Heterojen insan UC-MSC'lerini oluşturan üç ana alt gruptan biri olan BAMBIyüksekMFGE8yüksek MSC'lerin izolasyonu, belirli hastalıklarda klinik etkinliği artırmak için gelecekteki uygulaması için bu alt tipin özelliklerinin ve işlevlerinin tam olarak anlaşılmasına yardımcı olur. Burada, BAMBIyüksekMFGE8yüksek UC-MSC'leri sıralamak için bir yöntem sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İnsan BAMBIyüksekMFGE8yüksek Göbek Kordonu Kaynaklı Mezenkimal Stromal Hücrelerin İzolasyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Umbilikal kord kaynaklı mezenkimal stromal/kök hücreler (UC-MSC'ler), çeşitli hastalıkların tedavisinde düşük immünojenisite ve güçlü immünomodülatör etkiler gösterir. İnsan UC-MSC'leri, farklı hücre şekillerine, proliferasyon oranlarına, farklılaşma yeteneklerine ve bağışıklık düzenleyici işlevlere sahip üç ana alt popülasyondan oluşan heterojen bir popülasyondur. Daha önce, UC-MSC'lerden başarılı bir şekilde izole edilen ilk alt grup olan BAMBIyüksekMFGE8yüksek UC-MSC'lerin lupus nefritini hafifletmede başarısız olduğu bulunmuştu. Bu nedenle, hastalıklar için MSC tedavisinde bu alt grubun işlevi ve altta yatan mekanizması bilinmemektedir. Bu MSC alt grubunun doğasını tam olarak anlamak için BAMBIyüksekMFGE8yüksek UC-MSC'leri fenotipleri, metabolizmaları ve işlevleri açısından izole etmek ve daha fazla araştırmak gerekir. Bu protokolde, BAMBIyüksekMFGE8yüksek alt popülasyonunu insan UC-MSC'lerinden izole etmek için ayrıntılı bir yöntem açıklıyoruz. UC-MSC'lerin alt popülasyonu, akış sitometrisi sıralaması ile BAMBI ve MFGE8 olmak üzere iki yüzey markörü ile etiketlenir. İzole edilen hücreler kültürlenir ve akış sitometrisi analizi ile doğrulanır. BAMBIyüksekMFGE8yüksek UC-MSC'lerde eksprese edilen spesifik genler RT-qPCR ile tanımlanır. Bu protokol, yüksek verimli ve saf hücre sıralaması ile sonuçlanır ve BAMBIyüksekMFGE8yüksek UC-MSC'lerin işaretleyici profillerini tanımlar.
Giriş
İnsan mezenkimal stromal/kök hücreleri (MSC'ler), osteositlere, adipositlere, kondrositlere ve diğer hücre tiplerine farklılaşabilen somatik progenitörlerdir1. MSC'ler ilk olarak kemik iliğinden izole edildi ve yaygın olarak göbek kordonu, yağ dokusu ve diğer dokulardan türetildi2. UC-MSC'ler kolayca elde edilebildiğinden ve düşük immünojenisite ve immünosüpresif etkiler sergilediğinden, çeşitli hastalıkları tedavi etmek için klinik çalışmalarda yaygın olarak uygulanmaktadır 3,4,5. MSC tedavisi hastalıkların tedavisi için umut verici bir potansiyel gösterse de, terapötik etkiler bireyler arasında tutarsızdır6. Bununla birlikte, MSC tedavisinin instabilitesinin nedeni hala belirsizdir.
Moleküler dalgalanmalar, morfoloji, farklılaşma kapasitesi ve terapötik fonksiyon MSC heterojenliğini oluşturur. Bazı çalışmalar ayrıca MSC'lerin farklı işlevlere sahip alt popülasyonlar oluşturduğunuvarsaymıştır 7,8 ve tek hücreli RNA dizilimi (scRNA-dizilimi) yoluyla MSC heterojenliğini araştırmıştır9,10. Sonuçlar, insan UC-MSC'lerinin spesifik transkriptomik özelliklere sahip farklı alt popülasyonlara sahip olduğunu, oysa az sayıda çalışmanın MSC alt popülasyonları olarak adlandırılan alt popülasyonları başarılı bir şekilde izole ettiğini ortaya koymuştur. Daha önce, BAMBIyüksekMFGE8yüksek UC-MSC alt popülasyonunun daha fazla saflaştırıldığı ve işlevsel olarak test edildiği scRNA-seq ve biyoinformatik analiz yoluyla insan UC-MSC'lerini imzalarına göre üç alt gruba ayırdık11. Bununla birlikte, bu alt grup lupus nefritini hafifletemedi. Bu nedenle, gerçek işlevlerini anlamak için BAMBIyüksekMFGE8yüksek MSC'lerin terapötik etkilerini diğer bozukluklarda test etmek gerekir.
Bu protokol, akış sitometrisi ve BAMBIyüksekMFGE8yüksek alt grubunun özellikleri ile floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması (FACS) yoluyla insan UC-MSC'lerinden izole edilme yöntemlerini ve BAMBIyüksekMFGE8yüksek alt grubunun özelliklerini açıklar.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu çalışma, 1989 Helsinki Bildirgesi'nde belirtilen ilkelere uygun olarak yürütülmüş ve Nanjing Üniversitesi Tıp Fakültesi Bağlı Drum Tower Hastanesi'ndeki Etik Kurul tarafından onaylanmıştır (onay numarası: 202019701). İnsan göbek kordonları, Nanjing Üniversitesi Tıp Fakültesi Bağlı Drum Tower Hastanesi'ndeki sağlıklı annelerden, doğal doğum eyleminden sonra elde edildi ve bu çalışmada kullanılmaları için bilgilendirilmiş onamlarını verdiler. Primer UC-MSC'ler, daha önce bildirildiği gibi insan göbek kordonlarından izole edildi11.
1. İzolasyon öncesi UC-MSC kültürü ve tanımlaması
- MSC'ler% 70-80 birleşmeye (P0) ulaştığında, hücreleri bir kez PBS ile yıkayın ve 37 ° C'de 2 dakika boyunca 1 mL% 0.25 tripsin-EDTA ekleyin. Daha sonra, tripsini nötralize etmek için 9 mL tam ortam ekleyin, hücre süspansiyonunu 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın ve hücreleri toplamak için 5 dakika boyunca 300 × g'da santrifüjleyin. Süpernatanı atın ve hücreleri yeniden süspanse etmek için uygun tam ortamı ekleyin. Her tabaktaki hücreleri üç T75 şişesine (P1) aktarın ve 37 ° C ve% 5 CO2'de bir hücre inkübatöründe kültürleyin.
- UC-MSC'leri tripsinizasyon yoluyla 2x'i geçtikten sonra, P3'te, hücreleri adım 1.1'de açıklanan adımlarla hasat edin. Santrifüjlemeden sonra, süpernatanı atın. FACS boyama tamponundaki hücreleri yeniden süspanse edin (% 2 FBS içeren 1x PBS) ve sayın. FACS boyama tamponunu 5-10 × 106 hücre / mL'lik bir nihai konsantrasyona ekleyin ve hücre süspansiyonunu buz üzerinde tutun.
- Bu hücre süspansiyonunun tüp başına 100 μL'sini farklı 1.5 mL'lik tüplere dağıtın. CD29, CD73, CD90, CD105, CD14, CD34, CD45, CD79 ve HLA-DR'ye (tümü 1:200'de) karşı izotip kontrolleri ve FACS antikorlarını 4 ° C'de 30 dakika boyunca hücrelere ekleyin.
- Hücreleri 2 kez FACS boyama tamponu ile yıkayın ve 300 × g'da 5 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı atın ve MSC belirteçlerini tanımlamak için akış sitometrisi analizi için 200 μL FACS boyama tamponunda çökeltileri yeniden süspanse edin.
2. BAMBIyüksek MFGE8yüksek UC-MSC'lerin akış sitometrisi ile izolasyonu
- BAMBIyüksekMFGE8yüksek UC-MSC'leri izole ederken UC-MSC'yi yaklaşık 5-10 × 106 hücre yoğunluğuna kadar kültürleyin. Hücreleri yuvarlak bir morfolojiye sahip olmaya başlayana kadar 5 dakika boyunca 0.5 mM EDTA ile ayırın, hücreleri 15 mL'lik konik bir tüpe aktarmak için tam ortamı ekleyin ve hücre süspansiyonunu birkaç kez yukarı ve aşağı pipetleyin tek hücreli bir süspansiyon hazırlamak için. Hücreleri saymak ve hasat edilen toplam hücre sayısını hesaplamak için 10 μL hücre süspansiyonu kullanın. Hücreleri toplamak için konik tüpü hücre süspansiyonu ile 300 × g'da 5 dakika santrifüjleyin.
- Hücreleri 1 mL tam ortamda 5-10 × 106 hücre / mL'lik nihai konsantrasyona yeniden süspanse edin ve hücre süspansiyonunu buz üzerinde tutun.
- Hücreleri dört adet 1.5 mL'lik mikrosantrifüj tüpüne bölün (yalnızca boş hücreler; BAMBI etiketli hücreler; MFGE8 etiketli hücreler; ve hem BAMBI hem de MFGE8 etiketli hücreler).
- Tüplere uygun konsantrasyonlarda (MFGE8 ve BAMBI, her ikisi de 1:100'de) primer antikorlar ekleyin, karıştırın ve hücreleri oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin.
- Etiketli hücreleri 1x PBS ile bir kez yıkayın ve 300×g'da 5 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı atın. Hücreleri 1 mL tam ortamda yeniden süspanse edin, hücrelere konjuge floresan ikincil antikorlar (keçi anti-tavşan IgG H & L Alexa Fluor 488 ve Alexa Fluor 647, hepsi 1: 1.000'de) ekleyin, karıştırın ve hücreleri oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin karanlıkta.
- Etiketli hücreleri adım 2.5'te açıklandığı gibi 1x PBS ile bir kez yıkayın. Hücreleri 500 μL'lik tam ortamda yeniden süspanse edin, kümeleri ve kalıntıları ortadan kaldırmak için 70 μm'lik bir hücre süzgecinden süzün ve süzüntüyü akış sitometrisi sıralaması için 15 mL'lik bir tüpe aktarın.
- Boş hücre tüpünü bir antikor eklemeden (negatif kontrol) çalıştırın ve antikor boyama ile negatif popülasyonun ölçeğini geçmek için ileri saçılmayı (FSC) ve yan saçılmayı (SSC) ayarlayın.
- Pozitifliğin grafiğin neresinde başladığını belirlemek için tek antikor etiketli hücre tüplerini (yani, MFGE8 + keçi tavşan önleyici IgG H & L Alexa Fluor 488 veya BAMBI + keçi anti-tavşan IgG H & L Alexa Fluor 647) geçit kontrolü olarak çalıştırın.
- BAMBIyüksekMFGE8yüksek hücre popülasyonunu sıralamak ve toplamak için deneysel numune tüplerini çalıştırın.
- Sıralanmış BAMBIyüksekMFGE8yüksek MSC'leri 24 oyuklu bir plakada plakalayın ve hücreleri 37 ° C ve% 5 CO2'de bir hücre inkübatöründe yetiştirin.
- Sıralanan BAMBIyüksekMFGE8yüksek MSC'ler, yeterli hücre elde etmek için iki geçiş boyunca büyüdüğünde, hücreleri ayırın ve adım 2.1-2.9'da açıklandığı gibi, akış sitometrisi ile sıralanan hücre popülasyonlarının saflığını sağlamak için bir sıralama sonrası analiz yapın. Alternatif olarak, toplanan hücre sayısı çok küçükse, insan BAMBI ve MFGE8 ekspresyonuna karşı geleneksel immünofloresan ile sıralanan hücrelerin saflığını inceleyin.
3. BAMBIyüksek MFGE8yüksek MSC'lerin karakterizasyonu
- Sıralanmış BAMBIyüksekMFGE8yüksek MSC'leri 12 oyuklu bir plakada büyütün, hücre morfolojilerini mikroskop altında inceleyin ve bunları sınıflandırılmamış MSC'lerinkiyle karşılaştırın.
NOT: Genel olarak, BAMBIyüksekMFGE8yüksek hücreleri, sınıflandırılmamış UC-MSC'lerden daha hızlı büyür. - Hücreler 12 oyuklu plakada yaklaşık% 90 birleştiğinde, hücre kültürü ortamını aspire edin, hücreleri bir kez 1x PBS ile yıkayın ve hücrelere 500 μL RNA ekstraksiyon reaktifi ekleyin. Plakayı oda sıcaklığında (RT) 5 dakika yavaşça çalkalayın.
- Karışımı pipetleyin ve RNaz ve DNaz içermeyen bir tüpe aktarın. 100 μL kloroform ekleyin, tüpü kapatın ve karışımı 15 saniye boyunca girdaplayarak kuvvetlice çalkalayın. Ardından, tüpün 3 dakika boyunca RT'de durmasına izin verin.
- Tüpü 11.000 × g ve 4 ° C'de 15 dakika santrifüjleyin.
- Üst sulu tabakanın yaklaşık 200 μL'sini yeni bir tüpe aktarın. Aynı hacimde izopropanol ekleyin ve birkaç kez iyice yukarı ve aşağı pipetleyin. Ardından, karışımın 10 dakika RT'de beklemesine izin verin.
- 11.000 × g ve 4 °C'de 15 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı atın.
- Tüpteki pelete 500 μL %75 etanol ekleyin ve tüpü birkaç kez hafifçe ters çevirin.
- Tüpü 6.000 × g ve 4 ° C'de 5 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı atın. Santrifüjlemeyi 6.000 × g'da 10 saniye boyunca bir kez tekrarlayın, kalan sıvıyı pipet ile dikkatlice aspire edin ve tüpü RT'de kurutun.
- RNA peletini çözmek için 10 μL RNaz içermeyen su ekleyin ve bir spektrofotometre kullanarak RNA konsantrasyonunu ölçün.
- 1 μg'a kadar toplam RNA'dan birinci iplikli cDNA'yı sentezlemek için üreticinin talimatlarını izleyin.
- Üreticinin talimatlarına göre gen ekspresyonunu tespit etmek ve ölçmek için bir qPCR kiti kullanın.
NOT: Kullanılan DNA primerlerinin dizileri Tablo 1'de listelenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1, insan UC-MSC'lerinin hücre yüzeyi işaretleyici ifade profillerini göstermektedir. Kültürlenmiş MSC'ler CD44, CD73, CD90 ve CD105 ekspresyonu için güçlü pozitif, CD14, CD34, CD45, CD79 ve HLA-DR ekspresyonu için negatifti. BAMBIyüksekMFGE8yüksek MSC'leri, ekili insan UC-MSC'lerinden ayrıldı ve BAMBI ve MFGE8 ekspresyonu, 3-4 geçiş için genişlemeden sonra akış sitometrisi ile yeniden analiz edildi (Şekil 2). Bu süreçte, BAMBIyük...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, BAMBIyüksekMFGE8yüksek alt popülasyonunun insan UC-MSC'lerinden nasıl izole edileceğini ve zenginleştirileceğini açıklar. Yöntem, bu MSC alt grubunun morfolojisi, büyümesi ve işlevinin daha fazla incelenmesi için önemlidir. BAMBIyüksekMFGE8yüksek hücrelerinin başarılı izolasyonu ve yüksek verimi için bazı adımlar hayati önem taşır.
İlk olarak, dikkate alınması gereken en kritik teknik husus, mevcut proto...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı tarafından desteklenmiştir (hibe no. 82271843).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 0.6 mL mikrosantrifüj tüpü | Corning | Axygen MCT-060-A | |
| 1.5 mL mikrosantrifüj tüpleri | Beijing Labgic Technology | MCT-001-150 | |
| 100 mm hücre kültürü kabı | Pekin Labgic Teknolojisi | 12311 | |
| 12 oyuklu plaka | Pekin Labgic Teknolojisi | 11210 | |
| 15 mL santrifüj tüpü | Nanjing Vazyme Malzeme Teknolojisi | TCF00115 | |
| 24 kuyulu plaka | Pekin Labgic Technology | 11310 | |
| 50 mL santrifüj tüpü | Nanjing Vazyme Malzeme Teknolojisi | TCF00150 | |
| 5 mL Yuvarlak Tabanlı Borular | Corning | FALCON 352003 | |
| 70 & mu; m hücre süzgeci | Falcon | 352350 | Seyreltme: 1:1000 |
| APC anti-insan CD79a (Igα) Antikor | BioLegend | 333505 | 581 Seyreltme: 1:200 |
| APC/Siyanin7 anti-insan CD73 (Ekto-5'-nükleotidaz) | Antikor BioLegend | 344022 | G46-6 Seyreltme: 1:200 |
| APC-CY7 Fare IgG1, κ İzotip Kontrolü | BD Bioscience | 557873 | MOPC-31C (İzotip Kontrolü) Seyreltme: 1:200 |
| BAMBI antikoru | Bioss | bs-12418R | |
| Brilliant Violet 510 anti-fare/insan CD44 Antikoru | BioLegend | 103044 | 5E10 Seyreltme: 1:200 |
| Parlak Menekşe 510 Sıçan IgG2b, κ İzotip Ctrl Antikoru | BioLegend | 400646 | MOPC-21 (İzotip Kontrolü) Seyreltme: 1:200 |
| CD105 (Endoglin) Monoklonal Antikor APC | eBioscience | 17-1057-42 | HM47 Seyreltme: 1:200 |
| Hücre Sayma Odası Slaytları | Şangay QIUJING | XB-K-25 | |
| Santrifüj | Pekin BAIYANG | BY-320C | |
| ChamQ Evrensel SYBR qPCR Master Mix | Vazyme | Q711-02 | |
| Kloroform | XILONG Bilimsel | 13700908 | |
| DMEM/F-12 (1:1) bazik (1x) | Gibco | C11330500BT | |
| EDTA (0.5 M), pH 8.0, Rnase içermeyen | Invitrogen | AM9260G | Seyreltme: 1:1000 |
| Etanol & | XILONG Bilimsel | 12803405 | |
| Fetal Sığır Serumu (FBS) | Gibco | 10099-141C | |
| FITC Fare Anti-İnsan CD34 | BD Bioscience | 555821 | IM7 Seyreltme: 1:200 |
| FITC Fare Anti-İnsan CD45 | BD Bioscience | 555482 | AD2 Seyreltme: 1:200 |
| FITC Fare Anti-İnsan HLA-DR | BD Bioscience | 555811 | SN6 Seyreltme: 1:200 |
| Akış Sitometresi | BD Bioscience | FACSAria™ III Hücre SıralayıcıAria | |
| Flowjo | BD Bioscience | V10 | |
| Nazik Hücre Ayrışma Reaktifi | KÖK HÜCRE Teknolojileri | 100-0485 | |
| Keçi Anti-Fare IgG H & L (Alexa Fluor 488) | abcam | ab150113 | HI30 Seyreltme: 1:200 |
| Keçi Anti-Tavşan IgG H & L (AlexaFluor 594) | abcam | ab150080 | Seyreltme: 1:1000 |
| HiScript II Q RT SuperMix qPCR için (+gDNA sileceği) | Vazyme | R223-01 | |
| Ters Mikroskoplar | Nikon | ECLIPSE Ts2 | |
| İzopropil Alkol | XILONG Scientific | 12802505 | |
| MFGE8 antikoru | Biorbyt | orb388429 | Seyreltme: 1:100 |
| Mikrosantrifüj | Thermo Fisher Scientific | FRESCO 21 | |
| Fare IgG1 kappa İzotip Kontrolü APC | eBioscience | 17-4714-42 | P3.6.2.8.1 (İzotip Kontrolü) Seyreltme: 1:200 |
| Fare IgG1 kappa İzotip Kontrolü FITC | eBioscience | 11-4714-42 | eBMG2b (İzotip Kontrolü) Seyreltme: 1:200 |
| Fare IgG2b kappa İzotip Kontrolü FITC | eBioscience | 11-4732-42 | RTK4530 (İzotip Kontrolü) < br / > Seyreltme: 1:200 |
| PBS (10x) | Sangon Biotech (Şangay) | E607016-0500 | |
| PE-CY5 Fare Anti-İnsan CD90 | BD Bioscience | 555597 | P3.6.2.8.1 (İzotip Kontrolü) Seyreltme: 1:200 |
| PE-CY5 Fare IgG1 & kappa; İzotip Kontrolü | BD Bioscience | 550618 | |
| Penisilin-Streptomisin 100x | Cytiva | SV30010 | Seyreltme: 1:100 |
| Gerçek Zamanlı PCR Sistemi | Thermo Fisher Scientific | Q6 | |
| RNaz içermeyen su | tarafından uygulanan Biyosistemler QIAGEN | 129112 | |
| Spektrofotometre | Thermo Fisher Scientific | NanoDrop One(840-317400) | |
| Steril mikropipet uçları | Pekin Labgic Teknolojisi | Seyreltme: 1:100 | |
| T75 hücre kültürü şişesi | Beijing Labgic Technology | 13212A | |
| Termal Döngüleyici | Uygulamalı Biyosistemler byThermo Fisher Scientific | Veriti | |
| Tri reaktif | Sigma Aldrich | T9424 | |
| Typsin-EDTA Çözeltisi | Biyo-Kanal Biyoteknolojisi | BC-CE-005 | |
| Su Ceketli CO2 Kuluçka Makinesi | Thermo Fisher Scientific | 3111 |
Kaynaklar
- Liechty, K. W., et al. Human mesenchymal stem cells engraft and demonstrate site-specific differentiation after in utero transplantation in sheep. Nat Med. 6 (11), 1282-1286 (2000).
- Zhou, T., et al. Challenges and advances in clinical applications of mesenchymal stromal cells. J Hematol Oncol. 14 (1), 24(2021).
- Xie, Z., et al. Tnf-alpha-mediated m(6)a modification of elmo1 triggers directional migration of mesenchymal stem cell in ankylosing spondylitis. Nat Commun. 12 (1), 5373(2021).
- Mcguire, J. J., et al. Mesenchymal stem cell-derived interleukin-28 drives the selection of apoptosis resistant bone metastatic prostate cancer. Nat Commun. 12 (1), 723(2021).
- Yuan, X., et al. Mesenchymal stem cell therapy induces flt3l and cd1c(+) dendritic cells in systemic lupus erythematosus patients. Nat Commun. 10 (1), 2498(2019).
- Wang, D., et al. Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation in active and refractory systemic lupus erythematosus: A multicenter clinical study. Arthritis Res Ther. 16 (2), R79(2014).
- Ortiz, L. A., et al. Mesenchymal stem cell engraftment in lung is enhanced in response to bleomycin exposure and ameliorates its fibrotic effects. Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (14), 8407-8411 (2003).
- Phinney, D. G. Functional heterogeneity of mesenchymal stem cells: Implications for cell therapy. J Cell Biochem. 113 (9), 2806-2812 (2012).
- Wang, Z., et al. Single-cell transcriptome atlas of human mesenchymal stem cells exploring cellular heterogeneity. Clin Transl Med. 11 (12), e650(2021).
- Chen, P., et al. Single-cell and spatial transcriptomics decodes wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells heterogeneity and a subpopulation with wound repair signatures. Adv Sci (Weinh). 10 (4), e2204786(2023).
- Chen, H., et al. Dissecting heterogeneity reveals a unique bambi(high) mfge8(high) subpopulation of human uc-mscs. Adv Sci (Weinh). 10 (1), e2202510(2022).
- Tsuji, K., et al. Effects of different cell-detaching methods on the viability and cell surface antigen expression of synovial mesenchymal stem cells. Cell Transplant. 26 (6), 1089-1102 (2017).
- Lai, T. Y., et al. Different methods of detaching adherent cells and their effects on the cell surface expression of fas receptor and fas ligand. Sci Rep. 12 (1), 5713(2022).
- Avinash, K., Malaippan, S., Dooraiswamy, J. N. Methods of isolation and characterization of stem cells from different regions of oral cavity using markers: A systematic review. Int J Stem Cells. 10 (1), 12-20 (2017).
- Galvao, I., et al. Rock inhibition drives resolution of acute inflammation by enhancing neutrophil apoptosis. Cells. 8 (9), 964(2019).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
