İskemik İnmenin Sıçan Modelinde İmmünofloresan ile Hücre Ölümü Sinyalinin Değerlendirilmesi

Özet

Sıçan in vivo modelleri, iskemik inme için patolojik mekanizmaları ve terapötik hedefleri araştırmak için vazgeçilmez araçlardır. Bu çalışma, sıçanlarda orta serebral arter tıkanıklığını (MCAO) takiben enfarktüslü beyin dilimlerinde immünofloresan boyama gerçekleştirmeyi açıklayacaktır.

Özet

İnme, dünya çapında önde gelen bir ölüm ve sakatlık nedenidir. İnme vakalarının çoğu iskemiktir ve orta serebral arterin (MCA) tıkanmasından kaynaklanır. İskemik inme tedavisi için mevcut farmakolojik yaklaşımlar sınırlıdır; Bu nedenle, inme sonrası iskemik hasara karşı etkili nöroproteksiyon sağlayan yeni tedavilere acilen ihtiyaç duyulmaktadır. İskemik inmeyi takiben beyin dokusunda, iskemik penumbra alanı kurtarılabilir ancak geri dönüşü olmayan hasara ilerleme riski vardır. Enfarktüslü çekirdeği çevreleyen penumbral alan, nöroproteksiyon için kavramsal bir hedeftir. Penumbral bölgede kan akımı kısmen sağlandığından, bu bölgedeki nöronal ve nöronal olmayan hücreler inme sonrası geçici olarak hayatta kalır ve hala canlı olan bu hücreler uygun tıbbi müdahaleler ile kurtarılabilir. Penumbranın patofizyolojisini anlamak, nöroprotektif tedavilerin geliştirilmesinde önemlidir, çünkü iskemik penumbrada aktive olan hücre ölüm yolları, RUNX1 ve katepsinler gibi terapötik hedefleri gösterebilir. Programlanmış hücre ölümünün aracıları olarak işlev gören bu protein hedefleri, translasyonel araştırmalarda daha fazla kullanılabilir. Orta büyüklükte ve insan beynine benzerlik gösteren, MCA oklüzyonunun (MCAO) in vivo sıçan modeli, insan iskemik inmesini taklit eder ve penumbral patolojiyi araştırmak, hücre ölümü sinyalini incelemek ve MCAO bağlamında potansiyel hedeflerin etkilerini değerlendirmek için uygulanabilir bir araç sunar. Burada, sıçanlarda MCAO'nun nasıl indükleneceğini ve MCAO'yu takiben sıçan beyninde hücre ölümü sinyalinin tespiti için immünofloresan boyamanın nasıl gerçekleştirileceğini açıklıyoruz.

Giriş

Serebral inme, dünya çapında önde gelen bir ölüm ve sakatlık nedenidir¹. İnmenin yüksek mortalite ve morbiditesi, büyük kamu sağlık hizmeti yüküne ve ciddi sosyo-ekonomik sonuçlara neden olmaktadır. İnme insidansı ve mortalite oranı sabit kalmakla birlikte, inme hastalarının ve inmeye bağlı ölümlerin sayısı on yıllar boyunca artmaktadır ^2,3. İnmeler iskemik veya hemorajik olarak kategorize edilebilir. İnme olgularının büyük çoğunluğu bir ana serebral arterin tıkanması sonucu oluşan iskemik inmelerdir⁴. Bugüne kadar, doku plazmino....

Protokol

Bu protokol ve burada bildirilen deneyler Sichuan Üniversitesi Tıp Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. Hayvanların bakımı ve kullanımı yerel ve uluslararası etik kriterlere uygundu.

NOT: Bu çalışmada 250-280 g ağırlığındaki erişkin erkek Sprague-Dawley sıçanları kullanıldı. Sıçanlar standart bir çevresel koşulda (20-22 ° C sıcaklık, 12 saat aydınlık / karanlık döngü) barındırıldı, standart bir sıçan formülü diyeti ve yüksek saflıkta su ile beslendi. Cerrahi işlem steril şartlarda yapıldı.

1. MCAO'nun sıçan modeli

1. 1 L / dk'da oksijen ile% 4 izoflur....

Sonuçlar

Sıçanlar MCAO sırasında 120 dakika iskemiye ve ardından 22 saat reperfüzyona tabi tutulur. MCAO cerrahisi sırasında mortalite oranı minimaldi ve reperfüzyon süresi içinde % civarındaydı. MCAO grubunda önemli beyin hasarı gözlenirken, Sham grubunun beyninde enfarktüs gözlenmedi (24.87 ± %1.21'e karşı %0 enfarktüs alanı toplamı; MCAO [n = 3] vs. Sham [n = 3], P < 0.001; Şekil 1A,B). MCAO grubunda, katepsin-B'nin immünoreaktiviteleri iskemik çekirdekte belirgin artı.......

Tartışma

Serebral arterin tıkanması, oksijen ve beslenme yoksunluğuna, ardından reaktif oksijen türlerinin aktivasyonuna, hücre içi kalsiyum aşırı yüklenmesine, glutamat salınımına ve inflamatuar yanıtların indüksiyonuna yol açar¹⁵. Bu olaylar dizisi, enfarktüslü beyinde hücre ölümü ve geri dönüşü olmayan doku hasarı ile sonuçlanır. Penumbra, uygun bir terapötik pencere içinde tıbbi müdahale ile potansiyel olarak kurtarılabilir¹⁶. İskemik inme için .......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Akoya Vectra Polaris	Akoya Biosciences	N/A	Vectra Polaris multispektral görüntüleme sistemi
Susuz etanol	Chengdu Jinshan Kimyasal Reaktif Co.	N/A
Buprenorfin	Batı Çin Hastanesi	N/A
Carprofen	Batı Çin Hastanesi	N/A
Katepsin-B antikoru	Abcam	Ab214428
Kriyostat	LEICA	LEICA CM 1950
Dijital fotoğraf makinesi	OLYMPUS	TG-7
Keçi Anti-Sıçan IgG (H + L) (FITC konjuge)	Elabscience	E-AB-1021
Keçi serumu	Solarbio	SL038
GraphPad Prism 10 yazılımı	N/A	https://www.graphpad-prism.cn/?c=i&a=prismdownload_cn
ImageJ	N/A	https://imagej.net/ij/
İmmünohistokimya kalemi	Biosharp	http://www.biosharp.cn/index/product/details/language/en/product_id/2828.html
InForm yazılımı	Akoya Biosciences	Sürüm 2.6.0	multispektral görüntüleme sistemi için sistem yazılımı
İyodofor dezenfeksiyon çözümü	Huatian Technology Industry Co.	Yok
İzofluran	RWD Yaşam Bilimleri A.Ş.	https://www.rwdstco.com/inhalation-anesthesia-solutions/
DAPI	Solarbio	S2110
Naylon monofilament	RWD Life Science Co.	https://www.rwdstco.com/
Optimum kesme sıcaklığı (OCT) bileşiği	Epredia	N/A
Paraformaldehit	Biosharp	N/A
Fosfat tampon çözeltisi (PBS)	Solarbio	N/A
Prism	GraphPad	Sürüm 10
Proteinaz K	Tiangen	RT403-02
Tuzlu	Kelun Co.	Yok
Sprague-Dawley sıçanları	Huafukang Co.	N/A
Sükroz	BioFroxx	1245GR500
Cerrahi aletler	RWD Life Science Co.	N/A
TO-tipi şeffaf biyolojik ajan	Pekin Solarbio Bilim & Teknoloji A.Ş.	http://www.solarbio.net/
Trifeniltetrazolyum klorür (TTC) çözeltisi	Solarbio	G3005
Triton X-100	BioFroxx	1139ML100
TUNEL kiti	Elabscience	E-CK-A321

içeren montaj ortamı Serisi