Sivrisineklerdeki mikrobiyal topluluklar, vektör biyokontrol stratejileri için büyük umut vaat ediyor. Simbiyontların çoğu yetiştirilemez ve metagenomik analizler gerektirir. Dişi sivrisinekleri incelemek ve yumurtalıkları, orta bağırsakları ve tükürük bezlerini ayırmak, çapraz kontaminasyonu önlemek, organ düzeyinde mikrobiyom çalışmalarını kolaylaştırmak ve mikroorganizmaların sivrisinek biyolojisindeki rollerinin anlaşılmasını geliştirmek için bir yöntem açıklıyoruz.
Yöntem makalesi
Organ Düzeyinde Mikrobiyom Analizleri için Sivrisinek Yumurtalıkları, Midgut ve Tükürük Bezlerinin Diseksiyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Sıtma, dang humması, Batı Nil, Zika, Usutu ve sarı humma dahil olmak üzere sivrisineklerle bulaşan hastalıkların küresel yükü artmaya devam ediyor ve önemli bir halk sağlığı tehdidi oluşturuyor. Böcek ilacı direncinin artması ve etkili aşıların bulunmamasıyla birlikte, sivrisinek mikrobiyotasına odaklanan yeni stratejiler ortaya çıkmaktadır. Bununla birlikte, simbiyontların çoğunluğu ekime dirençli kalır. Bu nedenle, sivrisinek örneklerinde bakteri genomlarının çeşitliliğini ve işlevini karakterize etmek, metagenomiklere ve müteakip birleştirme ve gruplama stratejilerine dayanır. Ayrılmış organlardan Metagenom Birleştirilmiş Genomların (MAG'ler) elde edilmesi ve analizi, özellikle yumurtalıklarda (üreme organları), orta bağırsakta (gıda sindirimi ve bağışıklığın anahtarı) veya tükürük bezlerinde (patojenlerin tükürüğe girmek ve kan dolaşımına ulaşmak için onları kolonize etmesi gerektiğinden, vektör kaynaklı hastalıkların bulaşması için gereklidir) spesifik rolü hakkında önemli bilgiler sağlayabilir. Bu yeni yeniden yapılandırılmış genomlar daha sonra yeni vektör biyokontrol stratejilerinin geliştirilmesinin önünü açabilir. Bu amaçla, sivrisinek organlarını izole etmek, aralarında veya diğer sivrisinek organlarında bulunan mikroorganizmalarla çapraz kontaminasyondan kaçınmak gerekir. Burada, sivrisinek mikrobiyomunu organ düzeyinde incelemek için optimize edilmiş ve kontaminasyon içermeyen bir diseksiyon protokolünü açıklıyoruz.
Giriş
Sivrisinekler çok çeşitli patojenleri yayar, hastalıklara neden olur ve halk sağlığı için ciddi bir tehdittir. Sivrisinek popülasyonları arasında insektisit direncinin artan prevalansı ve bu patojenlere karşı etkili aşıların bulunmaması nedeniyle, sivrisinek mikrobiyomuna odaklanan yeni biyokontrol yöntemleri ortaya çıkmaktadır. Özellikle, patojen iletimine müdahale edebilen ve konakçı üremesini manipüle edebilen hücre içi bakteri Wolbachia öne çıkıyor 1,2,3. Ek olarak, diğer sivrisinek simbiyotları, konakçılarının hayatta kalması, gelişimi veya bağışıklık sisteminin yanı sıra patojenlerin enfeksiyonu ve bulaşmasında merkezi öneme sahiptir ve vektör kaynaklı hastalıklarla savaşmak için sömürülmeleri için büyük umut vaat etmektedir 4,5,6,7,8.
Sivrisineklerle ilişkili mikroorganizmalar, konakçılarıyla ve aynı zamanda farklı vücut bölmelerinde birbirleriyle yakından etkileşime giren mikrobiyal yaşamın tüm alanlarını (bakteriler, ökaryotlar ve mantarlar dahil) kapsar 9,10. Bu nedenle, mikrobiyotanın, potansiyel mevsimsel değişiminin11 ve üyelerinin farklı sivrisinek dokularında doğrudan etkileşime girdiği mekanizmaların daha iyi anlaşılması, yeni hedefli biyokontrol yöntemlerinin geliştirilmesine veya mevcut yöntemlerin iyileştirilmesine yardımcı olabilir. Bununla birlikte, simbiyontların çoğunluğu ekime karşı dirençli kalır ve bu da karakterizasyonlarını imkansız hale getirir.
İkinci ve üçüncü nesil dizileme yöntemlerinin ortaya çıkışı, son teknoloji montaj ve gruplama yaklaşımlarıyla birlikte, mikrobiyal genomların yeniden yapılandırılmasını ve yetiştirilemeyen mikropların çeşitliliğine ve işlevsel potansiyeline erişilmesini sağlamıştır. Burada, dişi sivrisineklerin yumurtalıklarının, orta bağırsaklarının ve tükürük bezlerinin diseksiyonu için çapraz kontaminasyonu önlerken bir yöntem sunuyoruz. Bu protokolü, organ düzeyinde sivrisinek mikrobiyotasının çeşitliliğini ve işlevini keşfetmek için genomik DNA ekstraksiyonu ve müteakip metabarkodlama veya av tüfeği metagenomik dizileme takip edebilir. Culex spp. örnekleri için sivrisinek diseksiyonu ve mikrobiyom verilerine bir örnek sunuyoruz, ancak bu protokol Anopheles veya Aedes gibi diğer cinslerin vektörlerine genişletilebilir.
Protokol
NOT: Şekil 1 , protokolün farklı adımlarını özetleyen yöntemin bir şemasını göstermektedir.
1. Malzeme hazırlama
- Deneye başlamadan önce, ekipmanı ve tezgahı dezenfekte etmek için% 0,5 aktif klor (Dünya Sağlık Örgütü tarafından önerilen) içeren bir ağartma çözeltisi hazırlayın.
- 900 mL suda, her biri 1.5 g aktif klor içeren üç çözünür tableti çözün. Tabletlerin tamamen çözünmesi için 15 dakika bekleyin,% 0.5'lik bir ağartıcı çözeltisi elde edilir.
- % 0.5 çamaşır suyu çözeltisini bir sprey şişesine koyun. Ardından, solüsyonu mikroskobik slaytlar ve tezgah dahil olmak üzere tüm diseksiyon ekipmanına püskürtün.
NOT: Ekipman ve tezgah kullanmadan önce ~10 dakika kurumaya bırakılmalıdır.
- Numunelerin dış bakterilerle kontaminasyonunu önlemek için her diseksiyondan önce sivrisinekleri durulamak için, dört adet 1.5 mL yeni sterilize edilmiş tüp hazırlayın: ikisi %96 etanol ve diğer ikisi 1x PBS tamponu (fosfat tamponlu tuzlu su) içerir.
- Her sivrisineğin diseksiyonundan sonra numuneleri saklamak için tüpleri hazırlayın: her biri 100 μL koruma tamponu içeren dört adet 1,5 mL steril tüp.
NOT: Tükürük bezleri için bir tüp, yumurtalıklar için bir tüp, orta bağırsak için bir tüp ve sivrisinek karkası için bir tüp hazırlayın.
2. Sivrisinek toplama
- Yetişkin kadın bireyleri toplayın ve yüzey sterilizasyonuna kadar (tarladan veya laboratuvardan, 4-7 gün) canlı tutun.
3. Sivrisineklerin yüzey sterilizasyonu
NOT: Forsepsleri ve iğneleri temizleyin ve her organ ile birey arasında yeni, sterilize edilmiş tüpler kullanın. Çamaşır suyu mevcut değilse, biyolojik materyalin çapraz kontaminasyonunu önlemek için her bir bireyin ve organın diseksiyonu arasındaki diseksiyon forsepslerini ve iğneleri alevle sterilize ettiğinizden emin olun. Diseksiyon aletleri bir sonraki kullanımdan önce herhangi bir ağartıcı/etanol kalıntısı olmadan kuru olmalıdır.
- Dişilerin alkole maruz kaldıklarında bağırsak içeriğini boşaltmalarını önlemek için, onları buz üzerinde veya -20 °C'de bir dondurucuda (doku ve organların donmaması için 4 dakika) soğuk uyuşturun.
- Tek tek sivrisinekleri 1 mL% 96 etanol içeren yeni sterilize edilmiş 1.5 mL tüpe aktarın. 30 saniye boyunca nazikçe (manuel) girdap yapın (böceklerin yüzeyindeki pulları ve potansiyel bakteriyel kirleticileri ayırmak için sivrisinekleri tüpte iyice çalkalayın). Etanol içeren tüpler kullanarak iki kez durulayın.
- Sivrisinekleri 1 mL steril 1x PBS çözeltisi ile yeni bir sterilize edilmiş 1.5 mL tüpe aktarın ve 30 saniye boyunca nazikçe (manuel olarak) girdap yapın (etanol ile DNA çökelmesini önlemek için). Steril 1x PBS içeren tüpler kullanarak iki kez durulayın.
4. Sivrisineklerin diseksiyonu
- Sivrisineğin yerleştirilmesini ve disseke edilmiş organların durulanmasını kolaylaştırmak için slayta birkaç küçük damla steril 1x PBS yerleştirin.
NOT: Steril PBS damlaları, sivrisinek organlarını barındıracak kadar büyük olmalıdır. - Temizlenmiş sivrisineği alın ve mikroskop lamı üzerinde bir damla steril 1x PBS üzerine yerleştirin.
- Tükürük bezlerini sterilize edilmiş forseps ve aşağıda tarif edildiği gibi iğne ile inceleyin.
- Hareket etmesini önlemek için sivrisineğin göğsünü cımbızla tutun. Ardından, boynuna, başın altına bir iğne yerleştirin ve sivrisineğin kafasını göğüsten ayırmak için hafifçe çekin.
NOT: Tükürük bezleri üst göğüs kafesinde bulunur ve tükürük kanalı ile başa bağlanır. Diseksiyon sırasında göğüs kafesinden çektiğinizde tükürük bezleri kafa ile birlikte gelmeyeceği için bu kanalın kırılmaması çok önemlidir. Bu yüzden donmuş bir sivrisinek değil, taze bir sivrisinek olması önemlidir. - Baş göğüs kafesinden ayrıldığında, her biri üç lobdan oluşan iki tükürük bezinin ortaya çıktığını gözlemleyin. Tükürük bezlerini tükürük kanalı seviyesinde kesin, bir iğne ile alın ve durulamak ve organlar arası kontaminasyonları önlemek için yeni bir steril 1x PBS damlasına yerleştirin.
- Tükürük bezlerini bir iğne kullanarak alın ve 100 μL koruma tamponu içeren yeni bir sterilize tüpe yerleştirin.
- Hareket etmesini önlemek için sivrisineğin göğsünü cımbızla tutun. Ardından, boynuna, başın altına bir iğne yerleştirin ve sivrisineğin kafasını göğüsten ayırmak için hafifçe çekin.
- Yumurtalıkları sterilize edilmiş forseps ve iğne ile aşağıdaki gibi inceleyin.
- Sivrisineği sırt üstü yatırın. Diseksiyon sırasında hareketi önlemek için sivrisinekleri göğüs kafesinden tutmak için forseps kullanarak, üçüncü karın segmentini (alttan başlayarak) bir iğne ile delin.
NOT: İsteğe bağlı olarak, diseksiyonu kolaylaştırmak için sivrisineğin bacaklarını ve kanatlarını çıkarın. - Üçüncü karın segmentini delerken, açmak ve iç organları ortaya çıkarmak için karnı aşağı çekin. Organların serbest bırakılmasını kolaylaştırmak için kalan sivrisinek dış iskeleti parçalarını çıkarın.
NOT: Bağırsak, Malpighian tübülleri ve yumurtalıklar gibi karın içindeki organlar görülebilir. - Her iki yumurtalığı da sterilize edilmiş forseps ile alın ve durulamak için mikroskop lamı üzerinde yeni bir steril 1x PBS damlasına yerleştirin. Yumurtalıkları alın ve 100 μL koruma tamponu ile 1,5 mL tüpe yerleştirin.
- Sivrisineği sırt üstü yatırın. Diseksiyon sırasında hareketi önlemek için sivrisinekleri göğüs kafesinden tutmak için forseps kullanarak, üçüncü karın segmentini (alttan başlayarak) bir iğne ile delin.
- Artık karın açık olduğuna ve organlar açığa çıktığına göre, yeni sterilize edilmiş forseps ve / veya iğne ile orta bağırsağı alın.
- Orta bağırsağı ön bağırsaktan ve arka bağırsaktan ayırın; daha sonra Malpighian tübüllerini orta bağırsaktan çıkarın. Steril bir iğne kullanarak orta bağırsağı alın ve durulamak ve organlar arası kontaminasyonları önlemek için yeni bir steril 1x PBS damlasına yerleştirin.
- Yeni bir steril 1x PBS damlasına aktarın. Ek Dosya 1'de açıklandığı gibi bakterileri serbest bırakmak ve zenginleştirmek için orta bağırsağı forseps ile açın. Orta bağırsağı forseps ile tutun ve tüm materyali (sıvı ve doku) 100 μL koruma tamponu ile yeni bir sterilize edilmiş 1,5 mL tüpte saklamak için bakteri içeren tüm PBS'yi pipetleyin.
- Mikroskop lamında daha önce kullanılan yere tekrar 5 μL 1x PBS ekleyin ve mikroskop lamına yapışmış olabilecek bakterileri almak için PBS'yi doğrudan aynı 1.5 mL'lik tüpe geri pipetleyin.
- Karkası (kalan gövde) kavramak için steril forseps kullanın ve 100 μL koruma tamponu ile yeni bir sterilize edilmiş 1,5 mL tüpte saklayın.
- Malzemenin daha sonraki işlemlere kadar depolanması
- Tüpleri 'Tür, Organ, Tarih, Araştırmacının adı' ile etiketleyin.
- Disseke edilmiş yumurtalıkları, orta bağırsakları, tükürük bezlerini ve karkası işlenene kadar -20 °C'de saklayın.
- Türler (veya yalnızca cins düzeyi), Toplama tarihi, Ülke, İl, Enlem, Boylam, Diseksiyonu yapan kişinin adı, Gravid dişi olup olmadığı, Kan unu veya değil.
Sonuçlar
x'Sivrisinek diseksiyonları
Protokolü takiben, bir laboratuvar kolonisinden iki Culex pipiens molestus örneğinden (bir gravid dişi dahil) yumurtalıkları, orta bağırsakları, tükürük bezlerini ve karkası topladık ve izole ettik. Dürbün altında kalıntı kalmayan tüm (yani kırılmamış) ve iyi izole edilmiş organların gözlemini takiben temiz diseksiyonları doğruladık. Bir Culex pipiens molestus örneğinin tüm vücudu, başı ve göğüsleri, disseke tükürük bezleri, yumurtalıkları ve orta bağırsağı Şekil 2'de gösterilmiştir. Beklendiği gibi, orta bağırsak ve tükürük bezleri, sivrisinek yumurtalıklarından daha küçük bir büyüklük sırasıydı. Bir gravid Culex örneğinin yumurtaları, orta bağırsağı ve Malpighian tübülleri ile birlikte Şekil 3'te sunulmuştur. Materyal taze olmadığında ve dokunun kırılma olasılığı yüksek olduğunda diseksiyonların başarısız olmaya daha yatkın olduğu unutulmamalıdır (Şekil 4B, C). Bu nedenle, dokular hala elastik olduğundan, mümkün olduğunda materyalin toplandıktan hemen sonra (12 saatten daha kısa bir süre içinde) diseksiyonunu öneriyoruz (Şekil 4A). Benzer şekilde, donmuş materyalin diseksiyonu yapılabilir, ancak kırılgan dokular nedeniyle başarısızlık ve organlar arasında çapraz kontaminasyon riski çok daha yüksektir (Şekil 4).
Mikrobiyom verileri
Ek olarak, aynı prosedürü izleyerek Noumea, Yeni Kaledonya'dan üç ayrı Culex quinquefasciatus örneğinden orta bağırsakları ve yumurtalıkları topladık ve ayırdık. Her organdan DNA çıkardık, tüm genom dizilimi için örnekler hazırladık ve Ek Dosya 1'de ayrıntılı olarak açıklandığı gibi mikrobiyom veri analizleri gerçekleştirdik. PhyloFlash12 kullanılarak birleştirilmemiş kalite filtreli kısa okumalar üzerinde yapılan bir bakteri taksonomik çeşitlilik analizi, yumurtalıklara kıyasla orta bağırsaklarda belirgin baskın taksonlar gösterdi (Şekil 5A). Özellikle, yumurtalık bakteri topluluklarına Wolbachia hakimdi, bireysel 3'ün yumurtalıklarında ek bir Spirochaetaceae filotipi bulunurken, orta bağırsak toplulukları Gammaproteobacteria, Spirochaetaceae
Tartışma
Tükürük bezlerinden başlayarak organ diseksiyonu sırasına özellikle dikkat etmenizi öneririz. Gerçekten de, sivrisineğin bütünlüğü korunduğu takdirde Culex örneklerinin göğüs kafesinden daha kolay çıkarıldıklarını gözlemledik. Karın veya göğüs kafesinin hasar görmesi, sivrisineğin vücudundaki basıncı azaltarak prosedürü engelleyebilir. Bununla birlikte, göğüs kafesi ile karın arasında kesi yapmak ve daha sonra tükürük bezlerini baş ve göğüs kafesinden çıkarmak da mümkündür (A. B. Failloux, kişisel iletişim). Ek olarak, yetkin diseksiyon becerileri edinmek zor olabilir, bu nedenle deneyden önce yeterli sayıda örnek üzerinde pratik yapmanızı öneririz.
Sistematik bir şekilde çapraz kontaminasyondan kaçınırken sivrisinek organlarını izole etmek, çok çeşitli aşağı havza sivrisinek mikrobiyota analizleri için çok önemlidir. Güney Fransa'daki Culex pipiens örneklerinden tek yumurtalıkların diseksiyonunu takiben genomla çözülmüş bir metagenomik çalışma, Culex pipiens'te Wolbachia'nın ilk plazmidinin keşfedilmesine izin verdi (pWCP14). Benzer bir yaklaşım kullanarak, çeşitli çevresel ve laboratuvar koşullarında dünya çapında hem kıta hem de ada bölgelerinden Culex pipiens ve Culex quinquefasciatus örneklerinde pWCP'nin dağılımını ve sıklığını araştırdık. Genel olarak, veriler Culex sivrisineklerinde dikkate değer ölçüde korunmuş bir Wolbachia plazmit elementini ortaya çıkardı ve bu da endosimbiyont biyolojisinde bu hareketli element için çok önemli bir rol oynadığını düşündürüyor15 ve daha fazla analiz gerektiriyor.
Burada, bu sistematik prosedür kullanılarak elde edilen orta bağırsak ve yumurtalık örnekleri üzerinde sivrisinek mikrobiyom analizlerinin ek örneklerini sunuyoruz. Dokular arasında mikrobiyotada belirgin bir fark gözlemledik (Şekil 5), hem paylaşılan hem de organa özgü bakteri taksonları ile. Beklendiği gibi, Wolbachia'nın varlığı her iki organda da tespit edildi, daha yüksek nispi bolluk (birleştirilmemiş kısa okumalara dayanarak) ve sivrisinek yumurtalıklarında orta bağırsaklara kıyasla MAG'lerin ortalama kapsamı, bu endosimbiyotun yumurtalıklar yoluyla iletildiği ve daha sonra somatik dokulara yayıldığı gözlemiyle tutarlı olarak. Bu çalışma Yeni Kaledonya'dan alınan örneklerle sınırlı olmasına rağmen, bu protokol Wolbachia'nın genomik değişkenliğinin küresel ölçekte araştırılmasını ve kendisinin yoğunluk regülasyonu ve viral koruma dahil olmak üzere çeşitli fenotiplerdeki rolünü kolaylaştırabilir. Ayrıca, bu çalışma, burada sunulan diseksiyon prosedürünün, orta bağırsak örneklerinde sivrisinek simbiyontlarının taksonomik çeşitliliğinin ve potansiyel fonksiyonel yeteneklerinin incelenmesine nasıl izin verdiğini örneklemektedir.
Sadece iki orta bağırsak örneğinde bulunan iki enterobakteriyel taslak genomu elde ettik ve bu iki örnek için organlar arasında kontaminasyon olmadığını doğruladık. 3. bireyin hem bağırsaklarında hem de yumurtalıklarında tespit edilen spiroketlerle ilgili olarak, Juma ve meslektaşları, 2020 yılında bu bakterilerin yumurta sallarının yüzeyinde varlığını gözlemledi. Yazarlar, yumurta sallarında bulunan bakteri topluluklarının, yumurta sallarının deiyonize ve bakteri içermeyen suda tutulduğu göz önüne alındığında, öncelikle yumurtalıklardan maternal olarak kalıtsal olabileceğini öne sürdüler. Bununla birlikte, yumurtlamadan hemen sonra meydana gelen bakteri kolonizasyonu olasılığını göz ardı edemediler ve yumurtalık mikrobiyomu16 üzerinde daha fazla çalışma yapılmasını önerdiler.
Başlangıçta Culex pipiens tür kompleksinin örnekleri için tasarlanmış olsa da, bu protokolün Anopheles veya Aedes gibi diğer vektörleri inceleyen daha geniş bir tıbbi entomolog topluluğuna uygulanabilirliğini öngörüyoruz. Bu yöntem, bireysel organlar düzeyinde çalışarak, vektör kontrol stratejilerini ilerletme potansiyeli ile birlikte, simbiyont genomik değişkenliği hakkında ince bir ölçekte içgörüler sunarak hem birey içi hem de bireyler arası genomik karşılaştırmaları mümkün kılabilir. Tükürük bezlerinin, yumurtalıkların ve orta bağırsağın mikrobiyal çapraz kontaminasyonu önleyen bu diseksiyon ve izolasyon yöntemi, bu üç organdaki viral enfeksiyon dinamiği çalışmaları için de yararlı bir protokol olabilir.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Jordan Tutagata'ya sivrisineklerden tükürük bezlerini nasıl ayıracağını öğrettiği için Gilbert Legoff'a ve sivrisinek organlarının fotoğraflarına yardımcı olduğu için Giuliano Mucci'ye teşekkür ederiz. Protokol hakkındaki yararlı tartışmaları için Anna-Bella Failloux ve Nonito Pages'e teşekkür ederiz. Bu çalışma, JR'ye ERC RosaLind Başlangıç Hibesi "948135" tarafından desteklenmiştir. Teknik destek sağladığı ve sivrisinek popülasyonlarının yetiştirilmesi ve bakımı için Vectopole platformuna (IRD, Montpellier) teşekkür ederiz.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Alkol 96 derece; | Fisher bilimsel | 10332562 | |
| Binoküler büyüteç | |||
| Bleach | RAJA | 145517 | 150 tablet 1.5 g |
| DNA hazırlık kiti | Illumina | MGX dizileme platformu tarafından sağlanmıştır | Daha önce Nextera DNA Flex |
| DNA-RNA Kalkanı (50 mL) | araştırması | ZR1100-50 | Koruma tamponu |
| DNeasy Kan ve Doku Kiti | Qiagen | 69504 | DNA ekstraksiyon kiti |
| Filtre uçları 20 ve mikro; L | Starlab | S1120-3810 | |
| Filtre uçları 200 ve mikro; L | Starlab | S1120-8710 | |
| Filtre uçları 1000 & L | Starlab | S1122-1730-C | |
| Forseps | FST (Güzel Bilim Araçları) | 11252-20 | Dumont Forseps #5 |
| Kütüphane niceleme kiti | Roche | MGX sıralama platformu | KAPA tarafından sağlanan Kütüphane Niceliklendirme Kitleri |
| Mikropipetler 2-20 ve mikro; L | Eppendorf | 6.291704 | |
| Mikropipetler 20-200 & mikro; L | Eppendorf | 6.291703 | |
| Mikropipetler 100-1000 & mikro; L | Eppendorf | 7.648488 | |
| Mikroskop slaytları | Epredia | J1800BMNZ | boyutu: 75 mm x 50 mm |
| İğneler | Terumo | AN*2719R1 | |
| NGS kiti | Agilent | MGX dizileme platformu tarafından sağlanmıştır | Fragman Analiz Sistemleri HS Genomik DNA 50kb Kiti |
| NovaSeq 6000 | Illumina | MGX dizileme platformu tarafından sağlanmıştır | Sıralayıcı |
| PBS Fosfat Tamponlu Salin (Steril) | Fisher scientific | 10212990 | |
| Kalıcı siyah işaretleyici | |||
| Steril Eppendorf | Dutscher | 33871 | 1.5 mL |
| İğne desteği | FST (Güzel Bilim Araçları) | 26016-12 | Moria MC1 Pim Tutucu 12 cm |
Kaynaklar
- Achee, N. L., et al. Alternative strategies for mosquito-borne arbovirus control. PLOS Negl Trop Dis. 13 (1), e0006822(2019).
- Hoffmann, A. A., et al. Successful establishment of Wolbachia in Aedes populations to suppress dengue transmission. Nature. 476 (7361), 454-457 (2011).
- Porter, J., Sullivan, W. The cellular lives of Wolbachia. Nat Rev Microbiol. 21 (11), 750-766 (2023).
- Coon, K. L., Brown, M. R., Strand, M. R. Mosquitoes host communities of bacteria that are essential for development but vary greatly between local habitats. Mol Ecol. 25 (22), 5806-5826 (2016).
- Didion, E. M., et al. Microbiome reduction prevents lipid accumulation during early diapause in the northern house mosquito, Culex pipiens pipiens. J Insect Physiol. 134, 104295(2021).
- Gabrieli, P., et al. Mosquito trilogy: Microbiota, immunity and pathogens, and their implications for the control of disease transmission. Front Microbiol. 12, 630438(2021).
- Garrigós, M., Garrido, M., Panisse, G., Veiga, J., Martínez-de La Puente, J. Interactions between West Nile Virus and the microbiota of Culex pipiens vectors: A literature review. Pathogens. 12 (11), 1287(2023).
- Zheng, R., et al. Holobiont perspectives on tripartite interactions among microbiota, mosquitoes, and pathogens. ISME J. 17 (8), 1143-1152 (2023).
- Flores, G. A. M., et al. Wolbachia dominance influences the Culex quinquefasciatus microbiota. Sci Rep. 13 (1), 18980(2023).
- Hegde, S., et al. Interkingdom interactions shape the fungal microbiome of mosquitoes. Anim Microbiome. 6 (1), 11(2024).
- Suo, P., et al. Seasonal variation of midgut bacterial diversity in Culex quinquefasciatus populations in Haikou city, Hainan province, China. Biology. 11 (8), 1166(2022).
- Gruber-Vodicka, H. R., Seah, B. K. B., Pruesse, E. phyloFlash: Rapid small-subunit rRNA profiling and targeted assembly from metagenomes. mSystems. 5 (5), e00920-e00920 (2020).
- Graña-Miraglia, L., et al. Spirochetes isolated from arthropods constitute a novel genus Entomospira genus novum within the order Spirochaetales. Sci Rep. 10 (1), 17053(2020).
- Reveillaud, J., et al. The Wolbachia mobilome in Culex pipiens includes a putative plasmid. Nat Commun. 10 (1), 1051(2019).
- Ghousein, A., et al. pWCP is a widely distributed and highly conserved Wolbachia plasmid in Culex pipiens and Culex quinquefasciatus mosquitoes worldwide. ISME Commun. 3 (1), 40(2023).
- Juma, E. O., Kim, C. -H., Dunlap, C., Allan, B. F., Stone, C. M. Culex pipiens and Culex restuans egg rafts harbor diverse bacterial communities compared to their midgut tissues. Parasit Vectors. 13 (1), 532(2020).
- Lee, M. D. GToTree: a user-friendly workflow for phylogenomics. Bioinformatics. 35 (20), 4162-4164 (2019).
- Parks, D. H., et al. A complete domain-to-species taxonomy for bacteria and Archaea. Nat Biotechnology. 38 (9), 1079-1086 (2020).
Yeniden basım ve izinler
