Tuzlu burun lavajı, köpek burun bağışıklık mikroçevresini örneklemek için kullanılabilir. Yaklaşım nispeten non-invaziv olduğu ve burun dokularını bozmadığı için seri olarak uygulanabilir. Nazal lavaj tekniğinden toplanan hücreler ve proteinler çeşitli laboratuvar analizleri için işlenebilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Köpek Nazal İmmün Mikroçevresinin Örneklenmesi için Tuzlu Su Lavajı
Bu makalede
Özet
Özet
Köpek burun boşluğunun lokal bağışıklık mikro ortamının değerlendirilmesi, normal doku sağlığı ve hastalık durumlarının, özellikle de lokal inflamasyonla ilişkili olanların araştırılması için önemli olabilir. Seri nazal lavaj yoluyla köpeklerin lokal nazal bağışıklık mikro çevresini değerlendirmek için bir tekniği optimize ettik. Kısaca, anestezi altındaki köpeklerde ve sternal yaslanma pozisyonunda, önceden ısıtılmış steril salin, esnek bir yumuşak kauçuk kateter kullanılarak etkilenen burun deliğine akıtılır. Sıvı geri akışı konik borularda toplanır ve bu işlem tekrarlanır. Yerinden çıkmış hücreler ve proteinler içeren sıvılar toplanır ve havuzlanan nazal lavaj örnekleri, büyük döküntüleri ve mukusu uzaklaştırmak için bir hücre süzgecinden süzülür. Numuneler santrifüjlenir ve hücre peletleri analiz için izole edilir. Numuneler işlendikten sonra, nazal lavajı takip edebilecek analizler arasında akış sitometrisi, toplu veya tek hücreli RNA dizilimi yoluyla hücrelerin transkriptomik analizi ve/veya lavaj sıvısında bulunan sitokinlerin miktar tayini yer alır.
Giriş
Köpekler yaşamları boyunca rutin olarak inflamatuar burun rahatsızlıkları geliştirirler. Köpeklerde akut veya kronik rinitin altında yatan neden, bulaşıcı (viral: örneğin, grip, parainfluenza, herpesvirüsler; bakteriyel [örneğin, Bordetella, mikoplazmalar], mantar [örneğin, aspergilloz, kriptokokoz]; parazitik [örneğin, burun akarları]) neoplastik (örneğin, sinonazal maligniteler, en yaygın olarak karsinom veya sarkom histotipleri) yabancı maddelere (örneğin, yabancı cisim, yer değiştirmiş dişlerin intranazal göçü) periodontal hastalığa kadar değişebilir. yanı sıra köpek idiyopatik inflamatuar rinit....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu nazal lavaj prosedürü, Colorado Eyalet Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi ve Klinik İnceleme Kurulu (IACUC # 2425) tarafından onaylanmıştır. Nazal lavaj yönteminin bir şeması Şekil 1'de sunulmuştur.
1. Burun lavajı için hazırlık
- Nazal lavaj işleminden bir gün önce, beş adet 20 mL'lik şırıngayı steril fizyolojik salin (% 0.9 sodyum klorür çözeltisi) ile doldurun ve bir kapakla kapatın. Şırıngaları, gece boyunca ısınabilmeleri için 37 °C'ye ayarlanmış bir inkübatöre yerleştirin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu nazal lavaj yöntemiyle, toplanan örnek, tüp döndürüldüğünde muhtemelen görünür hücresel kalıntı ve mukus parçaları ile birlikte hafif bulanık görünecektir. Lavaj prosedürü yanlışlıkla kanamaya neden olursa ve numune kırmızıya boyanırsa, bir numune periferik kanla kontamine olarak kabul edilir. İnfüzyon edilen salinin bir kısmı prosedür sırasında kaybolacak olsa da, infüze edilen salin burun deliğinden tüpe geri akmazsa negatif bir lavaj düşünülecektir; Potansiyel nedenler, başın etkili bir geri akışa izin verecek kada.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Nazal lavaj protokolünde birkaç kritik adım vardır. Nazal lavaj prosedürü uygulanan köpekle ilgili olarak, köpeğin kateter yerleştirilmesine veya lavaj uygulamasına tepki vermemesi için yeterince derin bir anestezi düzlemi içinde olması gerekir. Anestezi altında reaktif olurlarsa, bu, lavaj örneği toplamanın kalitesini ve miktarını tehlikeye atabilir ve ayrıca intranazal kateterden gelen lokal travma veya lavaj sıvısını aspire eden köpek için akut burun dokusu yaralanması risklerini pota.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Burada açıklanan köpek burun lavajı tekniği, K01 OD03109, CCTSI Colorado Pilot Hibe Ödülü, CSU CVMBS Koleji Araştırma Konseyi Paylaşılan Kaynaklar Programı ve CO HNC SPORE CA261605: Kariyer Geliştirme Programı tarafından desteklenen projeler aracılığıyla optimize edilmiştir. Şekil 1 , BioRender.com ile oluşturulmuştur.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1.5 mL Tüpler | Eppendorf | 05-402 | |
| 1000 & mikro; L Pipet | VWR | 89079-974 | |
| 1x PBS | Corning | 21-040-CV | |
| 20 mL Şırıngalar | VWR | BD302830 | |
| 50 mL Konik Tüpler | VWR | 89039-656 | |
| 70 & mikro; m Hücre Süzgeci | Fisherbrand | 22-363-548 | |
| 8FR Steril Kırmızı Kauçuk Kateter | Med Vet International | 50-252-2428 | |
| ACK Lizis Tamponu | Gibco | A1049201 | |
| Santrifüj | Beckman Coulter | 366816 | |
| Fizyolojik Salin (%0.9) | Vetivex | 17033-492-01 | |
| Vorteks | VWR | 10153-838 |
Kaynaklar
- Cohn, L. A. Canine nasal disease: An update. Vet Clin: Small Anim Pract. 50 (2), 359-374 (2020).
- Mortier, J., Blackwood, L. Treatment of nasal tumours in dogs: A review. J Small Anim Pract. 61 (7), 404-415 (2020).
- Plickert, H., Tichy, A., Hirt, R.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
