda sürekli olarak ince ölçekli ayarlamalar yapan konakçıları kullanmak²⁷.

Bu sınırlamalara rağmen, AC-DC EPG, araştırma ve yutma davranışlarını incelemek için diğer yaklaşımlara göre çok sayıda avantaja sahiptir. Kan beslemesi sırasında sondalama ve yutma davranışlarını ve tükürük salgılarını ölçmek için tasarlanan BiteOScope¹¹, flyPAD¹⁵ ve Otomatik Biyomateryal Platformu¹⁴ gibi sistemler, normal konakçı doku sistemleri ve konakçı ipuçlarından yoksun şeffaf yapay substratlar ve sıvı diyetler kullanır. Bu sentetik platformlar birçok deneysel amaç için faydalı olsa da, AC-DC EPG'nin açık bir avantajı, bu eklembacaklı davranışlarını ve doğal konakçı sistemleri içindeki ilgi çekici değişkenleri inceleme yeteneğidir. Ayrıca, AC-DC EPG sisteminin kullanıcı tanımlı uyarlanabilirliği, maksimum miktarda bilgi ile dalga formları elde etmek ve geniş bir konakçı ve eklembacaklı^yelpazesi üzerindeki olumsuz etkileri en aza indirmek için gerekli olan ayarlanabilir Ri seviyelerine, akım tiplerine ve voltaj seviyelerine sahip olmayan diğer EPG cihazlarına^22,33 ve EPG benzeri elektronik izleme cihazlarına^16,21 göre ek bir avantaj sunar^.²³. Elektromiyografi (EMG) teknikleri de kanla beslenmeyi incelemek için kullanılır. Bununla birlikte, elektrik devresi genellikle sadece eklembacaklıları içerir ve sadece kayıt elektroduna en yakın kas potansiyelleri kaydedilir, bu nedenle dalga formları, hücre yırtılmaları, stile konumları ve aktiviteleri ve ağız parçalarından akış potansiyelleri gibi konakçı-böcek arayüzünde meydana gelen ayrıntılı aktiviteler hakkında bilgi sağlamaz^28,34. İntravital mikroskopi teknikleri, canlı konakçı dokulardaki ayrıntılı ağız parçası hareketlerini ve aktivitelerini doğrudan görselleştirmek için kullanılabilir, ancak bu teknikler canlı hayvan modellerinde invaziv prosedürleri içerir⁹. Yalnızca AC-DC EPG monitörü, invaziv prosedürlere ihtiyaç duymadan canlı opak konakçı dokularda meydana gelen sondalama, yutma ve tükürük salgılama davranışları hakkında gerçek zamanlı olarak son derece ayrıntılı bilgi sağlayabilir ve çok çeşitli eklembacaklılarda kullanım için uyarlanabilir^10,12.

Bu, sivrisinekleri kablolamak, bir böcek aspiratörü inşa etmek ve insan konakçılar üzerinde EPG gerçekleştirmek için ilk ayrıntılı adım adım prosedürdür. Bu protokollerin, insan konakçılarla beslenen sivrisinekler üzerinde AC-DC EPG'nin benimsenmesini kolaylaştırması bekleniyor. AC-DC EPG'yi kullanan gelecekteki araştırma çabalarına örnek olarak, kan alımından önceki stereotipik araştırma davranışları dizilerinin tanımlanması, ağız parçalarından kan akışının araştırılması ve eklembacaklı türleri/gelişim aşamaları²⁶ içinde ve arasında beslenme plastisitesinin karşılaştırılması dahil olmak üzere, kan beslemenin temel mekanizmaları ve konakçı doku hasarı¹⁰ üzerine çalışmalar yer alabilir. EPG ayrıca insektisitlerin, antifeedantların ve kovucuların etkilerini ölçmek için de kullanılabilir¹². Sivrisinekleri insan ellerinde incelemek için AC-DC EPG'yi kullanmak için burada sunulan prosedürler, bu çalışmaları hızlandıracak ve sivrisinek kanı besleyici biyolojisine yeni bakış açıları sağlayacaktır.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur. Bu yayında ticari isimlerden veya ticari ürünlerden bahsedilmesi yalnızca belirli bilgiler sağlama amaçlıdır ve ABD Tarım Bakanlığı tarafından tavsiye veya onay anlamına gelmez. Bu rapordaki sonuçlar yazarlara aittir ve USDA'nın görüşlerini temsil etmeyebilir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Oklahoma Eyalet Üniversitesi'nden Prof. Astri Wayadande'ye, sivrisinekler için kablolama prosedürüne öncülük ettiği için, Parlier, CA'daki USDA-ARS'den Dr. Elaine Backus'a ve Gainesville, FL'deki EPG Technologies Inc.'den Bay Andrew Dowell'a EPG ekipmanında sorun giderme konusunda yardım için minnettarız. Ayrıca Manhattan, KS'deki USDA-ARS Insectary'den Dr. Dustin Swanson ve Bay William Yarnell'e sivrisinek sağladıkları için ve Manhattan, KS'deki Kansas Eyalet Üniversitesi'nden Bayan Miriam Ruhinda'ya prosedürel videoların çekilmesine yardımcı oldukları için teşekkür ederiz. Bu çalışma, Kansas Eyalet Üniversitesi'ndeki Entegre Moleküler Entomoloji Çekirdeğine (IEMC) erişim ile mümkün olmuştur. Bu araştırma USDA Araştırma, Eğitim ve Ekonomi İşgücü Geliştirme Anlaşması (#58-3022-0-002) ve Hatch Çok Devletli Projesi (NE1943) tarafından desteklenmiştir. Bu el yazması, Kansas Tarımsal Deney İstasyonu, Kansas Eyalet Üniversitesi, Manhattan, KS, ABD'den 24-194-J numaralı katkıdır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Instrumentation
AC-DC 4 kanallı elektropenetrograf	EPG Teknolojileri, Inc.		EPG için, güç kaynağı, kontrol kutusu, anahtar arayüz kutusu, dört kafa aşaması amplifikatörü, dört alt tabaka voltaj probu ve ilgili kabloları içerir
EPG sırasında insan konağın elini/kolunu dayaması için	hava yastıkları	Amazon.com
DI-710 Veri toplama donanımı (AD Kartı)	DATAQ Instruments Inc.		analog EPG sinyallerini bir bilgisayarda görselleştirilebilecek şekilde sayısallaştırmak için
Kısılabilir Led Büyüteç Lambası, Büyük 5X Işıklı Eller Serbest Büyüteç ve Okuma Standı Hobiler El Sanatları Dikiş Tezgahı	EPG	sırasında davranışsal gözlem için Amazon.com; EPG sırasında yalnızca fişe takılı olmayan kullanın, aksi takdirde gürültü oluşabilir
			EPG sırasında davranışsal gözlem için
Dino-Lite Esnek kollu Masaüstü Standı	Dino-Lite	MS22B	kamerayı tutmak ve manipüle etmek için
Eisco Çelik İmbik Taban Standı ve Çubuk Seti	Fisher Scientific	S41740	baş sahnesini tutmak için amplifikatör ve Faraday kafesini topraklamak için (metalden yapılmalıdır)
EPG Çevrimiçi Atölye	UF IFAS Uzantısı	https://ifas-crec-entomology.catalog.instructure.com/courses/epg-workshop-2022	AKA, EPG öğrenmek için "çevrimiçi kaynaklar" (cihaz kurulumu, veri toplama ve analizi, Faraday yapımı, gümüş tutkal hazırlama, böcek saplama yapımı, vb.)
Furman P-1800 AR Güç Regülatörü/Güç Düzenleyici	Amazon.com		hat gürültüsünü azaltmak için
sahibi ile Faraday kafesi arasında bariyer olarak kullanım için	Küçük Kabarcık Yastıklama Sargısı	Amazon.com
Troemner Talboys Labjaws Normal Kelepçe Tutucu	Fisher Scientific	02-217-121	baş stage amplifikatörünü tutmak ve Faraday kafesini topraklamak için (metalden yapılmalı ve plastikle kaplanmamalıdır)
EPG	ve istatistiksel analiz için	Windows bilgisayar Best Buy
Software
Backus 2.0 Veri Analizi SAS programı	UF IFAS Uzantısı	https://crec.ifas.ufl.edu/extension/epg/data-analysis/	dalga formu verilerinin istatistiksel analizi için
Ebert 1.0 Dosya Manipülatörü ve Hata Denetleyicisi SAS programları	UF IFAS Uzantısı	https://crec.ifas.ufl.edu/extension/epg/data-analysis/	dalga formu verilerinin istatistiksel analizi için dosyaların hazırlanması için
SAS sürüm 9.4	SAS Institute Inc.		dalga formu verilerinin istatistiksel analizi için
WinDaq Lite	DATAQ Instruments Inc.		EPG verilerinin kaydedilmesi ve gözden geçirilmesi için. WinDaq Hardware Manager yazılımını (AKA, "donanım yönetim yazılımı") ve WinDaq Waveform Browser yazılımını (AKA, "dalga formu inceleme yazılımı") içerir. Yalnızca Windows bilgisayarlarda kullanım içindir.
< güçlü >Faraday Kafesi< / güçlü >< / em>< / u >
Alüminyum ekran çerçevesi	Ev Deposu	MSCF5167	Faraday kafesinin duvarları
için Alüminyum Levha, 0.125 (1/8) kalınlığında 3003-H14	Metal Deposu	S318	Faraday kafesinin tabanı için
Köşe destekleri, 1 "	Faraday kafesinin duvarları için Home	Depot	339547
Düz başlı Phillips makine vidaları, # 6-32 x 1 "	Faraday kafesi yapımı için	Home Depot	459999
Düz rondelalar, # 6	Faraday kafesi yapımı için	Home Depot	638977
Fluke 15B+ Dijital Multimetre, Elektrik Uygulamaları için, 1000V ve 10A'ya kadar AC/DC Gerilim ve Akım Ölçümlerinin yanı sıra Faraday Kafesini
Taşınabilir Radyo FM, Hoparlörlü Goodes Transistörlü Radyo, Kulaklık Jakı, Uzun Menzilli Alım için 2AA Pille Çalışan Radyo,	Faraday Kafesini test etmek için	Amazon.com
Saf bakır ekran, 0.11 tel çapı ile 16 x 16 ağ, Faraday kafesinin duvarları için 36 "x 12'Metro	Ekran Işleri
Yuvarlak başlı birleşik makine vidaları, # 6-32 x 3/4 "	Faraday kafesi yapımı için	Home Depot	528466
Zımpara kağıdı, 1/2" x 1", 150 Grit	Home Depot	19036-20-CC	laboratuvar standının altından boyayı çıkarmak için
Ekran çerçevesi köşeleri, 5/16"	Home Depot	WCORN516	Faraday kafesinin duvarları için
Ekran spline, 0.14 "	Faraday kafesinin duvarları için	Depot	3034719
Böcek Saplamaları
Pirinç Rozet Pimleri	Home Depot	801294
Bakır tel, böcek	Amazon.com
Harris suda çözünür grip	Böcek saplama telini lehimlemeye, kaplamaya ve güçlü bir bağlantı oluşturmaya yardımcı olmak için	Home Depot	355398
İğne burunlu pense	Böcek saplamaları oluştururken tel bükmek için	Home Depot
Pro's Kit 900-015	Lehimleme sırasında rozet pimlerini tutmak için	Amazon.com
Lehim (reçine çekirdekli)	Home Depot	296497	böcek saplamaları oluşturmak için
Tel kesici sıyırıcı aracı	Böcek saplamaları oluştururken bakır teli sıyırmak ve kesmek için	Home Depot
YIHUA 928D-III Havya, 110W Yüksek Güçlü, tamamen Dijital Ekranlı Havya	Amazon.com		böcek saplamaları oluşturmak için; temizlik için bir stand, sünger ve çelik yünü ile birlikte gelir
Böcek Aspiratörü
Accuris ASPIRE Laboratuvar Aspiratörü	Accuris aletleri	V0020	; el tipi vakum kontrol cihazı, ince uçlu (40 mm) paslanmaz çelik adaptör ve pipet ucu adaptörü
Chemglass Life Sciences Pasteur pipetleri,	sivrisinekleri kablolarken böcek aspiratörü olarak kullanım için	Fisher Scientific NC0230004
içerirModifiye	Pasteur pipetini vakum hattına takmak için	Home Depot
Cibinlik yardımcı kumaş, 10 x 10 cm kare	Joann Kumaşlar	16651622	sivrisineklerin vakum pompasına aspire edilmesini önlemek için
Saint Gobain Performans Plastik Tüp Tygon 1/4 x 7/16	Fisher Scientific	50-206-8914	Farklı modifiye Pasteur pipetleri arasında hızlı ve kolay geçiş için
Thermo Scientific Nalgene HDPE Hızlı Bağlantı Kesme (3/8 ila 7/16 inç. Kimlik)	Farklı modifiye edilmiş Pasteur pipetleri arasında hızlı ve kolay geçiş için	Fisher Scientific	15-315B
Silver Glue < / strong>< / em>< / u >
Elmer'in Glue-All Çok Amaçlı Beyaz Tutkal	Amazon.com		gümüş tutkal hazırlama için
Gümüş Pul% 99,9 saf, 4-8 &mikro; m	ThermoFisher	786.09	gümüş tutkal hazırlama için
Silver Flake %99,95 saf, 8-10 & Gümüş	tutkal hazırlama için	Inframat Advanced Materials	47MR-12F
Böcek Anestezisi
CO₂ fıskiye kiti, 1000 mL, #9 Flypad	kullanırken böceklerin kurumasını önlemek için	FlyStuff	59-181
Kauçuk Tıpa Flypad çerçeve, standart ölçü	FlyStuff	59-118	sivrisineklerin flypad'den düşmesini önlemek için
Flystation Fırçası	FlyStuff	59-205	bir sineklik üzerinde çalışırken statik elektriği azaltmak için
Flystuff Flypad standart ölçü	FlyStuff	59-114	AKA sivrisinekleri uyuşturmak için "anestezi pedi"
Sinekliğe aktarmadan önce sivrisinek bardaklarını gazlamak için	huni (4 inç çapında)	Amazon.com
Pleksi cam veya düz plastik kapak (boyuta göre kesilmiş)	Sivrisinekler uyanmaya
başlarsa sinekliği örtmek için Home Depot MC-27Plastik Boru Hortum Kelepçelerini Kapatın Tek Konumlu ve Ayarlanabilir Açık (çeşitli 1/8 "ila 1/2")	Amazon.com		Flypad ve huni arasındaki gazı yönlendirmek için
CO<_{2 <}>			tank" gaz akışını düzenlemek için tek kademeli COsub>2 /subtank
T” Hem	flypad'i hem de huniyi CO₂ tankına bağlamak için	FlyStuff	59-123
, şeffaf ve nbsp;	FlyStuff	59-124C	huni ve flypad'i CO₂ tankı
Insect Wiring
Black kart stoğu, (65Lb, 176 g/m²) 8.5" x 11"	Michael's Stores Inc.		Altın telin görselleştirilmesi 327826 daha kolay hale getirilir
Siyah inşaat kağıdı kare 3.5 "x 4.0"	telin görselleştirilmesini kolaylaştırmak için	956221	zımbalar
Oruç tutan sivrisinekler için	Amazon.com		pamuk topları
Craft köpük # 12 blok (3,1 cm x 17,2 cm x 30,2 cm)	Joann Kumaş ve El Sanatları Mağazası	Kablolu sivrisinekleri tutmak için	1941079
Deflecto Kurdele Dağıtıcı,	Altın tel depolamak için	Amazon.com
Tüy ağırlığı entomoloji forseps	Böcek manipülasyonu için	Fisher Scientific	S72110
İnce forseps (Dumont tarafından FST: #5 91150-20, Inox-Electronic)	Sivrisinekleri kablolarken altın bir halka yapmak için	Güzel Bilim Araçları	91150-20
İnce uçlu boya fırçası	Amazon.com		kablolama ve EPG sırasında sivrisinekleri manipüle etmek için; EPG için kullanılıyorsa plastik veya ahşap bir sapa sahip olmalıdır
İnce uçlu standart transfer pipetleri, dar, 5,8 mL	Gümüş tutkal hazırlama için	Thomas Scientific	7761D21
Altın tel, %99,99 saf, 0,025 mm kalınlık	Sivrisinekleri kablolamak için	Goodfellow	AU005121
Minutien pimleri, uç 0,2 mm, 1 cm	Sivrisineklere yapıştırıcı uygulamak için	Fisher Scientific	NC9681411
Kağıt bardaklar	Sert Kağıt Tüp
Böcek kablolaması sırasında minutien pimini tutmak için	yardımcısı	Fisher Scientific	50-996-811
Kapaklı plastik saklama kutusu (7 inç x 9 inç x 14 inç)	Amazon.com		kablolu sivrisinekleri taşımak için
Pleksi cam veya düz plastik kapak (boyuta göre kesilmiş)	Home Depot	MC-27	sivrisinekler uyanmaya başlarsa sinekliği örtmek için
Kendiliğinden kapanan forseps	Fisher Scientific	08-906	altın tel tutmak ve manipüle etmek için
Sıkıştırılmış Gaz
CO_{2 gaz tankı}	Matheson Sineklikleri	sineklik ile uyuşturmak için
*Ortak Laboratuvar Öğeleri*
Biohazard tek kullanımlık otoklav torbaları, 8 1/2" x 11" Kanla	beslenen sivrisineklerin atılması için	Fisher Scientific	03-410-591
Pasteur pipetlerinin modifikasyonu için	Amazon.com		Bunsen brülörü veya propan meşale
Renkli laboratuvar bandı	Daigger Malzemeleri	Etiketleme, gümüş yapıştırıcı hazırlama ve maskeleme forsepsleri için	EF9763R
sarf malzemeleri Tek kullanımlık pipet uçları, 1000 & L	Fisher Bilimsel		gümüş tutkal yaparken suyu kesmek için
Diseksiyon mikroskobu	Leica Microsystems		sivrisinekleri kablolamak için
Diseksiyon probu	Fisher Scientific	NC9109673	karıştırmak ve gümüş tutkal uygulamak için
Erlenmeyer şişesi, 1000 mL	Fisher Scientific		flypad Ethanol kullanırken böceklerin kurumasını önlemek için
,% 70 &	Kaçan sivrisinekleri kurtarmak için	Fisher Scientific	04-355-122
Cam petri kapları	Fisher Scientific	08-747B	sivrisinekleri buzla uyuşturmak için
Eldivenler	koruma için	Fisher Scientific
Kimwipes KimTech Science marka hassas görev silecekleri	Fisher Scientific	06-666	sivrisinekleri ezmek için
Laboratuvar önlükleri	Kişisel koruma için	Fisher Scientific
LiBa Sprey Şişeleri, Doldurulabilir Boş Sprey Şişeleri (sürtünme alkolü güvenli)	Amazon.com		kaçan sivrisinekleri kurtarmak için
Manyetik karıştırma çubuğu, 2 cm uzunluğunda	Fisher Scientific		gümüş tutkalı karıştırmak için
Mekanik Tek Kanallı pipet, 1000 & L	Fisher Bilimsel	13-690-032	gümüş tutkal yaparken suyu ayırmak için
Mikrosantrifüj tüpleri, 1.5 mL	Fisher Scientific	780420	gümüş tutkal Parafilm
M	Fisher Scientific	50-998-944	gümüş tutkal tüplerinin sızdırmazlığı için
Köpük bloğu kaplamak için	plastik sargı	Amazon.com
Pyrex 20 mL beher	Fisher Scientific	07-250-051	gümüş tutkalı karıştırmak için
Semi-Micro Balance	Fisher Scientific	10-919-370	tutkal ve gümüş pul tartmak için
Sharpie kalem,	etiketleme için	Amazon.com
Tek kenarlı tıraş bıçağı	Elektron Mikroskobu Bilimleri	71980	saplarını temizlemek için
Standart Tek Kullanımlık Transfer Pipetleri	Fisher Scientific	Gümüş yapıştırıcıyı bir saklama tüpüne aktarmak için	133-711-7mL
Karıştırma plakası	Fisher Scientific		Gümüş yapıştırıcıyı karıştırmak için
Zamanlayıcı/kronometre izle	sahibinin her bir böceğe ne kadar süre maruz kalacağını zamanlamak için	Fisher Scientific
Ultrapure (18 MΩ) su	Fisher Scientific		gümüş tutkal hazırlama için
Yardımcı makas	Fisher Scientific	08-945	altın tel kesmek için
Vorteks karıştırıcı	Fisher Scientific		gümüş tutkalı karıştırmak için
*Çalışma Organizmaları*
Culex tarsalis sivrisinekler	USDA ARS Manhattan'daki Tahıl ve Hayvan Sağlığı Araştırma Merkezi, KS		çalışma konusu olarak kullanılmak üzere

Dino-Lite Edge Dijital Mikroskop (250x büyütme)Dino-Lite AF4915ZT Ev ,, ,, test etmek için Amazon.com Direnç, Süreklilik, Diyot ve Kapasitans Özelliklerini Ölçer Kapalı, Açık ve Acil Kullanım için Cep Radyosu Home Böcek saplamaları inşa etmek için saplamaları yapmak için 20 AWG Yardımcı Eller Lehimleme Yardımı Böcek aspiratörüne emiş uygulamak için 5 3/4" uzunluğunda edilmiş Ticari Elektrikli Renkli Vinil Elektrik Bandı m " regülatörü1/8in ID Boru için montaj, Altın şeffaf Oruç sivrisinekler için pim , gaz Kişisel saklamak için;ince uçlu böcek Ev

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Becker, N., et al. Medical importance of mosquitoes in Mosquitoes and their control. , 2nd ed, Springer. Los Angeles, CA. 25-42 (2010).
World Health Organization. Vector-borne diseases. , (2024).
Woodstream Corporation, Inc. The economic cost of mosquito-borne diseases. AMosquito Magnet. , (2022).
Bartlow, A. W., et al. Forecasting zoonotic infectious disease response to climate change: Mosquito vectors and a changing environment. Vet Sci. 6 (2), 40(2019).
Naslund, J., et al. Emerging mosquito-borne viruses linked to Aedes aegypti and Aedes albopictus: Global status and preventive strategies. Vector Borne Zoonotic Dis. 21 (10), 731-746 (2021).
Shaw, W. R., Catteruccia, F. Vector biology meets disease control: Using basic research to fight vector-borne diseases. Nat Microbiol. 4 (1), 20-34 (2019).
Wilson, A. L., et al. The importance of vector control for the control and elimination of vector-borne diseases. PLoS Negl Trop Dis. 14 (1), e0007831(2020).
Dusfour, I., et al. Management of insecticide resistance in the major Aedes vectors of arboviruses: Advances and challenges. PLoS Negl Trop Dis. 13 (10), e0007615(2019).
Choumet, V., et al. Visualizing non infectious and infectious Anopheles gambiae blood feedings in naïve and saliva-immunized mice. PLoS ONE. 7 (12), e50464(2012).
Backus, E. A., Cervantes, F. A., Guedes, R. N. C., Li, A. Y., Wayadande, A. C. AC-DC electropenetrography for in-depth studies of feeding and oviposition behaviors. Ann Entomol Soc Am. 112 (3), 236-248 (2019).
Hol, F. J., Lambrechts, L., Prakash, M. BiteOscope, an open platform to study mosquito biting behavior. Elife. 9, e56829(2020).
Backus, E. A., Guedes, R. N., Reif, K. E. AC-DC electropenetrography: Fundamentals, controversies, and perspectives for arthropod pest management. Pest Manag Sci. 77 (3), 1132-1149 (2021).
Gordon, R. M., Lumsden, W. H. R. A study of the behavior of the mouthparts of mosquitoes when taking up blood from living tissue; together with some observations on the ingestion of microfilariae. Ann Trop Med Parasitol. 33, 259-278 (1939).
Janson, K. D., et al. Development of an automated biomaterial platform to study mosquito feeding behavior. Front Bioeng Biotechnol. 11, 1103748(2023).
Henriques-Santos, B. M., Xiong, C., Pietrantonio, P. V. Automated analysis of feeding behaviors of females of the mosquito Aedes aegypti using a modified flyPAD system. Sci Rep. 13, 20188(2023).
Kashin, P., Wakeley, H. G. An insect 'Bitometer. Nature. 208 (5009), 462-464 (1965).
Kashin, P. Electronic recording of the mosquito bite. J Insect Physiol. 12, 281-286 (1966).
Kashin, P. Development of an orally effective insect repellent. IIT Research Institute. , (1967).
Kashin, P., Arneson, B. E. An automated repellency assay system. II. a new electronic "Bitometer-timer.". J Econ Entomol. 62 (1), 200-205 (1969).
Shieh, J. -N. Salivation and engorgement parameters of sucking insect vectors: Implications in pathogen transmission. , Oregon State University. (1994).
Kimsey, R. B. Measuring and recording arthropod blood feeding. History, Development, and Applications of AC Electronic Insect Feeding Monitors. , Entomological Society of America. 122-128 (1994).
Backus, E. A., Devaney, M. J., Bennett, W. H. Comparison of signal processing circuits among seven AC electronic monitoring systems for their effects on the emf and R components of aphid (Homoptera: Aphididae) waveforms. Principles and Applications of Electronic Monitoring and Other Techniques in the Study of Homopteran Feeding Behavior. Walker, G. P., Backus, E. A. , Entomological Society of America: Lanham, MD. 102-143 (2000).
Backus, E. A., Bennett, W. H. The AC-DC correlation monitor: New EPG design with flexible input resistors to detect both R and emf components for any piercing-sucking hemipteran. J Insect Physiol. 55 (10), 869-884 (2009).
Backus, E. A., Cline, A. R., Ellerseick, M. R., Serrano, M. S. Lygus hesperus (Hemiptera: Miridae) feeding on cotton: New methods and parameters for analysis of nonsequential electrical penetration graph data. Annals of the Entomological Society of America. 100, 296-310 (2007).
Ebert, T. A., Backus, E. A., Cid, M., Fereres, A., Rogers, M. E. A new SAS program for behavioral analysis of electrical penetration graph data. Comput Electron Agr. 116, 80-87 (2015).
Wayadande, A. C., et al. Waveforms from stylet probing of the mosquito Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) measured by AC-DC electropenetrography. J Med Entomol. 57 (2), 353-368 (2020).
Cooper, A. M. W., et al. An electropenetrography waveform library for the probing and ingestion behaviors of Culex tarsalis on human hands. Insect Sci. 31 (4), 1165-1186 (2024).
Reif, K. E., Backus, E. A. AC-DC electropenetrography unmasks fine temporal details of feeding behaviors for two tick species on unsedated hosts. Sci Rep. 11 (1), 2040(2021).
Vaughan, L. D., et al. Electropenetrography as a tool to quantify probing and injection behaviors of mosquitoes (Aedes aegypti) in mice under biocontainment housing. Comp Med. 73 (6), 25(2023).
Backus, E. A., Shugart, H. Electropenetrography (EPG) Online Workshop. Hosted by L. Diepenbrock at the University of Florida. Institute of Food and Agricultural Sciences Extension. , https://ifas-crec-entomology.catalog.instructure.com/courses/epg-workshop-2022 (2022).
Dataq Instruments Inc. WinDaq recording and playback software. , (2024).
Backus, E. A. Our own jabberwocky: clarifying the terminology of certain piercing-sucking behaviors of homopterans. Principles and applications of electronic monitoring and other techniques in the study of homopteran feeding. Walker, G. P., Backus, E. A. , Entomological Society of America: Lanham, MD. 102-143 (2000).
Tjallingii, W. F. Comparison of AC and DC systems for electronic monitoring of stylet penetration activities by homopterans. Principles and Applications of Electronic Monitoring and Other Techniques in the Study of Homopteran Feeding Behavior. Walker, G. P., Backus, E. A. , Entomological Society of America. 41-69 (2000).
Mizrahi, J. Advances in Applied Electromyography. , IntechOpen. Rijeka, Croatia. (2011).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Sivrisinek Beslenme Davran Prob Davran Al m Davran Kanla Beslenme Elektriksel Sinyal Kayd Patojen letimi Alt n Tel Elektrot nsan Konak Etkile imi

Culex tarsalis sivrisineklerinin insan ellerinde sondalama ve yutma davranışlarının incelenmesi için AC-DC elektropenetrografi

Bu makalede

Özet

Özet

Giriş

Protokol

Sonuçlar

Tartışma

Açıklamalar

Teşekkürler

Malzemeler

Kaynaklar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler