Kronik yaraları tedavi etmek için önemli çabalara rağmen, başarı sınırlı kalmıştır. Normal iyileşmeyi bozan ve kronik yaraların başlamasına ve gelişmesine katkıda bulunan hücresel ve moleküler süreçler iyi anlaşılmamıştır. Sonuç olarak, bu yaralar için etkili tedaviler geliştirmenin zor olduğu kanıtlanmıştır. Bunun başlıca nedeni, insanlarda kronik yaraları taklit eden hayvan modellerinin olmaması ve kronik yaraları olan insanlarda yapılan deneylerin sınırlı olmasıdır. Daha önce, insanlarda diyabetik kronik yaralarla birçok özelliği paylaşan kronik yaraları incelemek için bir fare modeli yayınlamıştık. Bu model, deri mikrobiyotasında ve çevrede bulunan bakterilerden doğal olarak oluşan biyofilmlerin, yaralara dışarıdan bakteri sokulmasına gerek kalmadan varlığını içerir. Bu nedenle, bu model, yaraların nasıl kronikleştiğine dair temel anlayışı potansiyel olarak ilerletebilir. Burada, bu fare modelini geliştirmek için orijinal protokole bir güncelleme sunuyoruz. Farelerin ölüm oranını ~% 30'dan ~% 5'e düşürmeye odaklandık. Ayrıca, bu modelin, yeni nesil transkriptomik yaklaşımlar kullanarak, enfeksiyon ve biyofilm gelişimi sırasında bakteri popülasyon dinamiklerini açıklayarak ve küçük moleküller de dahil olmak üzere tedavilerin etkinliğini test etmenin değerini göstererek yara kronikliğinin başlangıcını ve ilerlemesini anlamak için nasıl kullanıldığını da açıklıyoruz. Şimdiye kadar, müdahale edilmeden iyileşmeyen tek kronik yara modeli budur.
Yöntem makalesi
Diyabetik farelerde kronik yaralar oluşturma protokolü - yayınlanan protokolde bir güncelleme
Bu makalede
Özet
Giriş
Bu, mevcut bir makaleye yönelik bir güncelleştirmedir. Orijinal halini görmek için lütfen tıklayınız.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
GÜNCELLEŞTİRME:
Bu, daha önce sunulan protokol için bir güncellemedir1
Tüm deneyler federal düzenlemelere uygun olarak tamamlandı ve Kaliforniya Üniversitesi politika ve prosedürleri Kaliforniya Üniversitesi, Riverside IACUC tarafından onaylandı.
1. Hayvan
Adım 1.1'e aşağıdaki notu ekleyin:
NOT: Homozigot diyabetik fareler doğrudan tedarikçilerden satın alınırsa, cildin normal cilt florası ile kolonizasyonuna izin vermek için fareleri geleneksel bir ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1: Damızlıklar oluşturmak için heterozigotları tanımlamak için genotipleme. Örnek bir jel, 8 bilinmeyen fare örneğinin sonuçlarını göstermektedir. Örnek 2 ve 5, 3 bant (610 bp, 406 bp ve 264 bp) içerdikleri için heterozigotlardır. 1, 3, 4, 6, 7 ve 8 numaralı numuneler, sadece 2 bant (610 bp ve 264 bp) içerdikleri için vahşi türlerdir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu kronik yara modelini kullanan bulgular:
Bu model, kronik yara başlangıcı ve ilerlemesinin hücre ve moleküler mekanizmalarını anlamak amacıyla çeşitli çalışmalar yapmak için kullanılmıştır. Antioksidan enzimleri inhibe ederek, db / db farelerde kronik yaralar oluşturulabileceği gösterilmiştir. Yaralar başlangıçta, zamanla spesifik biyofilm oluşturan bakteriler için seçilen bir polimikrobiyal topluluk içeriyordu. Kroniklik, farelere.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1 mm kulak yumruğu | Fisherbrand | 13812201 | 2 mm delik çapı |
| 3-Amino-1,2,4-triazol (ATZ) | TCI | A0432 | |
| %70 etanol | |||
| Acu Punch 7mm cilt biyopsisi yumrukları | Acuderm Inc. | P750 | |
| agaroz | |||
| B6. BKS(D)-Leprdb/J | Jackson Laboratuvarı | 00697 | Homozigotlar ve heterozigotlar mevcut |
| Buprenex (buprenorfin HCl) | Henry Stein Hayvan Sağlığı | 059122 | 0.3 mg / ml, Sınıf 3 |
| Jel Yükleme Boyası, Mor (6X) | New England Biolabs | B7024S | |
| Yatıştırıcı Aloe ve Lanolin | Nair | içeren | |
| Isı Terapisi (su) Pompası HTP-1500 | Adroit MedicalSystems | ||
| Isıtma yastığı | Conair | Nemli Kuru Isıtma Yastığı | |
| Hortum Adaptörleri | Adroit MedicalSystems | ||
| İnsülin şırıngaları | BD | 329461 | 0,35 mm (28G) x 12,7 mm (1/2 "") |
| İzofluran | Henry Schein Hayvan Sağlığı | 029405 | NDC 11695-6776-2 |
| İzofluran buharlaştırıcı | JA Baulch & İştirakler | ||
| Kimwipes | |||
| Maxi-Therm Hiper-Hipotermi Battaniyesi | Cincinnati Sub-Zero Cat | No. 247 | 22" x30 inç Yeniden Kullanılabilir Ağır Hizmet Tipi Ped |
| Merkaptosüksinik asit (MSA) | Aldrich | 88460 | |
| Fare burun konisi | |||
| Oksijen Tankı | buharlaştırma sistemi ile uyumlu olmalıdır | ||
| Fosfat tampon çözeltisi (PBS) | otoklav sterilize edilmiş | ||
| Keskin cerrahi makas | |||
| küçük plastik kaplar | |||
| Sodyum hidroksit | |||
| Tak 2X Master Mix | New England Biolabs | M0270L | |
| Tegaderm | 3M | Ref: 1624W | Şeffaf film sargısı (6 cm x 7 cm) |
| İnce metal spatula | |||
| Tri-HCl | |||
| Boru Cımbız | |||
| Wahl saç kesme makinesi | Wahl | Lityum İyon Pro |
Kaynaklar
- Kim, J. H., Martins-Green, M. Protocol to create chronic wounds in diabetic mice. J Vis Exp. (151), e57656(2019).
- He, J. -F., Tan, T., Zhu, H. A novel and quick PCR-based method to genotype mice with a leptin receptor mutation (db/db mice). Acta Pharmacol Sin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste