Farelerde Otoimmün Kas Spesifik Kinaz (MuSK) Myastenia Gravis'i İndüklemek için Aktif Bağışıklama

Özet

Bu makale, hastalığın patofizyolojisini ve potansiyel terapötik stratejilerini araştırmayı amaçlayan, otoimmün kasa özgü kinaz (MuSK) myastenia gravis'in deneysel bir fare modeli için kapsamlı bir protokol sunmaktadır.

Özet

Myastenia gravis (MG), nöromusküler kavşağı etkileyen otoimmün bir hastalıktır. Çoğu MG hastası asetilkolin reseptörüne (AChR) karşı otoantikorlar üretirken, hastaların bir alt kümesi kasa özgü kinaz'ı (MuSK) hedef alan otoantikorlar sergiler. MuSK MG, sıklıkla mekanik ventilasyon gerektiren ciddi kas güçsüzlüğü, tedaviye dirençli klinik tablolar ve miyastenik krizler ile karakterizedir. Sonuç olarak, hastalar sıklıkla uzun süreli yan etkilerle ilişkili olan immünosupresanların uzun süreli kullanımına ihtiyaç duyarlar. MuSK-MG'nin ciddiyeti ve nadirliği göz önüne alındığında, yeni tedavi modalitelerini geliştirmek ve altta yatan patofizyolojik mekanizmaların daha derin bir şekilde anlaşılması için deneysel bir hayvan modeli geliştirmek çok önemlidir. Deneysel otoimmün miyastenia gravis (EAMG), MuSK-MG için bir hayvan modeli olarak hizmet eder ve insan MG'nin klinik ve immünolojik özelliklerini etkili bir şekilde ancak kısmen taklit eder. Otoimmün hayvan modellerinin indüksiyonu, aktif veya pasif bağışıklama yoluyla sağlanabilir. Burada sunulan deneysel protokolde, aktif bağışıklama, ısıyla öldürülen Mycobacterium tuberculosis ile tam Freund adjuvanında emülsifiye edilmiş insan MuSK'nin saflaştırılmış hücre dışı alanının deri altına uygulanmasıyla kullanılmıştır. Dört bölgede bağışıklama yapıldı, ardından 28. günde MuSK'nin takviye enjeksiyonu yapıldı. M. tuberculosis ile bu adjuvan, TLR4 yoluyla bağışıklık sisteminin aktivasyonunu ve uygulanan antijenin fagositozunu arttırır. Bu makale, MuSK-EAMG'nin gelişimini ve karakterizasyonunu başlangıçtan sonuca kadar kapsamlı bir şekilde detaylandırmaktadır.

Giriş

Myastenia gravis (MG), T hücresine bağımlı, antikor aracılı mekanizmalarla gelişen otoimmün bir hastalıktır. Esas olarak hastaların %80-85'inde nöromüsküler kavşağın (NMJ) postsinaptik membranındaki nikotinik asetilkolin reseptörlerine (AChR) karşı antikorlar ve hastaların yaklaşık %5'inde kas spesifik kinaza (MuSK) karşı antikorlar ve diğer NMJ proteinleri neden olur. MG, otoimmün bozukluklar için bir prototip ve postsinaptik fonksiyonu anlamak için bir model haline gelmiştir¹. Otoimmün bozuklukların hayvan modelleri iki ana kategoriye ayrılabilir: (1) Hayvanların doğal olarak bir otoimmün hastalık geliştirdiğ....

Protokol

Protokol, İstanbul Üniversitesi Hayvan Deneyleri Yerel Etik Kurulu (HADYEK) tarafından 2020/29 karar numarası ile onaylandı. Önceki çalışmalarımızda ^7,8,9, EAMG modeli 8-10 haftalık BALB/c veya B6 farelerde MuSK proteini ile aktif bağışıklama yoluyla indüklenmiştir. Bu makale, MuSK ile aşılanmış BALB/C fareleri (grup başına 4-8 fare) kullanılarak yapılan farklı deneylerden elde edilen örnek verileri sunmaktadır. Reaktifler ve kullanılan ekipman Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. B....

Sonuçlar

MuSK Deneysel Otoimmün Myastenia Gravis (EAMG) modelinin değerlendirilmesinde ve doğrulanmasında, hastalık modelinin başarılı bir şekilde indüksiyonunu ve karakterizasyonunu göstermek için birkaç temel parametre ve deneysel sonuç kritik öneme sahiptir. Aşağıda, MuSK EAMG modelinin kurulduğunu doğrulayan temsili sonuçlar yer almaktadır.

Klinik puanlama
Fareler, standart bir klinik skorlama sistemi kullanılarak myastenia gravis'in klinik semptomları açısından izlenir ve puanl.......

Tartışma

Murine MuSK-EAMG, kas güçsüzlüğü, bulber kas güçsüzlüğüne bağlı kilo kaybı, dolaşımdaki anti-MuSK antikorları ve azalmış kas AChR'si açısından hem klinik hem de immünopatojenik yönleriyle insan MuSK-MG'yi taklit eder. Bu MuSK-EAMG modeli için kilometre taşları ve beklenen zaman çizelgesine gelince, kas güçsüzlüğünün klinik belirtileri ikinci aşılamadan sonraki ilk hafta içinde ortaya çıkmalıdır. Farelerin yaklaşık% 5'i ilk aşılamadan sonra hastalık belirtileri geliştirebilir. İki aşılama.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
125I-&alfa;-bungarotoksin	Invitrogen	BTX T1175
2-Metilbütan	Sigma-Aldrich	M32631
40 & mu; m Hücre Süzgeci	NEST	258369
96 kuyulu Maxisorp plakası	Sigma-Aldrich	M9410
Adjuvan Eksik	Becton Dickinson & Co.& nbsp;	263910
Anti-AChR alfa1	Alomone	ANC-001
Anti-fare IgG HRP	Abcam	ab97023
Bullet Blender Storm	Next Advance		Doku homojenizatör
C3	Novus	NB200-540G
Karbonat-Bikarbonat Tampon	Merck	C3041
Kriyostat	Leica	CM1860
Dinamometre Imada DST-50N	Muromachi	MK380Si
Floresan mikroskobu	Leica	DM4M
Luer kilitli cam şırınga	ISOLAB	094.92.005
IgG	Abcam	ab96871
Mikroplaka Fotometre, Multiskan FC	Thermo Scientific	51119000
Fare Cerrahi Kiti	Kent Bilimsel Ortaklığı	INSMOUSEKIT
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	Becton Dickinson & Co.& nbsp;
OCT Bileşik	Agar Scientific	AGR1180
Şırıngaları, 1 mL	Becton Dickinson & Co.& nbsp;
Şırıngalar, 2 mL	B. Braun	7389
Üniversal hayvan tutucu	Merck	Z756911-1EA
WesternBright Sirius-Western lekelenme tespit kiti	Advansta	K-12043-D10	ECL

231141309625