Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Lycoris aurea Bitki Popülasyonlarının Florokrom Bantlama ve 45S ve 5S rDNA-FISH Kullanılarak Karşılaştırmalı Karyotip Analizi

758 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/67363

⸱

29 Kasım 2024

 ,  , 

Bu makalede

Özet

Bu protokol, kombine PI ve DAPI kromozom boyama, 18S-5.8-26S rRNA gen bölgeleri (45S rDNA bölgeleri) ve 5S ribozomal DNA probları ile floresan in situ hibridizasyon (FISH) kullanarak sekiz Lycoris aurea (L'Her) Herb popülasyonundaki heterokromatin dağılımını araştırır.

Özet

Sekiz popülasyondaki karyotip varyasyonunu anlamak için, kromozomal ölçümler, floresan bantları ve rDNA FISH sinyalleri kullanılarak ayrıntılı karyotipler titizlikle oluşturuldu. 45S rDNA bölgelerinin sayısı, popülasyon başına bir ila beş çift arasında değişir ve karyotip başına en yaygın sayı dört çifttir. 45S rDNA lokusu ağırlıklı olarak kromozomların kısa kollarında ve terminal bölgelerinde bulunurken, 5S rDNA lokusu esas olarak kısa kolda ve terminal veya proksimal bölgelerde bulunur. HBWF, HNXN, HBBD ve HNZX popülasyonları, GXTL, HBFC ve SCLS'de olduğu gibi 45S rDNA bölgelerinin benzer bir dağılımını gösterdi ve bu da benzer 45S rDNA site dağılımlarına sahip popülasyonlar arasında yakın bir ilişki olduğunu gösterdi. İncelenen tüm popülasyonların karyotipleri simetriktir, kararlı ve yarı kararlı sentromerler veya sadece kararlı sentromerler içerir. MCA ve CVCL'nin dağılım grafikleri, karyotipik yapılarını etkili bir şekilde ayırt eder. Analiz altı kantitatif parametre (x, 2n, TCL, MCA, CVCL, CVCI) içerir. Ek olarak, sonuçlar, bu altı parametreye dayanan PCoA'nın sekiz popülasyon arasındaki biyolojik karyotip ilişkilerini belirlemek için sağlam bir yöntem olduğunu göstermektedir. Lycoris popülasyonlarındaki kromozom sayısı x = 6'dır.-8. Mevcut çalışma ve literatüre dayanarak, bu popülasyonların genomik farklılaşması, genom boyutu, heterokromatin, 45S ve 5S rDNA bölgeleri ve karyotip asimetrisi açısından tartışılmıştır.

Giriş

Lycoris , birkaç önemli bahçe bitkisi içeren bir ailedir1. Lycoris aurea (L'Hér.) Ot. uzun bir geçmişe sahip geleneksel bir Çin şifalı bitkisidir. Fitokimyasal analizler, Lycoris aurea (L'Her.) Herb, asetilkolin duyarlılığını artırabilen ve Alzheimer hastalığını kolinesteraz inhibitörleri2 olarak tedavi etme potansiyeline sahip galantamin ve diğer alkaloidleri içerir.

Daha yüksek bitkilerde, karyotip analizi, bitki biyolojisi için önemli pratik çıkarımlarla genetik ve fiziksel haritaları entegre etmek için çok ö....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipman Malzeme Tablosunda ayrıntılı olarak açıklanırken, kullanılan problar Ek Dosya 1'de verilmiştir.

1. Apikal kromozomların hazırlanması

  1. Hidroponik ile kök salın. Ampulün toprak üstü kısmını çıkardıktan sonra, Song ve ark.35 tarafından açıklanan yöntemi izleyerek suyu her 3 günde bir değiştirerek suyla dolu konik bir şişeye koyun.
  2. Aktif olarak büyüyen kök uçlarını yaklaşık 1.0-2.0 cm uzunluğa ulaştıklarında kesin ve 28 ° C'de 1.0 saat boyunca doymuş α-bromonaftalin içind....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Titiz enzim daldırma ve alevle kurutma (EMF) yöntemini kullanarak, Lycoris aurea'nın (L'Hér.) dağınık ve iyi farklılaşmış metafaz kromozomları Bitki elde edildi ve Lycoris aurea'nın sitogenetik kromozom karyotipi oluşturuldu (Şekil 1). En yüksek yoğuşma derecesine sahip metafaz kromozomları, azaltılmış morfolojik farklılıklar nedeniyle karyotip analizi için uygun değildir. Bununla birlikte, haploid kromozomların (TCL) toplam uzunluğu popülasyonlar arasında karşılaştırılabil.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Lycoris aurea'nın (L'Hér.) hazırlanması Bitki kökü kromozomları birkaç kritik adım içerir: (1) hidroponik yoluyla kök yetiştirmek, (2) kök uçlarını doymuş α-bromonaftalin ile muamele etmek, (3) kökleri bir alkol-asetik asit çözeltisi kullanarak sabitlemek, (4) bir enzim çözeltisi ile kök uçları üzerinde enzimatik hidroliz yapmak ve (5) sindirilmiş kökleri iyice ezmek ve slaytları bir alkol lambası alevi üzerinde kurutmak.

Sitogenetik çalışmalarda kary.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, rekabet eden hiçbir çıkar bulunmadığını beyan etmişlerdir.

Teşekkürler

Bu çalışma Çin Doğa Bilimleri Vakfı (32070367) tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AlkolSangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd.A500737-0005(% 70,  %90,  % 100)
1 kez; TNTSangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd.B5481081 kez;, 10 kez;
2 kez; SSCSangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd.B5481092 kez;, 20 kez;
45S  rDNASangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd.TAMRA her iki uca da eklenir (5 've 3' uçları)
4'6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.E60730320ml
5S  rDNASangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd.5 'end plus 6-FAM (FITC)
Adobe Photoshop yazılımıAdobe Systems IncorporatedCS6
Alpha bromo-naftalinSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A602718Doygunluk
Tükenmişlik önleyici ajanSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.Vectashield H-100010 mL
Biyokimyasal inkübatörŞangay Yiheng Bilimsel Enstrüman A.Ş., LTDLRH-70
SelülazSangon Biotech (Şangay) Co., Ltd.A42606810 g
Sitrik asitSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A50170210 g
Deiyonize formamid (FAD)Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A600211-05000.7
Dekstran sülfatSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A42822910 mL
Floresan yerinde hibridizasyon cihazıABD/Abbott ThermoBriteS500-24
Floresan mikroskobuOlympus  Çin  Co.ltdBX60
Buzlu asetik asitSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A501931500 mL
HClAladdin Reaktifi & nbsp; Co.   Ltd. (Şangay)H399657 500 mL
Buz makinesiDan Ding Shanghai International Trade Co., Ltd.ST-70
Leica biyolojik mikroskopAlmanya Leica Instrument Co., LTDDM6000B
Metil alkolSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A601617500 mL
MetMorph yazılımıMoleküler CihazlarSürüm 7.35
FırınThermo Scientific & Trade; Heratherm ve ticaret;THM # 51028152
PektinazSangon Biyoteknoloji (Şangay) Co, LtdA00429710 g
PepsinSangon Biotech (Şangay) Co., Ltd.1.07185100 g
Propidyum iyodür (PI)Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A4252591 g
RNaseASangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.R464210 mg
Somon sperm DNA'sı (ssDNA)Aladdin Reaktifi & nbsp; Co.   Ltd. (Şangay)D1198711 g
Sodyum sitratAladdin Reaktifi & nbsp; Co.   Ltd. (Şangay) S189183Windows 10.0 için 10 g
Statistica;İstatistiksel analiz için

Kaynaklar

  1. Heywood, V., Casas, A., Ford-Lloyd, B., Kell, S., Maxted, N. Conservation and sustainable use of crop wild relatives. Agric Ecosyst Environ. 121 (3), 245-255 (2007).
  2. Rong, W., Sun, J., Zhang, H., Wang, H., Liu, H. Cloning and characterization....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

45S rDNA Bölgeleri5S rDNA BölgeleriKromozom SayısıKaryotip VaryasyonuGenom FarklılaşmasıKaryotip Asimetrisi

Bu makale yayımlandı

Video yakında