Protokol, farelerde Ultraviyole B maruziyetinin sistemik ve lokal cilt etkilerinin bir çalışmasını açıklar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Protokol, farelerde Ultraviyole B maruziyetinin sistemik ve lokal cilt etkilerinin bir çalışmasını açıklar.
Ultraviyole B (UVB) radyasyonu (280-320 nm) 1928'den beri kanserojen olarak kabul edilmekte ve güneşe maruz kalmanın en aza indirilmesine yol açmaktadır. Bununla birlikte, epidemiyolojik çalışmalar, güneşe maruz kalmanın yaşam beklentisinin artması ve kardiyovasküler hastalıkların ve kolon ve endometriyal kanser gibi bazı kanserlerin insidansının azalması ile ilişkili olduğunu göstermektedir. UVB maruziyeti ayrıca karaciğer metabolizmasını etkiler, hepatosellüler lipotoksisiteye karşı korur ve metabolik sağlığı etkiler. Bu etkiler kısmen D vitamini sentezinden kaynaklanır, ancak bazıları D vitamininden bağımsızdır. Ayrıca, UVB ile fototerapi immünomodülatör özelliklere sahiptir ve vitiligo ve sedef hastalığı gibi cilt rahatsızlıklarını tedavi ederken aynı zamanda sistemik bağışıklık sistemini de etkiler. UVB'nin geniş fizyolojik etkileri göz önüne alındığında, bu etkilerin çoğunun arkasındaki mekanizmayı anlamada boşluklar vardır. Günlük düşük seviyeli UVB maruziyetinin erkek farelerde gıda arama davranışını geliştirdiğini, ancak cilt adipositlerinden ghrelin salgılanmasının artması nedeniyle dişilerde olmadığını gösterdik. Kadınlarda östrojen, adipositlerin p53 aktivitesini inhibe eder, ghrelin yükselmesini bloke eder ve UVB radyasyonuna cinsiyete bağlı bir yanıt gösterir. Ek olarak, epidermal keratinositlerde UVB ile indüklenen p53 aktivasyonu, hipotalamus-hipofiz-gonadal ekseni aktive ederek cinsel davranışı ve yumurtalık pro-fertilitesini indükler. Bu makale, bir C57BL/6J fare modeli kullanarak düşük UVB radyasyonunun lokal ve sistemik etkilerini incelemek için bir protokolün ana hatlarını çizmektedir. Temel unsurlar arasında UVB dozlarının hassas kalibrasyonu, muhafaza koşulları ve tutarlı maruziyeti sağlamak için dikkatli epilasyon yer alır. Fareler, sağlık ve davranış değişikliklerinin izlenmesiyle birkaç hafta boyunca kademeli bir UVB maruz kalma rejimine tabi tutulur. Pigmentasyon ölçümleri yoluyla radyasyon verimliliğinin doğrulanması için yöntemler de detaylandırılmıştır. UVB dozlarının kalibrasyonunu, titiz hayvan bakımını ve metodolojik kontrolleri vurgulayarak, bu protokol UVB maruziyetinin kapsamlı etkilerinin incelenmesini kolaylaştıracak ve terapötik yararları ve risklerinin incelikli bir şekilde anlaşılmasına katkıda bulunacaktır.
Dünya yüzeyine ulaşan güneş radyasyonunun frekansları arasında ultraviyole (UV), UVA radyasyonu (320-400 nm) ve UVB radyasyonu (280-320 nm) bulunur. UVB bir mutasyon indükleyicisidir. UV, 1928'dekanserojen olarak kabul edildi 1 ve 1900'lerin ortalarından itibaren, cilt kanserini önlemek için ihtiyati bir önlem olarak güneşe maruz kalmanın azaltılması önerildi2. UVB açıkça cilt kanseri için çevresel bir tetikleyici olmasına rağmen, son on yıldayapılan araştırmalar 3 grubumuzdan 4,5,6 yapılan son çalışmalarla UVB'nin fizyolojik sistemler üzerinde geniş etkileri olduğunu göstermiştir. 20 yılı aşkın bir süredir takip edilen bir kadın kohortu üzerinde yapılan bir araştırma, güneşten kaçmayan kadınlarda yaşam beklentisinin 2 yıl daha yüksek olduğunu ortaya koydu7. Ek çalışmalar, güneşe maruz kalmanın kardiyovasküler hastalıkta ve genel mortalitede azalma ile ilişkili olduğunu göstermiştir 8,9,10. Güneş ışığı ile kolon kanseri ve endometriyal kanser arasında ters korelasyonlar da bildirilmiştir8. UVB maruziyeti ayrıca karaciğer metabolizmasını11 indükler, hepatosellüler lipotoksisite ve metabolik hastalıklara karşı korur ve endorfinler ve cinsellikle ilgili davranışlar üzerinde olumlu etkileri vardır 3,6. Bu kanıtlar, güneşe maruz kalmaktan kaçınmanın insan sağlığı üzerindeki zararlı etkilerini göstermektedir. Güneşe maruz kalmanın yararlı etkileri esas olarak D vitamini üretiminin indüksiyonuna bağlanmıştır, ancak güneş ışığının sağlık yararlarının en azından bir kısmı D vitamini seviyelerinden bağımsızdır 4,6,12
Deri vücudun en büyük organıdır ve çevresel stres faktörlerine karşı ilk savunma hattıdır. Cildin epidermal ve dermal tabakaları, farklılaşmamış, kendini yenileyen keratinositler ve melanositlerden oluşan bazal epidermal bir tabaka ile ayrılır10. Terminal farklılaşmasının artan aşamalarında keratinositler üst epidermal tabakada bulunur. Dermis, fibroblastları ve kan damarlarını içerir ve hipodermis esas olarak adipositlerden oluşur. Deri, androjen reseptörü ve kortikotropin salgılayan hormon reseptörü gibi çoklu hormon reseptörleri deride eksprese edildiğinden, dermato-endokrin bir organdır, bu da hormonların derideki süreçleri parakrin ve otokrin yollarla etkilediğini düşündürür 13,14,15. Cilt aynı zamanda bir hormon üreticisidir. Bununla birlikte, birkaç istisna dışında, deride hormon üretimi ve kana salınması belgelenmemiştir ve ekspresyon tetikleyicileri bilinmemektedir (16'da gözden geçirilmiştir).
UVB'nin cilt hastalıklarında terapötik potansiyele sahip olduğu gösterilmiştir. Poralen-UVA ve dar bant UVB tedavisini içeren fototerapi, jeneralize vitiligo17 için temel tedavi yöntemidir. Fototerapiye yanıt, tedavinin başlamasından 6 ay sonra hastaların% 74'ünde ve 12 ay sonra hastaların% 75'inde meydana geldi18. Vitiligoda fototerapinin etki mekanizması iyi anlaşılmamıştır. Terapötik etkisi, hücre döngüsü kinetiği üzerindeki etkilerin, sitokin ekspresyonundaki değişikliklerin, melanositler üzerindeki etkilerin ve immünomodülasyonun bir kombinasyonunu içerir. Fototerapinin cilt bağışıklığı üzerindeki etkilerini inceleyen çok sayıda çalışmayapılmıştır 19,20,21; Bununla birlikte, sistemik etkiler, özellikle vitiligo bağlamında tam olarak anlaşılamamıştır. Bir çalışmanın fototerapi tedavisinden sonra proinflamatuar sitokinlerde bir azalma ve düzenleyici T hücrelerinde bir artış gösterdiği sedef hastalığının aksine, vitiligo'da, düzenleyici T hücrelerinin sayısı UV fototerapi ile azalmıştır21.
UVB'nin beyin14,15, böbreküstü bezleri22, yumurtalıklar 5,6, testisler6, karaciğer11 ve lenf düğümleri23 üzerinde etkileri olmasına rağmen, UVB'nin sistemik sistemleri modüle ettiği mekanizmalar çoğunlukla bilinmemektedir. Bu araştırma protokolü, UVB maruziyetinin kapsamlı etkilerinin incelenmesini kolaylaştıracak UVB maruziyetinin sistemik ve lokal (cilt) etkilerini incelemek için bir fare modelini açıklamaktadır. UVB fare modeli, cilt fizyolojisi, dermatoloji ve cilt kanseri, özellikle melanom alanlarında geniş ilgi görmektedir. Bu yöntemin genel amacı, ciltle ilgili bilimsel araştırma soruları için UVB fare modelini geliştirmek için basit ama sağlam, etkili bir protokol sağlamaktır. Protokol, fizyolojik koşullar altında epilasyon ve UVB maruziyeti ile ilişkili cilt eriteminin zorluklarının nasıl üstesinden gelineceğini açıklar ve UVB'nin cilt üzerindeki lokal ve sistemik etkilerinin incelenmesinde etkilidir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklanan tüm deneysel prosedürler, Tel Aviv Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin (IACUC izni: 01-20-043) yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. Deney için farelerin alışması
2. Fareleri barındırmak
3. Tıraş ve epilasyon
4. UVB maruziyet kurulumu
5. UVB maruziyeti
6. UVB maruziyet analizi
NOT: Fareler, AVMA Yönergelerine göre CO2 boğulması kullanılarak ötenazi yapıldı.
7. Hayvan bakımı
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu yöntem belgesi, UVB'ye maruz kalan fare modelini oluşturmanın ayrıntılı adım adım prosedüründen bahseder. Şekil 1, UVB'ye maruz kalmadan önce sırt tarafındaki temsili C57BL/6J farenin traşlı alanını açıkça göstermektedir ve sırt bölgesinin P-60'ının traş edildiğini göstermektedir. Tıraş protokolü, dermatolojik çalışmalar için son derece önemli olan cilt eritem belirtisi göstermez. Şekil 2, Pleksi cam hazneye yerleştirilmiş ayrı UVB maruziyet odasındaki UVB la...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
UVB uzun zamandır cilt kanserleri için çevresel bir risk faktörü olarak kabul edilmektedir; bununla birlikte, son çalışmalar UVB etkilerinin daha geniş bir spektrumunu aydınlatmıştır3. UVB'nin sistemik etkilerinin daha derin bir şekilde anlaşılmasını sağlayan çalışmalara ihtiyaç vardır. Klinik ortamlara kıyasla temel araştırmalarda kullanılan farklı dozlar, UVB etkilerini anlamamızı zorlaştırmakta ve bu boşlukları dolduran araştırmaların önemini vurgulamaktadır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
C.L., Avrupa Birliği'nin Horizon 2020 araştırma ve inovasyon programcısı (hibe sözleşmesi no. 726225), Karmaşık İnsan Hastalıkları Merkezi'nde I-CORE Gen Yönetmeliği (no. 41/11) ve İsrail Bilim Vakfı (ISF; hibe 129/13) kapsamında Avrupa Araştırma Konseyi'nden hibe desteğini kabul etmektedir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Dezenfektan | Dostluk uluslararası | Uygulanamaz | |
| Pozlama odası | Evde yapılmıştır | Uygulanamaz | |
| Tüy dökücü krem | Veet | Uygulanamaz | |
| Saç tıraş makinesi | Heiniger | 707-303 120V ABD | |
| İzofluran | Piramal Yoğun Bakım | Uygulanamaz | |
| İzofluran sistemi | Kent Bilimsel | VetFlo-1210S | |
| PBS | Sigma Aldrich | TMS-012 Serisi | |
| Pleksi-cam hazne | Evde yapılmıştır | Uygulanamaz | |
| UVB lambası | Ultraviyole Ürünler | XX Serisi - 15 Watt | |
| UVX radyometre | Ultraviyole Ürünler | 97-0015-02 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.