Yöntem makalesi

Evaporatif Işık Saçılma Dedektörü ile Birleştirilmiş Sıvı Kromatografisi ile Bir Lipid Nanopartikül RNA Taşıyıcı Sistemdeki Dört Bileşenin Belirlenmesi

DOI:

10.3791/67711

⸱

30 Mayıs 2025

 ,  ,  ,  , 
1Shimadzu (China) Co., Ltd., 2Medical College of Fudan University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, bir evaporatif ışık saçılma dedektörü (ELSD) ile birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanarak bir lipid nanopartikül (LNP) RNA dağıtım sistemindeki dört bileşen için kantitatif bir analiz yöntemi oluşturuyoruz. Yöntem iyi ayırma, yüksek hassasiyet ve yüksek verime sahiptir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale, lipid nanopartikül (LNP) bileşenlerinin analizi için bir yöntem sunmaktadır. RNA bazlı ilaçlar için önemli bir vektör görevi gören LNP, esas olarak kolesterol, modifikasyonlu PEG, iyonize olabilen lipitler ve yardımcı lipitlerden oluşur. Bu bileşenler zayıf polarite sergiler, bu da ters faz kromatografisi kullanılarak güçlü tutma ve ayırma zorluğuna yol açar ve ayrıca belirgin ultraviyole absorpsiyon özelliklerinden yoksundur. Bu zorluğun üstesinden gelmek için, bir sıvı kromatografi sistemi, bir buharlaştırıcı ışık saçılma dedektörü (ELSD) ile birleştirildi. Kromatografik kolon tipini sistematik olarak ayarlayarak ve mobil fazın gradyan elüsyon programını optimize ederek, dört kritik bileşenin hızlı ve tam bir temel ayrımı gerçekleştirildi. En son ELSD teknolojisinin kullanılması, algılama hassasiyetini önemli ölçüde artırdı ve yöntemin doğrusal aralığını genişletti. Deneysel sonuçlar, 5 μg/mL ila 250 μg/mL konsantrasyon aralığında, LNP'nin dört bileşeninin, tümü 0.999'dan büyük korelasyon katsayıları ile mükemmel doğrusallık gösterdiğini ve doğruluğun %94.2 ila %108.0 arasında değiştiğini gösterdi. Hassas deneylerde, 10 μg/mL'lik bir standart çözelti için hem alıkonma süresinin hem de tepe alanının nispi standart sapmaları sırasıyla %0.1 ve %2'nin altındaydı. Farklı LNP numunelerini analiz etmek için bu yöntem kullanılırken, tüm bileşenler başarıyla ayrılır ve ilgili içerikleri doğru bir şekilde ölçülür, bu da bu analitik yaklaşımın sağlam uyarlanabilirliğini vurgular.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Lipid nanopartikül (LNP), esas olarak antisens oligonükleotidler, küçük enterferans yapan nükleotidler, mRNA, vb. gibi nükleik asit ilaçlarının verilmesi için kullanılan en gelişmiş viral olmayan gen dağıtım sistemlerinden biridir 1,2,3. LNP genellikle dört bileşenden oluşur: iyonlaşabilir lipitler, polietilen glikol (PEG) modifiye edilmiş lipitler, fosfolipitler ve kolesterol. Anahtar bileşen, nükleik asit ilaç dağıtımının etkinliğinde belirleyici faktör olan iyonlaşabilir lipitlerdir. Diğer üç bileşen, LNP'nin stabilitesini artırabilir ve b....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Enstrümanın hazırlanması

  1. Enstrüman kurulumu
    1. Bir ELSD ile birleştirilmiş bir HPLC sistemi kurun.
  2. Sütun kurulumu
    1. Kromatografik sütunu (C4-300; 150 mm × 4.6 mm İç Çap, 5 μm), sütun üzerindeki ok yönünü izleyerek, bir ucu otomatik numune alma cihazı çıkışına ve diğer ucu ELSD girişine bağlı olacak şekilde takın.
  3. Mobil faz hazırlığı
    1. Mobil fazları hazırlayın: A fazı, 10 mM TEAA sulu çözeltisi (pH = 7.0) ve B fazı, 10 mM TEAA metanol çözeltisi (pH = 7.0).
    2. A fazını hazırlamak için 1.01 g trietilamin doğru bir şekilde tartın....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yöntem kullanılarak LNP standart çözeltisinin analizi, dört bileşen için 1.5'ten daha büyük bir ayırma derecesi elde etti ve temel ayırmayı gerçekleştirdi. Ayrıca, Şekil 1'de gösterildiği gibi yüksek konsantrasyonlu standart çözeltilerde hiçbir kalıntı gözlenmemiştir. 5 ila 250 μg/mL'lik bir konsantrasyon aralığında bir kalibrasyon eğrisi oluşturuldu ve tümü 0,999'u aşan korelasyon katsayıları sergileyerek geniş bir doğrusal aralığı ve mükemmel doğrusallığı gösterdi. Kalibrasyon eğrisi

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

LNP'nin dört bileşeninin tümü nispeten zayıf bir polarite sergiler. Bir C18 kolonu kullanılarak analiz edildiğinde, hedef bileşikler kolon içinde güçlü bir tutma gösterir ve bu da güçlü bir şekilde tutulan bileşenler için fosfolipid zirvesinin genişlemesine yol açar. Ayrıca, yüksek konsantrasyonlu çözeltiler analiz edildikten sonra, C18 kolonunun başında kalıntılar birikir ve bu da miktar tayininin doğruluğunu tehlikeye atabilir. Kromatogram Şekil 5'te göste.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deney için LNP örneklerini sağladıkları için biyofarmasötik şirketlerine teşekkür ederiz ve kromatografi sütununu sağladığı için Shimadzu (Şangay) Global Laboratory Consumables Co., Ltd'ye teşekkür ederiz.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Asetik asitANPEL Laboratuvar Teknolojileri (Şangay) A.Ş.CAEQ-4-000319-0050
DengeShimadzu (Şangay) Global Laboratuvar Sarf Malzemeleri Co., LtdAP135W
SütunShimadzu (Şangay) Global Laboratuvar Sarf Malzemeleri Co., LtdShimNex WP C4 (380-01235-74)
ELSDShimadzu (Çin) CO., LTDELSD-LT III (228-65900-46)
LabSolutions YazılımıShimadzu (Çin) CO., LTD
LCShimadzu (Çin) CO., LTDLC40D XR
MetanolANPEL Laboratuvar Teknolojileri (Şangay) A.Ş.CAEQ-4-003302-4000
Pipet-100 ve mikro; LShimadzu (Şangay) Global Laboratuvar Sarf Malzemeleri Co, Ltd00-NAR-100
Pipet-1000 ve mikro; LShimadzu (Şangay) Küresel Laboratuvar Sarf Malzemeleri Co, Ltd00-NAR-1000
TEAANPEL Laboratuvar Teknolojileri (Şangay) Inc.CAEQ-4-012190-0250
Ultra Saf Su SistemiMilliporeZIQ7000T0C
Vorteks KarıştırıcıANPEL Laboratuvar Teknolojileri (Şangay) A.Ş.VM-B
Teknolojisi

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zong, Y., Lin, Y., Wei, T., Cheng, Q. Lipid nanoparticle (LNP) enables mRNA delivery for cancer therapy. Adv Mater. 35 (51), e2303261(2023).
  2. Vlatko, I., et al. Non-immunotherapy application of LNP-mRNA: Maximizing efficacy and safety. Biomedicines.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Lipid Nanopar ac klarLNP Bile en AnaliziGradyan El syonBaz izgisi Ayr mY ksek Performansl S v KromatografisiKalibrasyon E risiD Standart Y ntemi

İlgili makaleler