Yöntem makalesi

Eksozomların yüklenmesi ve teslimi için mikroiğne yamalarının üretimi ve karakterizasyonu

DOI:

10.3791/67109

⸱

12 Temmuz 2024

 ,  , 
1Medical School, Faculty of Medicine, Tianjin University, 2Hangzhou Institute of Medicine, Chinese Academy of Sciences

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Eksozomlar önemli klinik potansiyele sahiptir, ancak kolay in vivo klerens ve zayıf stabilite nedeniyle pratik uygulamaları sınırlıdır. Mikroiğneler, fizyolojik engelleri delerek ve kuru halde koruma sağlayarak lokalize uygulamayı mümkün kılarak, böylece eksozom uygulamasının sınırlamalarını ele alarak ve klinik faydalarını genişleterek bir çözüm sunar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ortaya çıkan "yeni nesil" biyoterapötikler ve ilaç dağıtım vektörleri olarak eksozomlar, ilaç dağıtımı ve rejeneratif tıptan hastalık teşhisi ve tümör immünoterapisine kadar çeşitli biyomedikal alanlarda muazzam bir potansiyele sahiptir. Bununla birlikte, geleneksel bolus enjeksiyonu ile hızlı klerens ve eksozomların zayıf stabilitesi, klinik uygulamalarını kısıtlamaktadır. Mikroiğneler, eksozomların uygulama bölgesinde kalma süresini uzatan, böylece ilaç konsantrasyonunu koruyan ve sürekli terapötik etkileri kolaylaştıran bir çözelti görevi görür. Ek olarak, mikroiğneler ayrıca biyoaktif maddelerin stabilitesini koruma yeteneğine de sahiptir. Bu nedenle, eksozomların yüklenmesi ve iletilmesi için bir mikroiğne yaması sunuyoruz ve eksozomların izolasyonu, eksozom yüklü mikroiğne yamalarının üretimi ve karakterizasyonu dahil olmak üzere yöntemleri paylaşıyoruz. Mikroiğne yamaları, uç malzemeleri olarak trehaloz ve hyaluronik asit ve destek malzemesi olarak polivinilpirolidon kullanılarak iki aşamalı bir döküm yöntemi ile üretildi. Mikroiğneler, insan derisini simüle etmek için 2 N. Domuz derisine dayanabilen uçlarla sağlam mekanik mukavemet gösterdi ve mikroiğnelerin uçları cilt delinmesinden sonra 60 saniye içinde tamamen eridi. Mikroiğnelerden salınan eksozomlar, morfoloji, partikül boyutu, işaretleyici proteinler ve taze eksozomlarınkiyle karşılaştırılabilir biyolojik işlevler sergiledi, bu da dendritik hücrelerin alımını sağladı ve olgunlaşmalarını teşvik etti.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücreler tarafından hücre dışı matrise salınan küçük veziküller olan eksozomlar, çeşitli hastalıkların ve kanserlerin tedavisi için potansiyel biyoterapötikler ve ilaç dağıtım vektörleri olarak önerilmiştir1. Biyogenez süreçleri sırasında eksozomlar, fonksiyonel proteinler ve nükleik asitler2 dahil olmak üzere hücrelerin içinden çeşitli biyolojik olarak aktif molekülleri kapsüller. Sonuç olarak, taşıma işlemi sırasında alıcı hücreler tarafından alındığında, eksozomlar hedef hücrelerde gen ekspresyonunu ve hücresel fonksiyonları modüle etme yeteneğine sahiptir3. Bir tür doğal bilgi habercisi olarak, eksozomlar doku yenilenmesinde, bağışıklık regülasyonunda ve bir dağıtım taşıyıcısı olarak tam olarak kullanılmıştır4. Mühendislik teknikleri sayesinde, eksozomların yüzeyinde spesifik ligandlar zenginleştirilebilir, bu da alıcı hücrelerde sinyal olaylarının indüksiyonunu veya inhibisyonunu mümkün kılarveya belirli hücre tiplerini hedefler5. Kemoterapötik ajanlar ayrıca kanser tedavisi için eksozomlara da yüklenebilir6. Ayrıca, eksozomlar, terapötik kargo teslimatı için kan-beyin bariyerini geçme yeteneğine sahiptir ve bu da onları beyin bozukluklarının tedavisi için oldukça umut verici hale getirir7. Lipozomlarla karşılaştırıldığında, eksozomlar gelişmiş hücresel alım ve gelişmiş biyouyumluluk sergiler8. Daha iyi tolerans ve daha düşük toksisite gösterirken diğer hücrelere verimli bir şekilde girebilirler9. Bununla birlikte, eksozomların geleneksel bolus enjeksiyonu, kan dolaşımındaki karaciğer, böbrekler ve dalak tarafından sekestrasyona ve hızlı temizlemeye eğilimlidir10. Ayrıca, eksozomlar in vitro olarak zayıf stabiliteye sahiptir ve klinik uygulamalarını kısıtlayan depolama koşullarına karşı hassastır11.

Bir dizi mikrometrik boyutlu iğne ucu olan mikroiğneler, küçük moleküllü ilaçların12, proteinlerin13, nükleik asitlerin14 ve nanoilaçların15 verilmesi için fizyolojik engellere nüfuz etme yeteneğine sahiptir. Mikroiğneler, cilt yüzeyindeki lezyonları hedeflemek için hassas bir şekilde tasarlanmıştır ve dağınık uçları, hedeflenen bölgede homojen ilaç dağılımı sağlar, böylece terapötik etkilerini artırır16. Mikroiğnelerin tasarımı ve malzeme bileşimi, proteinler ve nükleik asitler gibi biyoaktif maddelerin kuru depolanmasını kolaylaştırarak stabilitelerini arttırır17. Geleneksel enjeksiyon yöntemleri nispeten kısa bir etki süresine sahiptir ve ağrıya neden olarak hastalarda korkuya neden olabilir18. Mikrometre boyutundaki mikroiğne uzunluğu, doku travmasını en aza indirir ve sinir uyarımını önler, böylece ağrıyı ortadan kaldırır ve hasta uyumunu artırır19. Ek olarak, mikroiğnelerin kullanıcı dostu yapısı, hastaların uzman personele ihtiyaç duymadan tedaviyi kendi kendilerine uygulamalarına olanak tanır16. Mikroiğneler cildin yanı sıra gözler20, ağız mukozası21, kalp22 ve kan damarları23 gibi dokularda da kullanılabilir. Eksozomların klinik olarak verilmesi için mikroiğnelerin uygulanması umut verici ve ileriye dönük bir strateji sağlar.

Bu nedenle, eksozom yüklü bir mikroiğne (exo@MN) yaması tanıtıyoruz ve üretim yöntemini açıklıyoruz. Mikroiğne yamaları, mikroiğne uçlarında eksozomların toplanmasını teşvik eden ve böylece dağıtım verimliliğini artıran santrifüjleme ve vakumlu kurutma ile birlikte iki aşamalı bir döküm yöntemi kullanılarak üretildi. Hem iğne uçları hem de destek, mükemmel biyouyumluluk ve suda çözünürlük sergileyen malzemeler kullanılarak yapılmıştır. Eksozomlar için koruma sağlamak için trehaloz ve hyaluronik asit (HA) uç materyaller olarak dahil edildi ve destek materyali olarak mutlak etanol içinde çözünen polivinilpirolidon (PVP) seçildi. Mikroiğne yamasının morfolojisi, mikroskopi ve taramalı elektron mikroskobu (SEM) kullanılarak karakterize edildi. Mikroiğnenin mekanik testi, cilde nüfuz etme yeteneklerini doğrulamak için bir gerilme ölçer kullanılarak değerlendirildi ve domuz derisi üzerindeki salım hızının 60 s olduğu araştırıldı. Ayrıca, exo@MN'daki hem taze eksozomların hem de eksozomların morfolojisi, boyutu ve protein içeriği, transmisyon elektron mikroskobu (TEM), nanopartikül izleme analizi (NTA) ve western blotting (WB) kullanılarak karakterize edildi. Eksozomların dendritik hücreler (DC'ler) tarafından içselleştirilmesi, konfokal lazer tarama mikroskobu (CLSM) kullanılarak karakterize edildi ve DC'lerin olgunlaşması akış sitometrisi ile değerlendirildi. İki tür eksozomun morfolojik karakterizasyonu ve biyolojik işlevleri esasen tutarlıdır.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bölüm 3'te açıklanan deneyler için kullanılan domuz derisi, deney hayvanlarından elde edilmediği için piyasadan yenilebilir domuz kulakları olarak satın alındığından, bu çalışma etik izin gerektirmez.

1. Eksozomların izolasyonu

  1. Hücre kültürü
    1. fetal sığır serumu ve %1 penisilin-streptomisin solüsyonu (100×) içeren Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium (DMEM) kültür ortamında fare yumurtalık epitel kanseri hücreleri ID8'i yetiştirin (bkz. Malzeme Tablosu) 15 cm çapında Petri kaplarında.
    2. ID8 hücrelerini bir CO2 inkübatöründe ( Malzeme Tablosuna bakınız) 37 ° C'de ve% 5 CO2'de



Eksozom hazırlama süreci diyagramı; santrifüjleme, vakumlu kurutma, stabilizasyon için polimer ilavesi.

  1. <<<<

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, eksozomların izolasyonu, exo@MN yamanın üretimi ve karakterizasyonu için bir protokol sunuyoruz. Şekil 1 , exo@MN yamanın üretimi için süreç akış şemasını göstermektedir. Eksozomlar trehaloz ve HA ile karıştırıldı ve karışım daha sonra mikroiğne kalıbına eklendi ve santrifüjlendi. Bu işlem, eksozomların iğne uçlarında toplanmasını kolaylaştırarak hızlı salınımı teşvik etti. Kuruduktan sonra, PVP çözeltisi ilave edildi ve kalıbı tamamen doldurmak için santrifüjlendi. Tamamen kuruduktan sonra, exo@MN yamaları elde etmek için kalıp çıkarıldı. Mikroiğnelerin morfolojisi, Şekil 2'de gösterildiği gibi mikroskopi ve SEM kullanılarak karakterize edildi. exo@MN yamadaki uçlar, keskin ve sağlam iğne uçları ile 10 x 10 dizide düzenlenmiş konik bir şekil sergiledi. Mikroiğnenin ucu 2 N'luk bir kuvvete dayanabilir ve bu da cilt bariyerinden geçmesine izin verir. Ayrıca, domuz derisi, exo@MN yamaların uygulanmasını simüle etmek için insan derisi için bir vekil olarak kullanıldı. Yamalar, serbest bırakma süresini gözlemlemek için domuz derisine bastırıldı ve mikroiğne uçları 60 saniye içinde tamamen eridi. exo@MN yamalar DPBS'de çözüldü ve Şekil 3'te gösterildiği gibi karakterize edildi. TEM görüntüleri, eksozomların morfolojisi ile tutarlı olarak tipik fincan şeklindeki yapılara sahip vezikülleri yakaladı. exo@MN çözeltisinin NTA ile partikül boyutu dağılımı, partiküllerin ağırlıklı olarak 50-250 nm aralığında konsantre olduğunu ortaya koydu. Bununla birlikte, HA malzemesinin yapışkan özelliklerine atfedilebilecek ve eksozom agregasyonuna neden olabilecek bazı daha büyük parçacıklar da mevcuttu. exo@MN çözeltisindeki CD63/Alix proteinlerinin WB analizi, exo@MN'in eksozom proteinlerini kısmen tutma yeteneğine sahip olduğunu göstermiştir. exo@MN'dan salınan eksozomların biyolojik işlevselliği, eksozomların hücreler tarafından alımına ve taze eksozomlara kıyasla dendritik hücrelerin aktivasyonuna odaklanarak Şekil 4'te doğrulanmıştır. CLSM görüntüleri, exo@MN hem taze eksozomların hem de eksozomların DC'ler tarafından verimli bir şekilde alındığını doğruladı. Akış sitometrisinden elde edilen temsili görüntüler ve orantılı istatistikler, exo@MN'daki eksozomların, taze eksozomlara benzer şekilde DC'lerin aktivasyonunu destekleyen biyolojik işlevlere sahip olduğunu göstermektedir.

Mikroiğne üretim diyagramı, SEM görüntüsü, basınç-yer değiştirme grafiği, penetrasyon testi dizisi.
Şekil 2: exo@MN yamalarının karakterizasyonu. (A) exo@MN yamaların stereo mikroskop görüntüleri. Ölçek çubuğu = 400 μm. (B) exo@MN yamaların SEM görüntüsü. Ölçek çubuğu = 200 μm. (C) exo@MN yamanın yük ve yer değiştirme profilleri. (D) Domuz derisine farklı zamanlarda yerleştirilen exo@MN yamalarının mikroskobik görüntüleri. Ölçek çubuğu = 400 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Eksozomların elektron mikroskobu; boyut dağılım grafiği; Protein belirteçlerinin batı lekesi.
Şekil 3: exo@MN'da taze eksozomların ve eksozomların karakterizasyonu. (A) TEM ile eksozomların morfolojisi. Ölçek çubuğu = 100 nm. (B) NTA ile eksozomların parçacık boyutu dağılımı. (C) WB tarafından eksozomların CD63 ve Alix'i. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Eksozom mikroskobu ve akım sitometrisi sonuçları; hücre boyama, akış analizi, CD80 MHCII ekspresyonu.
Şekil 4: exo@MN'da taze eksozomların ve eksozomların biyolojik testi. (A) DC'ler tarafından alınan eksozomların CLSM görüntüleri. Ölçek çubuğu = 10 μm. (B) Akış sitometrisi ile DC'lerin aktivasyonunun temsili grafikleri. (C) CD11c + CD80 + MHCII + DC'lerin yüzdesinin ölçülmesi. Veriler ortalama ± SD (n = 3) olarak sunulur. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şu anda, eksozomları izole etmek için ana yöntemler arasında ultrasantrifüjleme, yoğunluk gradyanlı santrifüjleme, ultrafiltrasyon, çökeltme, immünoaffinite manyetik boncuklar ve mikroakışkanlar24 bulunmaktadır. Küçük iğne ucu boşluklarının neden olduğu mikro iğnelerin sınırlı yükleme kapasitesi nedeniyle, daha fazla yükleme yapmak için eksozom konsantrasyonunu artırmak gerekir. Bu nedenle, hücre kültürü süpernatantını konsantre etmek için ultrafiltrasyonu seçtik ve ardından eksozomları izole etmek için ultrasantrifüjleme kullandık. Eksozomların konsantrasyonu, mikroiğnelerin onlarca ila yüzlerce mikrogram eksozom ile yüklenebilmesi için az miktarda sıvı yeniden süspansiyon ile arttırıldı. Bununla birlikte, bu yöntem, izole edilmiş eksozom çözeltisinde önemli miktarda protein varlığı ile sonuçlanır. Ek olarak, santrifüjleme işlemi sırasında önemli bir eksozom kaybı meydana gelir. Günümüzde, eksozomların terapötik uygulamasının sınırlamalarından biri, eksozomları yüksek saflıkta ve büyük miktarlarda izole etmek için etkili yöntemlerin olmamasıdır. Eksozomların klinik potansiyeli giderek daha fazla araştırıldıkça, ekstraksiyonlarıyla ilgili zorlukları ele almak için gelecekte daha ileri tekniklerin geliştirilmesine ihtiyaç vardır.

Bu çalışmadaki anahtar teknoloji, eksozom bazlı mikroiğnelerin tasarımıdır. Eksozom israfını en aza indirmek ve daha güçlü terapötik etkiler elde etmek için, exo@MN yamaları üretmek için iki aşamalı bir döküm yöntemi benimsenmiştir. Trehaloz daha önce eksozomların25 liyofilize korunması için uygun bir malzeme olarak bildirilmişti, HA ise mükemmel biyouyumluluk, hidrofiliklik ve inflamasyon inhibisyonu ve cilt onarımının teşviki26 işlevler sergiliyor. Bu iki malzeme kullanılarak eksozom yüklü iğne uçlarının üretilmesi, eksozomların biyolojik aktivitesinin korunmasına yardımcı olarak cilt içinde hızlı çözünmelerine ve salınmalarına izin verir. Üstelik bu yaklaşım enfeksiyon riskini en aza indirir ve cildin hızlı bir şekilde iyileşmesine katkıda bulunur. Santrifüjleme ve vakumlu kurutma yoluyla, eksozomlar mikroiğnelerin uçlarında konsantre edildi. Etanol ve trehalozun uyumsuzluğu göz önüne alındığında, destek malzemesi olarak mutlak etanol içinde çözünmüş PVP seçildi. Bu katmanlı üretim yöntemi, eksozomların dağıtım verimliliğini etkili bir şekilde artırdı.

4 °C, 37 °C veya -80 °C'de depolanmış olsun, in vitro eksozomların zayıf stabilitesi, eksozom yapısında değişikliklere veya bozulmaya11 yol açabilir. Bu sorunu çözmek için, dondurarak kurutma gibi eksozomların depolama yöntemlerini araştıran birkaç çalışma yapılmıştır. Microneedle teknolojisi başka bir yeni strateji sunuyor. RT'de kurutma yaparak, mikroiğne teknolojisi eksozomların stabilitesini artırabilir ve diğer tedaviler olmadan doğrudan eksozom iletimi için kullanılabilir. Ayrıca, eksozomlar için ekstraksiyon işlemi karmaşıktır ve bozulmaya eğilimlidir, bu da büyük ölçekli uygulamaları zorlaştırır. Ekstrakte edilen eksozomların mikroiğne teknolojisi kullanılarak saklanması, ekstraksiyon adımlarını basitleştirmez, ancak gereken ekstraksiyon sayısını azaltır. Tek bir ekstraksiyon, uzun bir süre boyunca saklanabilen büyük miktarda exo@MN yama üretebilir. Her tedavi için aynı partiden eksozom mikroiğnelerinin kullanılması, farklı partiler arasındaki varyasyonların terapötik sonuçlar üzerindeki potansiyel etkisini en aza indirir, böylece eksozom nanoplatformunun tekrarlanabilirliğini ve güvenilirliğini artırır27. Bu, eksozomların klinik uygulaması için daha fazla olasılık sağlar.

Gelecekteki araştırmalarda, yükün hassas kontrolünü sağlayan ve iğne uçları arasındaki ilaç varyasyonlarını en aza indiren yöntemleri araştırmak faydalı olacaktır. Bu, süreç optimizasyonu, kalite kontrol önlemlerinin uygulanması ve ileri tekniklerin kullanılması yoluyla gerçekleştirilebilir. Bu hususların ele alınması, güvenilir ve tutarlı ilaç dağıtım sistemlerinin geliştirilmesine önemli ölçüde katkıda bulunacaktır.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

H. C., F.L.Q ve S.J.M, bu el yazmasındaki verilere dayanarak yapılan bir patent başvurusunun mucitleridir. HC, Medcraft Biotech'in bilimsel kurucusudur. Inc.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

FLQ, Zhejiang Öncü Ar-Ge Programı (2022C03031), Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı (2021YFA0910103), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (22274141, 22074080), Shandong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (ZR2022ZD28) ve Shandong Eyaleti Taishan Burs Programı (tsqn201909106) tarafından desteklenen desteği takdir etmektedir. HC, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'nın (82202329) mali desteğini kabul eder. Yazarlar, Çin Bilimler Akademisi, Hangzhou Tıp Enstitüsü'ndeki (HIM) Paylaşılan Enstrümantasyon Çekirdek Tesisinde cihazların kullanımını kabul etmektedir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
100x penisilin-streptomisin çözeltileriJrunbio ScientificMA0110Hücre kültürü
180 kDa önceden boyanmış protein işaretleyiciThermo26616Western blotting
% 3 Uranil asetatHenan Ruixin Deneysel MalzemelerGZ02625Eksozomların morfolojik karakterizasyonu
3D yazıcıBMF teknolojisinanoArch S130Kalıp Hazırlık
% 4 & ndash; % 20 prekast jelGenscriptExpressPlus PAGE GELWestern blotting
5 kez; SDS-PAGE yükleme tamponuTitan04048254Batı lekeleme
Anti-fare Alix antikoruBiolegend12422-1-APBatı lekeleme
Anti-fare CD63 antikoruBiolegendab217345Batı lekeleme
APC anti-fare CD80 antikoruBiolegend104713Antikoru
Otomatik ince kaplayıcıZIZHUJBA5-100Mikroiğne BCA test kitinin morfolojik karakterizasyonu
BeyotimeP0012Protein konsantrasyonu deneyi
SantrifüjThermo FisherMuitifuge X1R proHücre santrifüjü
Sirkülasyonlu su vakum pompasıYuhua InstrumentSHZ-D (III) Filtrasyon
CO2 inkübatörüEppendorfCellXpert C170Hücre kültürü
Konfokal lazer tarama mikroskobuNikonA1HD25Floresan görüntüleme
Bakır örgüPekin Zhongjingkeyi Teknolojisi JF-ZJKY/300Eksozomların morfolojik karakterizasyonu
D- (+) -Trehaloz dihidratAladdin5138-23-4Mikroiğne üretimi 
Dulbecco' s değiştirilmiş Kartal' s mediumMeilunbioMA0212Hücre kültürü
Dulbecco' s fosfat tamponlu salinMeilunbioMA0010Hücre kültürü
Elektroforez sistemiBio-radPowerPac-basicWestern blotting
Fetal sığır serumuJrunbio ScientificJR100Hücre kültürü
FITC anti-fare CD11c antikoruBiolegend117305Antikor
Akış sitometrisiBDLSR FortessaFloresan algılama
Jel görüntüleyiciCytivaAmersham ImageQuant 800Batı lekeleme
HRP konjuge anti-tavşan IgGCST7074SBatı kurutma
HTL reçineBMF teknolojisiKalıp hazırlama
Hyaluronik asit (MW = 300 kDa)Bloomage Biyoteknoloji9004-61-9Mikroiğne imalatı 
Daldırma yağıNikonMXA22168Floresan görüntüleme
İyon temizleyiciJEOLEC-52000ICEksozomların morfolojik karakterizasyonu
MikroskopOlympusCKX53Mikroiğne ucu çözünme sürecini gözlemleyin
Fare yumurtalık epitel kanseri hücresi ID8MeisenCTCC  CC90105Hücre kültürü
Nanopartikül izleme analiziParçacık MetrixZetaViewEksozomların boyut analizi
Pasifik Mavisi anti-fare I-A/I-E antikoruBiolegend107619Antikoru
Fenilmetansülfonil florürBeyotimeST507Proteaz inhibitörleri
Plazma temizleyiciHefei Kejing Malzeme TeknolojisiPDC-36GMikroiğne imalatı 
PolidimetilsiloksanDow Corning9016-00-6Kalıp hazırlama
Polivinilpirolidon (MW = 40 kDa)Aladdin9003-39-8Mikroiğne imalatı 
Prizma GraphPadSürüm 9İstatistiksel analiz
PVDF membranKırlangıçIPVH00010Western blotting
Hızlı çıtçıtlı santrifüjBeckman344619Eksozom ekstraksiyonu
RIPA lizis tamponuApplygenC1053Lizis membranı
Roswell park anıt enstitüsü 1640MeilunbioMA0548Hücre kültürü
Taramalı elektron mikroskobuJEOLJSM-IT800Mikroiğne Stereo mikroskobun morfolojik karakterizasyonu
OlympusSZX16Morfolojinin karakterizasyonu
Süper ECL algılama reaktifiApplygenP1030Western blotting
Çekme ölçerInstron68SC-05Mekanik test
Transmisyon elektron mikroskobuJEOLJEM-2100plusEksozomların morfolojik karakterizasyonu
Tris tamponlu salinSangon BiotechJF-A500027-0004Batı blotlama
Tween-20BeyotimeST825Western blotting
UltrasantrifüjBeckmanOptima XPN-100Eksozom ekstraksiyonu
Ultrafiltrasyon tüpüMilliporeUFC910096Eksozom konsantrasyonu
Vakumlu kurutma fırınıŞangay Yiheng TeknolojisiDZF-6024Mikroiğne
Vakum filtrasyon sistemiimalatı BiosharpBS-500-XTFiltrasyon

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Barile, L., Vassalli, G. Exosomes: Therapy delivery tools and biomarkers of diseases. Pharmacol Ther. 174, 63-78 (2017).
  2. Kalluri, R., Lebleu, V. S. The biology, function, and biomedical applications of exosomes. Science. 367 (640), 6977(2020).
  3. Mathieu, M., Martin-Jaular, L., Lavieu, G., Thery, C. Specificities of secretion and uptake of exosomes and other extracellular vesicles for cell-to-cell communication. Nat Cell Biol. 21 (1), 9-17 (2019).
  4. Nair, A., et al. Hybrid nanoparticle system integrating tumor-derived exosomes and poly(amidoamine) dendrimers: Implications for an effective gene delivery platform. Chem Mater. 35 (8), 3138-3150 (2023).
  5. Lu, Z., et al. Dendritic cell-derived exosomes elicit tumor regression in autochthonous hepatocellular carcinoma mouse models. J Hepatol. 67 (4), 739-748 (2017).
  6. Oskouie, M. N., Aghili Moghaddam, N. S., Butler, A. E., Zamani, P., Sahebkar, A. Therapeutic use of curcumin-encapsulated and curcumin-primed exosomes. J Cell Physiol. 234 (6), 8182-8191 (2019).
  7. Yuan, D., et al. Macrophage exosomes as natural nanocarriers for protein delivery to inflamed brain. Biomaterials. 142, 1-12 (2017).
  8. Liao, W., et al. Exosomes: The next generation of endogenous nanomaterials for advanced drug delivery and therapy. Acta Biomater. 86, 1-14 (2019).
  9. Zhu, X., et al. Comprehensive toxicity and immunogenicity studies reveal minimal effects in mice following sustained dosing of extracellular vesicles derived from hek293t cells. J Extracell Vesicles. 6 (1), 1324730(2017).
  10. Wen, S., et al. Biodistribution of mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles in a radiation injury bone marrow murine model. Int J Mol Sci. 20 (21), 5468-5482 (2019).
  11. Cheng, Y., Zeng, Q., Han, Q., Xia, W. Effect of pH, temperature and freezing-thawing on quantity changes and cellular uptake of exosomes. Protein Cell. 10 (4), 295-299 (2019).
  12. Jana, B. A., Shivhare, P., Srivastava, R. Gelatin-PVP dissolving microneedle-mediated therapy for controlled delivery of nifedipine for rapid antihypertension treatment. Hypertens Res. 47 (2), 427-434 (2024).
  13. Zheng, Y., et al. A rapidly dissolvable microneedle patch with tip-accumulated antigens for efficient transdermal vaccination. Macromol Biosci. 23 (12), e2300253(2023).
  14. Huang, D., et al. Efficient delivery of nucleic acid molecules into skin by combined use of microneedle roller and flexible interdigitated electroporation array. Theranostics. 8 (9), 2361-2376 (2018).
  15. Zhou, Z., et al. Reverse immune suppressive microenvironment in tumor draining lymph nodes to enhance anti-pd1 immunotherapy via nanovaccine complexed microneedle. Nano Res. 13 (6), 1509-1518 (2020).
  16. Kim, Y. C., Park, J. H., Prausnitz, M. R. Microneedles for drug and vaccine delivery. Adv Drug Deliv Rev. 64 (14), 1547-1568 (2012).
  17. Bui, V. D., et al. Dissolving microneedles for long-term storage and transdermal delivery of extracellular vesicles. Biomaterials. 287, 121644(2022).
  18. Nir, Y., Potasman, I., Sabo, E., Paz, A. Fear of injections in young adults: Prevalence and associations. Am J Trop Med Hyg. 68 (3), 341-344 (2003).
  19. Zhang, Y., Jiang, G., Yu, W., Liu, D., Xu, B. Microneedles fabricated from alginate and maltose for transdermal delivery of insulin on diabetic rats. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 85, 18-26 (2018).
  20. Roy, G., Garg, P., Venuganti, V. V. K. Microneedle scleral patch for minimally invasive delivery of triamcinolone to the posterior segment of eye. Int J Pharm. 612, 121305(2022).
  21. Creighton, R. L., Woodrow, K. A. Microneedle-mediated vaccine delivery to the oral mucosa. Adv Healthc Mater. 8 (4), 1801180(2019).
  22. Hu, S., Zhu, D., Li, Z., Cheng, K. Detachable microneedle patches deliver mesenchymal stromal cell factor-loaded nanoparticles for cardiac repair. ACS Nano. 16 (10), 15935-15945 (2022).
  23. Yang, W., Zheng, H., Lv, W., Zhu, Y. Current status and prospect of immunotherapy for colorectal cancer. Int J Colorectal Dis. 38 (1), 266-276 (2023).
  24. Zhang, M., et al. Methods and technologies for exosome isolation and characterization. Small Methods. 2 (9), 1800021(2018).
  25. Bosch, S., et al. Trehalose prevents aggregation of exosomes and cryodamage. Sci Rep. 6, 36162(2016).
  26. Bhattacharyya, M., Jariyal, H., Srivastava, A. Hyaluronic acid: More than a carrier, having an overpowering extracellular and intracellular impact on cancer. Carbohydr Polym. 317, 121081(2023).
  27. Chang, H., et al. Cryomicroneedles for transdermal cell delivery. Nat Biomed Eng. 5 (9), 1008-1018 (2021).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Ekzozom letimiEkzozom Stabilitesila letimiEkzozom zolasyonuHiyal ronik AsitTrehaloz Mikroi nelerPolivinilpirolidon DestekMekanik TestlerDendritik H cre Al m

İlgili makaleler