Pediatrik sarsıntılar, fizyolojik ve psikolojik bozulmalarla birlikte uzun süreli sekellere neden olabilir. Bu pediatrik beyin sarsıntısı fare modeli, uzun süreli nöroinflamasyon, beyaz cevher değişiklikleri ve davranışsal işlev bozukluğu ile nöronal modifikasyonlar ile sonuçlanır. Model, yaşam süresi değişikliklerini değerlendirmek için diferansiyel çarpma konumlarına veya tekrarlanan sarsıntılara uyarlanabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Pediatrik Beyin Sarsıntısı Modeli: Uzun Süreli Bozukluklarla Kapalı Kafa Travması (ÇOCUK)
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Çocukluk döneminde beyin sarsıntısı ve hafif travmatik beyin yaralanmaları (mTBI) önemli bir sağlık tehlikesini temsil eder ve birçok hasta yaşamın ilerleyen dönemlerinde zayıflatıcı fizyolojik, nörolojik ve psikososyal sonuçlar sergiler. Hücresel ve moleküler patofizyolojik mekanizmalar nispeten bilinmemektedir ve bu önemli boşluk, kronik sekelleri hafifletmek için spesifik terapötik stratejilerin araştırılmasını etkili bir şekilde engellemektedir. Tek bir hayvan sarsıntısı modeli, insan deneklerde bildirilen tüm özellikleri özetlemez ve mevcut modeller, belirli araştırma sorularını yanıtlamak için tasarlanmıştır. Uzun Süreli Bozukluk (CHILD) ile Kapalı Kafa Travması olarak adlandırılan, karşılaşılan klinik erken ve uzun vadeli semptomolojiyi özetleyen bir çocuk sarsıntısı geliştirmek için yola çıktık. Bu modelde, bir elektromanyetik çarpma tertibatı aracılığıyla bir sarsıntı kuvveti, hafif anestezi uygulanmış, dizginlenmemiş bir doğum sonrası 17. gün (P17) faresinin kafasına iletilir ve başın serbest dönmesine izin verilir. Fareler, stereotaktik bir cihaz boyunca sıkıca gerilmiş bir kalay folyo üzerine yerleştirilir ve çarpma tertibatı, hedeflenen kortikal bölge ile dikkatlice hizalanır. Elektromanyetik çarpma tertibatı, yaralanma şiddetini belirlemek için darbe derinliği, bekleme ve süre seçimini kolaylaştırır. Bu modelin güçlü yanlarından biri, önemli bir klinik özellik olan baş rotasyonuna izin vermesidir. Çarpışmadan sonra, fareler çevrelerini keşfetmek için doğru zaman ve zaman için hemen izlenir ve ardından barajlarına geri dönerler. Beyin sarsıntısının şiddetini arttırmak, farelerin bir alt kümesinde intrakraniyal kanamalara neden olur. Fareler, istenildiği gibi ömürleri boyunca davranış ve nörogörüntüleme açısından rutin olarak izlenebilir. Çeşitli yaralanma şiddetleri, juvenil sarsıntıların heterojen doğasını taklit eder. Mevcut standart CHILD modeli kafatası kırığı göstermez, gözlemlenebilir konvansiyonel nörogörüntüleme değişikliği göstermez (kliniğe benzer), ancak ilerleyici ve kalıcı nöronal ölüme, değişmiş difüzyon MRG'ye, modifiye nöronal aktiviteye ve plastisiteye, artmış gliozise ve yaşla birlikte ilerleyici davranışsal bozulmalara yol açar. Özetle, bu CHILD modeli, birçok klinik beyin sarsıntısı hastasında gözlenen erken ve uzun vadeli özellikleri taklit eder.
Giriş
Pediatrik Travmatik Beyin Hasarı (TBH), pediatrik acil tıbbi bakım ziyaretlerinin önde gelen nedenini temsil ettiği ve yaşamın ilerleyen dönemlerinde zayıflatıcı sağlık sonuçları ile ilişkili olduğu için önemli bir sağlık sorunudur. Tüm TBH vakalarının %75'ini oluşturan hafif TBH (mTBI)bile 1, fizyolojik, psikolojik, nörolojik ve bilişsel işlev bozuklukları dahil olmak üzere uzun vadeli anormalliklere yol açar2. Pediatrik mTBH'nin yüksek oluşumuna ve bununla ilişkili önemli sağlık risklerine rağmen, kronik eksikliklerden önce gelen patolojik, hücresel ve moleküler mekanizmalar hala yeterince araştırılmamıştır. Bu bilgi eksikliği, pediatrik mTBH için etkili tedavilerin ve tanı yöntemlerinin geliştirilmesini engellemektedir.
Yetişkin kemirgen TBI modelleri ağırlık düşüşü, kontrollü kortikal etki ve sıvı perküsyon yaralanmasını içerir ve orta ila şiddetli yaralanmaları ortaya çıkarmak için titre edilebilir (sonuç ölçümlerine bağlı olarak)3,4. Bu yetişkin modellerin çoğu pediatrik TBI5,6 için uyarlanmıştır. Son on yılda, mTBI modelleri, kapalı kafa travması olan kemirgenlerde ve rotasyonel modellerdegeliştirilmiştir 7. Bununla birlikte, bu modellerin gelişmekte olan kemirgenlerde uygulanması, erişkin TBH literatürüne kıyasla seyrektir8. Pediatrik klinik heterojenliği modelleyen çok çeşitli şiddetleri kapsayan klinik önemi ele almak için bu çalışma, Uzun Süreli Bozukluklu Kapalı Kafa Travması (CHILD) TBI modelini geliştirdi. CHILD, 2-3 yaşındaki çocuklardagözlenen miyelinleşme zirvesine karşılık gelen gelişimsel bir yaş olan P17 fareleri kullanan cerrahi olmayan, dizginlenmemiş bir beyin sarsıntısı modelidir 9. Hafif izofluran ile anestezi uygulanmış bir farenin somatosensoriyel korteksi üzerinde bir elektromanyetik çarpma kuvveti kullanılarak bir sarsıntı kuvveti uygulanır. Kontrolsüz kafayı etkilemek, birçok klinik beyin sarsıntısı raporunda bildirildiği gibi, beyin10 üzerinde dönme kuvvetlerine neden olur. Klinik mTBI ile tutarlı olarak, CHILD modeli geleneksel nörogörüntülemede kafatası kırığına veya görünür anormalliğe yol açmaz.
CHILD modelinin çeşitli avantajları vardır. İlk olarak, CHILD'da juvenil beyin sarsıntısı hastalarında gözlenen patolojik klinik özellikleri taklit eden hem erken hem de uzun vadeli patolojik özellikler gözlenmiştir. Geç zaman noktalarında gliozis, değişmiş difüzyon tensör MRG veyaş 10,11, modifiye nöronal aktivite ve plastisite11,12 ile ilerleyici davranış bozuklukları gözlenmiştir. İlginç bir şekilde, tek bir pediatrik yaralanmadan sonra uzun vadede kardiyak anormalliklerde de beklenmedik periferik sonuçlar bulunmuştur13. İkincisi, bu model tekrarlanabilir ve araştırmacılar arasında ve laboratuvarlar arasında karşılaştırılabilir sonuçlar gösterdi13. Üçüncüsü, CHILD modeli esnektir ve TBI'lerin heterojen doğasını kapsayacak şekilde genişletilebilir. Örneğin, önceki çalışmalar, farklı hızların ve çarpma derinliklerinin farklı şiddetlerle sonuçlandığını göstermiştir10,11. Son olarak, bu modelin ek bir gücü, CHILD'ın tekrar tekrar uygulanabilmesi ve tekrarlanan yaralanmalara verilen yanıtları araştırmak ve hassas beyin bölgelerini belirlemek için farklı yerlere kolayca uygulanabilmesidir.
Genel olarak, CHILD modeli klinik pediatrik mTBI ve beyin sarsıntısını çoğaltır ve pediatrik mTBH'nin patofizyolojik özelliklerinin anlaşılmasını kolaylaştırmak için bir araştırma aracı olarak hizmet eder. Hiçbir model, gerçek hayattaki TBI vakalarında açıklanan özelliklerin her yönünü kapsamamakla birlikte, bu model cevapsız kalan olağanüstü araştırma sorularının çoğunu ele alabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Deneyler, Bordeaux Üniversitesi (Fransa) ve California Riverside Üniversitesi (CA, ABD) olmak üzere 2 bölgede çoğaltıldı.
Bordeaux'da, tüm deneyler Üniversite hayvan tesisinde yetiştirilen erkek ve dişi P17 C57Bl6J fareleri üzerinde yapıldı. İlk yetiştiriciler ticari bir kaynaktan elde edildi ve 12/12 saatlik karanlık/aydınlık döngüsü, 21 °C ± 1 °C sıcaklık ve U ila nem ± U ile standart koşullar altında yetiştirildi ve ad libitum yiyecek ve su sağlandı. Deneysel prosedürler, Bordeaux Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi düzenlemelerine, laboratuvar hayvanlarının kullanımını düzenleyen Fransız yasalarına (yetkilendirme #29324-2021012118549817 v3), Avrupa Konseyi direktiflerine (86/609/EEC) ve ARRIVE yönergelerine uygundur. Travmatik beyin hasarının hafif bir modeli olan bu protokol, ağrı veya sıkıntı yaratmaz. Bu nedenle, düzenli ağrı yönetimi dışında herhangi bir spesifik ağrı yönetimi gerektirmez. Yavruların sütten kesilmesi (TBI, Shams) P25'te etkili oldu.
Riverside'da, E13 hamile C57Bl6J dişi fareler ticari olarak elde edildi ve tüm deneyler, P17 yaşındaki hem erkek hem de dişi yavrularda elde edilen yavrular üzerinde gerçekleştirildi. Hayvanlar, otomatik 12/12 saatlik karanlık/aydınlık döngüsü ve 21 °C sıcaklıkta yetiştirildi. Barajlar ve yavruların yiyecek ve suya ad libitum erişimi vardı. Tüm deneysel prosedürler Kaliforniya Üniversitesi, Riverside Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı ve Hayvan Refahı Yasası ve Halk Sağlığı Hizmeti politikasına uygun hale getirildi. Bu tesisteki tüm yavrular (TBI, Sham) P21'de sütten kesildi.
Bu çalışmada kullanılan hayvanların, reaktiflerin ve ekipmanların detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.
1. Ön adımlar
- Hipotermiyi önlemek için, anestezi indüksiyonu için odayı ve kurtarma kafeslerini ısıtma pedleri ile önceden ısıtın.
- Stereotaksik cihazı, çarpma tertibatı 90° açıyla monte edilmiş olarak ayarlayın.
- Tüm parçaların uygun şekilde sıkıldığını ve sabitlendiğini ve pistonun çarpma tertibatına sıkıca vidalandığını doğrulayın.
- Stereotaksik aparata uyacak bir alüminyum levha kesin (bu durumda, 18 cm x 30 cm). Burada kullanılan alüminyum standart alüminyum kalitesindedir. Hayvanın üzerine yatırılacağı bir ped oluşturmak için stereotaksik çerçeveyi folyo ile sarın. Hayvanın ağırlığını korumak için folyonun konumunu ve gerginliğini normal laboratuvar bandı ile sabitleyin.
- Çarpma tertibatı kontrol cihazını açın ve yaralanmanın ciddiyetine bağlı olarak, çarpma hızını daha şiddetli bir darbe için derece 2 (G1) için 2 m.s-1 veya derece 3 (G1) için 2 m.s-2 olarak ayarlayın (bu parametrenin değiştirilmesi sarsıntının şiddetini etkileyecektir).
- Hayvanları tartın. P17'de, C57Bl6 fareleri için hayvanların ağırlığı 5,9 g'ın üzerinde olmalıdır. Bu ağırlığın altına düşen hayvanlar hariç tutulur.
NOT: Bazı çalışmalar için CD1 fareleri kullanılmış ve P17 için eşik 6.5 g'ın üzerinde olacak şekilde sabitlenmiştir (kişisel veriler).
2. Juvenil hafif travmatik beyin hasarı prosedürü
- İzoflurana 5 dakika maruz bırakarak fareyi uyuşturun. Gaz bileşimini 1,5 L/dk akış hızına sahip %2,5'lik bir karışıma ayarlayın (bu durumda taşıyıcı, ! oksijen içeren sentetik bir hava karışımıdır).
NOT: Bu adımdan itibaren, etkilenmemiş hayvanlar 5 dakika içinde uyanacağından, tüm eylemler hızlı bir şekilde yapılmalıdır. - Fare kafasını çarpma tertibatının altına yerleştirin. Yavru tüm uzunluklara yayılmalıdır. Uç 3 mm çapındadır ve metalin kafatası üzerindeki etkisini en aza indirmek için kauçukla kaplanmıştır.
- Düğmeyi Uzatma konumuna getirerek çarpma tertibatını indirin.
- Çarpma tertibatını kabaca indirin ve fareyi, çarpma tertibatı tam kulakların arasında olacak şekilde konumlandırın. Ardından, fareyi, piston ucu bir piston ucuna eşdeğer olacak şekilde ileri ve bir piston ucu hayvanın soluna gelecek şekilde kaydırın (bkz. Şekil 1).
NOT: Sahte hayvanlar pistondan biraz uzağa yerleştirilmiştir (hayvanın hiçbir kısmı etkilenmemelidir). - Çarpma tertibatını hayvanın kafasına temas edecek şekilde indirin (Şekil 1, E2).
- Çarpma tertibatını Geri Çekilecek şekilde ayarlayın (Şekil 1, E3).
- Yaralanmanın ciddiyetini belirlemek için, 1. derece (G1) için pistonu 1 mm aşağı hareket ettirin. Daha şiddetli darbe derecesi 2 (G2) için pistonu 3 mm aşağı hareket ettirin (Şekil 1E4).
- Ciddiyetinden bağımsız olarak bekleme süresini 0,1 saniyeye ayarlayın (bu parametrenin değiştirilmesi sarsıntının şiddetini etkilemeyecektir).
- Sağ düğmedeki Impact'e basın (Şekil 1E5).
- Sistemin aşırı ısınmaması için sol düğmeyi hızlı bir şekilde kapalı konuma getirin. Daha fazla bilgi için akış şemasına bakın (Şekil 2).
Şekil 1: Çarpma tertibatı ucunun konumlandırılması. (A) Çarpma tertibatı ucu ilk olarak kulaklar arasındaki orta hatta yerleştirilir. (B) Uç daha sonra 3 mm ileri hareket ettirilir (bir uç çapına eşdeğer). (C) Son olarak, piston ucu farenin sol tarafında 3 mm hareket ettirilir. (D,E) Çarpma tertibatı ucunun manyetik namluya göre olası konumları. (D) Çarpma tertibatı, piston gövdesine göre (nötr, geri çekilmiş veya uzatılmış/darbe) aralarında 5 mm mesafe olacak şekilde 3 konuma sahiptir. (E) Prosedürün farklı aşamalarında çarpma tertibatı ucunun kafatası yüzeyine göre pozisyonları. (1) Çarpma tertibatının nötr konumdaki konumu; (2) piston, hayvanın kafatasına hafifçe dokunacak şekilde hareket ettirilir (adım 2.5); (3) çarpma tertibatı daha sonra geri çekilecek şekilde ayarlanır (adım 3.6); (4) Çarpma tertibatının tüm gövdesi X mm aşağı hareket ettirilir (adım 2.7). G1 kalitesi için, G1 için 1 mm derinlik (x) ile 2 m.s-1 çarpma hızı (y) veya G2 için 3 mm (x) derinlik ile 3 m.s-1 çarpma hızı (y). (5) Kol darbesine basıldığında, çarpma tertibatı ucu, nötr konuma geri döndükten sonra bekleme süresi boyunca kafatası yüzeyinin x mm altına y hızında hareket eder. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: CHILD akış şeması. Beyin sarsıntısı indüksiyonunun farklı aşamalarını belirtmek için renk kodlu PND17 farelerinde CHILD'ı indükleme adımlarını detaylandıran akış şeması. Kurulumun fotoğrafları şunları içerir: (A) Darbe kontrolörü, çarpma tertibatı ve ucu gergin kalay folyonun üzerine yerleştirilmiş stereotaktik cihaz ve bir ısıtma yastığının üstünde bulunan kurtarma kutusu dahil olmak üzere tüm CHILD indüksiyon kurulumu (anestezi cihazı görünmez). (B) Ölçekli kauçuk darbe ucu (3 mm). (C) Stereotaktik çerçeve boyunca gerilmiş kalay folyolu stereotaktik cihaz ve darbe ucu folyonun üzerine yerleştirilmiş çarpma tertibatı solenoidi. (D) Isı yastığı üzerinde oturan geri kazanım odası. (E) Akış şemasında olduğu gibi vurgulanan iki kontrol anahtarına sahip darbe kontrolörü (kırmızı kutu = uzat/geri çek/kapat; mor kutu = darbe geçişi). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
3. Travma sonrası takip
NOT: Aşağıdaki adımlar, çevrimdışı analiz için videoya kaydedilebilir ve deneycinin arka arkaya birden fazla hayvan üzerinde CHILD gerçekleştirmesine olanak tanır. Bununla birlikte, hayvan refahının düzenli ve tekrarlanan değerlendirmeleri yapılmalıdır.
- Apnenin süresine, varsa (darbeden hemen sonra) ve çarpma sırasında bir kafa dönüşü olup olmadığına dikkat edin.
- Fareyi sağ yan tarafında, bir kurtarma kafesine yerleştirin.
- Farenin doğrultma zamanını (4 ayak üzerinde şahlanma) ve keşif davranışını sürdürme zamanını not edin. Tipik olarak, sahte fareler 3-4 dakika içinde uyanır ve 3-4 dakika sonra keşif davranışına devam eder (Şekil 3). ÇOCUK fareler, cinsiyete ve etki şiddetine bağlı olarak, çarpmadan 7-12 dakika sonra uyanır (Şekil 3A) ve çarpmadan 12-18 dakika sonra keşfe devam eder (Şekil 3B).
NOT: Etkilenen hayvan 30 dakika içinde keşif davranışına devam etmezse, hayvan dışlanır. - Tamamen iyileştikten sonra hayvanları ev kafeslerine geri koyun. Bu noktada, sahte ve ÇOCUK farelerin davranışları (G1 veya G2 şiddeti) tamamen benzer olmalı ve hayvan grupları çöp içinde ayırt edilemez olmalıdır.
NOT: Hayvanlar, yöntemlerin başında belirtilen koşullarda yaralanmadan 18 ay sonrasına kadar14 tutulabilir. Davranışsal sonuç değerlendirmeleri, MRI ölçümleri, miniskop görüntüleme, histoloji ve immünohistokimya ile ilişkili bir dizi test kullanılarak gerçekleştirilebilir12. GFAP ve NeuN için immünohistokimya, modeli ve doku değişikliklerinin varlığını doğrulamak için erken zaman noktalarında kullanılabilir.
4. İmmünohistokimya
NOT: Yaralanmadan bir gün sonra, G2 ve sham gruplarından hayvanlar (G2 için n = 4 fare ve Sham için n = 4) anestezi altına alındı ve fosfat tamponlu salin (PBS) 0.1 M, pH 7.4 4 ° C'de hazırlanan% 4 paraformaldehit (PFA) ile transkardiyal olarak perfüze edildi. Beyinler kafatasından10 çıkarıldı ve gece boyunca aynı PFA çözeltisine daldırıldı ve daha sonra kesilmeden önce sodyum azid (% 0.1) ile PBS'ye aktarıldı. Koronal kesitler daha sonra vibratom kullanılarak 50 μm kalınlığında hazırlandı. Uzun süreli depolama için, bölümler kullanıma kadar -20 ° C'de kriyoprotektif ortama (PBS'de 0 etilen glikol ve gliserol) yerleştirildi. Beyin sarsıntısının beyin gliozu ve nöronal kayıp üzerindeki etkisini karakterize etmek için, GFAP ve NeuN'yi hedefleyen immünohistokimya aşağıda tarif edildiği gibi gerçekleştirildi.
- PBS'de beyin bölümlerini 10 dakika boyunca 4 kez yıkayın.
- Bölümleri oda sıcaklığında (RT) 10 dakika boyunca bloke etme solüsyonunda (% 1 BSA,% 0,3 Triton X-100) aktarın.
- Bölümleri gece boyunca 4 ° C'de, aşağıdaki birincil antikorlar bloke edici çözelti içinde seyreltilmiş olarak inkübe edin: tavuk anti-GFAP (1:3000) ve tavşan anti-NeuN (1:500).
- Dilimleri çalkalama altında PBS'de 10 dakika boyunca 4 kez yıkayın.
- Daha sonra, RT, Alexa-Fluor-488-nm keçi tavşan önleyici ve Alexa-Fluor-568-nm keçi tavuğu anti-tavukta 1:1000 oranında seyreltilmiş ikincil floresan antikorları içeren bloke edici çözelti içindeki bölümleri aktarın.
- Daha sonra bölümleri çalkalama altında PBS'de 10 dakika boyunca 4 kez yıkayın.
- Bölümleri bir montaj ortamı kullanarak kızaklara monte edin ve bir kapak fişi ekleyin. Görüntü elde edilene kadar slaytları 4 °C'de tutun.
- Bir epifloresan mikroskobu ve micromanager yazılımı kullanarak immünofloresan elde edin. İpsilateral ve kontralateral hemisferlerin döşenmiş görüntülerini elde etmek için 10x lensli bir dikiş eklentisi kullanın.
NOT: Primer antikorun veya sekonder antikorun atlandığı negatif kontrol boyama, saptanabilir bir etiketleme göstermedi. Daha ayrıntılı görüntü analizi için, Fiji yazılımı15 , çeşitli ilgi alanlarındaki16 immün boyama parametrelerini ölçmek için kullanılabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
CHILD modeli, pediatrik farelerde nispeten hızlı ve tekrarlanabilir bir mTBI modelidir ve ayrıca şiddet ve konumdaki değişikliklere izin verir. ÇOCUK fareler, beklendiği gibi, kapalı kafa travmasından önemli ölçüde daha uzun iyileşme süreleri sergiledi (Şekil 3). Kohortlar (n = 36 dişi sahte, n = 140 erkek sahte, n = 30 kadın G1, n = 55 erkek G1, n = 32 kadın G2, n = 141 erkek G2) toplandığında, düzeltme süresinde (Şekil 3A, 3 yönlü ANOVA p < 0.001) ...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Protokoldeki kritik adımlar
Burada açıklanan CHILD protokolü, (1) darbe parametrelerini (hız, derinlik, süre) standartlaştıran, (2) laboratuvarlar içinde ve laboratuvarlar arasında tekrarlanabilirliği sağlayan ve (3) ticari olarak kolayca temin edilebilen bir elektromanyetik çarpma tertibatının (Şekil 2A) kullanılmasını gerektirir. Diğer bir kritik bileşen, kemirgenin kafasına çarpan çarpma tertibatı ucudur. Silikondan metal uçlara kadar ...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu yöntem makalesi Eranet Neuron Neuvasc (Badaut), Agence Nationale de la Recherche Nanospace (Badaut), CNRS IRP IINOVAtion (Badaut) ve NIH NINDS Grant No. 1R01NS119605 (Obenaus, Badaut) ve 1RF1NS138032 (Obenaus, Territo) tarafından finanse edilmiştir. Şekil 1 BioRender.com ile oluşturulmuştur.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| BSA | Sigma Aldrich Chimie S.a.r.l 80 Rue de Luzais L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701 38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex Fransa | A7030 | |
| C57Bl6J fareler | Charles River Laboratuvarı Fransa CRLF 9 Tümü. Moulin Berger, 69130 &Eakut; cully, Fransa | Bordeaux | |
| Elektromanyetik çarpma tertibatı | Leica Biosystems, Richmond, IL ABD | Impact One stereotaksik çarpma | |
| Epifloresan mikroskobu | Olympus, BX41, Center Valley, PA | ||
| Etilen glikol | Sigma Aldrich Chimie S.A.R.L 80 Rue de Luzais L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701 38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex Fransa | 102466 | |
| GFAP primer antikoru | Millipore, Billerica, MA | AB5541 | tavuk anti-GFAP |
| GFAP sekonder antikoru | Moleküler Problar, Invitrogen | A11034 | keçi anti-tavşan AlexaFluor 488 |
| Gliserol | Sigma Aldrich Chimie S.a.r.l 80 Rue de Luzais L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701 38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex Fransa | G5516 | |
| Ağır hizmet tipi alüminyum folyo | Kirkland | RK611 | Cosco Micromanager yazılımından elde edildi |
| (NIH, ABD | |||
| NeuN birincil antikoru | AbCam, Discovery Drive, Cambridge Biyomedikal Kampüsü, Cambridge, CB2 0AX, İngiltere | AB128886 | tavşan anti-NeuN |
| NeuN ikincil antikoru | Moleküler Problar, Invitrogen | A11041 | keçi anti-tavuk AlexaFluor 568 |
| PBS | Sigma Aldrich Chimie S.a.r.l 80 Rue de Luzais L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701 38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex Fransa | P5493 | |
| PFA | Sigma Aldrich Chimie S.a.r.l 80 Rue de Luzais L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701 38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex Fransa | 1.04003 | |
| Sodyum azid | Sigma Aldrich Chimie S.a.r.l 80 Rue de Luzais L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701 38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex Fransa | 26628-22-8 | |
| Stereotaksik çerçeve - temel | KOPF aletleri 7324 Elmo St, Tujunga, CA 91042, É tats-Unis | 900-C | |
| Stereotaksik çerçeve - elektrot manipülatörü | KOPF aletleri 7324 Elmo St, Tujunga, CA 91042, É tats-Unis | 960 | |
| Stereotaksik çerçeve - u-çerçeve | KOPF aletleri 7324 Elmo St, Tujunga, CA 91042, É tats-Unis | 900-U | |
| Triton x-100 | Sigma Aldrich Chimie S.a.r.l 80 Rue de Luzais L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701 38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex Fransa | X100 | |
| Vectashield | Vektör laboratuvarları | H-1000-10 | Montaj ortamı |
| Vibratom | Leica Biosystems, Richmond, IL ABD | VTS1000 | |
| Jackson laboratuvarı Jackson Laboratuvarı 600 Main Street Bar Harbor, ME, ABD 04609 | UCR |
Kaynaklar
- Dewan, M. C., et al. Estimating the global incidence of traumatic brain injury. J Neurosurg. 130 (4), 1080-1097 (2018).
- Rivara, F. P., et al. Persistence of disability 24 to 36 months after pediatric traumatic brain injury: a cohort study. J Neurotrauma. 29 (15), 2499-2504 (2012).
- Fesharaki-Zadeh, A., Datta, D. An overview of preclinical models of traumatic brain injury (TBI): Relevance to pathophysiological mechanisms. Front Cell Neurosci. 18, (2024).
- Panchenko, P. E., Hippauf, L., Konsman, J. P., Badaut, J. Do astrocytes act as immune cells after pediatric TBI. Neurobiol Dis. 185, 106231(2023).
- Kochanek, P. M., Wallisch, J. S., Bayır, H., Clark, R. S. B. Pre-clinical models in pediatric traumatic brain injury-challenges and lessons learned. Childs Nerv Syst. 33 (10), 1693-1701 (2017).
- Smith, A. M., Grayson, B. E. A strike to the head: Parallels between the pediatric and adult human and the rodent in traumatic brain injury. J Neurosci Res. 102 (7), e25364(2024).
- McNamara, E. H., Grillakis, A. A., Tucker, L. B., McCabe, J. T. The closed-head impact model of engineered rotational acceleration (CHIMERA) as an application for traumatic brain injury pre-clinical research: A status report. Exp Neurol. 333, 113409(2020).
- Bodnar, C. N., Roberts, K. N., Higgins, E. K., Bachstetter, A. D. A systematic review of closed-head injury models of mild traumatic brain injury in mice and rats. J Neurotrauma. 36 (11), 1683-1706 (2019).
- Semple, B. D., Blomgren, K., Gimlin, K., Ferriero, D. M., Noble-Haeusslein, L. J. Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species. Prog Neurobiol. 106-107, 1-16 (2013).
- Rodriguez-Grande, B., et al. Gliovascular changes precede white matter damage and long-term disorders in juvenile mild closed head injury. Glia. 66 (8), 1663-1677 (2018).
- Ichkova, A., et al. Early cerebrovascular and long-term neurological modifications ensue following juvenile mild traumatic brain injury in male mice. Neurobiol Dis. 141, 104952(2020).
- Badaut, J., et al. Endocannabinoid-mediated rescue of somatosensory cortex activity, plasticity and related behaviors following an early in life concussion. bioRxiv. , (2024).
- Leyba, K., et al. Neurovascular hypoxia after mild traumatic brain injury in juvenile mice correlates with heart-brain dysfunctions in adulthood. Acta Physiol. 238 (2), e13933(2023).
- Obenaus, A., et al. Progressive lifespan modifications in the corpus callosum following a single juvenile concussion in male mice monitored by diffusion MRI. bioRxiv. , (2023).
- Schindelin, J., et al. Fiji: An open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
- Clément, T., et al. Juvenile mild traumatic brain injury elicits distinct spatiotemporal astrocyte responses. Glia. 68 (3), 528-542 (2020).
- Drieu, A., et al. Persistent neuroinflammation and behavioural deficits after single mild traumatic brain injury. J Cereb Blood Flow Metab. 42 (12), 2216-2229 (2022).
- Obenaus, A., et al. A single mild juvenile TBI in male mice leads to regional brain tissue abnormalities at 12 months of age that correlate with cognitive impairment at the middle age. Acta Neuropathol Commun. 11 (1), 32(2023).
- Ryan, E., et al. Traumatic brain injury in children: Glial fibrillary acidic protein and clinical outcomes. Pediatr Emerg Care. 38 (3), e1139-e1142 (2022).
- Czeiter, E., et al. Blood biomarkers on admission in acute traumatic brain injury: Relations to severity, CT findings and care path in the CENTER-TBI study. EBioMedicine. 56, 102785(2020).
- Edwards, K. A., et al. Serum GFAP, NfL, and tau concentrations are associated with worse neurobehavioral functioning following mild, moderate, and severe TBI: A cross-sectional multiple-cohort study. Front Neurol. 14, 1223960(2023).
- Smith, A. M., et al. High-fat diet consumption negatively influences closed-head traumatic brain injury in a pediatric rodent model. Exp Neurol. 379, 114888(2024).
- Hunniford, V. T., et al. A systematic assessment of preclinical multilaboratory studies and a comparison to single laboratory studies. eLife. 12, e76300(2023).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
