Method Article

İnce Partikül Maddeye Maruz Kalan Zebra Balığı Embriyolarında Polisiklik Aromatik Hidrokarbonların Tespiti için Modifiye Edilmiş Bir QuEChERS-HPLC Yöntemi

DOI:

10.3791/67757

⸱

June 13th, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Suzhou Industrial Park Center for Disease Control and Prevention, 2Suzhou Medical College of Soochow University, 3MOE Education Key Laboratory of Geriatric Diseases and Immunology

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zebra balığı embriyolarında 16 PAH'ın iç seviyelerini değerlendirmek için modifiye edilmiş bir QuEChERS-HPLC yöntemi geliştirdik.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aerodinamik çapı2,5 μm veya daha az olan ince partikül maddeye (PM 2,5) annenin maruz kalması, insanlarda spontan düşük ve çeşitli konjenital hastalıklarla ilişkilendirilmiştir. Bununla birlikte, altta yatan mekanizmalar belirsizliğini korumaktadır. Zebra balığı embriyoları, PM2.5'in gelişimsel toksisitesini incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır, ancak PM2.5'in birincil toksik bileşenleri olan polisiklik aromatik hidrokarbonların (PAH'lar) iç seviyelerinin ölçülmesi bir zorluk teşkil etmektedir. Bu çalışmada, ABD Çevre Koruma Ajansı (EPA) öncelikli kirletici listesinde listelenen 16 PAH'ın iç seviyelerini değerlendirmek için Hızlı, Kolay, Ucuz, Etkili, Sağlam ve Güvenli Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (QuEChERS-HPLC) yöntemi geliştirdik. Zebra balığı embriyoları, döllenmeden 2-72 saat sonra (hpf) PM2.5'ten ekstrakte edilebilir organik madde (EOM) ile muamele edildi. Numune hazırlama için QuEChERS yöntemi, PAH'ların kalitatif ve kantitatif analizleri için HPLC-FLD/DAD (floresan dedektörlü ve diyot dizi dedektörlü HPLC) kullanılmıştır. PM2.5'e maruz kalan zebra balığı embriyolarında altı PAH (Fenatren, Antrasen, Floren, Asenaften, Floranten ve Piren) başarıyla tespit edildi. Bu yöntem, PM2.5'in neden olduğu gelişimsel toksisitenin mekanizmalarını araştırmak için çok önemlidir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aerodinamik çapı2,5 μm veya daha az olan ince partikül madde (PM 2,5). önde gelen bir çevresel risk faktörüdür. Küçük boyutu nedeniyle, PM2.5 dolaşım sistemine girebilir ve maternal-fetal bariyere nüfuz edebilir. Epidemiyolojik çalışmalar, annenin PM2.5'e maruz kalmasını spontan düşük ve çeşitli konjenital hastalıklarla ilişkilendirmiştir 1,2,3,4. Bununla birlikte, PM2.5'in embriyonik toksisitesinin altında yatan mekanizmalar iyi anlaşılmamıştır. PM2.5'in

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Örnek tedavi

  1. PM2.5 koleksiyonu
    1. PM2.5'i 47 mm kuvars membran filtrelerde toplayın.
      NOT: PM2.5 , Çin'in Suzhou kentindeki kentsel alanda toplanmıştır.
  2. EOM çıkarma
    1. Filtreyi parçalara ayırın ve 150 mL asetonitril içeren konik bir cam şişeye yerleştirin.
    2. Şişeyi 1 saat boyunca 35 ° C'de ultrasonikleştirin ve ekstraktı dört adet 50 mL tüpe aktarın.
    3. 20 dakika boyunca 7.000 × g'da santrifüjleyin, ardından süpernatanı bir döner buharlaştırıcıya aktarın ve yaklaşık 5 mL'ye konsantre edin.
    4. 35 °C....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

EOM maruziyeti, numune hazırlama ve PAH tespiti için tüm prosedür Şekil 1'de gösterilmektedir. HPLC-FLU / DAD için, 0.3 ila 5.0 ng / mL arasında bir algılama aralığı ile 3: 1'lik bir sinyal-gürültü oranı kabul edilebilir olarak kabul edildi. Yöntem tespit limitleri 3.0 × 10-4 ila 5.0 × 10-3 ng/organizma arasında değişmektedir. Tüm kalibrasyon eğrileri yüksek doğrusallık sergiledi (r2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zebra balığı embriyoları, gelişimsel toksisite çalışmaları için güçlü bir omurgalı modelidir, ancak küçük boyutları, PAH'lar gibi yarı uçucu organik bileşiklerin (SVOC'ler) tespitini zorlaştırır. Numune hazırlama sırasında, zebra balığı embriyolarının kontaminasyonunu önlemek çok önemlidir. Numunelerin uygun şekilde temizlenmesi, bileşiklerin maruz kalma ortamından numune ekstraktına taşınmasını önlemek için önemli bir adımdır. Eksik yıkama, aşırı tahmine yol açabilirken, aşırı yıkama, e.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe numarası: 81972999) ve Suzhou Bilim ve Teknoloji Geliştirme Planı (Tıbbi Uygulamalar Üzerine Temel Araştırma, SKY2023036 ve SKY2023115) tarafından mali olarak desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
16 PAH karışık standart çözeltiler o2si Akıllı Çözümler (Güney Karolina, ABD)110124-0616 PAH karışık standart çözeltiler  naftalin (Nap), asenaftilen (Acy), as-naften (Ace), floren (Flo), fenantren (Phe), antrasen (Karınca),floranten (Grip), piren (Pyr), benzo [a] antrasen (BaA), krizen (Chr), benzo [b] floranten (BbF), benzo [k] floranten (BkF),benzo [a] piren (BaP), indeno [1,2,3-cd] piren (IcdP), dibenz [a, h]antrasen (DahA), benzo [g,h,i] perilen (BghiP).
1260 Infinity II LC SistemiAgilent Technologies (Santa Clara, ABD)FLD (G1321A); DAD SL (G1315C)
AsetonitrilScharlab (Barselona,İspanya)AC03661000çözücü
CNWBOND HC-C18 SPE ANPEL Laboratuvar Teknolojileri (Şangay) Inc. (Şangay, ÇİN)SBEQ-CA0801C18 ambalajı, polar ve polar olmayan organik bileşikleri iyi bir şekilde adsorbe edebilen ve ayırabilen, hidrofilik ve hidrofobik arasında iyi bir dengeye sahip ters fazlı bir ambalajdır.
Diyatomlu toprakAgilent Technologies, Inc (Santa Clara, ABD)12214013Organik safsızlıkların ayrılması, saflaştırılması ve uzaklaştırılması için‌
Dağıtıcı SPE 15 mL, ENAgilent Technologies, Inc (Santa Clara, ABD)5982-5056Numune saflaştırma
FiltresiANPEL Laboratuvar Teknolojileri (Şangay) Inc. (Şangay, ÇİN)SCAA-104Organik faz iğne filtresi (naylon), 0.22 ve mikro; m
HexaneScharlab (Barselona, İspanya),HE02481000 çözücü
MilliporeMerck (New Jersey, ABD)Ultra saf su hazırlayın
Organomasyon - N-EVAP Azot EvaporatörleriOrganomasyonu (Massachusetts, ABD)Çözücüleri buharlaştırın
Sorvall ST4 PlusThermo Fisher Scientific (Waltham, ABD)santrifüjleme
  Vortex- Genie 2 (G560E)Scientific Industries (New York,ABD)Vortex
ZORBAX Eclipse PAHAgilent Technologies, Inc (Santa Clara, ABD)959990-918Bu sütun, PAH'ların hassas ve güvenilir analizini elde etmek için HPLC sistemlerinde yaygın olarak kullanılır.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, H., et al. Association of maternal exposure to ambient particulate pollution with incident spontaneous pregnancy loss. Ecotoxicol Environ Saf. 224, 112653(2021).
  2. Grippo, A., et al. Air polluti....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

QuEChERS HPLCPolycyclic Aromatic HydrocarbonsZebrafish EmbryosFine Particulate MatterPAH DetectionSample PreparationFluorescence DetectorDiode Array DetectorExtractable Organic MatterDevelopmental Toxicity

Related Articles