Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Kadın Drosophila melanogaster Germline Kök Hücre Nişlerinin Genişletilmiş Canlı Görüntülenmesi

1.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/67389

⸱

20 Aralık 2024

 ,  , 
1Centro Andaluz de Biología del Desarrollo, CSIC/Universidad Pablo de Olavide/JA, 2Departamento de Genética, Facultad de Biología, Universidad de Sevilla

Bu makalede

Özet

Burada, Drosophila yumurtalık nişindeki germ hattı kök hücrelerinin (GSC'ler) asimetrik bölünmesinin canlı görüntülemesini gerçekleştirmek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Spektrozom proteini Par-1'in yeşil floresan proteini (GFP) füzyonunu her yerde ifade eden bir transgenik çizgi kullanıyoruz.

Özet

Canlı görüntüleme yöntemleri, dinamik hücresel süreçlerin ayrıntılı ve gerçek zamanlı olarak analiz edilmesini sağlar. Drosophila yumurtalık, zaman içinde hücre bölünmesi, gövde, farklılaşma, göç, apoptoz, otofaji, hücresel yapışma vb. gibi sayısız gelişimsel sürecin dinamiklerini keşfetmek için mükemmel bir modeli temsil eder. Son zamanlarda, dişi Drosophila GSC nişinin genişletilmiş bir ex vivo kültürünü ve canlı görüntülemesini uyguladık. Örnek olarak bir GFP::P ar-1 transgeni barındıran bir Drosophila hattı kullanan bu yöntem, GSC'lerin nişleri içindeki asimetrik bölünmesinin görselleştirilmesine ve hücre döngüsü boyunca spektrozom morfolojisindeki değişikliklerin tanımlanmasına izin verir. Burada, Drosophila germaria'nın ex vivo kültürü için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz ve bu da dişi GSC nişinin uzun süreli görselleştirilmesini sağlıyor. Daha da önemlisi, bu protokol, stok merkezlerinde ve / veya Drosophila araştırma topluluğunda bulunan çok sayıda floresan etiketli ilgili proteine sahip canlı görüntüleme GSC'lerine geniş ölçüde uygulanabilir.

Giriş

Biyolojik süreçlerin canlı görüntülenmesi, doğrudan deneysel kanıt elde etmede etkilidir. Gelişmiş konfokal mikroskopi ve metodolojilerin optimizasyonunun kombinasyonu, çoklu biyolojik olayların yüksek hassasiyetle araştırılmasına izin verir. Doku manipülasyonu ve diseksiyonu, numune hazırlama ve koruma ve mikroskopi edinme ayarları gibi protokollerdeki adımların optimize edilmesi, elde edilen sonuçların güvenilirliğini ve sağlamlığını en üst düzeye çıkarmak için kritik öneme sahiptir. Burada, özellikle Drosophila melanogaster yumurtalıklarına odaklanan genişletilmiş görüntüleme için numuneleri izlemek için bir protokol sunuyoruz. Drosophila melanogaster yumurtalığı, çok çeşitli gelişimsel süreçlerin analizi için mükemmel bir model sistemdir. Diğerlerinin yanı sıra, meyve sineği Drosophila melanogaster'in bu üreme organı, çok iyi tanımlanmış bir yetişkin kök hücre nişi içerir. Bu GSC nişi, yetişkinlik döneminde dişi gametlerin gelişimini sürdürür. Drosophila yumurtalıkları, germaryumda yumurta odalarının geliştiği yaklaşık 18 yumurtalıktan oluşur. Her germaryumun ucunda, 2-4 GSC, esas olarak 8-10 hücreli bir terminal filament, 5-8 başlık hücreli bir rozet ve 2-3 ön eskort hücresi tarafından oluşturulan somatik bir hücresel niş içinde tutulur (Şekil 1A). Bu somatik niş, GSC'lere köklerini korumak, çoğalmayı kontrol etmek ve farklılaşmayı önlemek için gerekli sinyalleri ve fiziksel desteği sağlar1,2,3,4,5.

GSC'ler normalde asimetrik olarak bölünerek somatik niş ile teması sürdüren yeni bir kök hücre ve somatik başlık hücreleriyle doğrudan temasını kaybeden ve farklılaşan bir yavru hücre olan sistoblast (CB) oluşturur. GSC'ler ve CB'ler, ana işlevi mitoz6 sırasında mitotik iğin doğru oryantasyonu olan spektrozom olan oldukça dinamik ve sitoplazmik bir organel içerir. CB, eksik sitokinez ile 4 kez bölünür ve 16 hücreli kistler geliştirir, burada germ hattı hücrelerinden biri oositi belirtir ve diğer 15 hücre hemşire hücreleri haline gelir. CB spektrozomu, 16 hücreli birbirine bağlı germ hattı hücrelerini birbirine bağlayan fusome adı verilen dallı bir yapıya dönüşür. Spektrozom, serin-treonin kinaz Par-1 ve zar bileşeni Hu-li tai shao (Hts)7 gibi küçük veziküller ve iskelet proteinleri açısından zenginleştirilmiştir. GSC hücre döngüsü sırasında, spektrozom yeni materyalin eklenmesiyle büyür ve şeklini değiştirerek G1, S, G2 ve M fazlarının tanımlanmasına izin verir (Şekil 1B)8,9.

Yakın zamanda, canlı GSC'lerin 16 saate kadar görüntülenmesine izin veren Drosophila germarium'un ex vivo kültür yöntemini uyguladık. Bu hücreler ortalama olarak her 15,5 saatte bir bölündüğünden8, bu yöntem GSC hücre döngüsünün büyük bölümlerinin filme alınmasına izin verir. Bu nedenle, diğer araçlarla birlikte, kültürleme yöntemimiz, GSC hücre döngüsü sırasında spektrozom morfolojisinin tanımlanmasına ve farklı hücre döngüsü fazlarının in vivo8 (Şekil 1C) süresinin analizine izin vermiştir. Burada, metodolojiyi açıklayan adım adım rehberli bir video ile desteklenen bu genişletilmiş canlı görüntüleme yönteminin ayrıntılı bir protokolünü sunuyoruz (Şekil 2).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

NOT: Adım 1.4 en az 2 gün önceden yapılmalıdır. Adım 2.1 ve 2.2 1 gün önceden yapılabilir.

1. Deney öncesi düzenek I

  1. 100 μL streptomisin / penisilin antibiyotik karışımı (10.000 U / mL penisilin ve 10 mg / mL streptomisin) hazırlayın ve kullanana kadar -20 ° C'de saklayın.
  2. Otoklavlanmış saf su kullanarak aşağıdaki solüsyonlardan 15 mL hazırlayın, 4 ° C'de saklayın ve bir ay içinde kullanın: Sodyum bikarbonat (NaHCO3) 0.1 M pH 8.0 ve% 0.1 Tween 20.
  3. Kontaminasyonu önlemek için aşağıdaki kültür ortamını ve çözeltiyi laminer bir akış başlığında hazırlayın. Sterilize edilmiş filtre uçları ve tüpleri kullanın.
    1. 2 mL seyreltilmemiş fetal sığır serumu (FBS) hazırlayın ve aseptik koşullarda kullanılana kadar -20 ° C'de saklayın.
    2. %15 FBS ve %0.6 streptomisin/penisilin antibiyotik karışımı ile desteklenmiş Schneider Drosophila besiyerini hazırlayın. 7 mL alikot hazırlayın ve 4 °C'de saklayın. İki MatTek plakası için bir alikot yeterlidir (bkz. bölüm 2).
      1. Ringer çözeltisini hazırlayın (128 mM NaCl, 2 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 4 mM MgCl2, 35.5 mM Sükroz, otoklavlanmış saf suda 5 mM Hepe; pH 6.9). 1 mL alikot hazırlayın ve kullanana kadar -20 °C'de saklayın.
  4. GFP'ye (poli Ubiquitin-mGFP6: :p ar-1 hattı) kaynaşmış Par-1 proteinini yapısal ve her yerde ifade eden 1-2 günlük sinekleri, maya tozu ile desteklenmiş sinek yemi içeren yeni bir tüpe toplayın. Diseksiyondan önce bir inkübatörde 25 ° C'de 2 gün boyunca kültürleyin.
    NOT: Bu adım, ilgilenilen herhangi bir floresan etiketli muhabir ile yapılabilir.

2. Cam alt plaka kaplama ve hazırlama

  1. 35 mm'lik poli-D-lizin kaplı bir plakanın (cam alt tabak, bkz. Malzeme Tablosu) lamel ortasına 3 μL'lik bir damla belirli bir Cell-Tak yapıştırıcısı (bundan böyle hücre ve doku yapıştırıcısı olarak anılacaktır) yerleştirin. Steril uçlar kullanın.
    NOT: Hücre ve doku yapıştırıcısı 4 °C'de saklanmalıdır. İki genetik koşulla (tipik olarak, kontrol ve mutant koşullar) yapılan deneylerde, aynı cam alt plakaya iki ayrı, iyi ayrılmış yapıştırıcı damlası yerleştirin. Bu, her iki genetik arka planın da aynı koşullarda görüntülenmesini sağlayacaktır.
  2. Hemen ardından, üreticinin önerdiği şekilde 3 μL'lik yapışkan damlaya eşit hacimde (bu protokol kurulumunda 3 μL) 0,1 M NaHCO3 pH 8,0'ı dikkatlice ekleyin ve pipetleyerek karıştırın.
  3. Tam buharlaşma için, plakayı oda sıcaklığında (RT) 20 dakika inkübe edin ve ardından ertesi gün kullanılmak üzere gece boyunca 4 °C'de tutun. Alternatif olarak, hazırlanan plakayı 37 °C'de 25 dakika boyunca tamamen buharlaşana kadar inkübe edin ve doğrudan bir sonraki adıma geçin. Her iki durumda da plakayı kapağıyla birlikte koruyun. Steril uçlar kullanın.
  4. Hazırlanan cam tabanlı tabağı kullanmadan önce 15-20 dakika tezgahın üzerine koyarak RT'ye ulaşmasını sağlayın.
  5. Hazırlanan plakayı 3 kez dikkatlice yıkayın. Yapışkan tabakaya/tabakalara dokunmaktan ve onları rahatsız etmekten kaçının. Her yıkamada, 6 μL otoklavlanmış saf su ekleyin ve ardından NaHCO3 çözeltisinin kalıntılarını ortadan kaldırmak için üç yıkamanın her biri için temiz bir uç kullanarak suyu çıkarın.
  6. Toz parçacıklarını önlemek için kapağı kapalı olarak 5-10 dakika diseksiyon yaparken temiz ve hazırlanmış plakayı RT'ye yerleştirerek suyun tamamen buharlaşmasına izin verin.

3. Drosophila over diseksiyonu ve yumurtalık izolasyonu ve montajı

NOT: Yumurtalık diseksiyonu, numune dokusunun yapıştırıcıya yapışmasını engelleyebilecek proteinlerin varlığını önlemek için FBS olmadan Ringer solüsyonunda (Schneider ortamı yerine) gerçekleştirilir.

  1. Başlamadan önce üç kuyulu bir diseksiyon kabını, forsepsleri ve diseksiyon iğnelerini %70 etanol ile temizleyin.
  2. Üç kuyucuğun her birine yeterli hacimde (~ 200 μL) Ringer çözeltisi ekleyin.
  3. Maya ile beslenen 5 dişinin yumurtalıklarını, standart prosedürleri izleyerek iki çift forseps yardımıyla ilk kuyucukta 200 μL Ringer solüsyonunda diseksiyon yapın10,11. Drosophila dişisini forsepslerden biriyle göğüs ve karın bölgesinin kesiştiği noktada tutun. Ardından, kütikülü arka karın bölgesinden nazikçe yırtın ve iki yumurtalık açığa çıkana kadar karın kütikülünü çekin.
  4. Diseksiyondan kaynaklanan diğer doku kalıntıları veya döküntülerle kontaminasyonu azaltmak için diseke edilen yumurtalıkları ikinci kuyuya aktarın.
  5. Işık yayan diyot (LED) aydınlatmalı ve ince uçlu forsepsli bir stereomikroskop (zoom 8X-13.5X) yardımıyla 15-20 yumurtalığın kas kılıfını çıkarın. Yumurtalığın tüm vücudunu sabitlemek için bir çift forseps kullanın ve ikincisini geç evre bir yumurta odasını düzgün bir şekilde tutmak için kullanın ve kas kırılıp geride kalana kadar hafifçe gerin.
    NOT: Yumurtalıkların bu kısmı ile teması azaltarak germariaya zarar vermekten kaçınmak önemlidir. 8-9. aşamalardan daha eski yumurta odalarını çıkarın.
  6. Forseps kullanarak 15-20 kas kılıfı içermeyen yumurtalıkları birer birer 200 μL Ringer ortamı içeren üçüncü kuyucuğa aktarın.
  7. 20-200 μL'lik bir ucu pipetleme ile %0,1 Tween 20 ile önceden ıslatın. Bu, yumurtalıkların ucun plastik duvarlarına yapışmasını önler.
  8. Önceden ıslatılmış bir uç kullanarak kas kılıfı içermeyen yumurtalıkları içeren 6 μL Ringer solüsyonunu hazırlanan yapışkan plakaya aktarın (RT'de tutulur).
    NOT: Yumurtalık birikiminden sonra germaria dekolmanı önlemek için uç ile yapışkan tabaka arasındaki tüm temastan kaçının (sonraki adım). Germariaların yaklaşık% 30'u beklendiği gibi yapışmaz.
  9. Aktarılan yumurtalıkların yapışkan yüzeye yapışmasını sağlamak için, bir diseksiyon iğnesi veya forseps kullanarak yapışkan yüzeye temas edene kadar Ringer'ın damlasının dibine dikkatlice bastırın.
    NOT: Yumurtalıklar yerleştikten sonra yeniden düzenlemeye çalışmayın.
  10. MatTek plakasını %15 FBS ve %0.6 streptomisin/penisilin antibiyotik karışımı ile desteklenmiş 3 mL Schneider besiyeri ile dikkatlice doldurun (adım 1.3). Yumurtalıkların ayrılmasını önlemek için, plakanın dış kenarı etrafına bir seferde 1 mL yavaşça ekleyin.
  11. Kas kılıfsız yumurtalıkları içeren plakayı düz bir yüzey üzerinde mikroskop istasyonuna taşıyın.

4. Konfokal mikroskop kullanarak canlı görüntüleme

  1. Plakayı, dönen diskli bir mikroskobun veya konfokal bir mikroskobun (benzer ekipman kullanılabilir) 63x objektifine yerleştirin ve numuneyi odaklayın. Her germaryum için orta z düzlemini seçin.
  2. Aşağıdaki deneysel parametreleri yapılandırın: yakalama türü: 3D hızlandırılmış, 70/100 lazer gücünü ayarlayın, uyarma dalga boyu: 488 nm, z yığını aralığı: 30 μm ve Z yığınları arasındaki mesafe: 1,2 μm, süre: 17 saat, zaman noktaları arasındaki aralık: her 10 dakikada bir.
  3. Varsa, çok konumlu bir seçenek kullanarak, numunelerin XY koordinatlarını yeniden tanımlayın ve z-yığınları bu konumda ortalanacağından, her germaryumun ortasında bir Z-düzlemi seçin. Satın alma işlemini başlatın.
    NOT: Bir germanyumun normal genişliği 30 μm olduğundan, her Z yığını ~ 25-27 bölüm olacaktır. Konfokal'a bağlı olarak, 10 dakikalık aralıklarla en az 25 germaria görüntülenebilir. Normalde, 40x/1.30 NA veya 63x/1.40 NA yağa daldırma, planapo düzeltmeli objektifler kullanılır.
  4. Imaris veya ImageJ (Fiji) yazılımını kullanarak spektrozom morfolojisindeki belirli değişiklikleri görselleştirmek için görüntüleri zaman ve Z ekseninde analiz edin12,13. Gözlemlerindeki belirli zamanlar görüntülenir (Şekil 1B'). Filmleri monte etmek için her zaman noktasında en iyi Z düzlemini manuel olarak seçin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu genişletilmiş canlı görüntüleme protokolü ile, belirgin biyolojik bozulmalar olmaksızın, dişi GSC'lerin niş içerisindeki asimetrik mitozunu kaydedebiliriz. Bunun için, GSC hücre döngüsü boyunca beş farklı spektrozom morfolojisini (Yuvarlak, Tıpa, Çubuk, Birleşen ve Ünlem işareti) ayırt eden, GFP::Par-1 proteinini yaygın olarak eksprese eden germaria'lar kullanıyoruz (Şekil 1B,C). Daha ayrıntılı bir açıklama ile, Yuvarlak-G2 spektrozomunun güçlü GFP:Par1 sinyalinin (

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada, Drosophila melanogaster GSC nişini 16 saate kadar uzun bir süre boyunca izlemek için bir protokol sunuyoruz. Drosophila biyolojik süreçlerini ex vivo olarak filme almak için protokollerin çoğu daha kısa zaman pencerelerine odaklanır ve hayali kanat diskleri 15,16,17, embriyo gonadları 18,19 veya yumurtalıklar 20,21,22,23 <...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

El yazması hakkındaki yararlı yorumları için Acaimo González Reyes ve María Olmedo López'e teşekkür ederiz. Bu çalışma PID2021-125480NB-I00 (H. S-G), Junta de Andalucía'dan (JGM) "Ayudas a la contratación de personal Investigador Doctor", VI ve VII PPIT-Seville Üniversitesi'nden (PR) "Ayuda a proyectos de investigación precompetitivos" ve VI PPIT-Seville Üniversitesi'nden (PRR) "Contrato de Acceso de I+D+i" tarafından desteklenmiştir. Orijinal yayından (doi:10.1242/DEV.199716) uyarlanan görüntüleri paylaşma haklarını nazikçe sağladığı için Company of Biologists Ltd'ye teşekkürlerimizi sunarız.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
9 oyuklu cam plakaCorning 7220-85n/a
Kalsiyum klorür dihidratSigma AldrichC3881CaCl2· 2H2O; Ringer çözeltisini hazırlamak
için Cell-TakCorning 354240Hücre ve Doku Yapıştırıcısı, hücreleri veya doku bölümlerini plastik, cam, metal, FEP Polimer ve biyolojik malzemeler dahil olmak üzere birçok yüzey türüne yapıştırmak için kullanılır.
Dumont #5 Forseps Finescience11252-20n/a
Dumont #55 Forseps Finescience11255-20Boyutlar 0,05 mm x 0,02 mm ve uzunluk 11 cm
Fetal Sığır SerumuGibco10500-064Nitelikli, ısı ile etkisizleştirilmiş, AB onaylı, Güney Amerika Menşei 
Cam alt tabaklarMatTekP35GC-1.5-10-C35 mm Çanak, No. 1.5 Lamel, 10 mm Cam Çapı,  Poli-D-Lizin Kaplı
HEPESSigma AldrichH4034Ringer çözeltisini hazırlamak için
Magnezyum klorür Sigma AldrichM1028MgCl2; Ringer solüsyonunu hazırlamak için
İğne TutucuRoboz RS-6061Hafif, içi boş paslanmaz çelik sap; 4 3/4 "Uzunluğunda.
Nikon SMZ18 dürbün Nikonhttps://www.microscope.
healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18
Penisilin-StreptomisinThermo Fisher Scientific1514012210.000 U/mL
Potasyum klorürSigma AldrichP3911KCl; Ringer'ın çözümünü hazırlamak için
Schneider's Drosophila MediumBiowest L0207Böcek hücreleri için hücre kültürü ortamı
Sodyum bikarbonatSigma AldrichS8875 NaHCO3; ≥ % 99,5, toz
Sodyum klorürSigma AldrichS9888NaCl; Ringer solüsyonunu hazırlamak için
SucroseSigma AldrichS9378≥ %99,5 (GC); Ringer solüsyonunu hazırlamak için
Tungsten Diseksiyon İğnesiRoboz RS-60640,25 mm, Ultra İnce, 1 Mikron Uç (Pk 10)
Tween 20Sigma AldrichP9416, viskoz sıvı
Maya tozuSigma Aldrich51475n/a
Moleküler biyoloji için

Kaynaklar

  1. Li, L., Xie, T. Stem cell niche: structure and function. Annu Rev Cell Dev Biol. 21, 605-631 (2005).
  2. Drummond-Barbosa, D. Local and physiological control of germline stem cell lineages in Drosophila melanogaster. Genetics. 213 (1), e234(2019).
  3. Eliazer, S., Buszczak, M. Finding a niche: studies from the Drosophila ovary. Stem Cell Res Ther. 2 (6), 45(2011).
  4. Rojas-Ríos, P., Guerrero, I., González-Reyes, A. Cytoneme-mediated delivery of Hedgehog regulates the expression of bone morphogenetic proteins to maintain germline stem cells in Drosophila. PLoS Biol. 10 (4), e1001298(2012).
  5. Rojas-Ríos, P., González-Reyes, A. Concise review: the plasticity of stem cell niches: a general property behind tissue homeostasis and repair. Stem Cells. 32 (4), 852-859 (2014).
  6. Deng, W., Lin, H. Spectrosomes and fusomes anchor mitotic spindles during asymmetric germ cell divisions and facilitate the formation of a polarized microtubule array for oocyte specification in Drosophila. Dev Biol. 189 (1), 79-94 (1997).
  7. Huynh, J. R., Shulman, J. M., Benton, R., St Johnston, D. PAR-1 is required for the maintenance of oocyte fate in Drosophila. Development. 128 (7), 1201-1210 (2001).
  8. Villa-Fombuena, G., Lobo-Pecellín, M., Marín-Menguiano, M., Rojas-Ríos, P., González-Reyes, A. Live imaging of the Drosophila ovarian niche shows spectrosome and centrosome dynamics during asymmetric germline stem cell division. Development (Cambridge). 148 (18), dev199716(2021).
  9. De Cuevas, M., Spradling, A. C. Morphogenesis of the Drosophila fusome and its implications for oocyte specification. Development. 125 (15), 2781-2789 (1998).
  10. Wong Li, C., Schedl, P. Dissection of Drosophila ovaries. J Vis Exp. (1), 52(2006).
  11. Merkle, J. A. Dissection, fixation, and standard staining of adult Drosophila ovaries. Methods Mol Biol. 2626, 49-68 (2023).
  12. Thévenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. A pyramid approach to subpixel registration based on intensity. IEEE Trans Image Process. 7 (1), 27-41 (1998).
  13. Miura, K. Bleach correction ImageJ plugin for compensating the photobleaching of time-lapse sequences. F1000Res. 9, 95(2020).
  14. Duan, T., Cupp, R., Geyer, P. K. Drosophila female germline stem cells undergo mitosis without nuclear breakdown. Curr Biol. 31 (7), 1602-1610 (2021).
  15. Aldaz, S., Escudero, L. M., Freeman, M. Live imaging of Drosophila imaginal disc development. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (32), 14217-14222 (2010).
  16. Dye, N. A. Cultivation and live imaging of Drosophila imaginal discs. Methods Mol Biol. 2540, 275-285 (2022).
  17. Sohr, A., Du, L., Roy, S. Ex vivo Drosophila wing imaginal disc culture and furin inhibitor assay. Bio Protoc. 9 (16), e3336(2019).
  18. Anllo, L., Plasschaert, L. W., Sui, J., DiNardo, S. Live imaging reveals hub cell assembly and compaction dynamics during morphogenesis of the Drosophila testis niche. Dev Biol. 446 (1), 25-34 (2019).
  19. Gärthner, S. M. K., Rathke, C., Renkawitz-Pohl, R., Awe, S. Ex vivo culture of Drosophila pupal testis and single male germ-line cysts: dissection, imaging, and pharmacological treatment. J Vis Exp. 91, e51868(2014).
  20. Wilcockson, S. G., Ashe, H. L. Drosophila ovarian germline stem cell cytocensor projections dynamically receive and attenuate BMP signaling. Dev Cell. 50 (3), 296-310 (2019).
  21. Jackson, J. A., Imran Alsous, J., Martin, A. C. Live imaging of nurse cell behavior in late stages of Drosophila oogenesis. Methods Mol Biol. 2626, 191-206 (2023).
  22. Díaz de la Loza, M. C., Díaz-Torres, A., Zurita, F., et al. Laminin levels regulate tissue migration and anterior-posterior polarity during egg morphogenesis in Drosophila. Cell Rep. 20 (1), 121-133 (2017).
  23. Christophorou, N., Rubin, T., Bonnet, I., Piolot, T., Arnaud, M., Huynh, J. R. Microtubule-driven nuclear rotations promote meiotic chromosome dynamics. Nat Cell Biol. 17 (11), 1388-1398 (2015).
  24. Bers, D. M. Cardiac excitation-contraction coupling. Nature. 415 (6868), 198-205 (2002).
  25. Morris, L. X., Spradling, A. C. Long-term live imaging provides new insight into stem cell regulation and germline-soma coordination in the Drosophila ovary. Development. 138 (11), 2207-2215 (2011).
  26. Zielke, N., Korzelius, J., van Straaten, M., et al. Fly-FUCCI: a versatile tool for studying cell proliferation in complex tissues. Cell Rep. 7 (2), 588-598 (2014).
  27. Hinnant, T. D., Alvarez, A. A., Ables, E. T. Temporal remodeling of the cell cycle accompanies differentiation in the Drosophila germline. Dev Biol. 429 (1), 118-131 (2017).
  28. Hsu, H. J., LaFever, L., Drummond-Barbosa, D. Diet controls normal and tumorous germline stem cells via insulin-dependent and -independent mechanisms in Drosophila. Dev Biol. 313 (2), 700-712 (2008).
  29. Andersen, D., Horne-Badovinac, S. Influence of ovarian muscle contraction and oocyte growth on egg chamber elongation in Drosophila. Development (Cambridge). 143 (8), 1375-1382 (2016).
  30. Hudson, A. M., Petrella, L. N., Tanaka, A. J., Cooley, L. Mononuclear muscle cells in Drosophila ovaries revealed by GFP protein traps. Dev Biol. 314 (2), 360-372 (2008).
  31. Ables, E. T., Drummond-Barbosa, D. Cyclin E controls Drosophila female germline stem cell maintenance independently of its role in proliferation by modulating responsiveness to niche signals. Development (Cambridge). 140, 4267-4276 (2013).
  32. Lin, H., Spradling, A. C. Germline stem cell division and egg chamber development in transplanted Drosophila germaria. Dev Biol. 159 (1), 140-152 (1993).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Drosophila Germ HattıKök Hücre NişiEx Vivo KültürGerm Hattı Kök HücreleriAsimetrik BölünmeSpektrosom DinamikleriKonfokal MikroskopiFloresan Protein EtiketlemeHücre Döngüsü Analizi
Kadın Drosophila melanogaster Germline Kök Hücre Nişlerinin Genişletilmiş Canlı Görüntülenmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.