Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması

2.8K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/67084

⸱

1 Kasım 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shenzhen Key Laboratory of Reproductive Immunology for Peri-implantation, Shenzhen Zhongshan Institute for Reproductive Medicine and Genetics, Shenzhen Zhongshan Obstetrics and Gynecology Hospital (formerly Shenzhen Zhongshan Urology Hospital), 2Guangdong Engineering Technology Research Center of Reproductive Immunology for Peri-Implantation, 3School of Biomedical Engineering, Shenzhen Campus of Sun Yat-sen University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu makale, fare rahmine 1-3 dakika içinde %95 etanol enjekte ederek çok düşük mortalite oranı ve minimal intrauterin adezyonlara sahip güvenilir ve tekrarlanabilir bir ince endometriyum üretmek için ayrıntılı bir protokolü açıklamaktadır.

Özet

İnce endometriyum (TE), infertilitenin kritik bir nedeni olarak yaygın olarak kabul edilmektedir. Bununla birlikte, TE'nin patogenezi belirsizliğini korumaktadır ve tatmin edici tedavi seçeneklerine hala acilen ihtiyaç duyulmaktadır. TE'nin çeşitli hayvan modelleri geliştirilmiştir, ancak abdominal cerrahi ve% 95 etanol enjeksiyonunu içeren fare modeli, yüksek mortalite oranı ve doğru şekilde yapılmadığı takdirde intrauterin yapışma riski nedeniyle zorlu bir zorluk teşkil etmektedir. Burada, fare uterusuna değişen infüzyon süreleri ile %95 etanol enjekte ederek çok düşük mortalite oranı ve minimal intrauterin yapışıklıklar ile güvenilir ve tekrarlanabilir TE üreten ayrıntılı bir protokol tarif ediyoruz. Sonuçlar, tüm farelerin, endometriyal kalınlıkta ve bez sayısında tipik bir azalmanın yanı sıra aşırı endometriyal fibroz ile karakterize edilen 1-3 dakika arasında değişen infüzyon süreleri ile başarılı bir şekilde TE'yi geliştirdiğini gösterdi. Bu bulgular, bu fare modelinin ince endometriyum çalışmak için uygun olduğunu ve gelecekteki TE tedavilerini geliştirmek için bir platform olarak hizmet edebileceğini göstermektedir.

Giriş

İnce endometriyum (TE), obstetrik ve jinekolojide sıklıkla doğurganlık çağındaki kadınları etkileyen ciddi bir durumdur. TE, endometriyum kalınlığı ultrason taramasında 7 mm'den az ölçüldüğünde, normal bir uterus boşluğu ile birlikte teşhis edilir ve gebelik başarısızlığı ile yakından ilişkilidir 1,2. İn vitro fertilizasyon (IVF) tedavisi gören kadınların yaklaşık %1,5-9,1'inin TE yaşayacağı tahmin edilmektedir ve bu da üreme tıbbında büyüyen bir zorluk haline gelmektedir 3,4,5. TE'nin en sık nedenleri arasında, intrauterin adezyonların (IUA) ve küretajın cerrahi olarak ayrılmasını takiben yanlış endometrium onarımı yer alır ve buna sıklıkla kan damarı dağılımında bozulma ve seyrek bezler eşlik eder 6,7,8. Bugüne kadar, TE'nin altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmalar belirsizliğini korumaktadır. TE hastalarında endometriyumun iyileşmesi zaman alıcıdır, ancak östrojen tedavisi ve düşük doz aspirin tedavisi potansiyel müdahaleler olarak araştırılmıştır9. Bu nedenle, TE patogenezinin derinlemesine incelenmesi, bu durumun zorluklarını ele almak için en doğrudan yaklaşımdır. Bununla birlikte, TE'nin patogenezi üzerine yapılan çalışmalar hayvan modellerine dayanmaktadır ve bu da uygun bir model seçimini çok önemli hale getirmektedir.

İnce endometrium (TE) ile ilgili histopatolojik çalışmaların çoğu, epitel hücrelerinin ve makrofajların proliferasyonunda bozulma, over steroid hormon reseptörlerinin ekspresyonunda azalma, ekstraselüler matriksin aşırı birikimi ve hücresel yaşlanmanın TE 6,9,10'un en önemli patolojik özellikleri olduğunu göstermiştir. Şu anda, 11,12,13, iskemi14, termal yaralanma15 ve kimyasal yaralanma 16,17,18,19 ile indüklenen modeller de dahil olmak üzere TE'yi taklit etmek için çeşitli sıçan modelleri geliştirilmiştir. Bir sıçan modeli, endometriyumun bir iğne veya kateter ile çizilmesiyle indüklenir, bu da genellikle TE 11,12,20,21,22 yerine intrauterin adezyonlar (IUA) ile sonuçlanır. Sıçanlarda iskemiye bağlı bir TE modeli de bildirilmiştir, burada endometriyal iskemi bilateral uterin arter ligasyonu yapılarak elde edilir ve bu da endometriyal kalınlığın azalmasına neden olur. Bununla birlikte, bu yöntem zaman alıcıdır, üç ay gerektirir ve araştırma için yaygın olarak kullanılmamaktadır14. Termal yaralanmanın neden olduğu modelde, 85 ° C'de önceden ısıtılmış suyu uterus boynuzunun bir tarafına iki tarafın birleşmesi yoluyla demlemek için bir suni tohumlama tüpü kullanılır, bu da onu diğer yöntemlerden daha karmaşık hale getirir15. Kimyasal kaynaklı model, tüm endometriyuma zarar vermek için açıkta kalan uterus boynuzuna% 95 etanol enjekte etmeyi içerir. Bu model, TE'deki patolojik mekanizmaları ve tedavileri incelemek için düşük maliyetli ve kısa bir deneysel sürenin avantajlarını sunar, ancak esas olarak farelerden ziyade sıçanlarda kullanılır 16,17,23. Çeşitli hayvan modelleri, özellikle sıçan modelleri mevcut olsa da, her birinin sınırlamaları vardır. TE'nin yalnızca belirli yönlerini simüle edebilirler ve az sayıda fare modeli, TE'nin hastalık özelliklerini yakından taklit ederken, aynı zamanda araştırma için uygun ve çok yönlüdür.

Bu bağlamda, modifiye edilmiş bir yöntem24 ile zaman gradyanı yaklaşımı kullanarak uterus boşluğuna %95 etanol infüze ederek yeni bir ince endometriyum (TE) fare modeli geliştirdik (Şekil 1). Sonuçlar, infüzyon süresi 1-3 dakika arasında değiştiğinde, tüm farelerin, azalmış endometriyal kalınlık, bez azalması ve artmış endometriyal fibroz gibi tipik özellikler göstererek, başarılı bir şekilde TE geliştirdiğini gösterdi. Bu bulgular, fare modelimizin TE'yi incelemek için uygun bir araç olduğunu ve gelecekteki TE tedavilerini geliştirmek için bir platform olarak hizmet edebileceğini göstermektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışma, tüm hayvan deneylerinin yapıldığı Shenzhen Zhongshan Kadın Hastalıkları ve Doğum Hastanesi (eski adıyla Shenzhen Zhongshan Üroloji Hastanesi) Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Bu çalışmada dişi C57BL / 6 fareler (yaş 6-8 hafta, ağırlık 18-20 g) kullanıldı. Tüm hayvanlar, aynı odada belirli bir patojen içermeyen (SPF) ortamda barındırıldı ve deneylerden önce bir hafta boyunca, 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsü altında (22 ± 1) ° C'de spesifik patojenler içermeyen bir odada iklimlendirildi. Onlara yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlandı. Bu çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanların detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Kızgınlığın tanımlanması

NOT: Farelerde kızgınlık fazı, insanlarda geç luteal faz ile karşılaştırılabilir ve şu anda nispeten kalın bir endometriyal astar vardır. Model indüksiyonu için kızgınlıkta farelerin seçilmesi, nispeten tutarlı bir fizyolojik durumda olmalarını sağlar. Ek olarak, endometriyal incelmenin sonuçları, endometriyal kalınlık nispeten kalın olduğunda daha belirgindir. Bu prosedürle ilgili ayrıntılar için daha önce yayınlanmış raporlarabakın 25,26.

  1. Bir pipet kullanarak 20 μL salin hazırlayın. Farenin kulaklarının her iki tarafını kavrayarak ve farenin kuyruğunu sabitleyerek, pipetin ucunu vajinal deliğe yaklaşık 2 mm derinliğe kadar nazikçe sokun. Vajinaya 20 μL salin damlatın ve 5 döngü boyunca nazikçe yıkayın.
  2. Tuzlu suyu geri çekin ve temiz bir slayta eşit şekilde aktarın. Oda sıcaklığında doğal olarak buharlaşmasına ve kurumasına izin verin.
  3. Hücreleri sabitlemek için her slayta 30 μL etanol uygulayın. Slayt kuruyana kadar etanolün 5 dakika buharlaşmasına izin verin.
  4. Her slayta 50 μL kristal viyole boyama solüsyonu uygulayın ve hücreleri oda sıcaklığında 10 dakika boyayın.
  5. Fazla boyayı çıkarmak ve spesifik olmayan lekelenmeyi azaltmak için her slaytı deiyonize suyla durulayın.
  6. Hücre morfolojisini gözlemleyin ve mikroskop altında hücre tiplerinin oranını belirleyin.
  7. Stabiliteyi sağlamak için farelerin kızgınlık döngülerini art arda iki kez gözlemleyin. Deney için üçüncü kızgınlıktaki fareleri seçin.
    NOT: Farelerde kızgınlık döngüsü tipik olarak 4-5 gün sürer ve dört aşamaya ayrılır: proöstrus, östrus, metessus ve diestrus. Proöstrus yaklaşık 24 saat sürer ve yuvarlak ila oval çekirdekli epitel hücreleri ile karakterizedir (Şekil 2A). Östrus 12 saat ile 48 saat arasında sürer ve ağırlıklı olarak annüklee keratinize epitel hücreleri ile karakterizedir (Şekil 2B). Metestrus 24 saate kadar sürer ve anükleasyonlu keratinize epitel hücreleri ve nötrofillerin bir karışımı ile karakterize edilir (Şekil 3C). Diestrus 48 saat ile 72 saat arasında sürer ve nötrofiller, çekirdekli epitel hücreleri ve birkaç anükleasyonlu keratinize hücrenin bir kombinasyonu ile karakterize edilir (Şekil 2D).

2. Grup tasarımı

NOT: % 95 etanol infüzyonunun çeşitli sürelerinin TE modelinin stabilitesi üzerindeki etkisini değerlendirmek için altı tedavi grubu oluşturulmuştur. Bir gruba, prosedürel etkiler için bir kontrol olarak hizmet etmek için etanol uygulaması yapılmadan sahte cerrahi uygulandı. Etanol ile indüklenen TE'li fareler, infüzyon süresine (grup başına n = 5) göre aşağıdaki gibi rastgele beş tedavi grubuna ayrıldı:

  1. 1 dakikalık grup: Rahim boşluğuna 1 dakika boyunca etanol enjekte edin.
  2. 2 dakikalık grup: Rahim boşluğuna 2 dakika boyunca etanol enjekte edin.
  3. 3 dakikalık grup: Rahim boşluğuna 3 dakika boyunca etanol enjekte edin.
  4. 4 dakikalık grup: Rahim boşluğuna 4 dakika boyunca etanol enjekte edin.
  5. 5- dk grubu: Rahim boşluğuna 5 dakika boyunca etanol enjekte edin.

3. Farelerde TE modelinin indüksiyonu

  1. Fareleri 3 dakika boyunca% 5 izofluran ve% 100 oksijen içeren bir anestezi makinesi kullanarak uyuşturun (kurumsal olarak onaylanmış bir protokolü izleyerek). Bir burun konisi kullanarak anesteziyi% 1 -% 3 izofluranda tutun. Anestezi sırasında kuruluğu önlemek için farelerin gözlerine veteriner merhemi sürün. İşlem boyunca solunum hızını bir ayak parmağı tutamıyla izleyin.
  2. Farelerin uzuvlarını sabitlemek için tıbbi bant kullanın ve onları elektronik bir battaniye ile önceden ısıtılmış ameliyat masasında sırtüstü pozisyonda tutun. Hava yolu tıkanıklığını önlemek için farelerin dilini hafifçe çekin.
    NOT: Ameliyat sırasında fareleri sıcak tutmak, bağışıklık fonksiyonunun ve kan dolaşımının korunmasına yardımcı olur ve pıhtılaşmayı önler. Ek olarak, farelerin dillerini dışarı çekmek, anestezi sırasında boğulmayı önlemek için temiz solunum yolları sağlar.
  3. Farelerin alt karın bölgesine 3 dakika boyunca hayvan tüy dökücü krem uygulayın. Saçları temiz mendillerle çıkarın. Alanı% 75 etanol ve iyodofor ile dezenfekte edin.
  4. Karında 1 cm'lik bir kesi yapın, üretral delikten 1 cm uzakta. Kesiyeri periton boşluğuna kadar uzatmak için steril makas ve forseps kullanın.
  5. Uterusu bulmak ve sağ uterus boynuzunu ortaya çıkarmak için bağırsakları steril forseps ile nazikçe kenara hareket ettirin. Rahim ağzının yakınındaki proksimal uca ve yumurtalığın yakınındaki distal uca hemostatik klempler uygulayın.
    NOT: Rahim boynuzunun her iki ucunun da kenetlenmesi, etanol enjeksiyonu sırasında sızıntı olmamasını sağlayarak rahim ağzı, vajina ve yumurtalığın zarar görmesini önler.
  6. İğne rahim boynuzunun yönüne paralel olacak şekilde 25 G'lik bir şırınga kullanarak rahim boşluğuna yaklaşık 50 μL% 95 etanol27 damlatın. İğneyi rahim boşluğuna 30 derecelik bir açıyla yerleştirin. Şırıngayı uygun şekilde 1 dakika, 2 dakika, 3 dakika, 4 dakika veya 5 dakika koruyun. Etanolü geri çekin ve kalan etanolü çıkarmak için uterus boşluğunu 5 kez steril tuzlu su ile yıkayın. Benzer şekilde, aynı prosedürleri izleyerek kontrol olarak sol uterus boynuzuna eşit miktarda steril salin damlatın.
    NOT: Şırınga iğnesinin rahim boynuzunun yönüne paralel olduğundan emin olun. İğneyi, tüm rahim boynuzunu geçmesini önlemek için çok dik bir açıyla sokmaktan kaçının. Kalıcı hasarı ve deneysel kararsızlığı önlemek için etanolü mümkün olduğunca tamamen geri çekin.
  7. Kelepçeleri çıkarın ve uterusu ve bağırsakları orijinal konumlarına geri getirin.
  8. Peritonu 5-0 emilebilir poliglikolid cerrahi sütürlerle dikin, ardından epidermisi 5-0 emilemeyen poliglikolid cerrahi sütürlerle dikin.
  9. Kesiği %75 etanol ve iyodofor ile dezenfekte edin ve ardından hayvanları kafeslerine geri koyun. Ameliyattan sonra, fare tamamen iyileşene ve normal şekilde hareket edebilene kadar farenin kalp atış hızının kademeli ve istikrarlı bir şekilde artıp artmadığını yakından gözlemleyin (Şekil 3A-H).
    NOT: Oral analjezik (içme suyunda 3.2 mg / mL asetaminofen) ameliyattan bir gün önce sağlandı ve çalışmanın geri kalanı boyunca devam etti.
  10. Fareleri her gün 9:00 ve 15:00'te gözlemleyin ve iyi durumda olduklarından emin olmak için insizyonu iyodofor ile dezenfekte edin.

4. Örnek toplama

  1. % 95 etanol tedavisinden 7 gün sonra (kurumsal olarak onaylanmış bir protokolü izleyerek) derin anestezi altındayken servikal omurga çıkığı ile farelere ötenazi yapın.
  2. Cerrahi makas kullanarak uterusu ortaya çıkarmak için dikişleri kesin.
  3. Cerrahi forseps kullanarak tüm uterusu dikkatlice ve yavaşça çıkarın. Uterusu çevredeki bağırsaklardan ayırın.
  4. Hemen her iki rahim boynuzunu da çıkarın ve her boynuzu 3-4 küçük parçaya bölün.
  5. Bir pipet kullanarak 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne 1 mL %4 paraformaldehit ekleyin. Fiksasyon için uterus dokusunu 24 saat boyunca% 4 paraformaldehit içinde koruyun.

5. Doku dehidrasyonu

NOT: Doku dehidrasyonu, otomatik bir doku işlemcisi kullanılarak gerçekleştirilir (bkz. Malzeme Tablosu).

  1. Formalinle sabitlenmiş numuneleri doku kasetlerine yerleştirin.
  2. Dokuyu aşağıdaki gibi kurutmak için doku kasetlerini bir dizi artan etanol konsantrasyonundan geçirin: 1 saat boyunca% 70 etanol, 1 saat% 85 etanol, iki kez% 95 etanol (her biri 1 saat) ve% 100 etanol iki kez (her biri 1 saat).
  3. Parafinin dokuya nüfuz etmesini sağlamak için etanolü %100 ksilen ile değiştirin (ilk daldırma için 135 dakika, sonraki her daldırma için iki kez 20 dakika).
  4. Doku kasetlerini 60-65 ° C'de (3 kez, her biri 140 dakika) bir inkübatörde parafine daldırın ve kasetleri gömülene kadar sıcak tutun.

6. Parafin gömme

NOT: Bu adımları modüler bir doku gömme merkezi kullanarak gerçekleştirin (bkz. Malzeme Tablosu).

  1. Bir balmumu kalıbını 55 ° C'ye ısıtılmış erimiş parafin mumu ile doldurun.
  2. Sızan segmentleri gömme kasetinden balmumu kalıbına hızlı bir şekilde aktarmak için ısıtılmış forseps kullanın ve her segmentin enine kesitinin kalıbın tabanına paralel durduğundan emin olun.
  3. Segmentler düzgün bir şekilde yerleştirildikten sonra, gömme kasetinin altını histoloji kalıbının üzerine yerleştirin.
  4. Parafinin katılaşmasını sağlamak için kalıbı doğrudan en az 20 dakika boyunca 4 °C'ye ayarlanmış bir soğutma plakasına yerleştirin.
  5. Balmumu katılaştıktan sonra, numuneyi kalıptan çıkarın ve etrafındaki fazla balmumu kesmek için bir parafin düzeltici kullanın.

7. Parafin bölümleme

  1. 42 °C'de bir su banyosu hazırlayın. Parafin bloklarını kesmeden önce soğumalarını ve kesilmelerini kolaylaştırmak için soğuk bir tabağa koyun.
  2. Parafine gömülü numuneyi, doku yüzeyi yukarı bakacak şekilde döner bir mikrotom üzerine sıkıştırın.
  3. İstenilen doku düzlemine ulaşılana kadar dokuyu kaplayan fazla parafini çıkarmak için bir seferde 20 μm kesit.
  4. Bir seferde 4 μm kesit kesin.
  5. Parafin kesitli şeridi 2 dakika boyunca 42 °C ılık su banyosuna aktarın.
  6. Su yüzeyinden kesitleri alın ve açtıktan sonra bir mikroskop lamına yerleştirin.
  7. Slaytları 60 °C'lik bir inkübatörde 30 dakika kurutun.

8. Hematoksilen ve eozin boyama

NOT: Hematoksilen ve Eozin boyama, otomatik bir slayt boyama makinesi kullanılarak gerçekleştirilir (bkz. Malzeme Tablosu).

  1. Boyama prosedürüne başlamadan önce tüm reaktifleri önceden hazırlayın.
  2. Slaytları sırasıyla 10 dakika, 5 dakika ve 3 dakika %100 ksilen içinde bekletin.
  3. Slaytları azalan bir etanol serisindeki deiyonize suda aşağıdaki gibi rehidre edin: %100 etanol, %95 etanol (iki kez) ve %80 etanol, her biri 2 dakika.
  4. Slaytları deiyonize suda durulayın.
  5. Slaytları hematoksilen solüsyonunda 10 dakika boyayın. Slaytları deiyonize suda 1 dakika veya su artık mor olmayana kadar durulayın.
  6. Slaytları her seferinde 3-5 saniye boyunca iki kez% 0.5 asit etanol farklılaştırma çözeltisine batırın. Slaytları deiyonize suda 1 dakika durulayın.
  7. Slaytları 1 dakika boyunca bir mavileştirme tamponuna (% 1 amonyak çözeltisi) yerleştirin. Slaytları deiyonize suda 1 dakika durulayın.
  8. Slaytları %80 etanol ile kurutun ve ardından 10 saniye boyunca bir eozin-Y çalışma solüsyonuna batırın.
  9. Slaytları %95 etanole aktarın ve her biri 10 saniye boyunca iki kez durulayın. Ardından, slaytları mutlak etanole aktarın ve her biri 10 saniye boyunca iki kez kurutun.
  10. Dokuyu temizlemek için slaytları her biri 2 dakika boyunca iki kez %100 ksilene batırın.
  11. Dokunun üzerine bir lamel yerleştirin ve doğal reçine ile kapatın.

9. Masson boyama

  1. Slaytları sırasıyla 10 dakika, 5 dakika ve 3 dakika boyunca %100 ksilen içinde bekleterek dokuyu deparafinize edin.
  2. Deparafinize ettikten sonra, slaytları azalan bir etanol serisinde deiyonize suda bekletin:% 100 etanol,% 95 etanol (iki kez) ve% 80 etanol, her biri 2 dakika.
  3. Slaytları deiyonize suda durulayın.
  4. Slaytları Weigert'in demir hematoksilen solüsyonunda 5 dakika boyayın, ardından slaytları 30 saniye boyunca deiyonize suda yıkayın.
  5. Slaytları 15 saniye boyunca% 1 hidroklorik asit alkol içinde inkübe ederek lekeli doku yapılarının renklerini ayırt edin.
  6. Slaytları deiyonize suda 30 saniye durulayın.
  7. Dokuyu 3-5 dakika boyunca bir Bluing Solüsyonunda inkübe edin.
  8. Slaytları deiyonize suda 30 saniye durulayın.
  9. Slaytları 5-10 dakika Ponceau-Acid Fuchsin Solüsyonuna yerleştirin.
    NOT: Zayıf asit çalışma çözeltisini hazırlamak için deiyonize su ve zayıf asit çözeltisini 2:1 oranında karıştırın.
  10. Slaytları zayıf asit çalışma solüsyonu ile 30 saniye durulayın.
  11. Fosfomolibdik asit çözeltisindeki dokuyu 1-2 dakika ayırt edin ve ardından bölümleri 30 saniye boyunca zayıf bir asit çalışma çözeltisi ile durulayın.
  12. Doku bölümlerini 1-2 dakika anilin mavisi solüsyonla boyayın.
  13. Doku bölümlerini 2-3 saniye boyunca% 95 etanol içinde hızlı bir şekilde kurutun, ardından her biri 5-10 saniye boyunca iki kez% 100 etanol ile kurutun. Slaytları ksilen içinde her biri 1-2 dakika boyunca iki kez temizleyin.
  14. Dokunun üzerine bir lamel yerleştirin ve doğal reçine ile kapatın.
  15. Fazla reçineyi boşaltın ve slaytların kurumasını bekleyin.

10. Görüntüleme ve analiz

  1. Bir slayt tarayıcı sistemi kullanarak bölümlerin görüntülerini yakalayın.
    NOT: Bölümlere genel bir bakış için 4x veya 10x hedef kullanın; Daha ayrıntılı görüntüler için 20x ila 100x objektif kullanın.
  2. HALO görüntü analiz platformunu kullanarak endometriyal kalınlık, bez sayısı ve doku fibrozunun derecesinin kantitatif analizini gerçekleştirin.
    NOT: Ortalama kalınlık, rastgele seçilen 5 görüş alanında uterus boşluğundan myometriuma olan dikey mesafenin ölçülmesiyle elde edilir.

11. İstatistiksel analizler

  1. SPSS sürüm 23.0'ı (SPSS Inc., Chicago, IL, ABD) kullanarak istatistiksel analizler yapın.
  2. Önce bir normal dağılım testi yaparak kontrol ve model grupları arasındaki deneysel farklılıkların istatistiksel anlamlılığını değerlendirin.
  3. Normalde ortalama ± SEM olarak dağıtılan verileri sunun.
  4. Tek yönlü ANOVA kullanarak farklı tedavi gruplarından gelen verileri analiz edin. Bonferroni yöntemini kullanarak her lokusta test edilen alellerin sayısının çoklu karşılaştırmaları için ayarlayın. <0.05 P değerini istatistiksel olarak anlamlı olarak düşünün.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

İnce endometriyumun (TE) temel özellikleri, artmış endometriyal fibroz ile birlikte azalmış endometriyal kalınlık ve glandüler yoğunluktur. Bu yöntem, bu özellikleri model farelerde başarıyla çoğalttı. Veri analizi, 1 dakikalık grupta (222.3 μm ± 13.96 μm'ye karşı 359.2 μm ± 12.41 μm, P < 0.05), 2 dakikalık grupta (168.7 μm ± 17.57 μm'ye karşı 359.2 μm ± 12.41 μm, P < 0.05) endometriyal kalınlıkta önemli bir azalma gösterdi±±. P < 0.05) kontrol grubu ile kar...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

TE, yetersiz hücre proliferasyonu ve işlevsiz hücreler ile karakterizedir, kısırlık, tekrarlayan düşük ve plasental anormallikler ile yakından bağlantılıdır 2,3. Ne yazık ki, şu anda TE için etkili bir tedavi yoktur. Hayvan modelleri bu durumun incelenmesinde çok önemli bir rol oynamaktadır. 2014 ve 2024 yılları arasında 208.000 çalışmanın %16,4'ünde (34.200 çalışma) sıçanlar ve %22,7'sinde (47.300 çalışma) fareler model organizm...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

İsimsiz hakemlere önemli ve yardımcı yorumları için minnetle teşekkür ederiz. Bu çalışma Shenzhen Bilim ve Teknoloji Projesi tarafından desteklenmiştir (No. JCYJ20220818103207016) ve Guangdong Temel ve Uygulamalı Temel Araştırma Vakfı (No. 2024A1515010478).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Anestezi MakinesiRWD Life ScienceR530Küçük hayvanlar için mobil inhalasyon anestezi makinesi
% 0.9 salinHubei Kelun İlaç & nbsp;C230817A210 mL, tıbbi enjeksiyon
%75 etanolLIRCON6303060031500 mL, dezenfektan reaktif
%95 etanolGuangzhou Kimyasal Reaktif Fabrikası64-17-5500 mL, kimyasal reaktif
Emilebilir sütürlerJinhuan MedicalCR537Kalınlık: 5-0; Uzunluk: 90 cm
Sulu amonyakMilliporeSigma1336-21-61000 mL, kimyasal reaktif
Otomatik Doku İşlemcisiLeicaTP1020100 gömme kutusu tek seferde işlenebilir
C57BL / 6 fare Güney Tıp Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi 
Eosin-YBASOBA40241000 mL, parafin bölümlerinin, donmuş bölümlerin vb. boyanması için kullanılır
HematoksilenBASOBA40411000 mL, parafin bölümlerinin, donmuş bölümlerin vb. boyanması için kullanılır
HALO Görüntü AnalizPlatformu Indica laboratuvarlarıCihaz, kullanım kolaylığı ve ölçeklenebilirlik, güçlü analitik yetenekler ve en hızlı işleme özelliklerine sahiptir hız
Hemostatik kelepçelerHUAYON18-50210,7 cm çene ile toplam uzunluk 1,8 cm
Hemostatik forsepsHUAYON18-502010 cm toplam uzunluk
HistoCore Döner MikrotomLeica149BIO000C1Dilim kalınlığı 1 ila 60 &mu arasında değişir; m
IndorphorADF1005500 mL, dezenfektan reaktif
İzofluranRWD Life ScienceR510-22-10100 mL, aktif bileşen %100 izofluran
Masson'un trikrom boyamaSOLARBIOG13407 & kez; 100 test için 100 mL
Mikroskop lamıGene TechGT100511Uzunluk: 75 cm; Genişlik: 25 cm
Modüler Doku Gömme MerkeziLeicaEG1150 CCihaz, gömme işi için esneklik sağlayan bir soğuk aşama ve ısıtılmış bir parafin dağıtım modülü içerir
Doğal reçineSAKURA4770Reçine kaplı film, Histoloji boyama için uygun
Olympus SLIDEVIEW VS200PANOVUEVS200Cihaz, yüksek kaliteli sanal slayt görüntüleri yakalar ve gelişmiş nicel görüntü analizine olanak tanır 
Paraformaldehit fiks çözeltisiServicebioG1011500 mL, üniversal doku fiksatif (nötr)
Cerrahi forsepsHUAYON18-13002,2 mm düz, 12,5 cm genişlik
Cerrahi makasHUAYON18-011010 cm, paslanmaz çelik cerrahi makas
ŞırıngaNazikçe600170311 mL, iğne Mendili ile tek kullanımlık steril şırınga
kasetlerCITOTEST80106-1100-16Beyaz; akış yuvaları; 0ne-parçalı entegre kapak; Etiketleme alanları üç tarafta bulunur
Doku-Tek Prisma PlusSAKURADRS-Prisma-P-JCSİşleme kapasitesi bir seferde 60 slayttır
KsilenGuangdong Guanghua Sci-Tech1330-20-71000 mL, organik çözücü

Kaynaklar

  1. Mahajan, N., Sharma, S. The endometrium in assisted reproductive technology: How thin is thin. J Hum Reprod Sci. 9 (1), 3-8 (2016).
  2. Liu, X., et al. Thin endometrium is associated with the risk of hypertensive disorders of pregnancy in fresh IVF/ICSI embryo transfer cycles: A retrospective cohort study of 9,266 singleton births. Reprod Biol Endocrinol. 19 (1), 55(2021).
  3. Liu, K. E., Hartman, M., Hartman, A. Management of thin endometrium in assisted reproduction: A clinical practice guideline from the Canadian Fertility and Andrology Society. Reprod Biomed Online. 39 (1), 49-62 (2019).
  4. Wang, Y., Tang, Z., Teng, X. New advances in the treatment of thin endometrium. Front Endocrinol (Lausanne). 15, 1269382(2024).
  5. Saad-Naguib, M. H., Kenfack, Y., Sherman, L. S., Chafitz, O. B., Morelli, S. S. Impaired receptivity of thin endometrium: Therapeutic potential of mesenchymal stem cells. Front Endocrinol (Lausanne). 14, 1268990(2023).
  6. Lv, H., et al. Deciphering the endometrial niche of human thin endometrium at single-cell resolution. Proc Natl Acad Sci U S A. 119 (8), e2115912119(2022).
  7. Gharibeh, N., et al. Cell-based therapy in thin endometrium and Asherman syndrome. Stem Cell Res Ther. 13 (1), 33(2022).
  8. Lei, L., et al. Angiogenic microspheres for the treatment of a thin endometrium. ACS Biomater Sci Eng. 7 (10), 4914-4920 (2021).
  9. Maekawa, R., et al. Thin endometrium transcriptome analysis reveals a potential mechanism of implantation failure. Reprod Med Biol. 16 (2), 206-227 (2017).
  10. Xu, L., Fan, Y., Wang, J., Shi, R. Dysfunctional intercellular communication and metabolic signaling pathways in thin endometrium. Front Physiol. 13, 1050690(2022).
  11. Hu, J., Song, K., Zhang, J., Zhang, Y., Tan, B. Z. Effects of menstrual blood-derived stem cells on endometrial injury repair. Mol Med Rep. 19 (2), 813-820 (2019).
  12. Kim, Y. Y., et al. Efficient production of murine uterine damage model. Tissue Eng Regen Med. 16 (2), 119-129 (2019).
  13. Chen, K., et al. A novel method to repair thin endometrium and restore fertility based on menstruation-derived stem cell. Reprod Sci. 31 (6), 1662-1673 (2024).
  14. Hu, J., Yuan, R. Decreased expression of C-kit and telomerase in a rat model of chronic endometrial ischemia. Med Sci Monit. 17 (4), Br103-Br109 (2011).
  15. Wang, G., Ren, C., Jiang, J. Effects of bone marrow mesenchymal stem cells on repair and receptivity of damaged endometrium in rats. J Obstet Gynaecol Res. 47 (9), 3223-3231 (2021).
  16. Lin, J., et al. Microenvironment-protected exosome-hydrogel for facilitating endometrial regeneration, fertility restoration, and live birth of offspring. Small. 17 (11), e2007235(2021).
  17. López-Martínez, S., et al. Bioengineered endometrial hydrogels with growth factors promote tissue regeneration and restore fertility in murine models. Acta Biomater. 135, 113-125 (2021).
  18. Haghighi, L., et al. Angiogenic lipid-based drug delivery system (phytosolve) for treatment of a thin endometrium in animal model. Tissue Cell. 90, 102481(2024).
  19. Saleem Raheem, S., Falah Hasan, H., Hashim Abid Ali, A., Mansour Jasim, A. Effectiveness of histopathological changes of induced thin layer endometrium by pentoxifylline and pentoxifylline-loaded poly lactic-co-glycolic acid on female rats. Arch Razi Inst. 78 (6), 1762-1770 (2023).
  20. Feng, Q., et al. Establishment of an animal model of intrauterine adhesions after surgical abortion and curettage in pregnant rats. Ann Transl Med. 8 (4), 56(2020).
  21. Bazoobandi, S., et al. Induction of Asherman's syndrome in rabbit. J Reprod Infertil. 17 (1), 10-16 (2016).
  22. Bai, X., et al. Therapeutic effect of human amniotic epithelial cells in rat models of intrauterine adhesions. Cell Transplant. 29, 963689720908495(2020).
  23. Liu, J., et al. The effects and mechanisms of GM-CSF on endometrial regeneration. Cytokine. 125, 154850(2020).
  24. Yan-Ping, L. Establishment and identification of rat thin endometrium model. Life Sci Res. , https://api.semanticscholar.org/CorpusID:88150888 (2011).
  25. Cora, M. C., Kooistra, L., Travlos, G. Vaginal cytology of the laboratory rat and mouse: Review and criteria for the staging of the estrous cycle using stained vaginal smears. Toxicol Pathol. 43 (6), 776-793 (2015).
  26. Quignon, C. Collection and analysis of vaginal smears to assess reproductive stage in mice. Curr Protoc. 3 (9), e887(2023).
  27. Yi, K. W., et al. marrow-derived cells or C-X-C motif chemokine 12 (CXCL12) treatment improve thin endometrium in a mouse model. Biol Reprod. 100 (1), 61-70 (2019).
  28. Nakada, Y., et al. Hypoxia induces heart regeneration in adult mice. Nature. 541 (7636), 222-227 (2017).
  29. Mylonas, K. J., et al. Cellular senescence inhibits renal regeneration after injury in mice, with senolytic treatment promoting repair. Sci Transl Med. 13 (594), eabb0203(2021).
  30. Mckellar, D. W., et al. Large-scale integration of single-cell transcriptomic data captures transitional progenitor states in mouse skeletal muscle regeneration. Commun Biol. 4 (1), 1280(2021).
  31. Elzat, E. Y., et al. Establishing a mouse contusion spinal cord injury model based on a minimally invasive technique. J Vis Exp. 187, e64538(2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Endometrial FibrozisUterin Korn EnjeksiyonuEtanol İnfüzyonuEndometrial KalınlıkUterin AdezyonHayvan CerrahisiParafin Gömmeİnfertilite Modeli
İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.