Burada, P. blakesleeanus çiftleşmesinin indüksiyonu için temel bir protokol sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Mucoromycete Phycomyces blakesleeanus ile Cinsel Haçlar
Bu makalede
Özet
Özet
Mucoromycota filumu içindeki ipliksi bir mantar olan Phycomyces blakesleeanus, çevresel algı ve uyarlanabilir tepkiler için olağanüstü kapasitesi ile ayırt edilir. Geçmiş çalışmalar, yerçekimi, ışık, nem ve besin mevcudiyeti dahil olmak üzere çevresel uyaranların büyüme dinamiklerini ve üreme stratejilerini etkilediğini göstermiş olsa da, altta yatan mekanizmalar araştırmanın odak alanı olmaya devam etmektedir. Çevresel ipuçları eşeyli veya eşeysiz üremeyi tetikler. Eşeyli üreme, hifal kemoretraksiyonu tetikleyen feromon sinyallemesi ile başlar ve sonunda bir zigospor oluşumuyla sonuçlanan seri morfolojik geçişlere yol açar.
Laboratuvar ortamında, P. blakesleeanus'un çaprazlanması, farklı aşamalarda cinsel döngüye giren tamamlayıcı misellere neden olur. Çalışmamız, çevresel ipuçlarının P. blakesleeanus miselleri boyunca çiftleşmeyi tetikleyip tetikleyemeyeceğini test etmeyi amaçlıyor. Besin değeri sınırlı ortamlarda yetiştirilen P. blakesleeanu'nin çaprazlamaları, besin yoksunluğuna uygun bir cinsel tepkiyi tetiklemek için besin açısından sınırlı agar'a tabi tutulacaktır. P. blakesleeanus'ta çiftleşmenin başarılı bir şekilde tetiklenmesi, belirli aşamalarda büyük miktarda eşeyli üreyen misel gerektiren gelecekteki çalışmaları kolaylaştıracaktır. Bu araştırmanın sonucu, P. blakesleeanus üreme mekanizmalarının çevresel faktörlerden nasıl etkilendiğine dair anlayışımızı daha da geliştirecek ve filamentli mantarların eşeyli üremesine ilişkin daha geniş bilgi tabanına katkıda bulunacaktır.
Giriş
Laboratuvar koşullarında mantar sistemlerinde çiftleşmenin indüksiyonu, ökaryotik genetik, hücre biyolojisi, evrimsel biyoloji ve biyoteknolojinin anlaşılmasını ilerletmiştir. Dikaryan mantarları, özellikle Ascomycota, laboratuvar ortamında çiftleşme indüksiyonu hakkında en kapsamlı bilgiye sahiptir1. İlginç bir şekilde, eşeyli üremenin önerildiği ilk mantar olan Syzygites megalocarpus, Ascomycota'nın bir üyesi değil, Mucoromycota2 filumunun bir üyesidir. Mucoromycota filumu, daha önce "Zygomycota" olarak sınıflandırılan, ancak şimdi Dikaryan soylarınınkardeşi<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Medya hazırlığı
- Toz mısır unu agar (CMA) veya patates dekstroz agarını (PDA) deiyonize suda askıya alın. % 100 CMA veya PDA için, üreticinin talimatlarına uyun ve 1 L deiyonize suda 17 g CMA'yı veya 1 L deiyonize suda 39 g PDA'yı askıya alın. % N% CMA veya PDA için, üretici tarafından önerilen miktarın 1 / N'sini askıya alın ve% 7.5'lik (a / h) bir agar konsantrasyonu elde etmek için ek agar ile takviye edin.
NOT: İsteğe bağlı adım: Otoklavlamadan önce, bakteriyel kontaminasyon söz konusuysa 25 μg/mL kloramfenikol ekleyin. - Ortamı otoklavda 121 °C'de 15 dakika sterilize edin.
- Ortam....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
4 bir çaprazlamayı takiben, her bir suş, miselyum alanındaki değişiklikle belirlendiği gibi büyüme hızında biraz değişmiştir (Şekil 2). İstatistiksel olarak anlamlı olmasa da, NRRL 1555% 25 CMA,% 25 PDA veya% 100 PDA ile kaplandığında alanda daha hızlı bir değişikliğe sahipti. Benzer şekilde, NRRL 1465, P PDA veya CMA'da yetiştirildiğinde alanda daha yüksek bir değişikliğe sahipti. NRRL 1464, 0 CMA ile yetiştirildiğinde alanda en hızlı artışa sahip oldu. 24 saat (1 DPI) sonra, PDA'da büyüyen.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Laboratuvar ortamında P. blakesleeanus'ta eşeyli üremeyi indüklemek için basit bir protokol burada sunulmuştur. Bu protokol için en kritik hususlardan biri besin sınırlamasıdır. Mantarların, besin sınırlaması 6,28,29,30,31,32 gibi zorlu çevresel koşullara bir yanıt olarak eşeyli üremeyi seçtiği varsayılmaktadır.<.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Colorado Koleji Doğa Bilimleri Yürütme Komitesi'ne, Organizma Biyolojisi ve Ekoloji Bölümü'ne ve Hevey Ailesi Öğrenci Araştırmaları Fonu'na bu çalışmayı finanse ettikleri için teşekkür ederiz. Ayrıca teknik destekleri için Alice Keller ve Tia Hutchens'a da teşekkürlerimizi sunarız.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Agar tozu | ThermoFisher | 3453PK | |
| kloramfenikol | FisherSci | BP904-100 | |
| Mısır unu agar | Carolina | 742460 | |
| Panorama Stitcher | Apple App Store | ||
| Phycomyces blakesleeanus (-) NRRL 1555 | Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı - Tarımsal Araştırma Servisi | 1555 | USDA-ARS yalnızca akademik araştırmacılara gönderilecektir; alternatifler için aşağıya bakınız |
| Phycomyces blakesleeanus (-) NRRL 1564 | Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı - Tarımsal Araştırma Servisi | 1564 | USDA-ARS yalnızca akademik araştırmacılara gönderilecektir; alternatifler için aşağıya bakın |
| Phycomyces blakesleeanus (-) Tüp Kültürü | Carolina Biyolojik Tedarik | 156183 | Eğitim sınıfı kültür satın alınabilir; NRRL 1555 |
| Phycomyces blakesleeanus (+) NRRL 1554 | Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı - Tarımsal Araştırma Servisi | 1554 | USDA-ARS yalnızca akademik araştırmacılara gönderilecektir; alternatifler için aşağıya bakın |
| Phycomyces blakesleeanus (+) NRRL 1565 | Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı - Tarımsal Araştırma Servisi | 1565 | USDA-ARS yalnızca akademik araştırmacılara gönderilecektir; alternatifler için aşağıya bakın |
| Phycomyces blakesleeanus (+) Tüp Kültürü | Carolina | 156182 | Eğitim sınıfı kültür satın alınabilir; NRRL 1554 |
| Patates dekstroz agar | FisherSci | DF0013-17-6 | |
| Sprout Plus Mini Santrifüj | Heathrow Scientific | SKU 120610 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P6585-10ML |
Kaynaklar
- NaranjoOrtiz, M. A., Gabaldón, T. Fungal evolution: diversity, taxonomy and phylogeny of the fungi. Biol Rev Camb Philos Soc. 94 (6), 2101-2137 (2019).
- Idnurm, A. Sex determination in the firstdescribed sexual fungus. Eukaryot Cell. 10 (11), 1485-1491 (....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
