Deneysel akut nöbet için bir hayvan modeli olarak düzlemsel

Özet

Nöbetler çeşitli fonksiyonları ve yaşam kalitesini olumsuz yönde etkiler. Planarya solucanları, nöbet fenotiplerini ve bozucu motilitelerini değerlendirmek için değişen konsantrasyonlarda kemokonvülsanlara maruz bırakıldı. Bu çalışma, insanlarda akut nöbetler için bir model olarak planarya solucanlarının kullanılmasını önermektedir ve epilepsi için ilaç geliştirmede önem taşımaktadır.

Özet

Epilepsi, tekrarlayan spontan nöbetlerle karakterize en sık görülen nörolojik hastalıklar arasındadır. Nöbetler, kontrolsüz, aşırı senkronize nöral hücre aktivitesinin klinik bir tezahürünü temsil eder. Nöbetlerden kaynaklanan beyin hasarının derecesi, sürelerine ve yoğunluğuna bağlıdır. Ne yazık ki, epilepsi için etkili bir çare yoktur. Bu araştırmanın amacı, planarya kurdu Dugesia dorotocephala'nın akut nöbetleri hedefleyebilecek epilepsi tedavilerinin belirlenmesine ve geliştirilmesine yardımcı olacak bir model olarak hizmet edip edemeyeceğini değerlendirmektir. Şu anda, nöbet önleyici ilaçları (ASM) değerlendirmek için deniz modelleri gibi çeşitli modeller kullanılmaktadır. Ancak, çok pahalıdırlar ve etik kaygılar vardır. Alternatif olarak, omurgasız modelleri, ASM için ilaç keşif sürecinde uygun maliyetli bir araştırma fırsatı sunar. Planarya, yassı solucan ailesine aittir ve deniz, tatlı su ve karasal ortamlarda yaşar. Dugesia dorotocephala Kuzey Amerika'daki baskın su planaryası türüdür. D. dorototosefala , diğer omurgasızlardan veya daha büyük hayvanlardan farklı olarak, maliyet etkinliği, omurgalı benzeri nöronları ve ölçülebilir davranışları nedeniyle epilepsi çalışmaları için uygun bir omurgasız modeli olarak sunulmaktadır. Yaş, hafıza ve rejenerasyon ile ilgili çeşitli farmakoloji ve çevresel toksikoloji çalışmalarında kullanılmıştır. Bu çalışmada, planaryalar, maruz kalma durumlarındaki davranışlarını incelemek için yaygın bir kemokonvülsan olan farklı konsantrasyonlarda pilokarpine maruz bırakıldı. Gözlemi takiben, planarya ötenazi yapıldı ve nörohistolojik değerlendirme için formaldehit veya Golgi solüsyonunda korundu. Planaryada altı farklı davranışsal fenotip gözlendi: dorsal salınımlar, kafa salınımları, kuyruk sırt genişlemesi, C şekli, kafa hareketi ve kuyruk hareketi. Dorsal salınım frekansları deney grupları arasında kontrol grubuna göre anlamlı olarak artmış ve doz bağımlılığı sergilemiştir. Ek olarak, pilokarpin planaryanın hareketliliğini bozdu. Planaryadaki pilokarpin kaynaklı nöbetler, epilepsiden muzdarip insan hastalar için terapötik müdahalelerin geliştirilmesinde gerekli olan akut nöbetleri ve nöbet önleyici ilaçları değerlendirmek için bir model görevi görebilir.

Giriş

Belirgin bir neden olmaksızın 24 saat içinde iki veya daha fazla nöbet ile karakterize edilen epilepsi, dünya çapında ~ 50 milyon insanı etkilemektedir¹. Bunların arasında 10-15 milyon bireyin ilaca dirençli epilepsi hastası olduğu bildirilmektedir². Bu nedenle epilepsi ilaçlarının araştırılması çok önemlidir. Bu durum, boş bakıştan vücut sertleşmesine ve sallanmasına kadar değişen kısmi veya genelleştirilmiş istemsiz hareketin kısa bölümlerini gerektirir ve beyindeki elektriksel aktivite dalgalanması ile bağlantılıdır³.

Tarihsel olarak....

Protokol

NOT: Genel deney tasarımı Şekil 1'de açıklanmıştır.

1. Davranış fenotip tahlili

1. Kaynak suyunda çözünmüş 1 mM ve 2 mM pilokarpin konsantrasyonlarını hazırlayın ve sadece Kaynak Suyu ile kontrol edin.
2. Her çözeltinin 3 mL'sini 4 x 3 oyuklu bir plakaya pipetleyin, her sıra farklı bir pilokarpin konsantrasyonunu temsil eder.
3. Ucu kesilmiş bir transfer pipeti kullanarak 12 kuyucuğun her birine yaklaşık 2 haftalık olan, laboratuvarda yetiştirilen bir Dugesia dorotocephala yerleştirin.
   NOT: Ucu, düzleme zarar vermeden sığacak ....

Sonuçlar

Aşağıdaki davranış, değişen pilokarpin konsantrasyonlarına maruz kalan planarya tarafından gözlenmiştir:
Dorsal salınımlar: Planaryanın vücudunun kafatası ucundan kaudal uca doğru hareket eden kabarcık benzeri bir oluşum.
Kafa salınımları: kurbağa yavrusu benzeri bir görünüm oluşturan düzlemin başı tarafından kabarcık benzeri oluşum.
C-Şekli: kafa saat yönünde hareket eder ve kuyruk bir C oluşturmak için saat yönünün tersine hareket eder.
Kafa hareketi: Planaryanın başı anide.......

Tartışma

Bu çalışma, farklı konsantrasyonlarda planaryada pilokarpinin neden olduğu davranışı göstermiştir. En uygun davranış salınımlı dorsal genişlemeydi, çünkü bu davranış planarya ^{9,10,11,12'deki} nöbet benzeri davranışla ilgili diğer çalışmalarda belgelenmemiştir. Pilokarpinin planaryada nöbet benzeri davranışlara neden olduğu mekanizma hala bilinmemektedir. Bununla.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1.5 mL santrifüj tüpleri
% 4 paraformaldehit çözeltisi	Himedia	TCL119
Sulu montaj ortamı	Clini Sciences	NB-47-02240-30ML
Beherler (test edilen her konsantrasyon için bir tane)
Carolina Springwater	carolina	132450
Kriyostat
Seyreltilmiş primer ve sekonder antikorlar
Etanol (%100)	sigma Aldrich
EthosVision XT 16	noldus
Fiji Sürüm 2.9.0
Jelatin kaplı slaytlar	sigma Aldrich	643203
Golgi Antikoru 1H6	DSHB	AB_2619608
Golgi lekesi kit_	Neuroscience Associate	PK 401/401A
Hidrojen Peroksit
Metanol
Montaj ortamı	termo fischer bilimsel
OCT bileşiği
PBS tampon	sigma Aldrich	P4417
Süt Tozu
Kalay folyo
Transfer pipetleri
Ksilen