Method Article

Aşırı Bakım Fenotiplerinin Değerlendirilmesi için Drosophila melanogaster Tımar Davranışının Miktarının Belirlenmesi

DOI:

10.3791/67708

⸱

March 21st, 2025

 , 
1Simmons University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada sunulan yöntem, belirli tımar davranışları için Drosophila melanogaster'den elde edilen görüntülerin manuel olarak açıklanmasını içerir. Atipik kendi kendine bakım fenotiplerini değerlendirmek için hem tımar nöbetlerinin sayısının hem de tımar için harcanan toplam sürenin ölçülmesine izin verir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kalıplaşmış tımarlamada gözlemlenebilir değişiklikler, model organizmalarda translasyonel olarak uygulanır. Bu değişiklikler, insan davranışında benzer sapmaları ortaya çıkaran patolojileri temsil eder; örneğin, aşırı tımarlama, Tourette Sendromu veya obsesif-kompulsif bozukluk gibi durumlarda mevcut olan obsesif ve kompulsif davranışlar için bir vekil görevi görür. Sunulan tımar testi, Drosophila melanogaster'deki anormal kendi kendine tımar fenotiplerinin değerlendirilmesine izin verir. Sinekler 10 dakikalık bir süre boyunca kaydedilir ve bu kayıtlar önceden tanımlanmış tımar davranışları için kör olarak gözlemlenir ve açıklanır. Hem tımar etme sıklığının hem de kendi kendine tımar etmek için harcanan zamanın nicel ölçümleri, çekime manuel olarak açıklama eklenerek elde edilebilir. Tahlil nispeten ucuzdur, laboratuvar ortamlarında halihazırda mevcut olmayan az sayıda malzeme gerektirir ve tımarlamayı gözlemlemeyi amaçlayan herhangi bir çalışmanın özel ihtiyaçlarına uyacak şekilde kolayca uyarlanabilir. Ek olarak, bilgisayar bilimi ağırlıklı otomatik yöntemlerle karşılaştırıldığında, testi gerçekleştirmek için gereken düşük beceri seviyesi, protokolü küçük laboratuvarlar ve öğrenciler için çok uygun hale getirir. Bu testi gerçekleştirmek için gereken adımları ve mevcut sınırlamalarını ayrıntılı olarak tartışıyoruz.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Drosophila melanogaster , davranışsal ve nörobiyolojik çalışmalarda iyi bilinen bir model organizmadır ve benzer insan davranışlarını yönlendiren mekanizmalar hakkında fikir verir. Bu organizmada kendi kendini tımar etme, birbirinden kolayca ayırt edilebilen basmakalıp kalıpları takip eden, yüksek düzeyde düzenlenmiş ve iyi tanımlanmış bir davranıştır1. Sinek tarafından sergilenen ayrı tımar davranışları genellikle anatomik bölge2'ye göre sınıflandırılabilir, en kolay şekilde posterior veya anterior olarak tanımlanır. Drosophila tımar başlangıçta ön bölgeye odaklanacak ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Protokole genel bir bakış Şekil 1'de sunulmuştur.

1. Çekimler için hazırlık

  1. Dört adet üç kuyulu tabağı beyaz bir yüzeye yan yana yerleştirin ve her birini bir cam slaytla kaplayın.
  2. Bulaşıkların üzerine bir kamera (burada bir Raspberry Pi sistemi, ancak yüksek çözünürlüklü video yapabilen herhangi bir kamera yeterlidir) yerleştirin.
    1. Tüm bulaşıkların çerçevede ve odakta olduğundan emin olmak için kontrol edin.
    2. Slaytlarda, çanaktaki sineklerin görünürlüğünü sınırlayacak parlama olmadığından emin olmak için kontrol ed....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu tahlil, açıklamalı görüntülerden tımar davranışlarının zamanını ve sıklığını ölçen nicel veriler üretir. Kurulumun ve davranışların nasıl tanımlandığının temsili bir görüntüsü Şekil 2'de özetlenmiştir. Video analizinin getirdiği öznellik göz önüne alındığında, videoların tüm ek açıklamaları, analizi yapan araştırmacıya kör edilmelidir.

Bu yöntem, Drosophila geni Atg8a'nın tımar davranışının gelişimindeki rolünü değerlendirmek için kullanıldı. .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Genel olarak, bu kolayca yürütülebilir ve uygun maliyetli test, Drosophila melanogaster tımar davranışının sağlam bir şekilde karakterize edilmesini sağlar. Bu teknik, daha önce tanımlanmış çok sayıda tımar davranışının sıklığı, meşgul olmak için harcanan zaman ve anatomik dağılımı hakkında fikir verir. Bakımın gerçekleşeceğine veya devam etmekte olduğuna dair iyi bir gösterge, bacak yerleşimindeki değişiklikler, özellikle de 6 bacaktan herhangi birinin kaldırılmasıdır. Özellikl.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deneysel tasarımla ilgili geri bildirimleri için John Young'a, el yazması revizyonu için Eric Luth'a ve figür tasarımı yardımı için Madeleine Hatfield'a teşekkür ederiz. Bu çalışma Simmons Üniversitesi ve Biyoloji Bölümü tarafından finanse edildi.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
16 GB Micro SD kartAdafruit1294İşletim sistemi ekranının tanıtımında kullanım için
Adafruit3578HDMI veya esnek kablo ile bağlanabilen herhangi bir ekran yeterlidir
Drosophila Atg8a-RNAi UAS hattıBloomington Stock Center34340Temsili verilerde kullanılan hat
Drosophila Ok6 SürücüN/AN/ATemsili verilerde kullanılan hat
Cam kaydıraklarFisher Scientific12-550-A3Sinekleri muhafazada tutar
Soğutucular AdafruitBilgisayarın aşırı ısınmasını önler
LensAdafruit4563Yalnızca HD kamera ile kullanılır
PiCameraAdafruit4561Burada HD versiyonu kullanılmıştır ancak bütçe kısıtlamaları altında standart bir kamera kullanılabilir
Raspberry pi 4Adafruit4292Bilgisayar PiSpy,
Ribbion KablosuAdafruit1648Kamera ve ekran SB bileşenlerinin bağlanmasında kullanım için
KılıfAdafruit4301Bilgisayarı korur
Spot PlateFisher ScientificS99406Pyrex versiyonları zaten kullanımımız için mevcuttu ancak hücre kültürü kapları veya plastik spot plakaları da yeterli
TripodBest Buy6355959Kameranın askıya alınması ve konumlandırılması için, bunu yapabilen herhangi bir cihaz yeterlidir
USB C Güç KaynağıAdafruit1995Bilgisayara güç sağlar
üzerinde çalışır

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mueller, J. M., Zhang, N., Carlson, J. M., Simpson, J. H. Variation and variability in Drosophila grooming behavior. Front Behav Neurosci. 15, 769372(2022).
  2. Szebenyi, A. L. Cleaning behaviour in Drosophila melanogaster. Anim Behav. 17 (4), 641-651 (1969).
  3. Seeds, A. M., ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Drosophila GroomingGrooming BehaviorExcessive GroomingManual AnnotationBehavioral QuantificationAtg8a KnockdownNeurodevelopmental DisordersTourette Syndrome ModelELAN SoftwareRNAi Mutants

Related Articles