Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Fare Dalak Dokularından Elde Edilen Eksozomların İzolasyonu ve Karakterizasyonu

1.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/67234

⸱

20 Eylül 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology, the Second Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Guangdong Medical University, 2Scientific Research Center, the Second Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Guangdong Medical University, 3Medical Interdisciplinary Science Research Center of Western Guangdong, the Second Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Guangdong Medical University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Burada, kollajenaz tip I ile sindirim ve ultrasantrifüjlemenin bir kombinasyonunu kullanarak fare dalağından türetilmiş eksozomları izole etmek için bir protokol sunuyoruz.

Özet

Eksozomlar (Exo), hayvanlar, bitkiler ve prokaryotlar da dahil olmak üzere çeşitli hücreler tarafından salgılanan lipid-çift katmanlı yapılardır. Önceki çalışmalar, humoral veya hücre süpernatanından türetilen Exo'nun yeni tanısal veya prognostik biyobelirteçler için umut verici hedefler olduğunu ve hastalık patogenezindeki önemli rollerinin altını çizdiğini ortaya koymuştur. Doku kaynaklı Exo (Ti-Exo), doku özgüllüğünü ve mikro çevreyi doğru bir şekilde yansıtma yeteneği nedeniyle artan ilgi görmüştür. İnterstisyel uzayda bulunan Ti-Exo, hücreler arası iletişimde ve organlar arası sinyalleşmede çok önemli roller oynar. Hastalık mekanizmalarının aydınlatılmasında bilinen değerlerine rağmen, doku matrislerinin karmaşıklığı ve ekstraksiyon yöntemlerindeki değişkenlik nedeniyle Ti-Exo'nun izole edilmesi zor olmaya devam etmektedir. Bu çalışmada, farelerin dalak dokusundan eksozomları izole etmek için pratik bir protokol geliştirdik ve daha sonraki tanımlama analizi ve fonksiyonel çalışmalar için tekrarlanabilir bir teknik sağladık. Dalak kaynaklı Exo'yu izole etmek için diferansiyel ultrasantrifüjleme ile birlikte Tip I kollajenaz sindirimi kullandık. İzole edilmiş Exo'nun özellikleri elektron mikroskobu, nano akış sitometresi ve western blot ile belirlendi. İzole edilmiş dalak türevli Exo, 30 nm ila 150 nm arasında değişen partikül boyutları ile lipid çift katmanlı veziküllerin tipik morfolojisini sergiledi. Ek olarak, eksozom belirteçlerinin ekspresyon profili, eksozomların varlığını ve saflığını doğruladı. Birlikte ele alındığında, farelerde dalak kaynaklı Exo'yu izole etmek için pratik bir protokolü başarıyla oluşturduk.

Giriş

Eksozomlar (Exo), proteinler, nükleik asitler ve lipitler dahil olmak üzere çok çeşitli biyomolekülleri kapsayan, boyutları 30 ila 150 nm arasında değişen hücre dışı veziküllerin (EV'ler) bir alt grubudur1. Bu biyomoleküller ebeveyn hücrelerinden türetilir ve hücre dışı boşluğa salınır. Exo, hem prokaryotik hem de ökaryotik sistemlerde rol oynayarak hücreler ve çevrelerindeki mikro ortamlar arasında biyomoleküler bilgi alışverişini kolaylaştırır2. Eksozomların içerik, boyut, zar bileşenleri ve hücresel köken gibi özellikleri oldukça değişkendir ve kaynak hücre tipi, hücresel durum ve çevresel koşullardan etkilenir.

Eksozomlar genellikle kaynaklarına göre üç kategoriye ayrılır: hücre kültüründen türetilmiş, vücut sıvısından türetilmiş ve dokudan türetilmiş (Ti-Exo). Hücre kültüründen türetilmiş eksozomlar, erişilebilirlikleri ve tutarlı verimleri nedeniyle kapsamlı bir şekilde incelenmiş olsa da, kullanımları, biyolojik işlevlerini yanlış temsil edebilecek uzun süreli kültürden sonra hücre özelliklerindeki potansiyel değişikliklerle sınırlıdır 3,4,5. Ayrıca, çoğu hücre kültürü, kompleks in vivo hücreler arası etkileşimleri taklit etmeyen iki boyutlu ortamlarda tutulur ve bu da potansiyel olarak veri yorumlamasınıetkiler 6. Tersine, biyolojik sıvılardan izole edilen eksozomlar, hastalığın ilerlemesini gerçek zamanlı olarak izlemek için minimal invaziv bir seçenek sunar7. Bununla birlikte, bu numuneler genellikle çeşitli kökenlerden gelen eksozomların bir karışımını içerir ve bu da birincil kaynaklarının doğru bir şekilde tanımlanmasını zorlaştırır8. Bu zorluklar göz önüne alındığında, hücre dışı interstisyumda bulunan ve hücreler arası sinyalleşmenin anahtar aracıları olan Ti-Exo'ya artan bir ilgi vardır.

Dalak, bağışıklık fonksiyonunda ve iç homeostazın korunmasında çok önemli bir rol oynar. Ti-Exo'yu beyin, karaciğer ve tümörler gibi organlardan izole etmek için mevcut protokollere rağmen, dalak kaynaklı eksozomlar için pratik yöntemler sınırlı olarak rapor edilmiştir 9,10. Bu çalışma, önceki bir rapordan modifiye edilmiş farelerde dalak dokusundan eksozomları izole etmek için pratik bir protokol oluşturmayı amaçladı11. Kollajenaz sindirimini ve ardından hücre zarının bozulmasını en aza indiren ve dalak türevi Exo'nun yüksek saflığını ve verimini sağlayan ultrasantrifüjlemeyi içeren bir yöntemi detaylandırıyoruz. Bu yerleşik protokol kullanılarak izole edilen Exo'nun özellikleri, elektron mikroskobu (TEM), nano-akış sitometresi (Nano-FCM) ve western blot ile doğrulandı ve protokolün daha ileri deneysel araştırmalar için etkinliğini doğruladı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Örnekler, Guangdong Tıp Üniversitesi Etik Komitesi tarafından verilen etik onay ile farelerden elde edildi. Bu protokolde kullanılan malzeme, ekipman ve yazılımların ayrıntılı açıklamaları Malzeme Tablosunda verilmiştir. Ekstraksiyon öncesi preparatın detayları Şekil 1'de gösterilirken, Spleen-Exo ekstraksiyonu ve zenginleştirme işlemi Şekil 2'de açıklanmaktadır.

1. Hazırlık

  1. Yüksek hızlı ve ultra yüksek hızlı santrifüjleri 4 °C'ye önceden soğutun ve masaüstü çalkalayıcının sıcaklığını 37 °C'ye ayarlayın.
  2. Şekil 1A, B'de gösterildiği gibi hücre kültürü kapları (figure-protocol-1100 mm), 50 mL steril santrifüj tüpleri, buz ve steril hücre süzgeci (figure-protocol-270 μm) hazırlayın.
  3. Makas ve forsepsleri u alkol spreyi kullanarak sterilize edin, ardından yüksek sıcaklıkta sterilizasyon yapın. Bu araçlar Şekil 1C'de gösterilmiştir.
  4. Dalak dokusunu buz üzerinde 100 mm'lik steril figure-protocol-3bir Petri kabına yerleştirin ve yüzey kanını 1x buzlu steril fosfat tamponlu salin (PBS) ile yıkayın. Dalak dokularını steril gazlı bezle kurulayın ve kuruduktan sonra tartın.
    NOT: Doku donmuşsa, devam etmeden önce bir tabakta buz üzerinde 15 dakika çözdürün.
  5. Steril bir transfer pipeti kullanarak süzgecin içine 1 mL steril PBS bırakarak hücre süzgecini (figure-protocol-470 μm) nemlendirin.
  6. Sindirim tamponunu (% 0.1 tip I kollajenaz) bir girdap karıştırıcı ile 1x PBS kullanarak hazırlayın.
    NOT: Her 100 mg dalak dokusu için 10 mL sindirim tamponu kullanın. Bu çalışmada kollajenaz konsantrasyonu, ürün talimatlarına göre seçilmiştir. Diğer doku türleri için, araştırmacıların bu parametreleri doku yoğunluğuna ve bileşimine göre ayarlamaları gerekebilir. Her doku tipi için en uygun koşulları belirlemek için değişen konsantrasyonlarda ve sindirim sürelerinde ön deneyler yapılması önerilir.

2. Doku sindirimi

  1. Dokuyu buz üzerinde bir kültür kabında makasla düzgün küçük parçalar halinde kesin (Şekil 3A) ve steril bir transfer pipeti ile 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın.
  2. Yukarıda belirtildiği gibi dalak dokusu ağırlığına göre tüpe sindirim tamponu ekleyin (Şekil 3B), ardından tüpü 37 °C'de yatay bir çalkalayıcı üzerinde 45°'lik bir açıyla çalkalayın. Sindirim ilerlemesini izleyin ve doku parçaları dağıldığında ve çoğu şeklini kaybettiğinde sindirimi durdurun. Sindirim süresi dokular arasında farklılık göstermelidir. Bu çalışmadaki deney koşullarında sindirim süresi yaklaşık 30 dakikadır.
  3. Fibröz ve daha büyük doku kalıntılarını gidermek için sindirilmiş karışımı oda sıcaklığında (RT) bir hücre süzgecine (Ф70 μm) aktarın.
    NOT: Sindirimden hemen sonra filtrelemeyi tamamlayın.
  4. Süzüntüyü 50 mL'lik yeni bir santrifüj tüpünde toplayın.

3. Diferansiyel santrifüjleme ile eksozom izolasyonu

  1. Santrifüj filtratları 500 x g'da 4 ° C'de 10 dakika boyunca süzülür. Şekil 3C'de gösterildiği gibi, santrifüjlemeden sonra artık hücreler, hücre kalıntıları ve çekirdekler içeren bir pelet görülebilir.
  2. Süpernatanı yeni bir tüpe aktarın ve 4 ° C'de 20 dakika boyunca 3000 x g'da santrifüjleyin. Şekil 3D'de gösterildiği gibi, santrifüjlemeden sonra apoptotik cisimler ve mikrozomlar içeren bir pelet görülebilir.
  3. Süpernatanı yeni bir tüpe aktarın ve 4 ° C'de 30 dakika boyunca 10.000 x g'da santrifüjleyin. Pelet içeren mikro-parçacıklar ve plazma zarı, Şekil 3E'de gösterildiği gibi santrifüjlemeden sonra görülebilir.
  4. Elde edilen süpernatanı 4 ° C'de 2 saat boyunca 120.000 x g'da ultrasantrifüjleyin. Şekil 3F'de gösterildiği gibi, santrifüjlemeden sonra tüpün dibinde bir pelet görülebilir.
  5. Süpernatanı atın, peleti PBS ile yıkayın ve eksozomları elde etmek için 4 ° C'de 2 saat boyunca 120.000 x g'da tekrar ultrasantrifüj edin. Şekil 3G'de gösterildiği gibi, santrifüjlemeden sonra tüpün dibinde bir pelet görülebilir.
  6. İzole eksozomları steril PBS (dalak başına 200 μL) ile çözün ve izole edilen eksozomları -80 °C'de yeni bir 2 mL santrifüj tüpünde saklayın.

4. Transmisyon elektron mikroskobu (TEM) ile eksozom karakterizasyonu

NOT: Ekstrakte edilen Exo'nun vezikül özellikleri gösterip göstermediğini belirlemek için TEM kullanıldı. Elektron mikroskobu ile tanımlanan Exo numuneleri taze numuneler olmalı veya kısa bir süre için 4 °C'de kısa bir süre saklanmalıdır.

  1. Eksozomları (2-6 μg/μL) %2 elektron mikroskobu (EM) dereceli paraformaldehit ile RT'de 2 saat sabitleyin.
  2. Bakır bir ağ üzerine 10 μL eksozom solüsyonu yerleştirin, RT'de 10 dakika inkübe edin, steril damıtılmış su ile durulayın ve fazla sıvıyı emici kağıtla kurulayın.
  3. Bakır ağı 1 dakika boyunca %2 uranil asetat ile boyayın, fazla sıvıyı filtre kağıdı ile kurulayın ve 2 dakika akkor lamba altında kurutun.
  4. Hazırlanan numuneyi 80 kV'da bir transmisyon elektron mikroskobu altında gözlemleyin.

5. Eksozomların boyut dağılımı ve partikül konsantrasyonu ölçümü

  1. Standart polistiren nanopartikülleri (250 nm) nano akış sitometresine yükleyin.
  2. Bir BCA protein test kiti kullanarak Exo numunelerinin protein konsantrasyonunu ölçün. BCA Protein Testi sonuçlarına göre Exo örneğini PBS ile seyreltin (eksozomları 1-10 ng/μL'ye seyreltin), ardından yan saçılma yoğunluğunu (SSI) ölçmek için Exo örneklerini nano akışa yükleyin.
  3. Standart polistiren nanopartiküllerdeki SSI'nin partikül konsantrasyonuna oranına göre Exo konsantrasyonunu hesaplayın.
    NOT: Boyut ölçümü için, gradyan boyutlarına (68 nm, 91 nm, 113 nm, 155 nm) sahip standart silika nanopartiküllerin nano akış sitometresine yüklenmesiyle standart bir eğri oluşturulur. Exo numunesinin yüklenmesi bunu takip eder. Exo'nun boyut dağılımı standart kürlemeye göre hesaplandı.

6. Eksozom proteinlerinin lizis ve immünoblot doğrulaması

  1. Protein analizi için eksozom peletine 100 μL radyo immünopresipitasyon testi (RIPA) lizis tamponu ekleyin.
  2. Kuvvetlice girdap yapın, parafilm ile örtün, RT'de 20 dakika sallayın, sonra tekrar girdap yapın.
  3. Numuneyi toplamak için 30-60 saniye boyunca 1000 x g'da kısa bir süre santrifüjleyin, yeni bir 1.5 mL mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve analize kadar -20 °C ila -80 °C arasında saklayın.
  4. İmmünoblot için, 1x konsantrasyon elde etmek için numuneleri 5x yükleme tamponu ile karıştırın ve jel elektroforezi için hazırlanın.
  5. Tüm doku homojenat kontrolleri isteniyorsa, yukarıda detaylandırıldığı gibi dokuyu parçalamak için bir proteaz inhibitörü ile güçlü bir lizis tamponu kullanın. Ardından, numuneleri 10,000 x g'da 10 dakika santrifüjleyin ve kalan hücre dışı matrisi, tüm hücreleri veya sağlam hücresel kalıntıları atın.
  6. Eksozom veya doku homojenatı içeren numune tamponunu 95 °C'de 5-10 dakika kaynatın. 'luk bir SDS-PAGE jele şerit başına eşit protein yükleyin. Kontrol olarak eşit doku homojenat proteini yükleyin.
  7. Konvansiyonel elektroforez tamponunu kullanarak yaklaşık 2 saat boyunca 80 V'luk bir voltaj altında jel elektroforezine devam edin. Saflaştırılmış lizatlardaki Exo protein ekspresyonunu doğrulamak için western blot analizi yapın ve fraksiyonlardaki nispi Exo bolluğunu karşılaştırın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Dalak kaynaklı eksozomların izolasyonu ve saflaştırılması
Eksozomları fare dalak dokusundan izole etmek için, kollajenaz sindirimi ve diferansiyel ultrasantrifüjlemenin bir kombinasyonunu kullandık (Şekil 2). İlk adımlar, yüzey kanını çıkarmak için dalak dokusunun ön işlemden geçirilmesini ve ardından Tip I kollajenaz ile sindirimi içeriyordu. Bu enzimatik işlem, hücre dışı matris bileşenlerinin parçalanmasını kolaylaştırdı, böylece bütünlüklerini korurken eksozomları ser...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Son zamanlarda yapılan araştırmalar, dalak kaynaklı eksozomların (Spleen-Exo) mide kanserinin tedavisinde kritik bir rol oynadığını bildirmiştir12. Spleen-Exo'nun işlevlerini daha da aydınlatmak için, dalak dokusundan çıkarılması için tekrarlanabilir ve optimal bir yöntem oluşturmak gerekir. Beyin ve karaciğer kanserinden eksozomları izole etmek için protokoller mevcut olsada 13,14, diğer dokular için yönt...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar rekabet eden çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82370281, 81870222), Guangdong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (2022A1515012103) ve Bilim, Zhanjiang Şehri Teknoloji Geliştirme Özel Fonu Rekabetçi Tahsis Projesi (2021A05086) ve Guangdong Tıp Üniversitesi İkinci Bağlı Hastanesi'nden Başlangıç Vakfı (23H03) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
70 ve mikro; m Hücre SüzgeciBiologix Group Co., Ltd.ABD15-1070
Anti CD9 antikoruHücre Sinyalleme Teknolojisi, Inc (CST), ABD983275
Anti GM130 antikoruProteintech Group, Inc.China 66662-1-lg
Anti TSG101 antikoruAbcam Plc, İngiltere125011
Hücre Kültürü KabıWuxi NEST Biotechnology Co., Ltd, Çin704001
Santrifüj tüpüWuxi NEST Biotechnology Co., Ltd, Çin788211
Kollajenaz Tip ISigma-Aldrich Corp., ABDC2674
Masaüstü Termostatik ÇalkalayıcıShanghai bluepard instruments Co., Ltd., ÇinTHZ-100
Elektroforez tamponuWuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Çin G2081-1L
Gelişmiş BCA Protein Test KitiShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Çin P0010S
Akış NanoAnalizörüNanoFCM Inc., ÇinN30E
Floresan / Kemilüminesans görüntüleme sistemi Guangzhou Biolight Biotechnology Co., Ltd., ÇinGelView 6000Plus
HRP Keçi anti-Fare IgGProteintech Group, Inc.China 15014
HRP Keçi anti-Tavşan IgG ProteintechGroup, Inc.China 15015
mikroplaka okuyucuMoleküler Cihazlar, ABDCMax Plus
MicroscissorsŞangay  Tıbbi  Aletler (grup)   Co., Ltd., ÇinWA1010
Mikroskobik cımbızŞangay & nbsp; Tıbbi  Aletler (grup)   Co., Ltd., ÇinWA3010
Multifuge X1R Pro santrifüjThermo Fisher Scientific, ABD75009750
Oftalmik makasŞangay  Tıbbi  Aletler (grup) Co., Ltd.,ÇinY00030
Oftalmik cımbızŞangay  Tıbbi  Aletler (Grup) Co., Ltd., Çin JD1060
Optima XPN-100 Ultrafiltrasyon santrifüjüBeckman Coulter, ABDA94469
fosfat tamponlu salin (PBS)Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd., ÇinP1003
RIPA lizis tamponu (güçlü, inhibitörsüz)Shanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Çin P0013K
CetvelŞarküteri  İmalat  Şirket, Çin
SDS-PAGE Numune Yükleme Tamponu, 5xShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Çin P0015
Transfer PipetiBiologix Group Co., Ltd.USA30-0238A1
Transmisyon Elektron MikroskobuHitachi, JaponyaH-7650
Ultrasantrifüj tüpüBeckman Coulter, ABD355618
Batı Transfer Tamponu Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Çin G2028-1L

Kaynaklar

  1. Meldolesi, J. Exosomes and Ectosomes in Intercellular Communication. Curr Biol. 28 (8), R435-R444 (2018).
  2. Costa-Silva, B., et al. Pancreatic cancer exosomes initiate pre-metastatic niche formation in the liver. Nat Cell Biol. 17 (6), 816-826 (2015).
  3. Crescitelli, R., Lasser, C., Lotvall, J. Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues. Nat Protoc. 16 (3), 1548-1580 (2021).
  4. de Jong, B., Barros, E. R., Hoenderop, J. G. J., Rigalli, J. P. Recent advances in extracellular vesicles as drug delivery systems and their potential in precision medicine. Pharmaceutics. 12 (11), 1006(2020).
  5. Crescitelli, R., et al. Subpopulations of extracellular vesicles from human metastatic melanoma tissue identified by quantitative proteomics after optimized isolation. J Extracell Vesicles. 9 (1), 1722433(2020).
  6. Jensen, C., Teng, Y. Is it time to start transitioning from 2D to 3D cell culture. Front Mol Biosci. 7, 33(2020).
  7. Leung, L. L., Riaz, M. K., Qu, X., Chan, J., Meehan, K. Profiling of extracellular vesicles in oral cancer, from transcriptomics to proteomics. Semin Cancer Biol. 74, 3-23 (2021).
  8. Shah, R., Patel, T., Freedman, J. E. Circulating extracellular vesicles in human disease. N Engl J Med. 379 (10), 958-966 (2018).
  9. Wang, X., et al. An enrichment method for small extracellular vesicles derived from liver cancer tissue. J Vis Exp. (192), e64499(2023).
  10. Vella, L. J., et al. A rigorous method to enrich for exosomes from brain tissue. J Extracell Vesicles. 6 (1), 1348885(2017).
  11. Hoshino, A., et al. Extracellular vesicle and particle biomarkers define multiple human cancers. Cell. 182 (4), 1044-1061.e18 (2020).
  12. Chen, Y., et al. Yiwei decoction promotes apoptosis of gastric cancer cells through spleen-derived exosomes. Front Pharmacol. 14, 1144955(2023).
  13. Useckaite, Z., et al. Proteomic profiling of paired human liver homogenate and tissue-derived extracellular vesicles. Proteomics. 24 (11), e2300025(2023).
  14. Hurwitz, S. N., et al. An optimized method for enrichment of whole brain-derived extracellular vesicles reveals insight into neurodegenerative processes in a mouse model of Alzheimer's disease. J Neurosci Methods. 307, 210-220 (2018).
  15. Lai, J. J., et al. Exosome processing and characterization approaches for research and technology development. Adv Sci (Weinh). 9 (15), e2103222(2022).
  16. Zhang, Y., et al. Exosome: A review of its classification, isolation techniques, storage, diagnostic and targeted therapy applications. Int J Nanomedicine. 15, 6917-6934 (2020).
  17. Roh, Y. J., et al. Adipose tissue-derived exosomes alleviate particulate matter-induced inflammatory response and skin barrier damage in atopic dermatitis-like triple-cell model. PLoS One. 19 (1), e0292050(2024).
  18. Gallart-Palau, X., Serra, A., Sze, S. K. Enrichment of extracellular vesicles from tissues of the central nervous system by PROSPR. Mol Neurodegener. 11 (1), 41(2016).
  19. Kurian, T. K., Banik, S., Gopal, D., Chakrabarti, S., Mazumder, N. Elucidating methods for isolation and quantification of exosomes: A review. Mol Biotechnol. 63 (4), 249-266 (2021).
  20. Menu, E., Vanderkerken, K. Exosomes in multiple myeloma: from bench to bedside. Blood. 140 (23), 2429-2442 (2022).
  21. Shen, S., et al. Effects of lysate/tissue storage at -80 degrees C on subsequently extracted EVs of epithelial ovarian cancer tissue origins. iScience. 26 (4), 106521(2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Dalak EksozomlarıEksozom İzolasyonuDoku Kaynaklı EksozomlarDiferansiyel UltrasantrifügasyonTip I KollagenazGeçirimli Elektron MikroskobuNano-Akış SitometrisiEksozom BelirteçleriBağışıklık YanıtıFare Dalak Dokusu
Fare Dalak Dokularından Elde Edilen Eksozomların İzolasyonu ve Karakterizasyonu
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.