Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Akciğer Adenokarsinomu ile İlişkili Primer Sjögren Sendromu: Potansiyel Ortak Patojenik Mekanizmaların Araştırılması ve Deneysel Doğrulama

1.1K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/67421

⸱

20 Eylül 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Graduate School, Beijing University of Chinese Medicine, 2Oncology Department, Wangjing Hospital, China Academy of Chinese Medical Sciences, 3The Second Department of Healthcare, China-Japan Friendship Hospital, 4Rheumatology Department, Shangqiu Hospital of Traditional Chinese Medicine

Bu makalede

Özet

Bu makale, biyoinformatik analiz ve deneysel doğrulama yoluyla primer Sjögren sendromu ve akciğer adenokarsinomunu birbirine bağlayan potansiyel yaygın patojenik mekanizmaları araştırmak için operasyonel prosedürleri ve önlemleri açıklamaktadır.

Özet

Bu çalışma, primer Sjögren sendromu (pSS) ve akciğer adenokarsinomunu (LUAD) birbirine bağlayan potansiyel yaygın patojenik mekanizmaları biyoinformatik analiz ve deneysel doğrulama yoluyla araştırmayı amaçladı. pSS ve LUAD ile ilişkili ilgili genler, Gene Expression Omnibus (GEO) veri tabanından ve Genecard veri tabanından alınmıştır. Daha sonra, pSS ve LUAD ile ilişkili diferansiyel olarak eksprese edilen genler (DEG'ler) pSS-LUAD-DEG'ler olarak tarandı. Kyoto Genler ve Genomlar Ansiklopedisi (KEGG) ve Gen Ontolojisi (GO) zenginleştirme analizleri, pSS-LUAD-DEG'lerin önemli biyolojik işlevlerini aydınlatmak için yapıldı. Temel hedefler, protein-protein etkileşimi (PPI) ağı oluşturularak belirlendi ve Alıcı Çalışma Karakteristiği (ROC) eğrisi analizleri yoluyla hub gen tanısal doğruluğu daha fazla değerlendirildi. Bu çalışmada, NOD / Ltj fareleri pSS hayvan modelleri olarak görev yaptı ve bir inflamatuar reaksiyon oluşturmak için partikül madde 2.5 (PM2.5) ile uyarıldı. İlgili moleküler biyoloji deney doğrulaması için kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR), enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) ve western blotting kullanıldı. KEGG ve GO zenginleştirme analizleriyle ortaya çıkan sonuçlar, inflamasyonun pSS ve LUAD arasında bağlantı kurmada kritik bir rol oynadığını göstermektedir. IL6, CCNA2, JAK2, IL1B, ASPM, CCNB2, NUSAP1 ve CEP55, pSS-LUAD'ın anahtar hedefleri olarak belirlendi. BALB / c fareleri ve NOD / Ltj fareleri, PM2.5 ile 21 günlük stimülasyonun ardından akciğer dokularında inflamatuar sitokinler IL-6 ve IL-1β'nin gelişmiş ekspresyonunu sergiledi, JAK2 / STAT3 sinyal yolunu aktive etti ve tümörle ilişkili genler CCNA2, CCNB2 ve CEP55'in ekspresyonunu yukarı regüle etti ve NOD / Ltj fareleri BALB / c farelerinden daha belirgin değişiklikler gösterdi. Bu protokol, pulmoner inflamatuar mikroçevre tarafından indüklenen karsinogenezin, pSS hastalarında yüksek LUAD insidansının anahtar bir nedeni olabileceğini göstermektedir. Ek olarak, blokajla ilgili mekanizmalar, pSS hastalarında LUAD oluşumunu önlemeye yardımcı olabilir.

Giriş

Primer Sjögren sendromu (pSS), ekzokrin bezlerin lenfositik infiltrasyonu ile karakterize otoimmün bir hastalıktır ve kuru göz (kseroftalmi) ve ağız kuruluğu (kserostomi) klinik semptomlarına yol açar1,2. pSS'ye genellikle ana advers prognostik faktörleri oluşturan hiperglobulinemi3, interstisyel akciğer hastalığı4, renal tübüler asidoz5, nörolojik hasar6 ve trombositopeni7 dahil olmak üzere tutulumun ekstra glandüler bulguları eşlik eder. Son yıllarda, bir dizi çalışma, pSS'ye genellikle hematolojik maligniteler ve katı tümörler dahil olmak üzere artmış kanser prevalansının eşlik ettiğini göstermiştir 8,9,10. Akciğer kanseri, özellikle akciğer adenokarsinomu (LUAD) olmak üzere pSS ile ilişkili en sık görülen kanserlerden biridir11.

Toplu olarak, daha fazla araştırma, LUAD ile pSS'nin altta yatan bazı ortak patogenezlere sahip olabileceğini düşündürmektedir. Mevcut bilgilerimize göre, iki hastalık arasındaki ortak mekanizmaları açıklayan özel bir çalışma henüz yoktur. Son zamanlarda, biyoinformatik analizler, türler arasında potansiyel olarak paylaşılan hastalık mekanizmalarını ortaya çıkarmamız için potansiyel bir olasılık sunmaktadır 12,13,14. Altta yatan mekanizmaları daha fazla ortaya çıkarmak için, pSS ve LUAD arasındaki ortak hedeflerin ve sinyal yollarının analizi için biyoinformatik analiz kullanılır ve daha sonra deneysel doğrulama için hayvan modelleri oluşturulur. Bu mekanizmaların ortaya çıkarılması, pSS hastalarında LUAD'ın klinik olarak önlenmesi için bir kanıt temeli sağlamaya yardımcı olabilir.

Bu çalışma, pSS ve LUAD ile ilişkili ilgili genleri almak için GEO ve Genecard veritabanlarını kullandı. Daha sonra, pSS ve LUAD ile ilişkili DEG'ler pSS-LUAD-DEG'ler olarak tarandı. pSS-LUAD-DEG'lerin önemli biyolojik fonksiyonlarını aydınlatmak için KEGG ve GO zenginleştirme analizleri gerçekleştirdik. Temel hedefleri belirlemek için PPI ağ yapısı kullanıldı ve ROC eğrisi analizleri yoluyla hub gen tanı doğruluğunu daha fazla değerlendirdik. Bir inflamatuar reaksiyon oluşturmak için partikül madde 2.5 (PM2.5) ile uyarılan pSS hayvan modelleri olarak NOD / Ltj fareleri kullandık. Çalışmayı deneysel olarak doğrulamak için QPCR, ELISA ve western blotlama yapıldı. Genel olarak, buradaki sonuçlar, pulmoner inflamatuar mikroçevre tarafından indüklenen karsinogenezin, pSS hastalarında yüksek LUAD insidansının kritik bir nedeni olabileceğini göstermektedir. Ayrıca, pSS hastalarında LUAD oluşumunun, blokaj ile ilgili mekanizmalarla önlenebileceğini düşündürmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Deney hayvanları, Çin'in ulusal standardı olan Laboratuvar Hayvanları-Çevre ve Barınma Tesislerinin Gereksinimleri (GB14925-2010) ile uyumlu olarak barınma koşullarının hayvan besleme ortamını karşıladığı Çin-Japonya Dostluk Hastanesi'nin hayvan tesisine yerleştirildi. Tüm hayvan bakımı prosedürleri ve deneyleri, ARRIVE yönergelerine uygundur ve Çin Ulusal Hayvan Refahı Yasası'nın yönergelerine bağlı kalarak 3R ilkelerine (azaltma, değiştirme, iyileştirme) dayanıyordu. BALB/c fareleri SPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.'den ve NOD/Ltj fareleri Huafukang (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.'den satın alındı.

1. Biyoinformatik analiz

  1. Veri setlerinin hazırlanması
    1. Gen Ekspresyon Omnibus (GEO) veritabanını (www.ncbi.nlm.nih.gov/geo)15 açın ve gen ekspresyon profillerini aramak için primer Sjögren sendromu ve akciğer adenokarsinomunu anahtar kelime olarak kullanın. Ardından GEO DataSets Veritabanındaki sonuçlara tıklayın ve En İyi Organizmalar bölümünde Homo sapiens'i seçin. İlgilendiğiniz veri kümesini ilgili platform bilgileriyle birlikte seçin ve indirin.
    2. Genecard veritabanını (https://www.genecards.org/)16 açın ve pSS ve LUAD genlerini elde etmek için primary Sjögren sendromu ve akciğer adenokarsinomunu anahtar kelime olarak kullanın. Hastalık genlerinin elektronik tablolarını indirin.
  2. pSS ve LUAD arasında paylaşılan DEG'lerin tanımlanması
    1. R yazılımını indirin ve açın (https://cran.r-project.org/)17. GEOquery R paketini, stringr R paketini, ggplot2 R paketini, reshape2 R paketini ve limma R paketini R yazılımına yükleyin.
    2. R yazılımını kullanarak farklı GEO veri kümelerinde (GSE84844, GSE51092, GSE32863 ve GSE75037) diferansiyel olarak ifade edilen genleri (DEG'ler) tanımlayın ve görselleştirin, ardından bu veri kümeleri arasındaki gen ekspresyonunu karşılaştırın ve analiz edin. Ayarlanmış bir P değeri 0.05 < ve kat değişimi (FC) > 1.2 veya < 0.83 olan genleri DEG olarak düşünün.
    3. Genecard veritabanından pSS ve LUAD ile ilgili 20'ye eşit veya daha büyük bir ifade seviyesine sahip genleri seçin.
    4. pSS ile ilişkili DEG'leri ve LUAD ile ilişkili DEG'leri hem GEO veritabanından hem de Genecard veritabanından birleştirin.
    5. pSS ve LUAD (pSS-LUAD-DEG'ler) ile ilişkili DEG'leri elde etmek ve görselleştirmek için VennDiagram paketini R'ye kurun ve yükleyin.
  3. Kyoto Genler ve Genomlar Ansiklopedisi (KEGG) yolağı zenginleştirme analizi
    1. Metascape'e girin (https://metascape.org/)18. Dosya Seç'e tıklayın ve pSS-LUAD-DEGs'in .xlsx biçimindeki dosyasını yükleyin. Tür Olarak Giriş'te H. sapiens'i seçin. Benzer şekilde, Tür Olarak Analiz'de H. sapiens'i seçin.
    2. Özel Analiz'e tıklayın. Zenginleştirme'ye tıklayın ve KEGG Yolu'nu seçin. Zenginleştirme Analizi'ni tıklatın, ardından zenginleştirme analizi tamamlandığında Analiz Raporu Sayfası'nı tıklatın.
    3. Sonucu indirmek için Hepsi Bir Arada Zip Dosyası'na tıklayın. Sonucu görüntülemek için indirme Enrichment_GO klasöründeki _ FINAL_GO.csv dosyasına erişin.
    4. R'de KEGG görselleştirme programını gerçekleştirmek için ggplot2 paketini kullanın.
  4. Gen Ontolojisi (GO) zenginleştirme analizi
    1. R'de clusterProfiler ve enrichplot paketini yükleyin ve yükleyin.
    2. pSS-LUAD-DEG'lerin metin biçimindeki listesini R'ye aktarın.
    3. GO zenginleştirme analizi ve sonuç görselleştirmesi için clusterProfiler ve enrichplot paketlerini çalıştırın. Analizde 0,05'< ayarlanmış bir P değerinde istatistiksel anlamlılığı tanımlayın.
  5. Protein-protein etkileşimi (PPI) ağının oluşturulması ve modül analizi
    1. Etkileşimli Genlerin Alınması (STRING) veritabanına (http://string-db.org/)19 girin. Gözat'a tıklayın ve pSS-LUAD-DEGs dosyasını yükleyin. Organizmalar'da Homo sapiens'i seçin ve Ara'yı tıklayın.
    2. Devam'ı tıklayın. Sonuçlar hazır olduğunda, Ayarlar'a tıklayın. Temel Ayarlar > Minimum Gerekli Etkileşim Puanı altında, Yüksek Güvenilirlik (0,700) öğesini seçin. Gelişmiş Ayarlar'da Ağdaki Bağlantısı Kesilen Düğümleri Gizle'yi işaretleyin ve ardından Güncelle'yi tıklayın.
    3. PPI ilişki metnini TSV formatında indirmek için başlık çubuğundaki Dışa Aktarmalar'a tıklayın.
    4. Cytoscape 3.7.1 yazılımını indirin ve açın (https://cytoscape.org/)20. PPI ağını oluşturmak için TSV biçimindeki dosyayı içe aktarmak için Dosya >> Ağı Dosyadan İçe Aktar'a tıklayın.
    5. Ağdaki topolojik parametreleri analiz etmek için Ağ Çözümleyicisi aracını kullanın. Sol kontrol panelindeki stil çubuğu aracılığıyla düğüm boyutunu ve rengini optimize edin.
    6. Menü çubuğunda Araçlar > Ağı Analiz Et'i seçin. Tablo panelinde, bileşenleri dereceye göre azalan düzende sıralamak için Derece'ye tıklayın. Hub genleri olarak daha yüksek derecelere sahip ilk 20 geni alın.
    7. Hub genlerini dereceye göre görselleştirmek için igraph ve ggplot2 paketlerini R'ye kurun ve yükleyin.
  6. Hub genlerinin tanımlanması ve doğrulanması
    1. pROC paketini R'ye kurun ve yükleyin.
    2. Hub genlerinin metin biçimindeki listesini R'ye aktarın.
    3. Hub genlerinin alıcı çalışma karakteristiği (ROC) eğrilerini çizin ve ROC eğrisi (AUC) değerlerinin altındaki alanı hesaplayın.
      NOT: DEG'leri filtrelemek için R kodu için Ek Kodlama Dosyası 1'e bakın.

2. Deneysel doğrulama

NOT: Bu protokolde kullanılan malzemeler, reaktifler ve aletlerle ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.

  1. Hayvan hazırlama
    1. 12 dokuz haftalık dişi BALB/c faresini ve 12 dokuz haftalık dişi NOD/Ltj faresini 1 hafta boyunca adaptif olarak besleyin.
    2. 12 dokuz haftalık dişi BALB/c faresini boş kontrol grubuna ve PM2.5 grubuna eşit olarak tahsis etmek için rastgele bir sayı tablosu kullanın. Benzer şekilde, 12 dokuz haftalık dişi NOD / Ltj faresini pSS grubuna ve pSS-PM2.5 grubuna eşit olarak bölün.
  2. Partikül madde 2.5 (PM2.5) süspansiyonunun hazırlanması
    NOT: PM2.5, fare modeli21'de inflamasyonla ilişkili LUAD'ın oluşumunu ve gelişimini indükleyebilir. BALB / c fareleri ve NOD / Ltj fareleri, inflamasyonla ilgili değişiklikler geliştirmek için PM2.5 tarafından indüklendi. Piao ve ark.22 tarafından tarif edilen yönteme göre, PM2.5 süspansiyonunun konsantrasyonu 1 mg / mL'de hazırlandı.
    1. PM2.5 kuvars fiber membranları tartın, 2 cm × 2 cm'lik parçalar halinde kesin ve uygun miktarda deiyonize su içeren bir behere daldırın.
    2. Beheri kapatın ve her seferinde 30 dakika boyunca 37 ° C'de bir su banyosu sonikatöründe sonikleştirin. Parçacıklar tamamen çözülene kadar bu işlemi 3 kez tekrarlayın.
    3. Beherdeki sıvıyı 16 kat steril tıbbi gazlı bezden süzün, ardından gazlı bezden kalan nemi sıkın.
    4. Süzüntüyü düz bir tabağa koyun ve -20 °C dondurucuda buz blokları halinde dondurun. Ardından, süzüntüdeki buz bloklarını kurutmak ve toz haline getirilmiş parçacıkları toplamak için bir dondurarak kurutma aleti (-52 °C, 0,1 mbar, 48 saat) kullanın.
    5. 1 mg / mL konsantrasyonda bir PM2.5 süspansiyonu hazırlamak için toz haline getirilmiş parçacıkları tuzlu su içinde iyice çözün. PM2.5 süspansiyonunu bir cam şişeye dökün, yüksek basınçlı bir sterilizatöre koyun ve sterilizasyon için yüksek basınç ve sıcaklık (121°C'de 15 dakika, 15 psi) uygulayın.
    6. Ultrasonik çalkalama yapın (200 W, 10 s ajitasyon, 10 s dinlenme, 3 döngü için). İşlemden sonra, daha sonra kullanmak üzere 4 ° C'lik bir buzdolabında saklayın.
  3. PM2.5 fare modelinin kurulması
    NOT: PM2.5 grubu ve pSS-PM2.5 grubuna, her doz 0.1 mL olmak üzere 28 gün boyunca her 3 günde bir trakea damlası ile PM2.5 süspansiyonu uygulandı. Boş kontrol grubu ve pSS grubuna, her doz 0.1 mL olmak üzere, 28 gün boyunca her 3 günde bir trakea damlası ile fizyolojik salin uygulandı.
    1. Fareye bir Ketamin (100 mg / kg) ve Xylazine (10 mg / kg) karışımı enjekte edin. Bir ayak parmağı tutamına yanıt eksikliği olup olmadığını kontrol ederek ve tam kas gevşemesini sağlayarak cerrahi anestezi düzlemini onaylayın. Tüm adımlar tamamlanana kadar prosedür boyunca yeterli anestezinin sürdürülmesini sağlamak için refleksleri, solunumu ve genel yanıtı sürekli olarak izleyin.
    2. Fareyi, karnı yukarı bakacak, başı yukarıda ve kuyruğu 45°'lik bir açıyla indirecek şekilde küçük hayvan tutucunun üzerine yerleştirin. Farenin üst kesici dişlerinin etrafından dolaşmak, onları yukarı doğru çekmek için ince iplik kullanın ve ipliği hayvan tutucudaki bir vidaya sabitleyerek farenin ağız boşluğunun tam olarak açığa çıkmasını sağlayın.
    3. Soğuk ışık lambasını açın ve ışığı farenin boynunun derisine tutun. Farenin dilini çıkarmak için forseps kullanın ve glotis'i tamamen açığa çıkarın. Farenin ağız boşluğu içinde, farenin hava yolu açıklığının konumunu gösteren, tekrar eden bir açılma ve kapanma ışığı noktasını gözlemleyin.
    4. 18 G venöz kalıcı iğneyi fare trakeasına yerleştirin, iğne çekirdeğini dışarı çekin, pamuk ipliği venöz kalıcı iğnenin dış ucuna yerleştirin ve farenin göğüs hareketleriyle hareket eden pamuk ipliğini gözlemlerken başarıyı onaylayın.
    5. Önce 1 mL'lik bir şırınga kullanarak 0.2 mL hava aspire edin, ardından 0.1 mL PM2.5 süspansiyonunu aspire edin, ardından 0.2 mL daha hava aspire edin. Karışımı 18 G venöz kalıcı iğneden trakeaya enjekte edin.
    6. 18 G venöz kalıcı iğneyi dışarı çekin. Hayvan tutucuyu dik olarak sabitleyin ve PM30 süspansiyonunu farenin ciğerlerine eşit olarak dağıtmak için saat yönünde ve saat yönünün tersine 2.5 kez çevirin. Ardından, farenin boynunu düz bir şekilde uzatın ve boğulmayı önlemek için yan yatırın.
  4. Örneklerin toplanması
    NOT: Sonraki moleküler biyoloji analizleri için deneyin 29. gününde örnekleri toplayın.
    1. Ötenazi sisteminin bağlantısını kontrol edin ve denetleyici gücünü açın. Karbondioksit (CO2) tüp valfini açın.
      NOT: Hayvanları içine yerleştirmeden önce ötenazi odasını önceden doldurmayın.
    2. Fareleri hazneye yerleştirin ve CO2'yi dakikada hazne hacminin %30-70'inde infüze edin. Fareleri 5 dakika boyunca CO2'ye maruz bırakın, hareketsiz olduklarından, nefes almadıklarından ve genişlemiş göz bebeklerine sahip olduklarından emin olun. CO2 silindir valfini kapatın ve ölümü doğrulamak için 5 dakika daha gözlemleyin.
    3. Ötenazi fareyi temiz bir diseksiyon tahtası üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Trakea, kalp ve akciğerleri açığa çıkarın.
    4. Ventral, torasik ve boyun bölgelerini kaplayan deri ve kasları çıkarmak için makas ve forseps kullanın. Kalbi ve akciğerleri içeren göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için göğüs boşluğunun her iki yanındaki kaburgaların kenarları boyunca kesiler yapmak için makas ve forseps kullanın. Ardından, sol ve sağ akciğer loblarını iyice incelemek için yeterince geniş bir açıklık oluşturmak için köprücük kemiğini kesin.
    5. Sternum ve kaburgalardan çeneye uzanan boyun kaslarını çıkarın. Kaburgaların ön kenarının altına makas sokun ve trakeayı kaplayan kemikli kısmı çıkarmak için her iki tarafta kesiler yapın.
    6. Trakeayı çenenin yakınında forseps ile kavrayın ve forsepsin üzerine yerleştirilmiş makas kullanarak tam bir enine kesi yapın.
    7. Trakeayı forseps ile nazikçe yukarı çekin, tüm torasik doku vücuttan çıkarılana kadar ventral doku bağlantılarını makasla kesin.
    8. Akciğerleri tezgahın üzerine düz bir şekilde yerleştirin. Akciğer dokusu yüzey kalıntısını tuzlu su ile durulayın, filtre kağıdı ile kurulayın, kriyotüplere alın ve -80 °C'de saklayın.
  5. Kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR)
    1. Sıvı nitrojen içeren bir harç kullanarak akciğer dokusunu toz haline getirin.
    2. Hassas bir terazi kullanarak 20 mg öğütülmüş dokuyu tartın, bir santrifüj tüpünde 750 μL Tampon RL ile birleştirin, bir vorteks karıştırıcı kullanarak iyice karıştırın ve 3 dakika oda sıcaklığında (RT) bekletin. Ardından, RT'de 5 dakika boyunca 14.000 x g'da santrifüjleyin ve süpernatanı toplayın.
    3. Genomik DNA (gDNA) filtre mini kolonunu 2 mL'lik bir toplama tüpüne yerleştirin. Süpernatanı gDNA filtre mini kolonuna aktarın ve RT'de 2 dakika boyunca 14.000 x g'da santrifüjleyin.
    4. gDNA filtresi mini sütununu atın. Süzüntüye eşit hacimde %70 etanol ekleyin ve 5 kez yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın.
    5. RNA mini kolonunu 2 mL'lik bir toplama tüpüne yerleştirin. Karışımın 750 μL'sini RNA mini kolonuna aktarın ve RT'de 1 dakika boyunca 12.000 x g'da santrifüjleyin.
    6. Süzüntüyü atın ve RNA mini kolonunu 2 mL toplama tüpüne geri yerleştirin. RNA mini kolonuna 500 μL Tampon RW1 ekleyin ve RT'de 1 dakika boyunca 12.000 x g'da santrifüjleyin.
    7. Süzüntüyü atın ve RNA mini kolonunu 2 mL toplama tüpüne geri yerleştirin. RNA mini kolonuna 500 μL Tampon RW2 ekleyin. RT'de 1 dakika boyunca 12.000 x g'da santrifüjleyin. Bu adımı bir kez daha tekrarlayın.
    8. Süzüntüyü atın ve RNA mini kolonunu 2 mL toplama tüpüne geri yerleştirin. RT'de 2 dakika boyunca 12.000 x g'da santrifüjleyin.
    9. RNA mini kolonunu 1.5 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın, kolon zarının merkezine 100 μL RNaz içermeyen su ekleyin ve RT'de 2 dakika inkübe edin. Ardından, RT'de 1 dakika boyunca 12.000 x g'da santrifüjleyin. RNA mini kolonunu atın ve RNA çözeltisini -80 °C'de saklayın.
    10. RNA çözeltisinden 2 μL alın ve konsantrasyonunu ve kalitesini belirlemek için ekipman kılavuzuna göre NanoDrop spektrofotometresini kullanarak ölçün.
      NOT: Çalışmada RNA kalite kontrolü için 260/280 ve 260/230 oranları seçilmiştir.
    11. Aşağıdaki bileşenleri bir mikrosantrifüj tüpüne sırayla ekleyerek RNA çözeltisini hazırlayın: 1 μg toplam RNA, 4 μL MgCl2 (25 mM), 2 μL ters transkripsiyon 10x tampon, 2 μL dNTP karışımı (10 mM), 0.5 μL rekombinant ribonükleaz inhibitörü, 15 birim ters transkriptaz, 0.5 μg oligo(dT)15 primer, ve 20 μL'ye Nükleaz İçermeyen Su ekleyin. Tüpün altındaki tüm sıvıyı toplamak için içeriği hafifçe karıştırın.
      NOT: Daha tutarlı cDNA sentezi ve RNA miktar tayini sağlamak için kokteyl çözeltileri hazırlanmalıdır.
    12. 20 μL RNA çözeltisini 42 °C'de 15 dakika inkübe ederek, 95 °C'de 5 dakika denatüre ederek ve ardından 4 °C'ye soğutarak ve ardından -20 °C'de depolayarak cDNA'ya ters transkribe edin.
    13. Reaksiyon sistemini hazırlamak için 6.4 μL damıtılmış su, 10 μL SYBR Green gerçek zamanlı PCR ana karışımı, 2 μL elde edilen cDNA çözeltisi, 0.8 μL ileri primer (10 μM) ve 0.8 μL ters primer (10 μM) birleştirin ve iyice karıştırın (Tablo 1).
    14. Hedef genler ve referans genler için döngü eşiği (CT) değerlerini elde etmek için reaksiyonu PCR cihazında çalıştırın.
      1. Her PCR döngüsünün başında ilk denatürasyonu 60 saniye boyunca 95 °C'ye ayarlayın.
      2. PCR döngüleri sırasında, 15 saniye boyunca 95 ° C'de denatürasyon, 15 saniye boyunca 60 ° C'de tavlama ve 45 saniye boyunca 72 ° C'de uzatma gerçekleştirin ve uzatma adımı sırasında veri toplayın. Toplam 40 PCR döngüsü gerçekleştirin.
      3. PCR döngülerini tamamladıktan sonra, PCR cihazını kullanarak erime eğrisi analizini otomatik olarak gerçekleştirin.
        NOT: Erime eğrisi çift tepe veya düzensiz tepe şekli gösteriyorsa, bu, deneyle ilgili bir sorun olabileceğini gösterir.
    15. 2-ΔΔCT yöntemini kullanarak her bir hedef genin nispi ekspresyon seviyelerini belirleyin ve ardından daha fazla istatistiksel analiz yapın. 2-ΔΔCT yöntemi için aşağıdaki formül listesini kullanın:
      ΔCT (test) = CT (hedef, test) - CT (referans, test)
      ΔCT (kalibratör) = CT (hedef, kalibratör) - CT (ref, kalibratör)
      ΔΔCT = ΔCT (test) -ΔCT (kalibratör)
      2-ΔΔCT = Gen ifadesindeki kat değişikliği

Gen adıSıra (5 ′ ila 3 ′)
Fare CCNA2 ileriCCCAGAAGTAGCAGAGTTTGTG
Fare CCNA2 tersTTGTCCCGTGACTGTGTAGAG
Fare ASPM ileriCTTATTCAGGCTATGTGGAGGA
Fare ASPM tersCCAGGCTTGAATCTTGCAG
Fare CCNB2 ileriTTGAAATTTGAGTTGGGTCGAC
Fare CCNB2 tersCTGTTCAACATCAACCTCCC
Fare NUSAP1 ileriCTCCCTCAAGTACAGTGACC
Fare NUSAP1 tersTTTAACAACTTGGTTGCCCTC
Fare CEP55 ileriCCGCCAGAATATGCAGCATCAAC
Fare CEP55 tersAGTGGGAATGGCTGCTCTGTGA

Tablo 1: Kantitatif gerçek zamanlı PCR için asal diziler.

  1. Enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA)
    NOT: ELISA kitinin talimatlarına göre, ELISA kitini RT ile dengeleyin, bir yıkama tamponu hazırlayın ve standardı seyreltin. Önceden bir biyotinile antikor çalışma çözeltisi (1:100) hazırlamak için 90 μL konsantre biyotinile antikoru 8910 μL biyotinile antikor seyreltme tamponu ile seyreltin. Benzer şekilde, önceden bir enzim konjugat çalışma çözeltisi (1:100) hazırlamak için 90 μL konsantre enzim konjugatını 8910 μL enzim konjugat seyreltme tamponu ile seyreltin.
    1. Sıvı azot içeren bir harç kullanarak akciğer dokusunu toz haline getirin.
    2. Hassas bir terazi kullanarak 50 mg akciğer dokusunu tartın, bir öğütme tüpünde 1 mL PBS ile birleştirin ve buz üzerinde iyice öğütün.
    3. Karışımı 4 ° C'de, 3000 x g'de 5 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı bir örnek olarak toplayın.
    4. ELISA plakasının ilgili kuyucuklarına 100 μL numune/farklı konsantrasyonlarda standart yerleştirin, reaksiyon kuyularını yapışkan sızdırmazlık filmi ile örtün ve 37 °C'lik bir inkübatörde 90 dakika inkübe edin.
    5. ELISA plakasını 4 kez yıkamak için otomatik bir plaka yıkayıcı kullanın, her seferinde enjeksiyon ve aspirasyon arasında 30 sn aralıklarla 350 μL yıkama tamponu enjekte edin.
    6. Kuyucuk başına 100 μL biyotinile antikor çalışma solüsyonu ekleyin, kuyucukları yapışkan sızdırmazlık filmi ile kapatın ve 37 ° C'lik bir inkübatörde 60 dakika inkübe edin. Daha sonra, daha önce açıklanan prosedürü izleyerek ELISA plakasını 4 kez yıkayın.
    7. Kuyucuk başına 100 μL enzim konjugat çalışma çözeltisi ekleyin, kuyucukları yapışkan sızdırmazlık filmi ile kapatın ve 37 ° C'lik bir inkübatörde 30 dakika inkübe edin. Daha sonra, daha önce açıklanan prosedürü izleyerek ELISA plakasını 4 kez yıkayın.
    8. Oyuk başına 100 μL kromojenik ajan ekleyin, ışıktan koruyun ve 37 ° C'lik bir inkübatörde 10-20 dakika inkübe edin. Ardından, oyuk başına 100 μL durdurma çözeltisi ekleyin, iyice karıştırın ve optik yoğunluğu hemen 450 nm (OD450) değerlerinde ölçün.
      NOT: Biyotinile antikor çalışma solüsyonunu, enzim konjugat çalışma solüsyonunu ve durdurma solüsyonunu eklemek için 8 kanallı bir pipet kullanılır, bu da eklemenin hızlı bir şekilde tamamlanmasını ve olası hataların önlenmesini sağlar.
    9. Her bir numune kuyucuğundaki hedef maddelerin konsantrasyonunu hesaplamak için CurveExpert yazılımını (http:// curveexpert.webhop.net/) kullanarak standart bir eğri oluşturun.
  2. Batı lekeleme
    1. RIPA lizis tamponu, Fenilmetansülfonil florür (PMSF) ve fosfataz inhibitörünü 100:1:1 oranında karıştırarak radyoimmünopresipitasyon testi (RIPA) çözeltisini hazırlayın ve buzun üzerine yerleştirin.
    2. Sıvı azot içeren bir harç kullanarak akciğer dokularını toz haline getirin.
    3. Hassas bir terazi kullanarak 20 mg akciğer dokusunu doğru bir şekilde tartın ve 250 μL RIPA karışık çözeltisine ekleyin.
    4. Karışımı buz üzerinde 20 dakika inkübe edin, ardından 4 ° C'de 15 dakika boyunca 12.000 x g'da santrifüjleyin ve süpernatanı numune olarak toplayın.
    5. BCA kitinden Reaktif A ve Reaktif B'yi 50:1 oranında karıştırarak BCA çalışma çözeltisini hazırlayın.
      1. 0, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 ve 0.5 mg / mL konsantrasyonlarda seyreltilmiş standart çözeltiler hazırlamak için standardı seyreltin. Her standart çözeltiden 20 μL ekleyin ve 96 oyuklu bir plakanın ayrı oyuklarına numune alın ve 37 ° C'de 30 dakika inkübe edin.
      2. Mikroplaka okuyucuyu kullanarak absorbansı 490 nm'de ölçün. Standart çözeltilerin konsantrasyonlarını ve absorbanslarını kullanarak standart eğriyi uygun hale getirin ve numune konsantrasyonunu23 hesaplayın. RIPA karışık çözeltisini kullanarak numune konsantrasyonlarını aynı seviyeye ayarlayın.
    6. Protein süpernatanı bir santrifüj tüpünde 4: 1 oranında 5x yükleme tamponu ile karıştırın. Metal bir banyoda 5 dakika kaynatın, ardından 12.000 x g'da 4 ° C'de 15 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı toplayın.
    7. Sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) kullanarak protein ayrımı yapın ve proteinleri elektrikle bir poliviniliden florür (PVDF) membranına aktarın. PVDF membranını RT'de %5 yağsız sütle 1 saat bloke edin.
    8. PVDF membranını birincil antikor (1:1000 seyreltilmiş) ile 4 ° C'de 12 saat inkübe edin, ardından her biri 10 dakika boyunca TBST ile üç kez yıkayın ve daha sonra 2 saat boyunca RT'de ikincil antikor (1:5000 seyreltilmiş) ile inkübe edin.
    9. Tam otomatik bir elektrokemilüminesans immünoassay sistemi kullanarak hedef bantları tespit edin ve yerleşik yazılımı kullanarak kantitatif analiz gerçekleştirin.
  3. İstatistiksel analiz
    1. İstatistiksel analiz için uygun yazılımları kullanın.
    2. Deneysel verileri ortalama ± standart sapma olarak sunun.
    3. Tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanarak anlamlılığı belirleyin.
    4. P < 0.05'i istatistiksel olarak anlamlı olarak düşünün.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

GSE84884'daki 23348 genden (pSS) 2659 yukarı regüle gen ve 631 aşağı regüle gen dahil olmak üzere toplam 3290 DEG tanımlanmıştır (Şekil 1A). GSE51092 (pSS) için, 11409 genden, 667 yukarı regüle gen ve 587 aşağı regüle gen dahil olmak üzere toplam 3290 DEG tanımlanmıştır (Şekil 1B). GeneCards veritabanı, yumurtalık pSS ile ilgili 102 DEG elde etti ve tarama kriterlerinin korelasyon skoru ≥20 idi. GEO ve GeneCard'lardan elde edilen pSS ile ilgili DEG'lerin birleşt...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

pSS, esas olarak ekzokrin bezlerin invazyonu ile karakterize bir hastalık olarak kabul edilse de, ekstra bezlerin hasarı göz ardı edilemez24. Akciğerler, pSS için bir hedef organı temsil eder ve akciğer tutulumu, tipik olarak bronşiyal mukozanın lenfositik infiltrasyonu ve pulmoner interstisyum25'i içeren, pSS'nin yaygın bir salgı dışı belirtisidir. Araştırmalar, pSS hastalarının en az %20'sinin interstisyel akciğer hastalığı (ILD) yaşadığı...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Ulusal Üst Düzey Hastane Klinik Araştırma Fonu (2023-NHLHCRF-BQ-01) ve Çin-Japonya Dostluk Hastanesi Gençlik Projesi (No.2020-1-QN-8) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
3 Renkli Önceden Boyanmış Protein İşaretleyiciEpizyme WJ103Western Blot
Antikor Seyreltme TamponuEpizymePS119Western Blot
BCA Protein Miktar Tayin KitiEpizymeZJ101Western Blot
Cytoscape 3.7.1 yazılımıUlusal Genel Tıp Bilimleri Enstitüsü (NIGMS), Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH)Sürüm 3.7.1.Biyolojik ağ analizi ve görselleştirme için açık kaynaklı yazılım
ECL Işık SıvısıEpizymeSQ203Western Blot
Elektroforez TamponuEpizymePS105SWestern Blot
GraphPad Prism 10.0GraphPadSürüm 10.0Veri analizi
HRP konjuge Keçi anti-Tavşan IgG (H + L) (AS014)abklonalAS014Western Blot
JAK2 AntikorHücre Sinyal Teknolojisi3230TBatı
Blot Fare IL-1 ve beta; ELISA KitiPekin  4A  Biotech Co., LtdCME0015ELISA
Fare IL-6 ELISA KitiPekin  4A  Biotech Co., LtdCME0006ELISA
Fosfataz İnhibitörü Kokteyli (100&kez;)EpizymeGRF102Western Blot
Fosfo-JAK2 (Tyr1007/1008) AntikorHücre Sinyal Teknolojisi3776SWestern Blot
Fosfo-STAT3 (Tyr705) AntikorHücre Sinyal Teknolojisi9145SWestern Blot
Proteaz İnhibitörü Kokteyli (100&�)EpizymeGRF101Western Blot
Protein İçermeyen Hızlı Bloke Edici Tampon (5 kez;)EpizymePS108Western Blot
PVDF membranMillipore IPVH00010Western Blot
R yazılımıİstatistiksel Hesaplama için R VakfıUygulanamazVeri analizi, görselleştirme ve makine öğrenimi uygulamaları için kullanılan istatistiksel analiz yazılımı ve programlama dili
Radyo İmmünopresipitasyon TestiEpizymePC101Western Blot
Ters Transkripsiyon SistemiPromegaA3500PCR
SDS-PAGEEpizymeLK303Western Blot
SDS-PAGE Protein Yükleme Tamponu (5 kez;)EpizymeLT103Western Blot
STAT3 AntikorHücre Sinyal Teknolojisi9139SWestern Blot
SYBR Yeşil Gerçek Zamanlı PCR Ana KarışımıTOYOBOQPK-201PCR
TBST (10 kez;)EpizymePS103Western Blot
Western Blot Transfer Tamponu (10&kez;)EpizymePS109Western Blot
& beta; - Aktin AntikoruabklonalAC026Western Blot

Kaynaklar

  1. Thorlacius, G. E., Bjork, A., Wahren-Herlenius, M. Genetics and epigenetics of primary sjogren syndrome: Implications for future therapies. Nat Rev Rheumatol. 19 (5), 288-306 (2023).
  2. Bjordal, O., Norheim, K. B., Rodahl, E., Jonsson, R., Omdal, R. Primary Sjogren's syndrome and the eye. Surv Ophthalmol. 65 (2), 119-132 (2020).
  3. Zhong, H., et al. Hyperglobulinemia predicts increased risk of mortality in primary Sjogren's syndrome: Based on a Chinese multicentre registry. Mod Rheumatol. 34 (1), 137-143 (2023).
  4. Lin, W., et al. Interstitial lung disease in primary Sjogren's syndrome. BMC Pulm Med. 22 (1), 73(2022).
  5. Aiyegbusi, O., et al. Renal disease in primary Sjogren's syndrome. Rheumatol Ther. 8 (1), 63-80 (2021).
  6. Liampas, A., et al. Primary sjogren syndrome-related peripheral neuropathy: A systematic review and meta-analysis. Eur J Neurol. 30 (1), 255-265 (2023).
  7. Wu, J., et al. Clinical and laboratory features of primary Sjogren's syndrome complicated with mild to severe thrombocytopenia. Ann Transl Med. 10 (6), 300(2022).
  8. Zhong, H., et al. Primary Sjogren's syndrome is associated with increased risk of malignancies besides lymphoma: A systematic review and meta-analysis. Autoimmun Rev. 21 (5), 103084(2022).
  9. Goulabchand, R., et al. Cancer incidence in primary Sjogren's syndrome: Data from the French hospitalization database. Autoimmun Rev. 20 (12), 102987(2021).
  10. Witkowski Durand Viel, P., et al. Chronological interplay, clinical features, and treatments among patients with cancer and primary Sjogren's syndrome. Cancer Immunol Immunother. 72 (12), 4309-4322 (2023).
  11. Xu, Y., et al. The prevalence and clinical characteristics of primary Sjogren's syndrome patients with lung cancer: An analysis of ten cases in China and literature review. Thorac Cancer. 6 (4), 475-479 (2015).
  12. Shi, L., Du, X., Li, J., Zhang, G. Bioinformatics and systems biology approach to identify the pathogenetic link between psoriasis and cardiovascular disease. Clin Cosmet Investig Dermatol. 16, 2283-2295 (2023).
  13. Xu, R., Ma, L. L., Cui, S., Chen, L., Xu, H. Bioinformatics and systems biology approach to identify the pathogenetic link between heart failure and sarcopenia. Arq Bras Cardiol. 120 (10), e20220874(2023).
  14. Lv, Y., et al. Bioinformatics and systems biology approach to identify the pathogenetic link of long COVID and myalgic encephalomyelitis/chronic fatigue syndrome. Front Immunol. 13, 952987(2022).
  15. Barrett, T., et al. Ncbi geo: Archive for functional genomics data sets--update. Nucleic Acids Res. 41 (database issue), D991-D995 (2013).
  16. Stelzer, G., et al. The GeneCards suite: From gene data mining to disease genome sequence analyses. Curr Protoc Bioinformatics. 54, 1.30.1-1.30.33 (2016).
  17. Liu, S., et al. Three differential expression analysis methods for RNA sequencing: limma, EdgeR, DESeq2. J Vis Exp. 175, e62528(2021).
  18. Zhou, Y., et al. Metascape provides a biologist-oriented resource for the analysis of systems-level datasets. Nat Commun. 10 (1), 1523(2019).
  19. Szklarczyk, D., et al. The string database in 2023: Protein-protein association networks and functional enrichment analyses for any sequenced genome of interest. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D638-D646 (2023).
  20. Shannon, P., et al. Cytoscape: A software environment for integrated models of biomolecular interaction networks. Genome Res. 13 (11), 2498-2504 (2003).
  21. Hill, W., et al. Lung adenocarcinoma promotion by air pollutants. Nature. 616 (7955), 159-167 (2023).
  22. Piao, C. H., et al. PM2.5 exposure regulates th1/th2/th17 cytokine production through NF-κβ signaling in combined allergic rhinitis and asthma syndrome. Int Immunopharmacol. 119, 110254(2023).
  23. Desjardins, P., Hansen, J. B., Allen, M. Microvolume protein concentration determination using the nanodrop 2000c spectrophotometer. J Vis Exp. 33, e1610(2009).
  24. Luo, J., et al. Distinct clinical phenotypes of primary Sjogren's syndrome differ by onset age: A retrospective study of 742 cases and review of the literature. Clin Exp Rheumatol. 40 (12), 2373-2380 (2022).
  25. Luppi, F., et al. Lung complications of Sjogren syndrome. Eur Respir Rev. 29 (157), (2020).
  26. Berardicurti, O., et al. Interstitial lung disease and pulmonary damage in primary Sjogren's syndrome: A systematic review and meta-analysis. J Clin Med. 12 (7), 2586(2023).
  27. Roca, F., et al. Interstitial lung disease in primary Sjogren's syndrome. Autoimmun Rev. 16 (1), 48-54 (2017).
  28. Fisher, D. A., et al. Diagnosis and treatment of lung cancer in the setting of interstitial lung disease. Radiol Clin North Am. 60 (6), 993-1002 (2022).
  29. Okudela, K., et al. Implications of thyroid transcription factor-1 gene methylation in carcinogenesis of interstitial pneumonia-related non-terminal respiratory unit lung adenocarcinoma. Int J Clin Exp Pathol. 15 (3), 120-130 (2022).
  30. Sekine, A., et al. Disease activity of lung cancer at the time of acute exacerbation of interstitial lung disease during cytotoxic chemotherapy. Thorac Cancer. 13 (17), 2443-2449 (2022).
  31. Glaviano, A., et al. PI3K/AKT/mTOR signaling transduction pathway and targeted therapies in cancer. Mol Cancer. 22 (1), 138(2023).
  32. Ediriweera, M. K., Tennekoon, K. H., Samarakoon, S. R. Role of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway in ovarian cancer: Biological and therapeutic significance. Semin Cancer Biol. 59, 147-160 (2019).
  33. Hoxhaj, G., Manning, B. D. The PI3K-AKT network at the interface of oncogenic signalling and cancer metabolism. Nat Rev Cancer. 20 (2), 74-88 (2020).
  34. Liu, R., et al. PI3K/AKT pathway as a key link modulates the multidrug resistance of cancers. Cell Death Dis. 11 (9), 797(2020).
  35. Manogaran, P., Beeraka, N. M., Paulraj, R. S., Sathiyachandran, P., Thammaiappa, M. Impediment of cancer by dietary plant-derived alkaloids through oxidative stress: Implications of PI3K/AKT pathway in apoptosis, autophagy, and ferroptosis. Curr Top Med Chem. 23 (10), 860-877 (2023).
  36. Acosta-Martinez, M., Cabail, M. Z. The PI3K/AKT pathway in meta-inflammation. Int J Mol Sci. 23 (23), 15330(2022).
  37. Chen, G. Y., et al. Prediction of Rhizoma Drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5233462(2021).
  38. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of Rhizoma Drynariae restore the MMP/TIMP balance in models of osteoarthritis by inhibiting the activation of the NF-κβ and PI3K/AKT pathways. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 6634837(2021).
  39. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology analysis and experimental validation to investigate the mechanism of total flavonoids of Rhizoma Drynariae in treating rheumatoid arthritis. Drug Des Devel Ther. 16, 1743-1766 (2022).
  40. Yao, C., Narumiya, S. Prostaglandin-cytokine crosstalk in chronic inflammation. Br J Pharmacol. 176 (3), 337-354 (2019).
  41. Liu, P., et al. NOD-like receptor signaling in inflammation-associated cancers: From functions to targeted therapies. Phytomedicine. 64, 152925(2019).
  42. Damasceno, L. E. A., et al. PKM2 promotes Th17 cell differentiation and autoimmune inflammation by fine-tuning stat3 activation. J Exp Med. 217 (10), e20190613(2020).
  43. Banerjee, S., Biehl, A., Gadina, M., Hasni, S., Schwartz, D. M. JAK-STAT signaling as a target for inflammatory and autoimmune diseases: Current and future prospects. Drugs. 77 (5), 521-546 (2017).
  44. Jiramongkol, Y., Lam, E. W. FOXO transcription factor family in cancer and metastasis. Cancer Metastasis Rev. 39 (3), 681-709 (2020).
  45. Tong, X., et al. Targeting cell death pathways for cancer therapy: Recent developments in necroptosis, pyroptosis, ferroptosis, and cuproptosis research. J Hematol Oncol. 15 (1), 174(2022).
  46. Ou, H. L., et al. Cellular senescence in cancer: From mechanisms to detection. Mol Oncol. 15 (10), 2634-2671 (2021).
  47. Felten, R., et al. Interleukin 6 receptor inhibition in primary Sjogren syndrome: A multicentre double-blind randomised placebo-controlled trial. Ann Rheum Dis. 80 (3), 329-338 (2021).
  48. Bardsen, K., et al. Interleukin-1-related activity and hypocretin-1 in cerebrospinal fluid contribute to fatigue in primary Sjogren's syndrome. J Neuroinflammation. 16 (1), 102(2019).
  49. Barrera, M. J., et al. Tofacitinib counteracts il-6 overexpression induced by deficient autophagy: Implications in Sjogren's syndrome. Rheumatology (Oxford). 60 (4), 1951-1962 (2021).
  50. Liu, H., Zhou, Q., Xu, X., Du, Y., Wu, J. ASPM and TROAP gene expression as potential malignant tumor markers. Ann Transl Med. 10 (10), 586(2022).
  51. Qian, X., et al. CCNB2 overexpression is a poor prognostic biomarker in Chinese NSCLC patients. Biomed Pharmacother. 74, 222-227 (2015).
  52. Mo, M. L., et al. Use of serum circulating CCNB2 in cancer surveillance. Int J Biol Markers. 25 (4), 236-242 (2010).
  53. Li, L., et al. NuSAP is degraded by APC/C-Cdh1 and its overexpression results in mitotic arrest dependent of its microtubules' affinity. Cell Signal. 19 (10), 2046-2055 (2007).
  54. Fabbro, M., et al. Cdk1/Erk2- and Plk1-dependent phosphorylation of a centrosome protein, cep55, is required for its recruitment to midbody and cytokinesis. Dev Cell. 9 (4), 477-488 (2005).
  55. Jeffery, J., Sinha, D., Srihari, S., Kalimutho, M., Khanna, K. K. Beyond cytokinesis: The emerging roles of CEP55 in tumorigenesis. Oncogene. 35 (6), 683-690 (2016).
  56. Feng, Z., et al. Overexpression of abnormal spindle-like microcephaly-associated (ASPM) increases tumor aggressiveness and predicts poor outcome in patients with lung adenocarcinoma. Transl Cancer Res. 10 (2), 983-997 (2021).
  57. Zheng, H., et al. Comprehensive pan-cancer analysis reveals NuSAP1 is a novel predictive biomarker for prognosis and immunotherapy response. Int J Biol Sci. 19 (14), 4689-4708 (2023).
  58. Verstappen, G. M., Pringle, S., Bootsma, H., Kroese, F. G. M. Epithelial-immune cell interplay in primary sjogren syndrome salivary gland pathogenesis. Nat Rev Rheumatol. 17 (6), 333-348 (2021).
  59. El Rayes, T., et al. Lung inflammation promotes metastasis through neutrophil protease-mediated degradation of Tsp-1. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (52), 16000-16005 (2015).
  60. Zhao, L., et al. PM2.5 and serum metabolome and insulin resistance, potential mediation by the gut microbiome: A population-based panel study of older adults in china. Environ Health Perspect. 130 (2), 27007(2022).
  61. Li, J., et al. PM2.5 exposure perturbs lung microbiome and its metabolic profile in mice. Sci Total Environ. 721, 137432(2020).
  62. Liao, J. H., et al. Network pharmacology-based strategy to investigate the mechanisms of artemisinin in treating primary sjogren's syndrome. BMC Immunol. 25 (1), 16(2024).
  63. Hu, Q., et al. JAK/STAT pathway: Extracellular signals, diseases, immunity, and therapeutic regimens. Front Bioeng Biotechnol. 11, 1110765(2023).
  64. Xue, C., et al. Evolving cognition of the JAK-STAT signaling pathway: Autoimmune disorders and cancer. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 204(2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Diferansiyel Ekspresyon Gösteren GenlerKEGG ZenginleştirmeGO ZenginleştirmeProtein-Protein EtkileşimiJAK2 STAT3 Yolağıİnflamatuar SitokinlerHayvan Modeli
Akciğer Adenokarsinomu ile İlişkili Primer Sjögren Sendromu: Potansiyel Ortak Patojenik Mekanizmaların Araştırılması ve Deneysel Doğrulama
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.