Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İn Vivo Yaprak Aşılaması: Kök Pamukçuk Hastalığının Kavak Yetiştiriciliğinde Hibrit Klonların Hastalık Direncini Değerlendirmek İçin Alternatif Bir Yöntem

1.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/67290

⸱

20 Eylül 2024

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bir in vivo yaprak aşılama yöntemi kullanarak kavağın kök pamukçuk patojenlerine karşı direncini değerlendirmek için adım adım bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem özellikle Çin'deki kavak damızlık döllerde Cytospora chrysosperma ve Botryosphaeria dothidea pamukçuk hastalığı direncinin büyük ölçekli değerlendirmesi için uygundur.

Özet

Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr.) ve Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. Çin'deki kavak plantasyonlarında bulunan ve bazen tüm kavak fidelerini yok edebilen veya olgun kavak ormanlarına ciddi şekilde zarar verebilen iki büyük orman hastalığıdır. Hibrit ıslah, ağaç hastalıklarını kontrol etmenin ve yönetmenin en doğrudan ve etkili yöntemidir. Bununla birlikte, in vitro kök inokülasyonuna dayalı olarak hastalık direncinin değerlendirilmesi veya hastalığa dirençli klonların seçilmesi verimsiz, zaman alıcı ve pahalıdır ve kavak sapı pamukçuk hastalığının melez üremesinin gelişimini sınırlar. Bu çalışmada, in vivo yaprak aşılaması yoluyla kök pamukçuk patojenlerine karşı hastalık direncini değerlendirmek için alternatif bir yöntem önerdik. Bu yöntemde kullanılan test malzemeleri, 1 yaşındaki kavak fidanları üzerinde olabileceği gibi, serada veya tarlada bulunan çok yıllık kavakların tek yıllık dalları üzerinde de olabilir. Bu alternatif yöntemin kritik adımı, aşılayıcı yaprakların seçimidir: 5-7. yeni olgunlaşmış yapraklar en uygun olanı olabilir. Yaprak aşılama yönteminin ikinci kritik adımı, iğne delikleri yoluyla bitki yapraklarında yaralar açmak ve hastalık şiddetini ölçmek için yeterli lezyonları sağlamaktır. Kavak ıslahının erken aşamasında üretilen yeterli sayıda yaprak için, bu in vivo yaprak aşılaması, hastalığa dirençli kavak klonlarının pamukçuk patojenlerini köklendirmek için hızlı, doğru ve büyük ölçekli taramasına katkıda bulunur. Ayrıca, bu yaprak aşılama yöntemi, kök pamukçuk hastalığı patojeni C. chrysosperma, B. dothidea veya diğer kavak sapı pamukçuk patojenlerinin patotiplerinin taranması için de etkili bir yöntem olarak hizmet edecektir.

Giriş

Esas olarak iki nekrotrofik patojenin neden olduğu kavak sapı pamukçuk hastalıkları, Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr. ve Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. Çin'in Kuzeydoğu, Kuzey ve Kuzeybatı (Üç Kuzey) bölgelerindeki kavak tarlalarının gelişimini ve hayatta kalmasını ciddi şekilde tehdit ediyor. Hibrit ıslah, ağaç hastalıklarını kontrol etmek ve yönetmek için en doğrudan ve verimli yöntemdir; Bununla birlikte, yüksek verimli, hızlı büyüyen veya diğer kavak melezi klonları için ıslahtaki ilerleme ile karşılaştırıldığında, kavak pamukçuk hastalığı için direnç ıslahı üzerine araştırmalar azdır. Hastalığa di....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Aft patojeni için mantar kültürü

  1. Mantar suşları için patates dekstroz agar (PDA; patates ekstraksiyonu 6.0 g, dekstroz 20.0 g, agar 20.0 g) kültür ortamını hazırlayın; Yukarıdaki malzemeleri 1000 mL'ye kadar suda çözün, ortamı 100 ° C'de 10 dakika boyunca tamamen çözün.
  2. PDA ortamını 25 mL'lik tüplere dökün (her biri 15.0 mL içerir); Tüm tüpleri 121.1 °C'de 30 dakika sterilize edin. Ortamı kültür plakalarına (9.0 cm çapında) dökün ve plakaları oda sıcaklığında (RT) soğutun.
  3. PDA ortamında 28 ° C'de 7 gün boyunca kültürlenen mantar patojeninin miselyumunu ~ 0,5 cm kare küpler halinde kesi....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu protokolde, kök pamukçuk patojeni C. chrysosperma ile enfekte olmuş 48 kavak melezi klonda şematik iş akışı gerçekleştirilmiştir (Şekil 1). Kavak melezi klonları, Pekin'deki Çin Ormancılık Akademisi'ndeki (CAF) fidanlıkta yetiştirilen P. deltoides'in melezleme soyunun bir parçasıdır.

Kök pamukçuk patojeni C. chrysosperma izolatı CZC, kavak pamukçuk hastalığının 6,7,8,9

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu protokol, kavak kanserine dirençli patojenler için hızlı ve etkili bir aşılama yöntemi sağlar ve kavak kanserine dirençli patojenlerin hibrit ıslahı ve kök pamukçuk patojenlerinin patojenite taraması gibi büyük ölçekli hastalık direnci taraması gerektiren araştırma alanları için uygundur.

Yöntemin ilk kilit noktası, olgunlaşmış gövde/dallar yerine yeni olgunlaşmış yaprak aşılaması ile hastalık direncinin değerlendirilmesidir. Sonuç olarak, kök pamukçuk has.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu araştırma, Merkezi Kamu Yararına Bilimsel Kurum, Devlet Anahtar Ağaç Genetiği ve Islahı Laboratuvarı Temel Araştırma Fonu (hibe numarası CAFYBB2020ZY001-2) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (hibe numarası 32171776) tarafından Jiaping Zhao'ya ortaklaşa finanse edildi.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Alüminyum folyoBiosharp BS-QT-027B
C. chrysosperma izolatıÇin Ormancılık Kültürü Toplama MerkeziCFCC86775Laboratuvarımız tarafından ayırma ve koruma
Cytospora chrysospermaBitki Fizyolojisi Laboratuvarı, Ormancılık Yeni Teknoloji Enstitüsü, Çin OrmancılıkAkademisiNCBI erişim numarası: rRNA-ITS için MK994101 ve EF1 ve alfa için MN025273; gen    CGMCC numarası: 40575Laboratuvarımız tarafından ayırma ve koruma
Epson Perfection V370 FotoğrafEpson V370Tarayıcı; Yaprakları görüntüye tarayın
PDA (Patates Dekstroz Agar) SolarbioP8931Mantar büyümesi için besin sağlar
PE plastik filmYapraklardaki mantarları sabitlemek için
Populus alba var. PyramidalisBitki Fizyolojisi Laboratuvarı, Ormancılık Enstitüsü Yeni Teknoloji, Çin Ormancılık AkademisiLaboratuvarımız SPSS
Veri analizi yazılımı
Termostatik inkübatörShanghai Kuntian Laboratory Instrument Co., LtdKTD-6000Mantar büyümesi için bir ortam sağlayın
Tough TG-6 kameraOLYMPUSHastalıklı yaprakların fotoğraflarını çekmek için
IBM tarafından yetiştirilen

Kaynaklar

  1. Du, K., et al. Genetic analysis and seedling selection of the poplar progenies of Aigeiros section. Journal of Huazhong Agricultural University. 28 (5), 624-630 (2009).
  2. Shi, Y. Identification of canker resistance to selection poplar clones [Mas....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Patojen TaramasıNekrotik LezyonlarImageJ AnaliziPatates Dekstroz AgarHastalık Derecelendirmesi