Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Mekanotransdüksiyon Odaklı, İnsan Benzeri Hipertrofik Yara İzinin Bir Fare Modeli

3.1K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/67156

⸱

29 Kasım 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, University of Arizona, 2Department of Biomedical Engineering, University of Arizona

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, insan benzeri yara izini simüle etmek için mekanotransdüksiyon sinyalini artıran bir hipertrofik yara izi oluşturan murin modelinin nasıl oluşturulacağını açıklayacaktır. Bu yöntem, bir farede iyileşen bir kesi boyunca mekanik gerilimi artırmayı ve ayrıntılı histolojik ve biyoinformatik analizler için tekrarlanabilir, aşırı skar dokusu oluşturmak için özel bir cihaz kullanmayı içerir.

Özet

Hipertrofik skar (HTS), aşırı skar dokusu oluşumu ile sonuçlanan anormal bir yara iyileşmesi sürecidir. Son on yılda, mekanik uyaranların hücresel tepkilere dönüştürülmesi olan mekanotransdüksiyonun aşırı fibrotik yara iyileşmesine neden olduğunu gösterdik. İnsan benzeri hipertrofik yara izini değerlendirmek için bir fare modeli, çeşitli terapötikleri ve bunların yara izini azaltma ve iyileşmeyi iyileştirme yeteneklerini incelemek için önemli bir araç olacaktır. Spesifik olarak, laboratuvarımız insan benzeri HTS'yi teşvik etmek için mekanik gerilimi artıran bir murin yara modeli geliştirmiştir. Bu protokol, iyileşme sırasında yara yatağı boyunca sürekli gerginlik uygulamak için kolları insizyonun her iki tarafına yerleştirilen ve kademeli olarak birbirinden uzaklaştırılan modifiye edilmiş 13 mm damak genişleticilerden yapılmış biyomekanik yükleme cihazlarını kullanır. Yaklaşık yirmi yılı aşkın bir süredir kullanımda, bu model etkinliği ve tekrarlanabilirliği artırmak için önemli ölçüde geliştirilmiştir. Murin HTS modeli kullanılarak, önemli dermal fibrotik skarların histolojik olarak insan hipertrofik skarlarıyla karşılaştırılabilir olması indüklenebilir. Bu fare modeli, HTS'nin tedavisinde yer alan biyolojikler ve yabancı cisim yanıtı gibi mekanotransdüksiyonla ilgili durumların geliştirilmesi için bir ortam sağlar.

Giriş

Vücudun hasarlı dokuyu onarmaya ve cilt bariyerini yeniden inşa etmeye çalıştığı süreç olan yara iyileşmesi, hemostaz, iltihaplanma, proliferasyon ve yeniden şekillenme süreçleri düzensiz ise atipik iyileşme ile sonuçlanabilir1. Hipertrofik skar (HTS), yaralanma bölgesinde hücre dışı matriks ve bağ dokusunun aşırı birikmesi ile karakterize edilen ve genişlemiş bir skar dokusu alanıoluşumu ile karakterize düzensiz yara iyileşmesinin bir örneğidir 1,2,3. Eklemlerin etrafı veya yüz gibi tekrarlanan mekanik gerilme stimülasyonlarına maruz kalan vücut bölgeleri, HTS ve fibrozgeliştirmeye daha yatkındır 4,5,6,7,8,9,10. Biz ve diğerleri, bir yara yatağı boyunca mekanik gerilmenin, mekanik uyaranların hücresel tepkilere dönüştürülmesiolan mekanotransdüksiyon yollarının aktivasyonu yoluyla HTS oluşumunu desteklediğini gösterdik 9,11.

HTS sadece karmaşık biyolojik süreçleri içermekle kalmaz, aynı zamanda etkilenen insanlar için önemli sosyal, tıbbi ve ekonomik zorluklar da taşır. Etkilenen bireyler, özellikle yara izleri yüz ve eller gibi görünür alanlarda olduğunda, benlik saygısı ve depresyon ile mücadele edebilir 1,9,10,12. Bilimsel derleme makaleleri, Amerika Birleşik Devletleri'nde HTS prevalansının %32 ile %72 arasında değiştiğini göstermektedir10,13. Bu estetik kaygıların ciddiyeti, özellikle yüz bölgesinde ciddi yanık yaralanmaları vakalarında, görünümü iyileştirmek için tam yüz nakli vakalarının sayısının artmasıyla vurgulanmaktadır10. Bu yara izleri ayrıca hareketi kısıtlayarak fonksiyonel bozukluklaraneden olabilir 6,14 ve yara izlerini eksize etmek ve hareketliliği eski haline getirmek için sıklıkla cerrahi müdahale gerekir10. HTS tedavisinin maliyeti, ameliyat, tedavi, fizik tedavi ve hatta uzun süreli bakım masrafları dahil olmak üzere önemli olabilir 1,10. Sadece Amerika Birleşik Devletleri'nde, HTŞ'yi tedavi etmenin yıllık maliyeti 4 milyar doları aşıyor10.

HTS'nin yaygınlığı ve komplikasyonlarını ele almak için alınan aşırı önlemler göz önüne alındığında, geleneksel tedaviler (ör., cerrahi eksizyon, kortikosteroid enjeksiyonları ve lazer tedavisi) oldukça değişken kalmaktadır 1,2,15,16,17. Bu tedaviler bazı durumlarda rahatlama sağlayabilirken, skar patolojisinin karmaşık doğası nedeniyle yetersiz olabilir. Bireyler arasındaki genetik farklılıklar ve HTS'yi tetikleyen mekanizmaların tam olarak anlaşılmaması gibi faktörler, terapötik stratejilerin klinik olarak yetersiz kalmasına neden olmaktadır 18,19,20. HTS tedavisinin geleceği, aşırı fibrotik skar iyileşmesini sağlamak için kapsamlı bir şekilde gösterdiğimiz mekanotransdüksiyon11,21 gibi HTS'nin hücre mekanik itici güçlerini hedef alan yeni yenilikçi yaklaşımlarda yatıyor gibi görünmektedir 5,6,7,8,11,21,22,23,24,25. Spesifik olarak, daha önce insan benzeri HTS9'u teşvik etmek için yara mekanik zorlanmasını artıran bir fare modeli geliştirmiştik. Bununla birlikte, yaklaşık yirmi yıllık kullanımdan sonra, model etkinliği ve tekrarlanabilirliği artırmak için önemli ölçüde geliştirilmiştir. Bu protokol, araştırmacıların, aşırı yara izinin arkasındaki hücre popülasyonlarını ve itici güçleri keşfetmek için güncellenmiş ve optimize edilmiş bir HTS fare modelini en iyi şekilde kullanmalarına olanak tanıyacak. Bu yöntemin genel amacı, araştırmacılara farelerde insan benzeri hipertrofik yara izi üretmek için tasarlanmış bir protokol sağlamaktır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneyler için Arizona Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nden (IACUC) onay alındı (kontrol no: 2021-0828). Bu protokol 15 haftalık C57BL / 6J erkek fareleri kullanır, ancak diğer yaşlara ve suşlarada uygulanabilir 9,26.

1. HTS biyomekanik yükleme cihazının oluşturulması

NOT: Damak genişleticilerin HTS cihazına değiştirilmesi, deneyden önce herhangi bir noktada gerçekleşebilir.

  1. Değiştirilmemiş damak genişleticiyi alın ve Şekil 1A,B'ye göre spesifikasyonlarla makerspace çekirdeğine veya fabrikasyon çekirdeğine sunun.
    NOT: Kullanılabilir bir makerspace veya fabrikasyon çekirdeği yoksa, aşağıdaki adımlara devam edin.
  2. Damak genişleticiyi Şekil 1A,B'nin özelliklerine uyacak şekilde değiştirmek için bir Mini Üniversal Bükücü (MUB) tel bükme aleti kullanın.
  3. Cihazı Şekil 1A'da gösterildiği gibi düz bir yüzeye yerleştirin 1.
  4. Şekil 90A'da görüldüğü gibi cihaz MUB ile düz dururken kolları üst kollar için 90° yukarı ve alt kollar için 2° aşağı bükün. Kolların artık cihazın gövdesine mükemmel bir şekilde paralel olduğu bir yüzey üzerinde düz bir şekilde dururken cihazın görünümü için Şekil 1A3'e bakın.
  5. Şekil 90A'da görüldüğü gibi noktalı çizginin ekseni boyunca her bir kolu tekrar sayfaya 4° bükün. Bükme işleminden sonra cihaz için Şekil 1A5'e bakın.

2. Ameliyat sonrası 0. günde epilasyon ve ilk kesi (POD 0)

NOT: Ameliyattan önce birkaç set cerrahi aleti temizleyin ve otoklavlayın (örn. diseksiyon makası, neşter, Adson forseps, İğne sürücüsü). Kullanım için sterilize edilmiş 5-0 sütürler hazırlayın ve elinizde bir cerrahi işaretleyici bulundurun.

  1. Çalışma alanını %70 etanol sprey ile temizleyin.
  2. Cerrahi öncesi hazırlık masasına 35 °C'ye ayarlanmış bir ısıtma yastığı yerleştirin. Isıtma yastığının üzerine emici bir ped bantlayın. Önceki pedin üzerine başka bir emici ped yerleştirin (traşlı saçları toplamak için). Anestezi konisini (veya konilerini) emici ped üzerine bantlayın.
    NOT: [İsteğe bağlı] Tezgah üstü duman emici varsa, koniyi çalışma alanının yakınına yerleştirin ve emişi açın.
  3. Fareyi, fareler sakince nefes alana kadar (2-3 dakika)% 1-3 izofluran ve 2 L / dk oksijen akışı olan anestezi indüksiyon odasına yerleştirin.
  4. Her farenin burnunu burun konisi açıklığına sokun, böylece 2 L / dak oksijen ile% 1-3 izoflurandan oluşan anestezinin solunmasına izin verin. Bir ayak parmağı tutamına reaksiyon olmaması nedeniyle yeterli anesteziyi onaylayın. Farenin gözlerine oftalmik kayganlaştırıcı merhem sürün.
  5. Şekil 1C'de görüldüğü gibi bölgedeki dorsumdaki kılları tıraş etmek için elektrikli bir tıraş bıçağı kullanın.
  6. Tüy dökücü macunu eldivenli bir parmak veya pamuklu çubukla cilde uygulayın ve traş edilen bölgeyi kaplayın. 45 saniye sonra, macunu gazlı bezle ve ardından alkollü bir bezle silin. Tüy dökücü macunu çıkarmak için sırtı başka bir alkollü çubukla silin ve geride tüysüz bir yama bırakın (Şekil 1C).
    NOT: Tüy dökücü macunun neden olduğu cilt yanıklarını önlemek için orta miktarda macun kullanmak, macunu hemen çıkarmak ve macunu çıkardıktan sonra fareyi silmek çok önemlidir. Murin derisi incedir, bu da onu hem fare sağlığı hem de deneysel kalite üzerinde zararlı etkileri olabilecek hızlı kimyasal yanıklara karşı hassas hale getirir.
  7. Tanımlama için fareyi kulak küpesine alın.
  8. Tüyleri çıkardıktan sonra, aşırı izofluran maruziyetini önlemek için fareyi kafese geri koyun. Fareyi izleyin.
  9. Temiz bir cerrahi öncesi moral çalışma yüzeyine sahip olmak için saçla kaplı üst emici pedi çıkarın.
  10. Ayrı bir cerrahi çalışma alanı oluşturun. Ameliyat masasına 35 °C'ye ayarlanmış bir ısıtma yastığı yerleştirin. Isıtma yastığının üzerine emici bir ped bantlayın. Anestezi konisini (veya konilerini) emici ped üzerine bantlayın.
  11. Fare sakin bir şekilde nefes alana kadar (2-3 dakika)% 2-4 izofluran ve 2 L / dk oksijen akışı olan anestezi indüksiyon odasına bir fare yerleştirin.
  12. Fareyi indüksiyon odasından çıkarın ve çalışma yüzeyine yerleştirin. Her farenin burnunu burun konisi açıklığına sokun, böylece 2 L / dak oksijen ile% 1-3 izoflurandan oluşan anestezinin solunmasına izin verin. Bir ayak parmağı tutamına reaksiyon olmaması nedeniyle yeterli anesteziyi onaylayın. Farenin gözlerine oftalmik kayganlaştırıcı merhem sürün.
  13. Cerrahi sonrası ağrı tedavisi için 21 G'lik bir iğne kullanarak omuza deri altına 0.05 mg / kg sürekli salimli buprenorfin enjekte edin.
  14. Farenin sırtını üç alternatif tur iyot / klorheksidin bazlı ovma ve alkollü çubukla dezenfekte edin. Cerrahi işaretleme kalemi ve bir cetvel ile Şekil 2D'de gösterildiği gibi tam kalınlıkta insizyonun yapılacağı dorsal orta hat üzerinde 1 cm'lik bir çizgi işaretleyin.
  15. İşaretli alandan tam kalınlıkta dorsal orta hat kesisi yapmak için bir neşter veya diseksiyon makası (cerrahi tercih) kullanın.
    NOT: Şekil 1D'de görüldüğü gibi alttaki dokuyu (örn. kas) kesmemeye dikkat edin.
  16. Basit bir kesintili düzende 5-0 sütür kullanarak, Şekil 1D'de gösterildiği gibi yarayı ikiye bölerek kesiyi kapatın. En az 5 eşit aralıklı sütür kullanın.
  17. Telfa gazlı bezi 3 cm x 1 cm'lik parçalar halinde kesin. Köpük yapışkan bir sargının ortasına yerleştirin ve yapışkan sargıyı, Şekil 1D'de gösterildiği gibi gazlı bez kesiyi kaplayacak şekilde fare sırtına yerleştirin. Karın üzerine ikiye bölünmüş bir pansuman yerleştirin ve sırt pansumanı ile buluşana kadar çevresel olarak sarın.
  18. Pansuman tamamlandıktan sonra, fareyi ayrı bir steril kafese yerleştirin ve anesteziden tamamen iyileşene kadar izleyin.
  19. Deney grubundan bağımsız olarak prosedürü tüm farelerle tekrarlayın. Bir sonraki adımdan önce insizyonun önümüzdeki 4 gün içinde iyileşmesine izin verin.

3. HTS biyomekanik yükleme cihazının yerleştirilmesi (POD 4)

NOT: Ameliyattan önce HTS cihazlarını ve çeşitli cerrahi alet setlerini temizleyin ve otoklavlayın (örn. diseksiyon makası, neşter, Adson forseps, İğne sürücüsü, cilt zımbası, cilt zımbaları). Kullanım için sterilize edilmiş 5-0 sütürler hazırlayın. [İsteğe bağlı] Tezgah üstü duman emici varsa, koniyi çalışma alanının yakınına yerleştirin ve emişi açın.

  1. Ameliyat alanını adım 2.1 ve 2.2'de açıklandığı gibi hazırlayın.
  2. Fareyi uyuşturun ve 2.11-2.13 adımlarını izleyerek analjezi sağlayın.
  3. Aleti ventral tarafa karşı yan yana çalıştırarak pansumanı farenin karnından ayırmak için forseps veya iğne sürücüsünü kullanın. Pansumanı ciltten çıkarmak için aleti sargı ile cilt arasında bırakarak, pansumanı kesmek için makas kullanın.
    NOT: Fare derisini kesmemeye, pansumanı yırtmamaya veya iyileşme kesiğini bozmamaya dikkat edin.
  4. Sırtı alkollü bir bezle temizleyin. Kesi yara ayrışması veya enfeksiyon belirtileri açısından inceleyin.
  5. HTS cihazının uzatılmadığından/genişletilmediğinden ve Şekil 1B'de gösterildiği gibi en küçültülmüş biçiminde olduğundan emin olun. Cihazın kollarını tıbbi yapıştırıcı ile hafifçe kaplayın.
  6. Bir elinizle, fare sırtındaki cildi enine yönde hafifçe gergin hale getirin. Öte yandan, HTS cihazını, kesi HTS cihazının her bir kolundan eşit uzaklıkta olacak şekilde fare sırtına yerleştirin ve böylece cihazı insizyonun üzerinde ortalayın. HTS cihazının kolları arasındaki derinin eşit derecede gergin olduğundan emin olun. Şekil 30A'da görüldüğü gibi yapıştırıcı kuruyana kadar (~ 2 s) cihazı yerinde tutun.
    NOT: Cihazla yapılan kesi üzerine eşit miktarda gerginlik uygulanmasını sağlamak için cildi eşit derecede gergin tutmak önemlidir. Bu işlem sırasında dikişleri sağlam bırakın çünkü cihazı yerleştirme işlemi cilde mekanik gerginlik ekler ve bu da iyileşme kesisini yeniden açabilir. Yaranın kapalı kalmasını sağlamak için dikişler germenin ilk gününe kadar yerinde kalır.
  7. Şekil 2B'de gösterildiği gibi her bir kolun etrafına ve deriye dört dikiş atın. Dikiş atarken iğnenin deriden kesiye doğru çıktığından emin olun.
    NOT: İğnenin cihazın kesi tarafından sokulması, cildi delmek için gerekli kuvvet nedeniyle bazen kesiyi yırtabilir.
  8. Şimdi kolların etrafına ve derinin içinden üç deri zımbası yerleştirin ve HTS cihazını Şekil 2B'de gösterildiği gibi cilde sabitleyin.
  9. 2.17 ve 2.18 adımlarını izleyerek fareyi bandajlayın.
  10. Deney grubundan bağımsız olarak prosedürü tüm farelerle tekrarlayın.
    NOT: Tüm fareler aynı hazırlığı alır; Bununla birlikte, deney tasarımında farelerin tarafsız bir dağılımını sağlamak için her deney grubunda (örneğin, kontrol, germe) rastgele atanırlar. Spesifik olarak, hem kontrol hem de gerdirme fareleri, cihazı sırtlarına bağlı hale getirecektir. Kontrol farelerinin cihazlarına dokunulmadan kalırken, streç fareler sonraki adımlardan geçecektir.

4. HTS biyomekanik yükleme cihazının ilk gerilmesi (POD 5)

NOT: Ameliyattan önce birkaç cerrahi alet setini (örn. diseksiyon makası, neşter, Adson forseps, İğne sürücüsü) temizleyin ve otoklavlayın. [İsteğe bağlı] Tezgah üstü duman emici varsa, koniyi çalışma alanının yanına yerleştirin ve emişi açın.

  1. Her fareyi kulak küpesi aracılığıyla istediğiniz gruba rastgele atayın. Kontrol fareleri için, insizyondaki dikişleri çıkarın ve yaraların pansumanlarını değiştirin (adım 1-6 ve ardından 8-9). İstenirse, germe sırasında cihazı çıkarın ve yara izi boyutunu izlemek için ölçek için bir ölçüm aleti ile bir fotoğraf çekin.
  2. Cerrahi alanı hazırlayın, fareyi uyuşturun ve 3.1-3.4 adımlarını uygulayarak pansumanı çıkarın.
    NOT: Pansumanı yırtmamaya veya iyileşme kesisini bozmamaya dikkat edin. HTS cihazının bir kolu ciltten ayrılmışsa, hafifçe yerine yapıştırın ve dekolman boyutuna bağlı olarak bir cilt zımbası veya sütür ekleyin.
  3. Dikişleri yaradan diseksiyon, makas veya tercih edilen başka bir yöntemle çıkarın.
  4. HTS cihaz anahtarını cihaza yerleştirin ve Şekil 2C'de görüldüğü gibi cilt gergin olana ancak cildi yırtma riski olmayana kadar cihazı genişletmek için çevirin.
    NOT: Bu ilk dikkat dağınıklığı, cihazın kolları arasındaki cilt gevşek olabileceğinden, anahtarın yaklaşık 4-8 tam dönüşünü alabilir.
  5. 2.17 ve 2.18 adımlarını uygulayarak fareyi bandajlayın.

5. HTS biyomekanik yükleme cihazının müteakip gerilmesi (POD 7, 9, 11, 13, 15, 17)

NOT: Ameliyattan önce birkaç cerrahi alet setini (örn. diseksiyon makası, neşter, Adson forseps, İğne sürücüsü) temizleyin ve otoklavlayın. [İsteğe bağlı] Tezgah üstü duman emici varsa, koniyi çalışma alanının yanına yerleştirin ve emişi açın.

  1. Kontrol fareleri için, yaraların pansumanlarını değiştirmeniz yeterlidir (adım 1-5 ve ardından adım 13-14). İstenirse, germe sırasında cihazı çıkarın ve yara izi boyutunu izlemek için ölçek için bir ölçüm aleti ile yara izinin fotoğrafını çekin.
  2. Cerrahi alanı hazırlayın, fareyi uyuşturun ve 3.1-3.4 adımlarını izleyerek pansumanı çıkarın.
    NOT: Bir HTS cihazının bir kolu ciltten ayrılmışsa, yerine yapıştırın ve dekolman boyutuna bağlı olarak bir cilt zımbası veya dikiş ekleyin.
  3. HTS cihaz anahtarını cihaza takın ve cilt gergin olana kadar ancak cildi yırtma riski olmayana kadar cihazı genişletmek için çevirin.
    NOT: Bu, yaklaşık 4 tur veya ~2 mm toplam dikkat dağınıklığı gerektirebilir. Cihaz maksimum uzatmaya ulaştıysa ve daha fazla uzatılamıyorsa, yeni bir cihazı çıkarmak ve yeniden takmak için 5.4-5.7 adımlarını gerçekleştirin. Aksi takdirde, 2.17 ve 2.18 adımlarını uygulayarak fareyi bandajlayın.
  4. Cihaz maksimum uzamaya ulaştıysa, zımbaların uçlarını kaldırarak zımbaları bir zımba sökücü veya makasla çıkararak cihazı farenin sırtından çıkarın. Ardından dikişleri çıkarın ve cihazı dikkatlice çıkarın.
  5. Cihazı neşter, alkollü bezler ve kağıt havlularla temizleyin. Temizlemeye yardımcı olması için cihazı ~ 20 dakika% 70 etanol içinde bekletin. Ardından, cihazı en ince biçimine daraltmak için anahtarı kullanın.
  6. 3.5-3.8 adımlarını izleyerek HTS cihazını yeniden takın.
  7. 2.17 ve 2.18 adımlarını izleyerek fareyi bandajlayın.

6. HTS dokusunun toplanması (POD 19)

NOT: Doku alımı, işlemin herhangi bir noktasında gerçekleşebilir. Erken zaman noktalarını incelemek için sadece 4 günlük esneme işleminden sonra doku topladık; bununla birlikte, doku en tutarlı şekilde POD 19'da (suşun başlatılmasından 2 hafta sonra) hasat edilir. Ameliyattan önce birkaç set cerrahi aleti (örn. diseksiyon makası, neşter, Adson forseps) temizleyin ve otoklavlayın. Zaman içinde yara izinin fotoğraflarını çekmek için, cihazı yeniden uygulamadan ve mekanik zorlanmayı yeniden başlatmadan önce yara izinin fotoğrafını çekmek için her germe adımından önce cihaz çıkarılabilir. [İsteğe bağlı] Tezgah üstü duman emici varsa, koniyi çalışma alanının yanına yerleştirin ve emişi açın. Tezgah üstü duman emici, izofluran gazı artık kullanılmadığında kapatılabilir.

  1. Cerrahi alanı hazırlayın, fareyi uyuşturun ve 3.1-3.4 adımlarını izleyerek pansumanı çıkarın.
  2. Fareyi servikal çıkık yoluyla feda edin.
    NOT: Cildi çekmemeye ve farenin sırtını yırtmamaya dikkat edin.
  3. Cilt zımbalarını çıkarmak için diseksiyon makası veya cilt zımba sökücü kullanın. Dikişleri kesin. Cildi yırtmamaya dikkat ederek HTS cihazını nazikçe çıkarın.
  4. Bir neşter veya makas kullanarak, HTS yara izini çevreleyen cildi kesin. Histolojik analiz için cildi istenen şekilde koruyun.
    NOT: Deri, transkriptomik veya protein analizi için kullanılacaksa (ör., qPCR, western blot, tek hücre analizi), çevredeki sağlıklı doku miktarını en aza indirmek için sadece HTS skar dokusunu eksize ettiğinizden emin olun. Bu, analizin yalnızca yara dokusunu yakalamasını sağlayacaktır.
  5. HTS cihazlarını bir neşterle kazıyarak temizleyin. Kalan yapıştırıcıyı veya dokuyu yumuşatmak için cihazları %70 etanol içeren bir behere yerleştirin.
    NOT: %70 etanole batırıldıktan sonra, cihazların otoklavlamadan önce daha fazla silinmesi, kazınması ve temizlenmesi gerekebilir.

7. Ortalama yara izi genişliğinin ölçülmesi

NOT: Bu, görüntü analiz yazılımı ImageJ ile gerçekleştirilmiştir ve bilgiler bir elektronik tabloya kaydedilmiştir.

  1. Görüntüleri ImageJ'de açın. Çokgen aracıyla yara izinin kenarlarını izleyin. Bu alanı ölçmek için analiz et | ölç'e tıklayın.
    NOT: Yara izi, renk değişikliği ve saç foliküllerinin olmaması ile tanımlanabilir.
  2. Segment aracını kullanarak yara izinin uzunluğunu uçtan uca ölçün. Bu uzunluğu ölçmek için analiz et | ölç'e tıklayın.
  3. Segment aracını kullanarak resimdeki 1 cm'lik uzunluğu veya başka bir standartlaştırılmış uzunluk birimini ölçün. Bu uzunluğu ölçmek için analiz et | ölç'e tıklayın.
  4. Elektronik tabloyu kullanarak, yara izinin alanını (piksel cinsinden; piksel) alın ve bunu yara izinin Uzunluğuna (piksel uzunluğu) bölün. Bu sonuç, piksel cinsinden ortalama yara izi genişliğini verir.
  5. Bu sonucu ölçülen standart uzunluk birimine (px uzunluk) bölün. Sonuç, deney için kullanılan standart uzunluk biriminin (örneğin, cm) birimindeki ortalama yara izi genişliği olacaktır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

HTS protokolünün etkin kullanımını açıkça göstermek ve başarılı "pozitif" sonuçları belirlemek için model, Şekil 3A'da gösterildiği gibi oluşturulmuştur. Temsili çalışmada, iki grup vardı: Şekil 3B, C'de görülen bir HTS oluşturmak için insizyon boyunca insan benzeri mekanik gerinim seviyelerinin indüklendiği Germe Kontrolü Yok (n = 6) ve Mekanik Germe HTS grubu (n = 6). Şekil 3A-C'de verilen deney p...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

HTS fare modeli, mekanotransdüksiyon yoluyla HTS'yi indüklemek ve potansiyel tedaviler geliştirmek için uygun maliyetli ve yüksek oranda tekrarlanabilir bir yöntemdir. Modeli etkili bir şekilde kullanmak için bir başlangıç öğrenme eğrisi olsa da, protokol pratikte, cerrahi eğitim almadan herhangi bir araştırmacı tarafından gerçekleştirilebilir. Bu modelin kullanılması, araştırmacıların HTS oluşumunu ve mekanotransdüksiyonun yara iyileşmesindeki rolünü daha iyi anlamalarını sağlar ve bu d...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların bu makalenin içeriğiyle ilgili herhangi bir rekabet çıkarı veya başka çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, National Institute of Dental and Craniofacial Research (U24 DE026914) (GCG) ve Plastic Surgery Foundation Translational Research Grant (837107) (K.C.) tarafından desteklenen Center for Dental, Oral, and Craniofacial Tissue and Organ Regeneration Interdisciplinary Translational Project Awards tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
100 mL PYREX Griffin beherMilipore SignmaCLS1000100
Aesculap Exacta mini düzelticiAesculap
AutoClip Systemİnce Cerrahi Aletler12020-00
BD marka izopropil alkollü çubuklarFisher Scientific13-680-63
Buprenorfin SR (0.5 mg / mL)Buprenex, Indivior Inc.12496-0757-1
C57/BL6 dişiler (6– 8 haftalık)Jackson Laboratuvarı000664
Covidien steril gazlı bezFisher Scientific2187
Covidien TelfaTM yapışmayan pedlerFisher Scientific, Covidien1961
Diş cerrahi cetveliDoWell Dental ProductsS1070
Tüy dökücü krem (Nair Tüy Dökücü Losyon)Church& Dwight, CVS339823
Etanol% 70 çözeltiFisher Scientific64-17-5
ExcelMicrosoft İşbirliğiMicrosoft.comyazılım programı 
ImageJImageJ, Wayne Rasbandimagej.netyazılım programı 
İnhalasyon anestezi sistemiVetEquip922130
İris makas 4 ve frak12; paslanmazMcKesson43-2-104
İzofluran, USPDechra Veterinerlik Ürünleri17033-094-25
Kaka endüstriyel MUB-1Kaka Endüstriyel 173207Yalnızca yapımcı alanı veya fabrikasyon atölyesi yoksa gereklidir 
Leone Rapid Palatal Expander- 13 mmGreat Lakes Dental Technologies125-004Cihazı genişletmek ve yerleştirmek için gerekli anahtar bu ürünle birlikte kutuda gelecektir
Sıvı itici örtü 75 x 90 cm, yapışkan delikli 6 x 9 cmOmnia S.p.A.12.T4362
Medequip Deposu İpek Siyah Örgülü Sutr 6-0 RxMedequip Deposu D707N, Fisher ScientificNCO835822
İğne tutucu 5 inç. tırtıklı çeneliMcKesson43-2-842
Prizma 9GraphPad Holdings, LLCgraphpad.comyazılım programı 
Puralube oftalmik merhemDechra, NDC17033-211-38
R studio MasaüstüRStudio PBCrstudio.comyazılım programı 
Cerrahi cilt kalemiMcKesson19-1451_BX
Tegaderm, 3 MVWR56222-191köpük yapışkan pansuman 
Termo-peep ısıtma yastığıK & H, Amazon
Doku forseps 4 & frac34; inç paslanmaz 1 x 2 dişMckesson43-2-775
Vetbond (3 M)Saint Paul, MN1469SB

Kaynaklar

  1. Mony, M. P., Harmon, K. A., Hess, R., Dorafshar, A. H., Shafikhani, S. H. An updated review of hypertrophic scarring. Cells. 12 (5), 678(2023).
  2. Limandjaja, G. C., Niessen, F. B., Scheper, R. J., Gibbs, S. Hypertrophic scars and keloids: Overview of the evidence and practical guide for differentiating between these abnormal scars. Exp Dermatol. 30 (1), 146-161 (2021).
  3. Cao, X., Sun, L., Luo, Z., Lin, X., Zhao, Y. Aquaculture derived hybrid skin patches for wound healing. Engineered Regeneration. 4 (1), 28-35 (2023).
  4. Ishise, H., et al. Hypertrophic scar contracture is mediated by the trpc3 mechanical force transducer via nfkb activation. Sci Rep. 5 (1), 11620(2015).
  5. Padmanabhan, J., et al. Allometrically scaling tissue forces drive pathological foreign-body responses to implants via rac2-activated myeloid cells. Nat Biomed Eng. 7 (11), 1419-1436 (2023).
  6. Kussie, H. C., et al. Avenanthramide and β-glucan therapeutics accelerate wound healing via distinct and nonoverlapping mechanisms. Adv Wound Care (New Rochelle). 13 (4), 155-166 (2024).
  7. Chen, K., et al. Disrupting biological sensors of force promotes tissue regeneration in large organisms. Nat Commun. 12 (1), 5256(2021).
  8. Chen, K., et al. Role of boundary conditions in determining cell alignment in response to stretch. Proc Natl Acad Sci USA. 115 (5), 986-991 (2018).
  9. Aarabi, S., et al. Mechanical load initiates hypertrophic scar formation through decreased cellular apoptosis. FASEB J. 21 (12), 3250-3261 (2007).
  10. Aarabi, S., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Hypertrophic scar formation following burns and trauma: New approaches to treatment. PLoS Med. 4 (9), e234(2007).
  11. He, J., et al. Mechanical stretch promotes hypertrophic scar formation through mechanically activated cation channel piezo1. Cell Death Dis. 12 (3), 226(2021).
  12. Weng, W., et al. Ellipsoidal porous patch with anisotropic cell inducing ability for inhibiting skin scar formation. Engineered Regeneration. 3 (3), 262-269 (2022).
  13. Lawrence, J. W., Mason, S. T., Schomer, K., Klein, M. B. Epidemiology and impact of scarring after burn injury: A systematic review of the literature. J Burn Care Res. 33 (1), 136-146 (2012).
  14. Ziolkowski, N., et al. Psychosocial and quality of life impact of scars in the surgical, traumatic and burn populations: A scoping review protocol. BMJ Open. 9 (6), e021289(2019).
  15. Gauglitz, G. G., Korting, H. C., Pavicic, T., Ruzicka, T., Jeschke, M. G. Hypertrophic scarring and keloids: Pathomechanisms and current and emerging treatment strategies. Mol Med. 17 (1-2), 113-125 (2011).
  16. Fu, X., et al. Oxygen atom-concentrating short fibrous sponge regulates cellular respiration for wound healing. Advanced Fiber Materials. 5 (5), (2023).
  17. Fu, X., et al. Living electrospun short fibrous sponge via engineered nanofat for wound healing. Advanced Fiber Materials. , (2022).
  18. Fomovsky, G. M., Holmes, J. W. Evolution of scar structure, mechanics, and ventricular function after myocardial infarction in the rat. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 298 (1), H221-H228 (2010).
  19. Macintyre, L., Baird, M. Pressure garments for use in the treatment of hypertrophic scars--a review of the problems associated with their use. Burns. 32 (1), 10-15 (2006).
  20. Brissett, A. E., Sherris, D. A. Scar contractures, hypertrophic scars, and keloids. Facial Plast Surg. 17 (4), 263-272 (2001).
  21. Chen, K., et al. Disrupting mechanotransduction decreases fibrosis and contracture in split-thickness skin grafting. Sci Transl Med. 14 (645), eabj9152(2022).
  22. Ogawa, R., et al. Clinical applications of basic research that shows reducing skin tension could prevent and treat abnormal scarring: The importance of fascial/subcutaneous tensile reduction sutures and flap surgery for keloid and hypertrophic scar reconstruction. J Nippon Med Sch. 78 (2), 68-76 (2011).
  23. Chen, K., Henn, D., Gurtner, G. C. Holy grail of tissue regeneration: Size. Bioessays. 44 (9), e2200047(2022).
  24. Sivaraj, D., et al. Nitric oxide-releasing gel accelerates healing in a diabetic murine splinted excisional wound model. Front Med (Lausanne). 10, 1060758(2023).
  25. Chen, K., et al. Pullulan-collagen hydrogel wound dressing promotes dermal remodelling and wound healing compared to commercially available collagen dressings. Wound Repair Regen. 30 (3), 397-408 (2022).
  26. Mascharak, S., et al. Preventing engrailed-1 activation in fibroblasts yields wound regeneration without scarring. Science. 372 (6540), eaba2374(2021).
  27. Fischer, K. S., et al. Protocol for the splinted, human-like excisional wound model in mice. Bio Protoc. 13 (3), e4606(2023).
  28. Wang, P. H., Huang, B. S., Horng, H. C., Yeh, C. C., Chen, Y. J. Wound healing. J Chin Med Assoc. 81 (2), 94-101 (2018).
  29. Azmat, C. E. Martha Council. Wound closure techniques. Statpearls. , StatPearls Publishing LLC. Treasure Island (FL). (2024).
  30. Tunca, M., et al. Cryosurgery to remove perichondrium for the rabbit ear hypertrophic scar model: A simplified method. Acta Dermatovenerol Alp Pannonica Adriat. 28 (2), 57-59 (2019).
  31. Sun, Q., et al. The effects of timing of postoperative radiotherapy on hypertrophic scar in a rabbit model. Med Sci Monit. 26, e921263(2020).
  32. Zu, W., Jiang, B., Liu, H. Establishment of a long-term hypertrophic scar model by injection of anhydrous alcohol: A rabbit model. Int J Exp Pathol. 102 (2), 105-112 (2021).
  33. Molina, E. A., et al. Angiogenic gene characterization and vessel permeability of dermal microvascular endothelial cells isolated from burn hypertrophic scar. Sci Rep. 12 (1), 12222(2022).
  34. Li, Z., et al. A highly simulated scar model developed by grafting human thin split-thickness skin on back of nude mouse: The remodeling process, histological characteristics of scars. Biochem Biophys Res Commun. 526 (3), 744-750 (2020).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Yara İyileşmesiMekanik GerinimFibrotik SkarBiyomekanik YüklemeDoku RejenerasyonuYabancı Cisim YanıtıSkar Azaltılması
Mekanotransdüksiyon Odaklı, İnsan Benzeri Hipertrofik Yara İzinin Bir Fare Modeli
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.