Yöntem makalesi

Vasküler Kalsifikasyon için Terapötik Bir Ajan Olarak Salidrosidin Ağ Farmakolojisi ve Deneysel Sıçan Modelleri Kullanılarak Değerlendirilmesi

DOI:

10.3791/67728

⸱

31 Ocak 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Encephalopathy, The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 2Research Center of Traditional Chinese Medicine, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Department of Nephrology, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 4Scientific Research Office, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 5Rehabilitation Department, The Affiliated hospital to Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, D3 vitamini (VD3) ile birlikte yüksek yağlı bir diyet (HFD) tarafından indüklenen bir sıçan vasküler kalsifikasyon modeli oluşturmaktadır. Model, salidrosidin vasküler kalsifikasyonu önleme ve tedavi etmedeki terapötik etkinliğini değerlendirmek için kullanıldı ve ağ farmakolojisi ve in vivo deneyler yoluyla potansiyel etki mekanizmaları hakkında bilgi sağladı.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vasküler kalsifikasyon (VK) önemli morbidite ve mortalite ile ilişkili kritik bir patolojik durumdur. Bu çalışma, Rhodiola crenulata'dan VC'ye karşı aktif bir bileşik olan salidrosidin (SAL) terapötik mekanizmalarını tanımlamak için ağ farmakolojisi ve moleküler biyolojinin hibrit bir yaklaşımını kullanmaktadır. Veritabanı madenciliği ve ağ analizi sayesinde, 2871 VC ile ilişkili hedefle kesişen 388 SAL hedefi belirlendi ve 208 ortak hedef elde edildi. String veritabanı ve Cytoscape 3.9.1'deki topolojik analiz yoluyla oluşturulan bir protein-protein etkileşimi (PPI) ağı, diğerlerinin yanı sıra IL6, TNF, TP53, IL1B, HIF1A, CASP3 ve STAT3 dahil olmak üzere 10 ana hedefi belirledi. Tanımlanan genler lipid ve ateroskleroz yolaklarında konsantre edildi, bu da VC'nin SAL ile iyileşmesinin, lipid ve enflamatuar faktörlerin anormal ekspresyonunun düzenlenmesi yoluyla meydana gelebileceğini gösterdi. Ayrıca SAL'ın enflamatuar faktörlerin anormal ekspresyonunu inhibe ettiği ve böylece VC'nin ilerlemesine müdahale etmek için JAK2 / STAT3 yolunu aktive ettiği bulunmuştur. JAK2/STAT3 yolu, SAL'ın VC'nin daha fazla bozulmasını önlediği anahtar bir moleküler mekanizmadır. Fonksiyonel zenginleştirme analizleri, bu hedeflerin VC'de antrikal yolaklar olan inflamatuar yanıtlar ve lipid metabolizması ile ilgili olduğunu ortaya koymuştur. Sıçanlarda yapılan in vivo çalışmalar, SAL'ın dislipidemi ve vasküler iltihabı hafifletmedeki etkinliğini, gelişmiş serum lipid profilleri ve azalmış vasküler kalsiyum birikimi ile göstermiştir. Western blot analizine dayanan mekanistik keşif, salidrositin JAK2 / STAT3 sinyal yolunu düzenleme yeteneğini gösterdi, bu kritik moleküler mekanizmada bir modülatör olarak potansiyelini vurguladı ve VC için potansiyel bir terapötik hedef sundu. Bu araştırmanın gücü, hesaplamalı tahminleri in vivo doğrulamalarla entegre eden metodolojik titizliğinde yatmaktadır. Bu kapsamlı yaklaşım, VC ile mücadelede doğal bileşiklerin terapötik mekanizmalarını araştırmak için sağlam bir çerçeve oluşturur.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vasküler kalsifikasyon (VC), damar duvarları içinde kalsiyumun anormal birikmesini ifade eder, bu da arteriyel sertleşmeye ve elastikiyetin azalmasına yol açar ve sonuçta vasküler fonksiyonu bozar. Geleneksel olarak, VC iki türe ayrılmıştır: lipid birikimine bağlı intimal kalsifikasyon ve medial kalsifikasyon. İlki, vasküler düz kas hücrelerinin (VSMC'ler) osteoblast benzeri hücrelere göçü, çoğalması ve farklılaşması ile karakterize edilen vasküler duvarda osteojenik bir dönüşümü tetikleyen inflamatuar infiltrasyon ile yakından ilişkilidir1.

VSMC'lerin yaşlanma, genetik ve diyabet ve kronik böbrek hastalığı gibi çevresel koşullar gibi faktörlerden etkilenen osteojenik farklılaşmaya uğrama yeteneği, yaşa bağlı VC'ye önemli bir katkıda bulunur. Bu osteoblast benzeri dönüşüm, arteriyel kalsifikasyonu ve dejenerasyonu şiddetlendirir1.

VC, dejeneratif değişiklikler, metabolik dengesizlikler ve çeşitli sistemik durumlar tarafından yönlendirilen çok yönlü bir durumdur. Vasküler yaralanmaların yaklaşık% 80'i ve koroner arter hastalığı vakalarının% 90'ı VC sergiler ve bu da ciddi kardiyovasküler olay riskini önemli ölçüde artırır 1,2. Bu nedenle, bu durumu etkili bir şekilde hafifleten veya tersine çeviren farmakolojik tedavileri keşfetmek için acil bir ihtiyaç vardır.

Şu anda, VC için tedavi stratejileri çeşitli farmakolojik müdahaleleri içermektedir, ancak hiçbir ilaç bu amaç için özel olarak tasarlanmamıştır. Hafif kalsifikasyonu olan hastalar için, statinler genellikle plakları stabilize etmek için reçete edilir. Bununla birlikte, lipid düzeylerini düşürerek koroner arter darlıklarını azaltabilirken, kalsifikasyon üzerindeki etkileri sınırlıdır2.

Aterosklerozun karmaşıklığı göz önüne alındığında, birçok hasta trombosit aktivasyonunu arttırır ve trombosit agregasyonunu inhibe etmek ve tromboz riskini azaltmak için aspirin veya klopidogrel gibi antiplatelet ilaçların kullanılmasını gerektirir. Bununla birlikte, aspirin tedavisi sadece koroner arter kalsiyum skoru yüksek ve kanama riski düşük olan bireyler için faydalıdır3.

Ek olarak, K vitamini gibi takviyeler üzerine yapılan araştırmalar, VC ilerlemesini önlemede potansiyel olduğunu göstermektedir4. Şiddetli vakalarda, invaziv müdahaleler düşünülebilir, ancak bunlar genellikle yaygın VC5 için uygun değildir. Mevcut VC'si olmayan bireyler için kan basıncı, lipid profilleri ve yaşam tarzı seçimleri gibi risk faktörlerini yönetmek kritik öneme sahiptir6.

Crassulaceae familyasının çok yıllık bir bitkisi olan Rhodiola crenulata, geleneksel olarak Çin tıbbında kullanılmıştır. Başlıca biyoaktif bileşeni olan salidrosit, dikkate değer biyolojik aktiviteleri nedeniyle büyük ilgi görmektedir. Salidrosid, apoptozu inhibe etme, sağlam antioksidan özellikler sergileme ve anti-inflamatuar özelliklere sahip olma yeteneği ile ünlüdür 7,8. Bu özellikler, vasküler fonksiyonu geliştirme, vasküler yaşlanmayı geciktirme ve vasküler endotelyumu koruma potansiyeline katkıda bulunur. VC için potansiyel bir terapötik ajan olarak, salidrosid araştırma için önemli bir değere sahiptir. Bununla birlikte, salidrosidin VC'yi iyileştirdiği kesin mekanizmalar tam olarak açıklanmaya devam etmektedir ve VC tedavisinde terapötik potansiyelinden yararlanmak için daha fazla araştırma yapılmasını gerektirmektedir.

Bu mekanizmaları keşfetmek için bu çalışma, biyolojik sistemleri analiz etmek ve ilaç mekanizmalarını aydınlatmak için farmakoloji, biyoinformatik ve bilgisayar bilimini birleştiren yenilikçi bir metodoloji olan ağ farmakolojisinden yararlanmaktadır. Geleneksel tek hedefli ilaç araştırmalarıyla karşılaştırıldığında, ağ farmakolojisi, bir ilacın birden fazla biyolojik hedef ve sinyal yolu üzerindeki etkilerini analiz ederek daha kapsamlı bir yaklaşım sunar. Modern ilaç geliştirmede önemli bir araç olarak, ilaç etkisinin altında yatan mekanizmaları ortaya çıkarmak için ilaç ağları, hedefler ve yollar oluşturur 9,10. Terapötik mekanizmaları araştırmada yaygın kullanımına rağmen, biyoinformatik ve ağ farmakolojisi perspektiflerinden salidrosid ve VC arasındaki etkileşimli mekanizmalar hakkında sınırlı araştırma yapılmıştır.

Bu araştırma, kapsamlı veritabanı madenciliği yoluyla temel hedefleri belirleyerek ve analiz ederek salidrositin VC üzerindeki potansiyel etkisinin moleküler bir ağ haritasını oluşturur. Bir protein-protein etkileşimi (PPI) ağı oluşturulur ve kalsifikasyon sürecindeki kritik düğümleri vurgulamak için topolojik analiz uygulanır.

Hesaplamalı tahminleri doğrulamak için, D3 vitamini (VD3) içeren yüksek yağlı bir diyet uygulanarak bir sıçan VC modeli geliştirilmiştir. Bu model, insan VC'nin patolojik özelliklerini çoğaltır. Vasküler hasar histolojik tekniklerle değerlendirilir, serum lipid profilleri ve inflamasyon belirteçleri salidrositin sistemik etkilerini araştırmak için değerlendirilir ve salidrosidin deneysel olarak indüklenen VC üzerindeki etkisini araştırmak için SAL anti-VC ile ilişkili proteinlerin ekspresyonu Western blotting kullanılarak ölçülür, bu çalışma, VC ile mücadele için terapötik bir strateji olarak bu bileşiğin potansiyeline değerli bilgiler katmayı amaçlamaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokol, Changchun Çin Tıbbı Üniversitesi Deney Hayvanları Komitesi tarafından onaylandı (Onay No. 2023091). Bu çalışma, Avrupa Topluluğu Yönergeleri ve 1986 tarihli AET Direktifi de dahil olmak üzere uluslararası yönergelere bağlı kalarak, çalışma boyunca hayvanlara etik muamele edilmesini sağlar. Çalışma için erkek Wistar sıçanları (8-10 hafta, ağırlık 200-220 g) kullanıldı. Kullanılan reaktiflerin ve ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Potansiyel salidrosid-VC hedeflerinin ağ farmakolojisi tahmini

NOT: Ağ farmakolojisi, ilaç molekülleri ile bir organizma içindeki yollar, genler ve proteinler gibi biyolojik hedefler arasındaki karmaşık etkileşimleri araştırmak için hesaplama yöntemlerini ve büyük ölçekli veri analizini kullanır11,12. Bu yaklaşım, incelenen varlıkların biyolojik işlevlerinin ve ilişkilerinin deşifre edilmesine yardımcı olur. Metodoloji, veri tabanı kullanımını, kimyasal bilgilerin işlenmesini, biyoaktivite verilerinin elde edilmesini, protein verilerinin alınmasını, gen ekspresyon profillerinin analizini, etkileşim ağlarının oluşturulmasını ve yolların zenginleştirme analizini kapsar11. Şekil 1, salidrosid ve vasküler kalsifikasyon arasındaki çekirdek hedeflerin etkileşim ağını göstermektedir.

  1. "Ingredient" hedef veritabanının oluşturulması
    1. HERB, TCMSP, PubChem, SwissTargetPrediction, CTD, PharmMapper, SEA ve STITCH gibi veritabanlarını13 aramak için malzemeler için anahtar kelime olarak "Salidroside" kullanın (Ek Tablo 1'e bakın).
    2. Homo sapiens olarak ayarlanmış türlerle salidrosit ile ilişkili hedefleri belirlemek için ilgili literatürü gözden geçirin. Kopyaları çıkardıktan sonra, UniProt kullanarak hedef proteinleri standartlaştırın (Ek Tablo 1'e bakınız) ve kapsamlı bir Salidroside hedef veritabanı14 oluşturun.
  2. "Hastalık" hedef veri tabanının oluşturulması
    1. Türler Homo sapiens olarak ayarlanmış olacak şekilde GeneCards, OMIM, PharmGkb ve DrugBank dahil olmak üzereveritabanlarını 15 aramak için anahtar kelime olarak "Vasküler kalsifikasyon" kullanın (Ek Tablo 1'e bakın). Tekilleştirmeden sonra, bir vasküler kalsifikasyon hedef veritabanı oluşturun.
  3. Potansiyel terapötik hedeflerin tahmini
    1. Ortak hedefleri belirlemek için salidrosid ve vasküler kalsifikasyon hedeflerini girin (Ek Tablo 1'e bakınız). Vasküler kalsifikasyon tedavisinde salidrosid için potansiyel terapötik hedefleri görselleştirmek için bir Venn şeması oluşturun.
  4. "Salidrosit-Vasküler Kalsifikasyon" Protein-Protein Etkileşimi (PPI) ağının oluşturulması
    1. Potansiyel hedefleri bir Çoklu Proteinler Listesi'nde derleyin ve organizma Homo sapiens ve etkileşim puanı orta güvenliğe (>0.4) ayarlanmış olarak STRING kullanarak analiz edin (Ek Tablo 1'e bakınız)16. Daha fazla analiz için ÜFE verilerini TSV formatında çıkarın.
      NOT: Sıçan genlerinin% 85'inin insan genlerine homolog olduğu ve benzer biyolojik işlevleri yerine getirdiği göz önüne alındığında, sıçanlar, salidrositin vasküler kalsifikasyon üzerindeki etkilerini doğrulamak için deneysel denekler olarak seçildi17.
  5. Kilit hedeflerin seçimi ve ağ inşası
    1. Arada Kalma (BC), Yakınlık (CC), Derece (DC), Özvektör (EC), Yerel Ortalama Bağlantı (LAC) ve Ağ Merkeziliği (NC) gibi parametreleri değerlendirmek için CytoNCA eklentisini kullanarak analiz için PPI ağ verilerini Cytoscape 3.9.1'e (Ek Tablo 1'e bakın) aktarın. 'SAL-VC' için bir temel hedef eylem spektrumu haritası oluşturmak için CC=1 ile ana hedefleri seçin.
    2. Maximal Clique Centrality (MCC), Maksimum Komşuluk Bileşeni (MNC) ve Derece hesaplamalarına dayalı olarak ilk 10 hub genini belirlemek için CytoHubba eklentisini kullanın ve bir Hub genleri spektrum haritası oluşturun.
  6. GO ve KEGG yolu zenginleştirme analizi
    1. DAVID kullanarak gen kimliği dönüşümü gerçekleştirin (Ek Tablo 1'e bakınız), tür bilgisi için gen tipi-9606 için ENSEMBL_GENE_ID seçin. Dönüştürülen gen listesini, GO fonksiyonel ve KEGG yolu zenginleştirmesi için Omicshare (Ek Tablo 1'e bakınız) kullanarak, anlamlılık P 0.0518 olarak ayarlanmış şekilde analiz edin.
      NOT: GO fonksiyonel analizi, moleküler fonksiyon (MF), biyolojik proses (BP) ve hücresel bileşeni (CC) içerir. KEGG yol analizi, yol zenginleştirme ve yol sınıflandırma zenginleştirmesini içerir19. Zenginleştirme analizi sonuçları Şekil 2'de gösterilmiştir.

2. Hayvan deneyi

  1. İklimlendirme
    1. Wistar sıçanlarını 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsü ile belirli patojen içermeyen (SPF) koşullar altında iklimlendirin. Deneylere başlamadan önce sağlıklarını korumak için yiyecek ve suya ad libitum erişimleri olduğundan emin olun. 1 hafta boyunca uyarlanabilir besleme yapın.
  2. Model oluşturma
    1. Sıçanları çevresel koşullara alıştırın ve rastgele beş gruba ayırın: Kontrol grubu (Ctrl, ND + Araç), Model grubu (Model, HFD + Araç), SAL düşük doz grubu (SAL-L, HFD + SAL 5mg / kg), SAL yüksek doz grubu (SAL-H, HFD + SAL 10mg / kg) ve Simvastatin (SIM) grubu (HFD + SIM 5mg / kg).
    2. Deneyin tüm süresi boyunca Ctrl grubuna normal bir diyet (ND) ve kalan gruplara yüksek yağlı bir diyet (HFD) uygulayın. HFD uygulamasının ilk gününde, Ctrl grubu20,21 dışındaki tüm gruplara 600.000 IU / kg VD3'lük tek bir deri altı dozu enjekte edin. Takip eden 8 hafta boyunca haftalık 100.000 IU / kg VD3 deri altı enjeksiyonları ile takip edin (Şekil 3).
    3. Hayvanların sağlık durumunu ve hayatta kalmasını günlük olarak izleyin. Dokuzuncu haftada deneysel müdahalelere başlayın.
    4. Çalışmanın sonunda hayvanlara ötenazi yapın (kurumsal olarak onaylanmış protokolleri izleyerek). Serum örneklerini toplayın, 30 dakika bekletin ve serumu izole etmek için santrifüjleyin (daha önce yayınlanmış raporları takiben20,21). Vasküler dokuları (abdominal aort) diseke edin ve kanı çıkarmak için fosfat tamponlu salin (PBS) ile durulayın.
    5. Histolojik inceleme için dokunun bir kısmını% 4 paraformaldehit içine sabitleyin ve diğer bir kısmını moleküler analiz için sıvı nitrojen içinde saklayın.
      NOT: Kullanmadan önce salidrosidi ılık suyla seyreltin.

3. HE, VK, EVG boyaması kullanılarak vasküler doku yaralanmasının değerlendirilmesi

NOT: Vasküler dokuyu (abdominal aort)% 4 paraformaldehitte sabitleyin, 48 saat sonra etanolde kurutulun ve parafine gömülün. Hematoksilen-Eozin (HE), Elastica van Gieson (EVG) ve Von Kossa (VK) boyama için gömülü parafin bloklarını 5 μm'lik dilimler halinde kesin ve ışık mikroskobu altında histolojik morfolojiyi gözlemleyin. HE boyama, doku morfolojisindeki değişiklikleri değerlendirmek için kullanılır. Vasküler dokuda, düz kas hücresi proliferasyonu, düzensiz hücre düzenlemesi ve iltihaplanma dahil olmak üzere damar duvarındaki yapısal değişiklikleri vurgular. EVG boyama, elastik lif hasarını değerlendirmek veya vasküler dokuda yeniden şekillenmek için gerekli olan elastik ve kollajen liflerini görselleştirir ve kalsifikasyonun vasküler elastikiyet üzerindeki etkisini anlamaya yardımcı olur. VK boyama, VC'de önemli bir özellik olan kalsiyum birikintilerini tespit eder ve vasküler dokudaki kalsifikasyonun derecesini ve dağılımını değerlendirmek için çok önemli hale getirir22,23.

  1. Vasküler doku hasarının tespiti için HE boyama
    1. Deparafinizasyon ve rehidrasyon
      1. Bölümleri her biri 8 dakika boyunca iki ksilen değişikliğinde deparafinize edin ve adım başına 3 dakika boyunca dereceli bir etanol serisinden (% 100,% 95,% 85,% 75) rehidre edin. Ardından akan musluk suyunda 2 dakikalık bir durulama ile takip edin.
    2. Hematoksilen boyama
      1. Bölümleri 5-10 dakika hematoksilen ile boyayın ve fazla lekeyi çıkarmak için yıkayın, ardından akan musluk suyu ile durulayın.
        NOT: Sitoplazmik rengi etkileyebilecek aşırı koyu lekelenmeyi önlemek için 5 dakikalık hafif bir leke önerilir.
    3. Farklılaştırma
      1. Bölümleri bir farklılaştırma solüsyonunda 30 saniye boyunca ayırt edin, ardından her biri 3 dakika musluk suyunda iki durulama yapın.
    4. Eozin karşı boyama
      1. Bölümleri 1 dakika boyunca eozin boyasına yerleştirin. Fazla lekeyi çıkardıktan sonra hızlı dehidrasyon yapın.
    5. Dehidrasyon, berraklaştırma ve montaj
      1. Hızlı dehidrasyon için, bölümleri her biri 3 saniye boyunca %75, %85, %95 ve %100 etanole, ardından 1 dakika boyunca %100 etanole batırın.
        NOT: Eozin su ve etanol gradyanlarında renk kaybedebileceğinden hızlı dehidrasyon önerilir.
  2. Kalsiyum tespiti için VK boyama
    1. Deparafinizasyon ve rehidrasyon
      1. Adım 3.1.1'i izleyerek bu adımı gerçekleştirin.
    2. Gümüş nitrat reaksiyonu
      1. Bölümleri kurulayın, ince bir fırça ile çizin ve Von Kossa ile boyayın (bkz. Malzeme Tablosu). 4 saat boyunca ultraviyole ışığa maruz bırakın, ardından akan musluk suyuyla iyice durulayın.
    3. Hematoksilen ile karşı boyama
      1. Bölümleri 5 dakika hematoksilen ile boyayın, akan musluk suyunda durulayın, farklılaştırın ve tekrar durulayın, ardından akan musluk suyuyla durulayın.
    4. Eozin karşı boyama
      1. Bölümleri kademeli etanol ile kurutun (her biri 5 dakika boyunca% 85 ve% 95), ardından 5 dakika boyunca eozin ile boyayın.
    5. Dehidrasyon ve montaj
      1. Bölümleri etanol banyolarında (her biri 5 dakika% 100 Etanol I, II, III) kurutun ve ksilen banyolarında (her biri 5 dakika Ksilen I ve II) berraklaştırın. Ardından, bölümleri nötr balsam ile monte edin.
    6. Mikroskobik inceleme ve görüntü yakalama
      1. Lekeli bölümleri ışık mikroskobu altında inceleyin ve analiz için görüntüleri yakalayın.
        NOT: Kalsiyum birikintilerinin kahverengi-siyah ila koyu siyah göründüğünden, çekirdeklerin mavi ve arka planın kırmızı olduğundan emin olun. Kullanmadan hemen önce gümüş nitrat çözeltisini taze VK boyaması için hazırlayın.
  3. Elastik ve kollajen lifleri için EVG boyama
    1. Deparafinizasyon ve rehidrasyon
      1. Parafin bölümlerine 50 dakika boyunca ısı uygulayın, ardından parafini çıkarmak için 20 dakika boyunca ksilene batırın. Bölümleri her biri 5 dakika boyunca kademeli bir etanol serisine (%100, %95, %85, %75) tabi tutarak devam edin ve 5 dakika akan musluk suyunda durulama ile sonlandırın.
    2. EVG boyama
      1. EVG boyama solüsyonunu ( Malzeme Tablosuna bakın) 10 dakika uygulayın, ardından fazla lekeyi çıkarmak için akan musluk suyunda 5 saniye boyunca kısa bir süre durulayın.
      2. Ardından, Verhoeff çalışma solüsyonunu (Malzeme Tablosuna bakınız) 5 dakika boyunca uygulayın, ardından 5 s boyunca akan musluk suyunda kısa bir durulama daha yapın. Elastin lifleri net bir şekilde görünene kadar Verhoeff'in farklılaştırıcı solüsyonunu 5 saniye boyunca uygulayın ve ardından 5 saniye boyunca akan musluk suyuyla durulayın.
        NOT: Kullanmadan önce Verhoeff çalışma solüsyonunu hazırlamak için A, B ve C bileşenlerini (piyasada bulunan kitte verilir) 5:2:2 oranında karıştırın. Solüsyonu 2 saat içinde kullanın ve bölümlerin kurumasını önlemek için boyama işlemi sırasında gerektiği kadar doldurun.
    3. Dehidrasyon ve montaj
      1. Bölümleri, her biri 5 saniye boyunca dereceli bir etanol serisinden (%75, %85, %95 ve %100) kurutun, ardından her biri 1 dakika boyunca iki ksilen değişikliğinde bir açıklama yapın. Kısa bir havayla kuruma süresinden sonra, bölümleri nötr balsam ile monte edin.
    4. Mikroskobik inceleme ve görüntü analizi
      1. Elastik ve kollajen liflerini görselleştirmek için lekeli bölümleri ışık mikroskobu altında inceleyin ve sonraki analizler için görüntüleri yakalayın.

4. Alkalen Fosfataz (ALP) testi

NOT: Anti-kalsifikasyon tedavilerinin etkinliğini değerlendirmek için ALP'yi önemli bir gösterge olarak kullanın.

  1. Reaktif hazırlama
    1. Renk geliştiren substratı buz gibi soğuk 0,05 M pH 9,6 karbonat tamponunda 2,5 mL'lik bir nihai hacme kadar çözün.
      NOT: 1.59 g sodyum karbonat ve 2.93 g sodyum bikarbonatı 1.000 mL çift damıtılmış suda çözerek tamponu hazırlayın.
  2. Substrat seyreltme
    1. 10 μL p-nitrofenol çözeltisini (10 mM) 0.05 M pH 9.6 karbonat tamponu ile 0.5 mM'lik bir nihai konsantrasyon elde etmek için 0.2 mL'lik bir nihai hacme seyreltin.
  3. Numune hazırlama
    1. Abdominal aortu lizis tamponunda homojenize edin. Homojenatı santrifüjleyin (4 ° C'de 10 dakika boyunca ~ 12.000 x g) ve ALP aktivitesi tespiti için süpernatanı toplayın.
      NOT: Lizis tamponunun fosfataz inhibitörleri içermediğinden emin olun. Bekleyen test numunelerini -80 °C'de saklayın ve tekrarlanan donma-çözülme döngülerinden kaçının.
  4. Test için mikroplaka hazırlama
    1. Boş, standart ve numune kuyucukları içeren 96 oyuklu bir plaka hazırlayın. Standart kuyucuklara 50 μL standart çözelti ve numune kuyucuklarına 50 μL bekleyen test numunesi ekleyin. Plakayı 37 °C'de 10 dakika inkübe edin.
  5. Reaksiyon sonlandırma ve absorbans ölçümü
    1. Reaksiyonu sonlandırmak için her oyuğa 100 μL durdurma çözeltisi ekleyin. 405 nm'de absorbansı ölçün ve absorbans değerlerine göre ALP aktivitesini hesaplayın (üreticinin talimatlarını izleyerek, Malzeme Tablosuna bakın).
      NOT: Standardı içeren kuyucuklar veya ALP aktivitesine sahip numuneler, değişen sarı tonları gösterecektir. Renk 2 saate kadar stabildir.

5. Kalsiyum içeriği tayini

NOT: Kalsiyum içeriğinin belirlenmesi, biyolojik dokulardaki mineralizasyonun derecesini değerlendirmek için kritik öneme sahiptir.

  1. Doku hazırlama
    1. Dokuyu küçük parçalar halinde doğrayın ve lizis tamponunda homojenize edin.
  2. Numune seyreltme ve santrifüjleme
    1. Dokuyu lizis tamponunda 1:10 oranında seyreltin. Karışımı homojenize edin ve 4 °C'de, 12.000 x g'da 5 dakika santrifüjleyin. Analiz için süpernatanı toplayın.
      NOT: 5 mM kalsiyum standart çözeltisi kullanarak kalsiyum standart seyreltmelerini (0-1.0 mM) hazırlayın (Malzeme Tablosuna bakınız).
  3. Plaka kurulumu ve inkübasyon
    1. 50 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 96 μL standart veya test numunesi ekleyin. 150 μL tahlil çalışma solüsyonu ekleyin, iyice karıştırın ve plakayı karanlıkta oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin. Absorbansı 575 nm'de ölçün ve standart bir eğri oluşturun.
  4. Kalsiyum içeriğinin hesaplanması
    1. Seyreltme faktörünü, numune hacmini ve kalsiyumun atom ağırlığını içeren standart eğriyi kullanarak kalsiyum içeriğini hesaplayın.

6. İnflamatuar sitokinler için Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi (ELISA) (IL-6, TNF-α, IL-1β)

NOT: IL-6, IL-1β ve TNF-α, bir inflamatuar yanıtın varlığını ve şiddetini gösteren anahtar proinflamatuar sitokinlerdir. Bu sitokinlerin ölçülmesi, enflamatuar süreci anlamak ve anti-inflamatuar tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için gereklidir.

  1. Numune toplama
    1. Sıçanın abdominal aortundan serum toplayın. Oda sıcaklığında 2 saat pıhtılaşmasına izin verin. Numuneyi 3.000 x g'da 4 °C'de 10 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı toplayın.
  2. Test için mikroplaka hazırlığı
    1. Standartlar ve test numuneleri için belirlenmiş kuyucuklara sahip 96 oyuklu bir plaka hazırlayın. Uygun kuyucuklara değişen konsantrasyonlarda 50 μL standart ( Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin.
  3. Numune hazırlama
    1. Test numuneleri için belirlenmiş her bir kuyucuğa 40 μL numune seyreltici ekleyin. Aynı kuyucuklara 10 μL numune ekleyin, bu da 5 kat seyreltme ile sonuçlanır.
  4. Enzim etiketli reaktiflerle inkübasyon
    1. Boşluk hariç tüm oyuklara IL-6, TNF-α veya IL-1β'ya özgü 100 μL enzim etiketli reaktif ekleyin. Plakayı 37 °C'de 60 dakika inkübe edin.
  5. Yıkama
    1. Sıvıyı boşluk dışındaki tüm kuyulardan atın. Kuyuları 1x yıkama solüsyonu ile yıkayın (damıtılmış suda 20 kat seyreltme olarak hazırlanır). Bu yıkama adımını beş kez tekrarlayın ve kuyuları kurutun.
  6. Renk geliştirme ve sonlandırma
    1. Her oyuğa 50 μL substrat çözeltileri A ve B (ticari olarak temin edilebilen kitten, Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin. Yavaşça karıştırın ve plakayı 37 °C'de karanlıkta 15 dakika inkübe edin. Reaksiyonu sonlandırmak için her oyuğa 50 μL durdurma çözeltisi ekleyin.
  7. Absorbans ölçümü ve veri analizi
    1. Boşluğu sıfır olarak ayarlayın. Bir mikroplaka okuyucu kullanarak absorbansı 450 nm'de ölçün. OD değerlerine ve standart konsantrasyonlara dayalı standart bir eğri oluşturun. Enterpolasyon kullanarak numune konsantrasyonlarını hesaplayın ve seyreltme faktörünü ayarlayın.

7. Lipid profil analizi

NOT: Lipid profili testi, yüksek veya dengesiz lipid seviyelerinin vasküler kalsifikasyon riskini hızlandırabileceği anormal lipid seviyelerini tespit eder.

  1. Toplam kolesterol ve trigliseritler (TC ve TG)
    1. Serumu toplayın ve boş, kalibrasyon ve bekleyen test numuneleri için belirlenmiş kuyucuklara sahip 96 oyuklu bir plaka hazırlayın. Her kuyucuğa 2,5 μL serum, kalibrasyon standardı veya boş çözelti ekleyin.
    2. Her kuyucuğa 250 μL çalışma çözeltisi ekleyin. Yavaşça karıştırın ve plakayı 37 °C'de 10 dakika inkübe edin. Bir mikroplaka okuyucu kullanarak absorbansı 500 nm'de ölçün.
  2. Düşük yoğunluklu lipoprotein ve yüksek yoğunluklu lipoprotein (LDL-C ve HDL-C)
    1. Serumu toplayın ve boş, kalibrasyon ve bekleyen test numuneleri için belirlenmiş kuyucuklara sahip 96 oyuklu bir plaka hazırlayın. İlgili kuyucuklara 2,5 μL serum, kalibrasyon standardı veya boş çözelti ekleyin.
    2. Uygun reaktifi (180 μL için Reaktif Bir veya 60 μL için Reaktif İki, Malzeme Tablosuna bakın) tahlil kiti talimatlarında belirtildiği gibi her bir kuyucuğa ekleyin. Her reaktif için önerilen sıcaklıkta (37 °C) ve süre boyunca (Reaktif Bir 5 dakika veya Reaktif İki 10 dakika) inkübe edin.
    3. Bir mikroplaka okuyucu kullanarak LDL-C veya HDL-C için belirtilen spesifik dalga boyunda (600 nm) absorbansı ölçün.

8. Batı lekeleme

NOT: Western blot (WB), hem toplam hem de fosforile formların saptanmasına izin vererek, anahtar proteinlerin ekspresyon seviyelerinin değerlendirilmesinde etkilidir.

  1. Doku hazırlama
    1. 0.05 g doku tartın ve fazla kalıntıları gidermek için PBS ile iyice durulayın. 1x fosfataz ve proteaz inhibitörleri içeren 500 μL lizis tamponu ekleyin. Dokuyu 4 °C'de 10 dakika inkübe edin ve bir doku öğütücü kullanarak homojenize edin.
  2. Protein ekstraksiyonu
    1. Homojenize numunenin 1 dakika bekletin, ardından 4 °C'de ve 12.000 x g'da 15 dakika santrifüjleyin. Protein analizi için süpernatanı toplayın. Üreticinin talimatlarını izleyerek BCA yöntemini kullanarak protein konsantrasyonunu belirleyin (bkz . Malzeme Tablosu). Konsantrasyonu hesaplamak için standart bir eğri kullanın.
      NOT: Kullanmadan önce santrifüjü 4 °C'ye önceden soğutun. Protein konsantrasyonunu 562 nm'de ölçün.
  3. Numune hazırlama
    1. Protein örneğini 4:1 oranında β-merkaptoetanol ve SDS içeren 5x yükleme tamponu ile karıştırın. Proteinleri denatüre etmek için karışımı 100 °C'de 5 dakika ısıtın.
      NOT: 1x yükleme tamponu gerekiyorsa, 5x tamponu lizis tamponu ile seyreltin.
  4. SDS-PAGE jel hazırlama
    1. % 12'lik bir SDS-PAGE jeli hazırlayın ve elektroforez aparatına yerleştirin. Talimatlara göre yarıya kadar 1x elektroforez tamponu ekleyin (Ek Tablo 2'ye bakın).
  5. Elektroforez
    1. Protein örneklerini -20 °C'den alın. Kuyucuk başına 60 μg protein yükleyin ve jeli çalıştırın.
    2. İstifleme jeli için akımı 50 dakika boyunca 20 mA'ya ayarlayın, ardından boya cephesi dibe ulaşana kadar ayırma jeli için 100 dakika boyunca 60 mA'ya yükseltin.
  6. Membran transferi
    1. PVDF membranını metanol içinde 5 dakika boyunca etkinleştirin.
    2. Transfer sandviçini şu sırayla monte edin: filtre kağıdı → SDS-PAGE jel → PVDF membran → filtre kağıdı. Proteinleri 60 dakika boyunca 300 mA'da aktarın.
      NOT: SDS-PAGE jel ve PVDF membranı arasında hava kabarcığı sıkışmadığından emin olun.
  7. Engelleme
    1. PVDF membranını oda sıcaklığında% 5 BSA'da (1x TBST'de hazırlanmış) 60 dakika hafifçe çalkalayarak inkübe edin. Membranı 1x TBST ile her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  8. Birincil antikor inkübasyonu
    1. Membranı uygun primer antikorun 5 mL'sinde inkübe edin (ör., p-JAK2, JAK2, p-STAT3, STAT3, p-NF-κB p65, NF-κB p65, IκBα) 2.5 saat oda sıcaklığında bloke edici tampon içinde seyreltilmiş.
  9. İkincil antikor inkübasyonu
    1. Primer antikor inkübasyonundan sonra membranı 1x TBST ile her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın. Uygun ikincil antikor ile oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin. Membranı tekrar 1x TBST ile her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  10. Algılama
    1. ECL kemilüminesans tespiti24 kullanarak protein bantlarını görselleştirin (bkz. Malzeme Tablosu).
  11. Dansitometri analizi
    1. ImageJ yazılımını kullanarak protein bantlarını ölçün. ImageJ'de şu iş akışını izleyin: Görüntü → 8 bit → İşlemi → Arka Planı Çıkar. Ölçümleri analiz edin → ayarlayın → ölçeği analiz → ayarlayın. Sonuçları düzenleyin → ters çevirin → analiz edin → → sonuçlarını ölçün. Dosya → IntDen → Farklı Kaydet.
    2. Grafik ve istatistiksel analiz yazılımı kullanarak istatistiksel grafikler oluşturun.
      NOT: Bulguları doğrulamak için sonuçların tekrarlar arasında tutarlı olduğundan emin olun.

9. İstatistiksel analiz

  1. GraphPad Prism 9.0 kullanarak veri toplayın ve düzenleyin.
  2. Ham verilerden ortalama ± SD kullanarak hata çubuklarını hesaplayın ve çizin.
  3. Tek yönlü ANOVA kullanarak istatistiksel analiz yapın ve ardından çoklu karşılaştırmalar için Tukey'in post-hoc testini yapın.
  4. İstatistiksel anlamlılığı P < 0.05'te belirleyin, daha küçük P değerleri sonuçlarda daha büyük farklılıklar olduğunu gösterir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ağ farmakolojisi analizi

HERB, TCMSP, Pubmed, SwissTargetPrediction, CTD, PharmMapper, SEA ve STITCH gibi veri tabanları kullanılarak salidrosid için 388 potansiyel hedef gen belirlendi. Ek olarak, VC ile ilgili 2871 potansiyel hedef gen, GeneCards, OMIM, PharmGkb ve DrugBank gibi veri tabanlarından alındı. VENN diyagramları aracılığıyla kesişme analizi, salidrositin VC'ye müdahalesi için kilit hedefler olarak kabul edilen 208 örtüşen hedefi ortaya çıkardı (

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

VC, vasküler hücrelerde ve dokularda dejeneratif değişiklikler ile karakterizedir, kan damarları içinde damar duvarlarının sertleşmesine veya aterosklerotik plakların oluşumuna yol açan patolojik mineral birikintileri ile obstrüktif vasküler hastalıklara neden olabilir25. Çalışmalar, VC plaklarının yaklaşık% 85'inin akut kardiyovasküler atakları tetikleyebilen tromboza dönüşebileceğini göstermektedir. Ek olarak, VC, potansiyel akut kardiyovasküler olayların, felçl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm yazarların her türlü çıkar çatışmasını açıkladığından emin olun.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Jilin İl Bilim ve Teknoloji Departmanı Projesi (YDZJ202301ZYTS460) ve Jilin İl Eğitim Departmanı Projesi (JJKH20230991KJ) tarafından mali olarak desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%30 (29:1) Akrilamid/Bis ÇözeltisiPekin Solarbio Bilim & Technology Co., Ltd, ÇinA1010
%4 Paraformaldehit Düzeltme ÇözümüBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ÇinP0099
5 * yükleme tamponuPekin Solarbio Bilim ve Technology Co., Ltd, ÇinP1040
Alkalin Fosfataz Test KitiBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ÇinP0321S
AlphaView YazılımıProteinsimple Inc.USAAlphaView SA
BCA Protein Test KitiBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ÇinP0012
Bluing ÇözümüPekin Solarbio Bilim ve Technology Co., Ltd, ÇinG1866
Kalsiyum Kolorimetrik Test KitiBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ÇinS1063S
Kollajen Elyaf ve Elastik Elyaf Boyama Kiti (EVG-Verh eff Yöntemi)Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd, ÇinG1597
Susuzlaştırma makinesiDiapath Biosciences  Ltd, İtalyaDonatello
Gömme makinesiWuhan Junjie Electronics Co., Ltd, ÇinJB-P5
Enzim etiketli alet Biotek Co., Ltd, ABDEpoch
Etanol mutlakGHTECH & nbsp; Co., Ltd, Çin64-17-5
Keçi Anti-Fare IgG (H + L) HRPBioworld teknolojisi, co, Ltd., ÇinBS20242-Y
GraphPad Prizma YazılımıGraphPad Yazılımı., ABDGraphPad Prizma 9.0
Hematoksilen-Eozin Leke KitiPekin Solarbio Bilim ve Technology Co., Ltd, ÇinG1120
Yüksek yoğunluklu lipoprotein kolesterol tahlil kitiNanjing Jiancheng Biyomühendislik Araştırma Enstitüsü Co., Ltd, ÇinA112
HRP etiketli Keçi Anti-Tavşan IgG (H + L)Guangzhou saiguo biotech Co., LTDA0208
Resim J YazılımUlusal Sağlık Enstitüleri (NIH), ABDResim J 
Iκ B Alfa Poliklonal antikorProteintech Group, Inc.A, ABD10268-1-AP
JAK2 AntikorAfinity Biosciences Co., Ltd., ÇinAF6022
Düşük yoğunluklu lipoprotein kolesterol test kitiNanjing Jiancheng Biyomühendislik Araştırma Enstitüsü Co., Ltd., ÇinA113
NF-κ BP65 AntikorProteintech Group, Inc.A, ABD10745-1-AP
Patolojik mikrotomLeica Biosystems, ABDRM2016
Fosfataz İnhibitörü Kokteyl MasalarıF. Hoffmann-La Roche, Ltd, İsviçre04906845001
Fosfo-JAK2 (Tyr931) AntikorAfinity Biosciences Co., Ltd, ÇinAF3024
Fosfo-NF-κ B p65 (Ser276) AntikorAffinity Biosciences Co., Ltd, ÇinAF2006
Fosfo-STAT3 (S727) AntikorAbways  Bilim & Technology Co., Ltd, ÇinCY5291
Proteaz İnhibitörü Kokteyli F. Hoffmann-La Roche, Ltd, İsviçre11873580001
PVDF membranıF. Hoffmann-La Roche, Ltd, İsviçre3010040001
Sıçan IL-1 ve beta; ELISA KitiBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ÇinPI303
Sıçan IL-6 ELISA KitiBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ÇinPI328
Sıçan TNF-&alfa; ELISA KitiBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ÇinPT516
RIPA Lizis TamponuBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ÇinP0013B
SalisorosideShanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd, ÇinS25475
SDSGuangzhou saiguo biotech Co., LTD, Çin3250KG001
Sodyum karbonatÇin Ulusal İlaç Grubu Co., Ltd., Çin1001921933
Sodyum hidrojen karbonatChina National Pharmaceutical Group Co., Ltd., Çin10018960
Sodyum tiyosülfatChina National Pharmaceutical Group Co., Ltd., Çin20042518
STAT3 AntikorProteintech Group, Inc.A, ABD10253-2-AP
TBST (10 kez;)Beyotime Biotech Inc (Beyotime), ÇinST673
Toplam kolesterol tahlil kitiNanjing Jiancheng Biyomühendislik Araştırma Enstitüsü Co, Ltd, ÇinA111
Trigliserit tahlil kitiNanjing Jiancheng Biyomühendislik Araştırma Enstitüsü Co, Ltd, ÇinA110
Tris TabanıGuangzhou saiguo biyoteknoloji Co, LTD1115GR500
Dik optik mikroskopNikon Corporation, JaponyaEclipse E100
Von Kossa Çözümü  Wuhan servicebio technology CO., LTD, ÇinG1043
Western Blotting Luminol ReaktifiSanta Cruz Biotechnology, Inc., ABDSC-2048
ve beta; - Aktin antikoruve nbsp; Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi, Inc., ABDE4967

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sutton, N. R., et al. Molecular mechanisms of vascular health: Insights from vascular aging and calcification. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 43 (1), 15-29 (2023).
  2. Henein, M. Y., Owen, A. Statins moderate coronary stenoses but not coronary calcification: Results from meta-analyses. Int J Cardiol. 153 (1), 31-35 (2011).
  3. Ajufo, E., et al. Value of coronary artery calcium scanning in association with the net benefit of aspirin in primary prevention of atherosclerotic cardiovascular disease. JAMA Cardiol. 6 (2), 179-187 (2021).
  4. Vossen, L. M., Kroon, A. A., Schurgers, L. J., De Leeuw, P. W. Pharmacological and nutritional modulation of vascular calcification. Nutrients. 12 (1), 100(2019).
  5. Kereiakes, D. J., et al. Principles of intravascular lithotripsy for calcific plaque modification. JACC Cardiovasc Interv. 14 (12), 1275-1292 (2021).
  6. Demer, L. L., Watson, K. E., Boström, K. Mechanism of calcification in atherosclerosis. Trends Cardiovasc Med. 4 (1), 45-49 (1994).
  7. Chen, F., et al. Network pharmacology analysis combined with experimental validation to explore the therapeutic mechanism of salidroside on intestine ischemia-reperfusion. Biosci Rep. 43 (8), BSR20230539(2023).
  8. Rong, L., et al. Salidroside induces apoptosis and protective autophagy in human gastric cancer ags cells through the pi3k/akt/MTOR pathway. Biomed Pharmacother. 122, 109726(2020).
  9. Zhang, P., et al. Network pharmacology: Towards the artificial intelligence-based precision traditional Chinese medicine. Brief Bioinform. 25 (1), bbad518(2023).
  10. Jiao, X., et al. A comprehensive application: Molecular docking and network pharmacology for the prediction of bioactive constituents and elucidation of mechanisms of action in component-based Chinese medicine. Comput Biol Chem. 90, 107402(2021).
  11. Li, S., Zhang, B. Traditional Chinese medicine network pharmacology: Theory, methodology and application. Chin J Nat Med. 11 (2), 110-120 (2013).
  12. Wang, X., Hu, Y., Zhou, X., Li, S. Editorial: Network pharmacology and traditional medicine: Setting the new standards by combining in silico and experimental work. Front Pharmacol. 13, 1002537(2022).
  13. Huang, Z., Yang, Y., Fan, X., Ma, W. Network pharmacology-based investigation and experimental validation of the mechanism of scutellarin in the treatment of acute myeloid leukemia. Front Pharmacol. 13, 952677(2022).
  14. Zhang, R., Zhu, X., Bai, H., Ning, K. Network pharmacology databases for traditional Chinese medicine: Review and assessment. Front Pharmacol. 10, 123(2019).
  15. Wang, C., Liu, X., Guo, S. Network pharmacology-based strategy to investigate the effect and mechanism of alpha-solanine against glioma. BMC Complement Med Ther. 23 (1), 371(2023).
  16. Li, X., et al. Network pharmacology prediction and molecular docking-based strategy to explore the potential mechanism of Huang Lian jiedu decoction against sepsis. Comput Biol Med. 144, 105389(2022).
  17. Holmes, R. S., et al. Recommended nomenclature for five mammalian carboxylesterase gene families: Human, mouse, and rat genes and proteins. Mamm Genome. 21 (9-10), 427-441 (2010).
  18. Geng, J., Zhou, G., Guo, S., Ma, C., Ma, J. Underlying mechanism of traditional herbal formula Chuang-ling-ye in the treatment of diabetic foot ulcer through network pharmacology and molecular docking. Curr Pharm Des. 30 (6), 448-467 (2024).
  19. Chen, X., et al. Puerarin inhibits emt induced by oxaliplatin via targeting carbonic anhydrase xii. Front Pharmacol. 13, 969422(2022).
  20. Herrmann, J., Babic, M., Tolle, M., Van Der Giet, M., Schuchardt, M. Research models for studying vascular calcification. Int J Mol Sci. 21 (6), 2204(2020).
  21. Zhou, H., X, W., Yuan, Y., Qi, X. Comparison of methods for establishing a rat model of atherosclerosis using three doses of vitamin D3 and atherogenic diet. Chin J Arterioscler. 20 (11), 995-998 (2012).
  22. Zhang, Y., et al. Il-18 mediates vascular calcification induced by high-fat diet in rats with chronic renal failure. Front Cardiovasc Med. 8, 724233(2021).
  23. Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic verhoeff-van gieson staining in dermatopathology. J Cutan Pathol. 40 (2), 211-225 (2013).
  24. Tang, X., et al. Underlying mechanism and active ingredients of tianma gouteng acting on cerebral infarction as determined via network pharmacology analysis combined with experimental validation. Front Pharmacol. 12, 760503(2021).
  25. Lee, S. J., Lee, I. K., Jeon, J. H. Vascular calcification-new insights into its mechanism. Int J Mol Sci. 21 (8), 2685(2020).
  26. Magdic, J., et al. Intracranial vertebrobasilar calcification in patients with ischemic stroke is a predictor of recurrent stroke, vascular disease, and death: A case-control study. Int J Environ Res Public Health. 17 (6), 2013(2013).
  27. Zhou, L., et al. Salidroside-pretreated mesenchymal stem cells contribute to neuroprotection in cerebral ischemic injury in vitro and in vivo. J Mol Histol. 52 (6), 1145-1154 (2021).
  28. Hutcheson, J. D., Goettsch, C. Cardiovascular calcification heterogeneity in chronic kidney disease. Circ Res. 132 (8), 993-1012 (2023).
  29. Zhang, X., et al. Salidroside: A review of its recent advances in synthetic pathways and pharmacological properties. Chem Biol Interact. 339, 109268(2021).
  30. Zhang, P., Li, Y., Guo, R., Zang, W. Salidroside protects against advanced glycation end products-induced vascular endothelial dysfunction. Med Sci Monit. 24, 2420-2428 (2018).
  31. Li, Y., et al. Salidroside promotes angiogenesis after cerebral ischemia in mice through shh signaling pathway. Biomed Pharmacother. 174, 116625(2024).
  32. Gao, X. F., Shi, H. M., Sun, T., Ao, H. Effects of radix et rhizoma Rhodiolae kirilowii on expressions of von Willebrand factor, hypoxia-inducible factor 1 and vascular endothelial growth factor in myocardium of rats with acute myocardial infarction. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 7 (5), 434-440 (2009).
  33. Li, X., Liu, C., Li, Y., Xiong, W., Zuo, D. Inflammation promotes erythropoietin induced vascular calcification by activating p38 pathway. Bioengineered. 13 (3), 5277-5291 (2022).
  34. Bessueille, L., Magne, D. Inflammation: A culprit for vascular calcification in atherosclerosis and diabetes. Cell Mol Life Sci. 72 (13), 2475-2489 (2015).
  35. Li, R., et al. Salidroside prevents tumor necrosis factor-alpha-induced vascular inflammation by blocking mitogen-activated protein kinase and nf-kappa B signaling activation. Exp Ther Med. 18 (5), 4137-4143 (2019).
  36. Xing, S. S., et al. Salidroside attenuates endothelial cellular senescence via decreasing the expression of inflammatory cytokines and increasing the expression of sirt3. Mech Ageing Dev. 175, 1-6 (2018).
  37. Hopkins, A. L. Network pharmacology. Nat Biotechnol. 25 (10), 1110-1111 (2007).
  38. Xin, P., et al. The role of jak/stat signaling pathway and its inhibitors in diseases. Int Immunopharmacol. 80, 106210(2020).
  39. Fu, X., et al. Glycosides from buyang huanwu decoction inhibit atherosclerotic inflammation via jak/stat signaling pathway. Phytomedicine. 105, 154385(2022).
  40. Macri, F., et al. High phosphate-induced jak-stat signalling sustains vascular smooth muscle cell inflammation and limits calcification. Biomolecules. 14 (1), 107328(2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Salidrosid TedavisiJAK2 STAT3 YolaProtein Etkile im ALipid Metabolizmasnflamatuar Yan tWestern BlotSerum Lipid Profili
Video yakında

İlgili makaleler