Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Bu protokol, sıçan retinal örneklemesi ve N-Metil-N-Nitrosourea'nın intraperitoneal enjeksiyonundan sonra retinadaki patolojik değişiklikleri ve apoptozu tespit etmek için hematoksilen-eozin boyama, TUNEL testi ve Western blot kullanımı için bir prosedürü tanımlar.
Retinopati, çoğu oküler hastalıkta ve diabetes mellitusun geç komplikasyonlarında görülebilir. Spesifik pigment epitel hücreleri ve optik hücrelerin hasar görmesi ve dejenerasyonu retinopatinin temel özellikleridir. Birçok geleneksel ilaç, retinopatinin tedavisinde önemli klinik etkinlik göstermiştir. Bir retinanın hızlı ve eksiksiz bir şekilde nasıl elde edileceği, retinopati tedavisi için geleneksel tıp araştırmalarında önemli bir adımdır. Bu çalışmada, N-metil-N-nitrosourea (MNU) ile indüklenen sıçanların retina hasarının örneklenmesi ve patolojik değişikliklerin çok indeksli değerlendirilmesi için standart ve uygulanabilir bir prosedür sağlamayı amaçladık. Sıçanlara retina hasarını indüklemek için bir kez intraperitoneal olarak 60 mg / kg MNU enjekte edildi ve retina örnekleri 7 gün sonra elde edildi. Ek olarak, retinal patolojik değişiklikleri değerlendirmek için hematoksilen-eozin boyaması yapıldı. Apoptoz oranı ve apoptoz proteininin TUNEL ve Western blot ile belirlenmesi. Retina örneklemesi ve patolojik değişikliklerin değerlendirilmesi için bu standartlaştırılmış protokoller, retinopati mekanizmasının araştırılmasında ve yeni ve etkili geleneksel bitkilerin keşfinde yardımcı olmaktadır.
Retinitis pigmentosa (RP) kalıtsal ve kör edici bir retina hastalığıdır1. RP'nin görülme sıklığı 1/3500 ile 1/5000 arasındadır ve dünyada yaklaşık 2,5 milyon kişinin görme fonksiyonunu etkilemektedir. İnsanda görme bozukluğuna yol açan, tüm topluma önemli bir yük getiren en yaygın hastalıklardan biridir2. Hastalık, retina pigment epitel hücre fonksiyonunun kademeli kaybı ve fotoreseptörlerin ilerleyici apoptozu ile karakterizedir. Erken evrede, hastalar periferik görme alanı kusurları olarak ortaya çıkan ve sonunda merkezi görme kaybına yol açan gece körlüğü yaşarlar3
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm protokoller ve cerrahi prosedürler Ningxia Tıp Üniversitesi Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır (Etik numarası: NO. 2020-Q066). 7-8 haftalık ve 200-220 g ağırlığındaki SPF Sprauge-Dawley (SD) erkek sıçanlar, SCXK (Ning) 2020-0001 hayvan lisans numarası ile Ningxia Tıp Üniversitesi'nden satın alındı. Tüm hayvanlar Ningxia Tıp Üniversitesi Laboratuvar Hayvanları Merkezinde yetiştirildi. Sıcaklık ve nem uygundu, gündüz-gece ışık döngüsü korundu ve yiyecek ve su serbest ve yeterliydi.
1. Ameliyat öncesi hazırlık
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
HE boyamadan sonra, kontrol grubundaki sıçanların tüm retina katmanları net doku yapısına, düzenli hücre düzenlemesine ve düzgün boyamaya sahipken, model grubundaki sıçanların retinal yapısı önemli ölçüde hasar gördü, dış retina tabakası daha inceydi, dış nükleer tabaka neredeyse tamamen iç çekirdek tabakası ile bütünleşmişti, tabakadaki hücrelerin düzeni son derece düzensizdi, Hücre katmanlarının sayısı önemli ölçüde azaldı ve ışığa duyarlı hücre katmanının ve dış nükleer katmanın kalınlığı önemli ölçüde daha inceydi. .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
RP kliniklerde sık görülen bir retina hastalığıdır. RP'nin başlangıcı, şiddeti ve ilerlemesi genler ve genetik modlarla ilgilidir ve çevreden etkilenir 8,11. RP, ailesel RP ve sıklıkla RP'yi içerir ve ailesel RP hastaların yaklaşık %60'ını oluşturur. Aile genetik geçmişinin izlenmesi yoluyla, şimdiye kadar RP ile ilgili 83 gen tanımlanmışken, ara sıra RP yaklaşık %40'ını oluşturur, bu da bu tür bir hastanın aile öyküsü olmadığı v.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Bu çalışma, Ningxia Yüksek Öğretim Departmanı (NYG2022029) Bilimsel Araştırma Projesi tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Amersham Görüntüleyici | GE | 680 | |
| Amonyum persülfat | Boster Biological Technology Co., Ltd | A8090 | |
| Analitik Terazi | Mettler Toledo | ME104E | |
| BCA protein niceleme kiti | ve nbsp; Ken Gen Biyoteknoloji. Co. Ltd | KGP902 | |
| bölünmüş kaspaz-3 antikor | Hücre Sinyal Teknolojisi | # 9664 | |
| bölünmüş kaspaz-7 antikor | Hücre Sinyal Teknolojisi | # 8438 | |
| bölünmüş kaspaz-9 antikor | Hücre Sinyal Teknolojisi | # 9507 | |
| DeadEnd Florometrik TUNEL Sistemi | Promega | G3250 | |
| Glisin | Boster Biyolojik Technology Co, Ltd | AR1200 | |
| Keçi Anti-Tavşan IgG H & L (HRP) | Bioss Antikorları | bs-80295G-HRP | |
| Keçi serumu | Biosharp | BL210A | |
| Yüksek hızlı kırıcı | Thermo Fisher Bilimsel | AG22331 | |
| Immobilon-P SQ Transfer membranları | Merck Millipore. Ltd | ISEQ00010 | |
| İzofluran | RWD Yaşam Bilimleri | R510-22-10 | |
| Metanol | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 20230108 | |
| Mikroplaka Okuyucu | Thermo Fisher Bilimsel | 1510 | |
| Mikroskop | Olympus | IX73 | |
| Mikroskop slaydı | Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd | 7105P-G | |
| Mini-PROTEAN Tetra | BIO-RAD | 1658001 | |
| N-Metil-N-Nitrosourea | sigma-Aldrich | N4766– 100G | |
| Fırın | Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd | DHG-8145 | |
| Sayfa Ön çözüm (%30) | Doublehelix Biology Science and Technology Co.,Ltd | L3202A PageRuler | |
| Önceden Boyanmış Protein Merdiveni | Thermo Fisher Scientific | 26617 | |
| PBS tamponu | Biosharp | G4202 | |
| SDS-PAGE Protein yükleme tamponu (5& kez;) | Beyotime Biyoteknoloji | P0015 | |
| Yağsız süt tozu | BioFroxx | 1172GR500 | |
| Sprague Dawley sıçanları | Ningxia Tıp Üniversitesi | SCXK (Ning) 2020-0001 | |
| TEMED& | nbsp; Boster Biological Technology Co., Ltd | AR1165 | |
| Toplam protein ekstraksiyon kiti | & nbsp; Ken Gen Biyoteknoloji. Co., Ltd KGP2100 | ||
| Trans-Blot Modülü | BIO-RAD | 1703935 | |
| Tris tabanı | Boster Biyolojik Technology Co, Ltd | AR1162 | |
| Cımbız ve nbsp; | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 130302027 | |
| β-aktin | Hücre Sinyal Teknolojisi | # 4970 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında