Canlı görüntülemeye uygun olan ktenofor Mnemiopsis leidyi'deki statokist ve ilişkili dokuların çıkarılması için basit bir protokol tarif ediyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Yüksek rejeneratif ktenoforlarda karmaşık bir duyu organının cerrahi olarak çıkarılması
Bu makalede
Özet
Özet
Ctenophore Mnemiopsis leidyi , tüm vücut rejenerasyonunun klasik bir hayvan modelidir. Birçok laboratuvar tekniği için artan izlenebilirlik ve bunların kalan Metazoa'nın olası kardeş grubu olarak filogenetik yerleşimi, ktenoforlarla çalışmaya yönelik bilimsel ilginin yakın zamanda yenilenmesine yol açmıştır. Birkaç gün boyunca vücudun ~% 15'i kadar küçük bir parçadan tam tüm vücut yenilenmesi de dahil olmak üzere herhangi bir eksik organ veya hücre tipini yeniden oluşturabilirler. Çoğu ktenofor gibi, M. leidyi de vücut pozisyonlarını ve yönelimlerini kontrol etmek için duyusal girdiyi motor çıkışına bağlayan, abortal olarak yerleştirilmiş, yerçekimi algılayıcı bir organa sahiptir. Bu protokol, M. leidyi'deki aboral organ (AO) kompleksinin ve ilişkili yapıların cerrahi olarak çıkarılmasını ve takip eden saatler ila günler içinde gerçekleşen yara iyileşmesi ve rejenerasyon süreçlerini görüntülemek için uygun kültürleme, taşıma ve montaj yöntemlerini gösterir. Bu basit teknikler, farklı deneysel paradigmalara ve laboratuvar bağlamlarına geniş ölçüde uyarlanabilir.
Giriş
Tarak jöleleri olarak da bilinen ktenoforlar, Dünya'nın deniz ortamları için kozmopolittir ve özellikle besin ağının bir parçası olarak ekosistemlerde önemli oyuncular olabilir. Ctenophore Mnemiopsis leidyi, tüm vücut yenilenmesinin tarihi ve giderek daha popüler hale gelen bir hayvan modelidir 1,2. Herhangi bir eksik organ veya hücre tipini yeniden oluşturma yetenekleri, embriyogenezin sonlarına doğru ortaya çıkar ve embriyonik sonrası ömürleriboyunca devam eder 3,4 (vücut büyüklüğünde ~ 0.1 ila >1.000 mm). A....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Araç ve gereçleri hazırlayın
- Standart bir Bunsen brülörü kullanarak, cam kılcal mikropipetlerden cam diseksiyon iğnelerini elle çekin. 1 mm'den büyük hayvanlar için, sıvı işleme için tasarlanmış kalibre edilmiş soda kireç cam mikropipetleri kullanın.
NOT: 100 μl boyutu, 0,5-3 mm'lik odak aralığında iyi sonuç verir.- Bunsen brülöründe keskin mavi bir alev konisi oluşturun.
- Cam pipetin orta noktasını, hafif basınç altında hareket edecek kadar yumuşayana kadar alevin içinde tutun.
- Pipeti alevden çıkarın ve kısa, güçlü bir iğne oluşturmak için hemen iki tarafı düz bir şekil....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Cydippid evresi M. leidyi tipik olarak yaralanmadan sonra ~ 20 dakika içinde yara kapanmasını tamamlar (Şekil 4 ve Şekil 5), organın tam rejenerasyonu 1-3 gün sürebilir. Bu zamanlama bazı biyolojik değişkenliklere sahiptir, ancak neredeyse her zaman ameliyattan 72 saat sonra tamamlanır (Şekil 6).
Aboral organ kompleksinden ve yakındaki dokulardan hücrelerin ve mezogleananın cerrahi olarak çıkarıl.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
İstenilen herhangi bir boyutta M. leidyi üzerinde benzer deneyler yapılabilir; Organın morfogenezi, rejeneratif yeteneğinbaşlamasıyla eş zamanlı olarak tamamlanır 4. Hayvanlar vahşi doğadan19 toplanabilir veya laboratuvardayetiştirilebilir 20,21. Belirli bir vücut büyüklüğü isteniyorsa, hayvanların yumurtlamasına izin verilebilir ve yavrular istenen boyuta yükseltilebilir. .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Yazarlar Jovita Joseph'e minnetle teşekkür ederler.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 0.2 μ m SFCA şırınga filtresi | Termo/Nalgen | 723-2520 | Steril deniz suyu oluşturun |
| 35 mm polistiren petri kabı | Şahin/Corning | 351008 | kesintiler yapmak; Kültür Küçük Hayvanlar |
| 60 mL tek kullanımlık luer-lock şırınga | BH Malzemeleri | BH60LL | Steril deniz suyu oluşturun |
| Kalibre edilmiş cam pipetler, 100 μ L | Drummond | 2-000-100 | Kesimler gerçekleştirin |
| Kapak camları, #1,5, 18 mm kare | VWR | 16004-326 | Görüntüleme için montaj aparatı |
| ktenoforlar | Körfez Örnekleri | Canlı hayvanlar | |
| Çift boşluklu cam çöküntü kızakları, 1,3 mm | VWR | 470200-930 | Görüntüleme için montaj aparatı |
| Cam mikroskop slaytları | VWR | 16004-398 | Görüntüleme için montaj aparatı |
| Anında Okyanus Deniz Tuzu | Anında Okyanus | Hayvan Kültürü Ortamı | |
| mini cetvel | Ted Pella | 13623 | Plastik pipetleri ölçün |
| Modelleme kili (hamuru) | Pepy Plastilina | Görüntüleme için montaj aparatı | |
| Petroelum Jöle | Vazelin | Görüntüleme için montaj aparatı | |
| Plastik Transfer Pipetleri (Çeşitli Boyutlarda) | Cole-Parmer | 06226-13, 06226-12, 06226-01 | Küçük hayvanları hareket ettirin |
| Rain-X cam işleme | Yağmur-X | Mikroskop slaytlarını silanize edin | |
| cetvel | Batı Cott | 10564 | Plastik pipetleri ölçün |
| makas | OXO | plastik pipetleri kes |
Kaynaklar
- Edgar, A., Mitchell, D. G., Martindale, M. Q. Whole-body regeneration in the lobate ctenophore Mnemiopsis leidyi. Genes. 12 (6), 867(2021).
- Martindale, M. Q., Henry, J. Q. Ctenophora. Evolutionary Developmental Biology of Invertebrates 1. , Springer. 179-201 (2015).
- Martindale, M. Q.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
