Bu protokol, dokularda, özellikle beyinde demir birikiminin dağılımını ve miktarını değerlendirmek için yöntemler sunar. Protokol, numune hazırlama, Perls/DAB boyama, görüntü yakalama ve veri analizi prosedürlerini detaylandırır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
5xFAD Farelerin Beyinlerinde Demir Birikiminin Perls/DAB Boyama ile Değerlendirilmesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Yaygın bir nörodejeneratif hastalık olan Alzheimer hastalığı (AD), yaşlılarda demansın önde gelen nedenidir. Demir birikimi AH patogenezi ile yakından ilişkilidir. AD beyninde, yüksek demir seviyeleri, β-amiloid plakları, tau nörofibriler yumaklar ve apoptoz dahil olmak üzere karakteristik AD patolojileri ile güçlü bir şekilde ilişkilidir. Artan kanıtlar, düzensiz demir metabolizmasına bağlı oksidatif stresin AH patofizyolojisinde önemli bir rol oynadığını göstermektedir. Bu nedenle, AH patolojisinde demir birikiminin rolünü anlamak, AH tedavisinde kritik öneme sahiptir. Beyindeki demir ekspresyonunu ve dağılımını tespit etmek için kapsamlı bir demir boyama protokolü gereklidir. Bu protokol, beyindeki demir birikiminin miktarını ve dağılımını değerlendirmek için bir yöntemi tanımlamayı amaçlamaktadır. Reaktif hazırlama, fare tedavisi ve beyin bölümlerinin hazırlanması ile ilgili süreçleri açıklıyoruz. Ek olarak, boyama sonuçlarının kapsamlı bir şekilde yorumlanmasını sağlamak için hem kantitatif değerlendirmeyi hem de morfolojik değerlendirmeyi entegre eden sistematik bir analitik çerçeve ile birlikte, serebral doku kesitlerinde histokimyasal demir tespiti için ayrıntılı bir adım adım protokol sunuyoruz. Bu deneysel protokol, araştırmacıların beyindeki demir birikimlerini anlamalarına ve AD araştırmalarını desteklemelerine yardımcı olacaktır.
Giriş
Alzheimer hastalığı (AH) en sık görülen nörodejeneratif hastalıktır ve toplum için ciddi bir sorun haline gelmiştir. AD prevalansı 1,2,3,4 yaşla birlikte dramatik bir şekilde artmaktadır. Alzheimer hastalığının (AD) birincil patolojik özellikleri, tau proteinlerinin anormal fosforilasyonuna bağlı olarak β-amiloid (Aβ) plaklarının ve nörofibriler yumakların (NFT'ler) birikmesini içerir. Aβ, amiloid öncü proteininin (APP) β-sekretaz ve γ-sekretaz enzimleri tarafından sıralı bölünmesi yoluyla üretilir. Aβ üretimindeki veya klerensindeki düzensi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm prosedürler, Xuzhou Tıp Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin yönergelerine ve Çin hükümetinin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı düzenlemelerine uygun olarak gerçekleştirildi.
1. Hayvanların perfüzyonu
- Fiksatifi hazırlayın:% 4 paraformaldehiti (PFA) 1× fosfat tamponlu salin (PBS) içinde çözün (bkz. Tablo 1).
- Fareyi ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (15 mg / kg) ile intraperitoneal enjeksiyon ile uyuşturun. Fare uyuşturulduktan sonra, uzuvları sabitlemek için dört pimli perfüzyon cerrahisi tepsisine sabitleyin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
AD'nin bir fare modelinde demir dağılımını ve birikimini araştırmak için, 8 aylık 5xFAD farelerin sagital dilimlerinde Perls / DAB boyaması gerçekleştirdik. Şekil 3'te gösterildiği gibi, 8 aylık 5xFAD ve vahşi tip farelerde ve 2 aylık vahşi tip farelerde Perls/DAB boyama sinyalleri gözlenmiştir. 5xFAD farelerinde, hipokampus ve kortekste, özellikle hipokampusun subikulumunda yüksek Perls' / DAB boyama sinyalleri gözlendi. Yabani tip fareler, doğrulanmış negatif kontroller olarak görev yaptı;.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Demir birikimi Alzheimer hastalığı ile yakından ilişkilidir. Bir yandan, amiloid öncü proteininin artan ekspresyonu {NOTE:20}23 ve ayrıca hızlandırılmış Aβ üretimine yol açabilen gelişmiş γ-sekretaz aktivitesi dahil olmak üzere çoklu mekanizmalar yoluyla Aβ üretimine yol açabilir24; Öte yandan, artan demirin neden olduğu lipid peroksidasyonu, tau polimerizasyonunu teşvik edebilir, bu da nöronlarda25 tau proteininin a.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Bu araştırma, Çin Doğa Bilimleri Vakfı'nın genel bir projesi tarafından desteklenmiştir (hibe numarası: 32271010).
Teşekkürler
Bu çalışmanın hazırlanması sırasında yazarlar, dili ve okunabilirliği geliştirmek için DeepSeek'i kullandılar. Bu aracı/hizmeti kullandıktan sonra, yazarlar içeriği gerektiği gibi gözden geçirip düzenlediler ve yayının içeriği için tüm sorumluluğu üstlendiler.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 0.1 M PBS | biosharp | BL601A Çözelti | yapmak için deiyonize su ekleyin |
| ; | Beyotime | P0099 | 4 &� C'de Geri Yükle; Kullanım için C |
| 20X DAB çözeltisi | Bioss | C-0003 | Mix 10 & mu; l çözelti A, 10 & mu; l çözelti B ve 180 μ l PBS |
| Alkol | Supelco | 107017 | |
| HCL | Sigma | 7647-01-0 | 50 ml ketamine damıtılmış su ekleyin |
| Çin Ulusal İlaçlar | H20193336 | Anestezi Mikroskobu için 100 mg / kg | |
| Olympus | CX43 | ||
| Optimum kesme sıcaklığı bileşiği (OCT) | Sakura Finetek | 4583 | |
| potasyum ferrosinid çözeltisi | Sigma | 14038-43-8 | |
| ve nbsp; | YS Biyoteknoloji | YS-(BC)-2842 | Anestezizasyon için 15 mg / kg |
| Ksilenler | Sigma | 1330-20-7 |
Kaynaklar
- Karlawish, J., Jack, C. R., Rocca, W. A., Snyder, H. M., Carrillo, M. C. Alzheimer's disease: The next frontier-special report 2017. Alzheimer's Dement. 13 (4), 374-380 (2017).
- Praticò, D. Oxidative stress hypothesis in Alzheimer's disease: A reappraisal. Tre....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
