Yöntem makalesi

Tithonia diversifolia Ekstraktlarının Gastrointestinal Nematod Yumurtalarına Karşı Antioksidan ve Antelmintik Özelliklerinin İn Vitro Deneyler Kullanılarak Değerlendirilmesi

DOI:

10.3791/67760

⸱

1 Ağustos 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Multidisciplinary Center for Technological Research, National University of Asunción (CEMIT - UNA), 2Centre of Marine Sciences (CCMAR/CIMAR LA), University of Algarve, 3Department of Food Biochemistry, Biodiversity, Food and Health Group (BIOALSA), Faculty of Chemical Sciences, National University of Asunción (FCQ - UNA), 4Carleton College

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, Tithonia diversifolia ekstraktlarının biyolojik aktiviteleri, küçük ruminantlarda gastrointestinal nematodlar üzerindeki etkilerini değerlendirmek için radikal bazlı yöntemler ve in vitro yumurta kuluçka testi (EHA) kullanılarak değerlendirilmiştir. Metodoloji ve temel bulgular açıklanmakta ve bu ekstraktların parazitleri kontrol etme potansiyeli vurgulanmaktadır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gastrointestinal nematodların (GIN) neden olduğu paraziter hastalıklar, hayvan refahını önemli ölçüde tehlikeye attıkları ve üretim maliyetlerini artırdıkları için dünya çapında hayvancılık üretimi için önemli sınırlayıcı faktörler olarak kabul edilmektedir. Yıllar boyunca, parazit kontrolü yalnızca sentetik ilaçların kullanımına dayanıyordu. GIN'in ticari antelmintiklere karşı direnci dünya çapında giderek daha fazla rapor edilmiştir. Bu nedenle, biyoaktif potansiyele sahip bitkilerin araştırılması da dahil olmak üzere çiftlik hayvanlarında GIN'i kontrol etmek için alternatif yaklaşımlar ortaya çıkmıştır. Tithonia diversifolia yıl boyunca hasat edilebilir ve bitkinin tüm kısımları halk hekimliğinde çok çeşitli hastalıklar için kullanılmıştır. Bu çalışma, yapraklar, dallar ve çiçekler dahil olmak üzere T. diversifolia hava kısımlarının su ve %70 sulu aseton ekstraktlarının in vitro antioksidan özelliklerini radikal temelli yöntemler kullanarak değerlendirdi ve su ekstraktları ile yumurta kuluçka testi (EHA) kullanan bir parazit modeli aracılığıyla antelmintik potansiyelini değerlendirdi. Ek olarak, ekstraktların toplam polifenolik içeriği belirlenmiştir. Bu bulgular, T. diversifolia'yı umut verici bir doğal antioksidan ve antelmintik bileşik kaynağı olarak vurgulamaktadır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gastrointestinal nematodların (GIN) neden olduğu paraziter hastalıklar, hayvan refahını önemli ölçüde tehlikeye atması ve üretim maliyetlerini artırması nedeniyle dünya çapında hayvancılık üretimi için önemli sınırlayıcı faktörler olarak kabul edilmektedir1. Parazit ve çiftlik hayvanları arasındaki ilişki, konakçı ile ilgili çeşitli faktörlerden, yani hayvanların direnç ve dayanıklılığının genetik özellikleri, hayvanların beslenme durumu, parazitlik seviyesi ve ilgili parazit popülasyonlarının patojenitesinden etkilenir2.

Yıllar boyunca, parazit kontrolü yalnızca sentetik antiparaziter ilaçlara dayanıyordu. Bununla birlikte, uzun süreli ve münhasır kullanım, direncin ortaya çıkmasına, etkinliklerinin azalmasına ve alternatif stratejilerin araştırılmasına yol açmıştır3. Nematodların çeşitli antelmintiklere karşı direnci, dünya çapında giderek daha fazla tanımlanmıştır ve özellikle tropikal bölgelerde endişe verici bir senaryo sunmaktadır4. Buna ek olarak, tüketiciler, hayvan eti ve çevredeki antiparaziter ilaçların kalıntılarını azaltma ihtiyacının giderek daha fazla farkına varmaktadır5. Bu nedenle çiftlik hayvanlarında nematod parazitlerinin kontrolü için alternatif yaklaşımlar ortaya çıkmıştır6.

Tithonia diversifolia , Orta Amerika'ya özgü tropikal bir çalıdır ve onu geviş getiren üretim sistemleri için değerli kılan benzersiz özelliklere sahiptir. Yıl boyunca hasat edilebilir ve bitkinin tüm kısımları geleneksel olarak halk hekimliğinde yerli topluluklar tarafından çok çeşitli rahatsızlıkları tedavi etmek için kullanılmıştır. Topikal olarak, karın ağrısı, yaralar, dermatoz ve kas bozukluklarını hafifletmek için uygulanırken, enfeksiyonları, sıtma, ateş, hepatit ve diyabeti yönetmek için oral uygulama kullanılmıştır. Bu çeşitli terapötik uygulamalar, geniş tıbbi potansiyelini vurgulamaktadır7.

Oksidatif stres, hem konakçı organizmada hem de hayatta kalma mücadelesi veren parazitik organizmada paraziter enfeksiyonların gelişiminde ve ilerlemesinde önemli bir rol oynar8. Bu nedenle, antioksidan aktivitenin tespit edilmesi, antelmintik potansiyele sahip tıbbi bitki ekstraktlarının biyolojik aktivitesinin değerlendirilmesi için çok önemlidir. Paraziter enfeksiyon nedeniyle, konakçıdaki antioksidanların konsantrasyonu azalırken, hücresel bileşenlerin oksidasyon ürünlerinin konsantrasyonu artar. Parazitler söz konusu olduğunda, oksidatif dengeyi korumak, konakçı ile etkileşimlerini uzatmak ve konakçı organizmada oluşan oksidatif strese karşı savunmak için esastır9.

Antelmintiklere karşı direncin gelişmesi ve hızla yayılmasına dair kanıtlar, yaygın olarak kullanılan tedavilerin etkisiz hale gelebileceğine dair endişeleri artırmaktadır. Bu nedenle, gastrointestinal nematodlarda benzimidazole (BZ) duyarlılığı veya direnci değerlendirmek için yumurta kuluçka testi (EHA) adı verilen bir in vitro test kullanılır. Bu test, bitki ekstraktlarının yumurtalar üzerindeki antelmintik aktivitesini değerlendirmek ve aktivitelerini dozun bir fonksiyonu olarak karşılaştırmak için yaygın olarak kullanılır. Bu testin ana sınırlamalarından biri, testler arasındaki yumurta kuluçkadaki değişkenliktir. Yumurtaların canlılığı maksimum 3 saat ile sınırlıdır, bu da hızlı iyileşme ve hızlı başlatma gerektirir. Buna rağmen, kuluçka yüzdesi değişebilir. Bu nedenle sonucun geçerli sayılabilmesi için kontrol grubunda yumurtaların en az %70'inin yumurtadan çıkması gerektiği tespit edilmiştir10,11. Ucuz, hızlı, kolay ve tekrarlanabilir bir testtir 12,13,14.

GIN kontrolü için alternatifleri araştırmak için bitki özlerinin kullanımı, ikincil metabolitlerin varlığına ve bunların biyoaktif potansiyellerine dayanmaktadır. Bu araştırma alanındaki zorluklardan biri, ikincil metabolitlerin miktarı ve stabilitesidir, çünkü bunlar biyotik ve abiyotik faktörlere ve ayrıca ekstraksiyon işleminin neden olduğu kimyasal strese bağlı olarak değişir 15,16,17.

Bu çalışma, ekstraksiyon için kullanılan çözücünün türüne bağlı olarak biyolojik aktivitelerdeki farklılıkların (antioksidan ve antelmintik etkiler) meydana gelebileceğini ve bunun polifenollerin bileşimini ve dolayısıyla biyoaktivitelerini etkileyebileceğini varsaymıştır. Bu el yazmasının amacı, kolayca çoğaltılabilen bir in vitro model kullanarak ekstraktların değerlendirilmesinde atılan adımların ana hatlarını çizmekti.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CEMIT hayvan etik kurulu, hayvan manipülasyonu içeren tüm deneyleri onaylar. Yumurta donör hayvanları, önleyici teşhis amacıyla dışkı örnekleri sağlayarak CEMIT ile işbirliği yapan çiftliklere aittir. Bu hayvanlar, her iki cinsiyetten, bir yaşından büyük koyun veya keçilerdir (belirli bir cins yoktur) ve numune alınmadan önceki 15 gün içinde kurtlardan arındırılmış olmamalıdır. Katılan tüm çiftlikler, numunelerin araştırma amaçlı kullanımı hakkında bilgilendirilir ve çalışmanın bir parçası olmak için onay verirler. Yumurta toplama işlemi için öncelikle çevredeki işletmelere haber verilir ve izin alındıktan sonra taze dışkı örnekleri almak için saha ziyaretleri düzenlenerek üç saat içinde işlem yapılması sağlanır. Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Bitki materyalinin hazırlanması

  1. Bitki türlerini toplamak için uygun bir yer seçin.
  2. Taksonomik tanımlama ve herbaryum hazırlığı için en az iki Tithonia diversifolia örneği toplayın.
  3. En az 1000 g T. diversifolia hava parçası toplayın.
  4. Toplanan biyokütleyi oda sıcaklığında (yaklaşık 26 °C; bkz. Şekil 1) kurutun.
  5. Kurutulmuş biyokütleyi bir elektrikli öğütücü kullanarak öğütün.
  6. Öğütülmüş malzemeyi buzdolabında 4 °C'de saklayın.

2. Ekstraktların hazırlanması

  1. Su ekstraktını hazırlayın:
    1. 10 g kurutulmuş biyokütleyi 100 °C'de 100 mL damıtılmış su ile karıştırın.
    2. Karışımın 120 rpm'de sürekli çalkalayarak 24 saat yumuşamasına izin verin.
    3. Ekstraktı filtre kağıdından süzün (Whatman no. 5 veya eşdeğeri).
    4. Filtrelenmiş özü dondurarak kurutun.
  2. Aseton ekstraktını hazırlayın:
    1. 10 g kurutulmuş bitki materyalini 1:3 oranında %70 sulu aseton ile karıştırın.
    2. Karışımın 120 rpm'de sürekli çalkalayarak 24 saat yumuşamasına izin verin.
    3. Ekstraktı filtre kağıdından süzün (Whatman no. 5 veya eşdeğeri).
    4. Filtrelenmiş özü dondurarak kurutun.
      NOT: Daha iyi koruma için liyofilize ekstraktları -20 °C'de saklayın (bkz. Şekil 2). En az 5 g liyofilize ekstrakt elde edildiğinden emin olun.

3. Stok çözeltisinin hazırlanması

  1. Antioksidan testi için:
    1. Kurutulmuş ekstraktları karşılık gelen çözücülerde (damıtılmış su veya% 70 sulu aseton) 10 mg / mL'lik bir nihai konsantrasyona çözündürün.
  2. Yumurtadan çıkma testi için:
    1. 2.4 mg / mL'lik bir stok çözeltisi elde etmek için 12 mg liyofilize ekstraktı 5 mL damıtılmış su içinde seyreltin.
    2. Beş konsantrasyon hazırlayın: 1.2 mg / mL, 0.6 mg / mL, 0.3 mg / mL ve 0.15 mg / mL (bkz. Şekil 3).
      NOT: Stok çözeltisinin hacmini, kullanılan kuyucuk ve plaka sayısına göre ayarlayın. Örneğin, 12 yerine 48 kuyu kullanılıyorsa, hacmi buna göre azaltın; 5 mL'de 12 mg yerine 2.5 mL'de 6 mg hazırlayın.

4. Fitokimyasal bileşim

  1. Ekstraktların toplam fenolik içeriği (TPC)
    1. 5 μL numuneyi, 96 oyuklu şeffaf plastik plakalarda damıtılmış suda ×10 oranında seyreltilmiş 100 μL Folin-Ciocalteu (FC) reaktifi ile karıştırın.
    2. Oda sıcaklığında (RT) 10 dakika inkübe edin.
    3. 100 μL sodyum karbonat çözeltisi (su içinde 75 g/L) ekleyin.
    4. RT'de 90 dakika inkübe edin.
    5. Absorbansı 650 nm'de ölçün.
      NOT: TPC'yi gallik asit eşdeğerleri (GAE) olarak ifade edin. En az beş konsantrasyonda gallik asit kullanarak bir kalibrasyon eğrisi oluşturun.
  2. Toplam flavonoid içeriği (TFC)
    1. 50 μL ekstraktları 50 μL% 2 alüminyum klorür ile metanol içinde 96 oyuklu şeffaf plastik plakalarda karıştırın.
    2. RT'de 10 dakika inkübe edin.
    3. Absorbansı 405 nm'de ölçün.
      NOT: TFC'yi quercetin eşdeğerleri (QE) olarak ifade edin. En az beş quercetin konsantrasyonu kullanarak bir kalibrasyon eğrisi oluşturun.
  3. Toplam tanen içeriği (TTC)
    1. Ekstraktların 10 μL'sini metanolde 200 μL %1 DMACA ve 100 μL %37 HCl ile 96 oyuklu şeffaf plastik plakalarda karıştırın.
    2. RT'de 15 dakika inkübe edin.
    3. Absorbansı 640 nm'de ölçün.
      NOT: TTC'yi mg/mL kateşin cinsinden ifade edin.

5. Antioksidan testi - ABTS

  1. 5 mL damıtılmış suya 0.003514 g potasyum persülfat ve 0.0203 g ABTS ekleyin.
  2. Solüsyonu alüminyum folyoya sarın ve 4 ° C'de buzdolabında 12-16 saat inkübe edin.
  3. Absorbansı 734 nm'de ölçün ve etanol ekleyerek yaklaşık 0.7'ye ayarlayın. Başlangıç noktası olarak, 5 μL ABTS çözeltisini 195 μL etanol ile karıştırın.
  4. 96 oyuklu şeffaf plastik plakalarda, 10 μL ekstraktları 190 μL ABTS çözeltisi ile karıştırın.
  5. Pozitif kontrol (C +) için, 10 μL Trolox'u (numunenin absorbansına dayalı standart bir eğri kullanarak konsantrasyonu belirleyin) 190 μL ABTS çözeltisi ile karıştırın.
  6. Negatif kontrol (C-) için, ekstraktları (su veya sulu aseton) çözmek için kullanılan 10 μL çözücüyü 190 μL ABTS çözeltisi ile karıştırın.
  7. Plakaları oda sıcaklığında (RT) 6 dakika inkübe edin.
  8. Absorbansı 734 nm'de ölçün.
    NOT: Şekil 4 , bir ABTS testinin bir örneğini göstermektedir.

6. Parazitolojik prosedürler

  1. Doğal olarak enfekte olmuş keçilerin rektumundan doğrudan dışkı örnekleri toplayın.
    NOT: Tazeliği sağlamak ve çevre kontaminasyonunu önlemek için doğal olarak enfekte olmuş keçi ve koyunların rektumundan dışkı örnekleri toplayın. Stresi en aza indirmek için eğitimli personel kullanarak hayvanları nazikçe kısıtlayın. Temiz tek kullanımlık eldivenler kullanarak, yağlanmış, eldivenli bir parmağınızı rektuma sokun ve yaklaşık 5-10 g dışkı materyali alın. Numuneleri temiz, etiketli plastik kaplara koyun ve 4-8 °C'de saklayın. Helmint yumurtalarının canlılığını korumak için tüm numuneleri toplandıktan sonraki 3 saat içinde işleyin. Kurumsal hayvan refahı yönergelerine uyun ve çiftlik sahiplerinden bilgilendirilmiş onay alın.
  2. Her örnekle ilişkili hayvan türlerini tanımlayın.
  3. Kofroloji testlerine hazırlanmak için her bir dışkı örneğinin 30 g'ını 50 mL doymuş tuz çözeltisi (yoğunluk = 1.2) ile karıştırın.
  4. Yumurtaları saymak için bir McMaster slaytı kullanın.
    1. 3 g dışkı örneğini 50 mL doymuş NaCl çözeltisi içinde homojenize edin. Karışımı tülbentten süzün, bir slaytın her iki odasını da doldurun ve 5 dakika bekletin.
    2. Slaytı mikroskop altında ×10 büyütmede inceleyin ve strongyle tipi yumurtaları sayın. Aşağıdaki formülü kullanarak gram başına yumurtaları (EPG) hesaplayın: EPG = (yumurta sayısı) × 50. Bu yöntem, küçük ruminantlarda gastrointestinal nematodların miktar tayinini standartlaştırır.
  5. Yumurta sayısını gram başına yumurta (EPG) olarak ifade edin.
  6. Dışkı kültürü hazırlığı için EPG'si en az 800 olan dışkı örneklerini seçin.
  7. Dışkı kültürlerinden L3 larvaları elde edin ve cinslerini veya türlerini tanımlayın.
    NOT: Gastrointestinal nematod yumurtaları, yaşam döngüsü boyunca çimlerde biriktirilir (bkz. Şekil 5). Çiftlik hayvanları küçükbaş hayvanlar genellikle poliparazitizm sergiler. Şekil 6 , koprolojik análizis gerçekleştirme adımlarını göstermektedir.

7. İn vitro testler - Yumurta Kuluçka Testi (EHA)

  1. Taze dışkı örnekleri toplayın.
  2. Steril gazlı bez kullanarak dışkıyı iki kez süzün.
  3. Elde edilen süspansiyonu süzün ve bir eleğe aktarın.
  4. Elek üzerindeki malzemeyi damıtılmış suyla yıkayın.
  5. Yıkanmış süspansiyonu 15 mL'lik tüplere toplayın.
  6. Numuneleri, sallanan bir kova rotoru ile donatılmış bir masa üstü santrifüj kullanarak oda sıcaklığında 5 dakika boyunca ~4800 × g'da santrifüjleyin. Yumurtaları altta konsantre etmek için iki kez damıtılmış su ile ve bir kez doymuş tuzlu su çözeltisi ile santrifüjleyin (yumurta morfolojisi için Şekil 7'ye bakınız).
  7. Yumurtaları PBS'de tekrar askıya alın.
  8. Tahlil kurulumu için yumurta konsantrasyonunu 100 yumurta / mL'ye ayarlayın.
  9. Tiabendazolün (TBZ) PBS'de 0.025 mg / mL'de çözülerek pozitif kontrolü hazırlayın.
  10. PBS'deki yumurta süspansiyonunu kullanarak negatif kontrolü hazırlayın.
  11. Test için 48 oyuklu çok kuyulu plakalar kullanın.
  12. 50/50 (h/h) ekstrakt ve yumurta süspansiyonu karışımı kullanarak her bir oyukta 250 μL'lik bir son hacim hazırlayın.
  13. Her kuyucuğa yaklaşık 100 yumurta / mL ekleyin.
  14. Her konsantrasyonu dört nüsha olarak test edin (dört tekrar).
  15. Yumurtaları ters mikroskop altında ×40 büyütmede sayın.
  16. Yalnızca% ≥70 tarama oranına sahip plakalar kullanın.
  17. Her konsantrasyon için larvaları (L1), yumurtadan çıkmamış yumurtaları (UnE), larva içeren yumurtaları (LFE) ve morüle yumurtaları (ME) sayın.
    NOT: Yumurta kuluçka tahlil protokolünün temsili bir özeti Şekil 8'de gösterilmiştir.

8. İstatistiksel análisis

  1. Excel kullanarak tanımlayıcı istatistiksel analiz gerçekleştirin.
  2. Konsantrasyonlar arasındaki farkları 0.05 anlamlılık düzeyinde değerlendirmek için tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve t-testlerini kullanın.
  3. Log 10 dönüştürülmüş konsantrasyon verilerine dayalı Probit analizini kullanarak %50 Etkili konsantrasyonu (EC50) hesaplayın (bkz. Ek Dosya 1).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Toplam fenolik içerik (TPC), toplam flavonoid içeriği (TFC) ve toplam tanen içeriği (TTC)
Tithonia diversifolia üzerindeki TPC, TTC, TFC ve ABTS sonuçları Tablo 1'de gösterilmektedir. Değerler, TPC için bir gram kuru madde başına mg gallik asit eşdeğeri (mg GAE/g DM), TFC için kuru madde gramı başına mg quercetin eşdeğeri (mg QE/g DM) ve TTC için kuru madde gramı başına mg kateşin eşdeğeri (mg CE/g DM) olarak ifade edilir. Antioksidan kapasit...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale, şifalı bitkilerle ilgili araştırmaları ilerletmek için birkaç temel adımı özetlemektedir. Yumurta çatlağı testi (EHA) gibi in vitro testler, kontrollü laboratuvar koşullarında gerçekleştirilebildikleri için özellikle çekicidir. EHA, nematod yumurtaları üzerindeki çeşitli konsantrasyonlarda bitki özlerinin aktivitesini değerlendirmek ve sonuçları hem pozitif hem de negatif kontrollerle karşılaştırmak için tasarlanmıştır. Elde edilen sonuçlar, özellikle gastrointestinal...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Numune alımını hayvanlarıyla birlikte yapmamız için bize güvenen tüm üreticilere. Luísa Custódio, UIDB/04326/2020 projeleri aracılığıyla Bilim ve Teknoloji Vakfı'ndan (FCT) Portekiz ulusal fonları aldı ( D O I: 1 0 . 5 4 4 9 9 / U I D B / 0 4 3 2 2 6 / 2 0 2 0 ), U I D P / 0 4 3 2 6 / 2 0 2 0 (DOI:10.54499/UIDP/04326/2020), LA/P/0101/2020(DOI:10.54499/LA/P/0101/2020) ve CEECIND/00425/2017. Rocio Avila, bana finansal destek sağlayarak bu projeyi mümkün kılmak için Nini'nin Bağışlanmış Staj Fonu'nu ve profesyonel rehberlik ve destek için Carleton Kariyer Merkezi'ni aldı. Griselda Meza, Portekiz'e seyahat etmek ve fitokimyasal tahliller yapmak için Beca de Investigacion BINV02 -52 CONACYT - 2. konvodatörlük aldı. Ismael Llano, Brezilya'da yumurta çatlama testini gerçekleştirmek için PINV01 -306, CONACYT Beca Movility formunu aldı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
15 mL tüplerSahada
48 delikli plakaSahada
96 kuyulu plakaVWR 734-0126
ABTSEnzimatikA1088.0005Sahada
Akademik optik mikroskop ve ters mikroskopSahada
AsetonEnzimatikA/0600/17
Alüminyum klorür  Sigma Aldrich6911
DMACA reaktifiSigma Aldrich49825
Etanol %96EnzimatikVR11202
Hayvanlardan çıkan dışkıÜniversiteye yakın çiftliklerde toplanmıştır
Folin CiocalteauSigma AldrichF9252
Gallik asitSigma Aldrich91215
HClSigma Aldrich258148
McMaster kameraSahada
MetanolEnzimatikM/4000/17
PBSSahada
Bitki özleriSahada
Potasyum persülfat Sigma Aldrich216224
QuercetinSigma AldrichQ4951
TuzSahada
Sodyum karbonat Sigma Aldrich1063920500
ThiabendazolSahada
TroloxSigma Aldrich648471Sahada
SuSahada
Whatmann no. 5VWR WHAT97039654

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Vineer, H. R., et al. Increasing importance of anthelmintic resistance in European livestock: Creation and meta-analysis of an open database. Parasite. 27, 69(2020).
  2. Ribeiro, W. L. C., Vilela, V. L. R. Editorial: Alternatives for the control of parasites to promote sustainable livestock. Front Vet Sci. 9, 1097432(2023).
  3. Hodgkinson, J. E., et al. Refugia and anthelmintic resistance: Concepts and challenges. Int J Parasitol Drugs Drug Resist. 10, 51-57 (2019).
  4. Molento, M. B. Parasite control in the age of drug resistance and changing agricultural practices. Vet Parasitol. 163 (3), 229-234 (2009).
  5. Morgan, E. R., van Dijk, J. Climate and the epidemiology of gastrointestinal nematode infections of sheep in Europe. Vet Parasitol. 189 (1), 8-14 (2012).
  6. Hoste, H., Torres-Acosta, J. F. J. Non-chemical control of helminths in ruminants: Adapting solutions for changing worms in a changing world. Vet Parasitol. 180 (1-2), 144-154 (2011).
  7. Mabou Tagne, A., Marino, F., Cosentino, M. Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray as a medicinal plant: A comprehensive review of its ethnopharmacology, phytochemistry, pharmacotoxicology and clinical relevance. J Ethnopharmacol. 220, 94-116 (2018).
  8. Pawłowska, M., Mila-Kierzenkowska, C., Szczegielniak, J., Woźniak, A. Oxidative stress in parasitic diseases-reactive oxygen species as mediators of interactions between the host and the parasites. Antioxidants. 13 (1), 38(2024).
  9. Maldonado, E., Rojas, D. A., Morales, S., Miralles, V., Solari, A. Dual and opposite roles of reactive oxygen species (ROS) in Chagas disease: Beneficial on the pathogen and harmful on the host. Oxid Med Cell Longev. 2020, 8867701(2020).
  10. Adamu, M., Naidoo, V., Eloff, J. N. Efficacy and toxicity of thirteen plant leaf acetone extracts used in ethnoveterinary medicine in South Africa on egg hatching and larval development of Haemonchus contortus. BMC Vet Res. 9, 38(2013).
  11. Molan, A. L. Effect of purified condensed tannins from pine bark on larval motility, egg hatching and larval development of Teladorsagia circumcincta and Trichostrongylus colubriformis (Nematoda: Trichostrongylidae). Folia Parasitol. 61 (4), 371-376 (2014).
  12. Eguale, T., Tadesse, D., Giday, M. In vitro anthelmintic activity of crude extracts of five medicinal plants against egg-hatching and larval development of Haemonchus contortus. J Ethnopharmacol. 137 (1), 108-113 (2011).
  13. von Samson-Himmelstjerna, G., et al. Standardization of the egg hatch test for the detection of benzimidazole resistance in parasitic nematodes. Parasitol. Res. 105, 825-834 (2009).
  14. Robles-Pérez, D., Martínez-Pérez, J. M., Rojo-Vázquez, F. A., Martínez-Valladares, M. Screening anthelmintic resistance to triclabendazole in Fasciola hepatica isolated from sheep by means of an egg hatch assay. BMC Vet Res. 11, 5(2015).
  15. War, A. R., Paulraj, M. G., War, M. Y., Ignacimuthu, S., Sharma, H. C. Mechanisms of plant defense against insect herbivores. Plant Signal Behav. 7, 1306-1320 (2012).
  16. Veeresham, C. Natural products derived from plants as a source of drugs. J Adv Pharm Technol Res. 3, 200-201 (2012).
  17. Barthwal, R., Mahar, R. Exploring the significance, extraction, and characterization of plant-derived secondary metabolites in complex mixtures. Metabolites. 14, 119(2024).
  18. Vargas-Magaña, J. J., et al. Anthelmintic activity of acetone-water extracts against Haemonchus contortus eggs: Interactions between tannins and other plant secondary compounds. Vet Parasitol. 206, 199-206 (2014).
  19. Gertrude, M., et al. In vitro anthelmintic activity of Bidens pilosa Linn. (Asteraceae) leaf extracts against Haemonchus contortus eggs and larvae. Eur J Med Plants. 4, 1325-1333 (2014).
  20. Castañeda-Ramírez, G. S., et al. Bio-guided fractionation to identify Senegalia gaumeri leaf extract compounds with anthelmintic activity against Haemonchus contortus eggs and larvae. Vet Parasitol. 270, 13-19 (2019).
  21. Chan-Pérez, J. I., et al. In vitro susceptibility of ten Haemonchus contortus isolates from different geographical origins towards acetone:water extracts of two tannin-rich plants. Vet Parasitol. 217, 53-60 (2016).
  22. Alonso-Díaz, M. A., Torres-Acosta, J. F. J., Sandoval-Castro, C. A., Hoste, H. Comparing the sensitivity of two in vitro assays to evaluate the anthelmintic activity of tropical tannin-rich plant extracts against Haemonchus contortus. Vet Parasitol. 181 (2-4), 360-364 (2011).
  23. Meza Ocampos, G., et al. Two in vitro anthelmintic assays of four Paraguayan medicinal plants for proof of concept of the role of polyphenols in their biological activities and LC-HRMS analysis. J Ethnopharmacol. 312, 116453(2023).
  24. Babják, M., Königová, A., Urda Dolinská, M., Vadlejch, J., Várady, M. Anthelmintic resistance in goat herds-In vivo versus in vitro detection methods. Vet Parasitol. 254, 10-14 (2018).
  25. Elfawal, M. A., et al. High-throughput screening of more than 30,000 compounds for anthelmintics against gastrointestinal nematode parasites. ACS Infect Dis. 11 (1), 1-11 (2025).
  26. de Araújo Sanchez, C., et al. In vivo anthelmintic activity of hydroethanolic extract of Piper cubeba fruits in sheep naturally infected with gastrointestinal nematodes. Vet Parasitol. 333, 110348(2025).
  27. Hördegen, P., Cabaret, J., Hertzberg, H., Langhans, W., Maurer, V. In vitro screening of six anthelmintic plant products against larval Haemonchus contortus with a modified methyl-thiazolyl-tetrazolium reduction assay. J Ethnopharmacol. 108 (1), 85-89 (2006).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Antioksidan zelliklerGastrointestinal NematodlarYumurta A lma AnaliziPolifenolik erikParazit KontrolStrongyle Tipi YumurtalarDoz Yan t

İlgili makaleler