Method Article

İlaç Keşfi Uygulamaları ile Clostridioides difficile için Biyofilm Testi

DOI:

10.3791/67913

⸱

July 8th, 2025

 ,  , 
1Department of Molecular Microbiology and Immunology and The South Texas Center for Emerging Infectious Diseases (STCEID), The University of Texas at San Antonio

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bakteriyel patojen Clostridioides difficile'nin biyofilmleri ve hastalıktaki önemi iyi anlaşılamamıştır. Son bulgular, nükste bir rol olduğunu öne sürmüş ve bunların önemini vurgulamıştır. Burada, biyofilmlere karşı ilaç keşfi uygulamaları ile metabolik bir okumaya bağlı bir biyofilm testinin adaptasyonunu açıklıyoruz.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Clostridioides difficile , çoğalmak, toksinler salgılamak ve bağırsak epiteline zarar vermek için disbiyotik bir mikrobiyota ortamından yararlanabilen bir gastrointestinal bakteriyel patojendir. C. difficile enfeksiyonu (CDI) hastalarının bir alt kümesi antibiyotik (%15-%30) veya dışkı mikrobiyota nakli (FMT) (%<10) tedavi başarısızlığı yaşayacaktır. Bu nedenle, ek terapötik müdahalelerin geliştirilmesi kritik öneme sahiptir. C. difficile biyofilmlerinin nüksteki rolü belirsizdir. Bununla birlikte, diğer organizmalardaki biyofilmler kronik ve tekrarlayan hastalıklardan sorumludur, bu da bunun tekrarlayan CDI'da da olabileceğini düşündürmektedir. C. difficile'nin biyofilmlerinin değerli bir terapötik hedef sunduğunu varsayıyoruz. Burada sunulan protokolün amacı, yerleşik C. difficile biyofilmlerine karşı aktiviteye sahip yeniden konumlandırılabilir bileşiklerin tanımlanması için bir biyofilm oluşum testini uyarlamaktır. Protokol, biyofilm oluşturmak için sağlam ve tekrarlanabilir bir testi rafine eder, onu metabolik bir testle birleştirir ve ilaç keşfine uygular. Bu protokol, biyofilm oluşum testini, biyokütle ve metabolik aktivite okumalarını, ilaç duyarlılık testini, yeniden konumlandırma kütüphanesinin ilaç taramasını ve temsili sonuçları ana hatlarıyla belirtir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Clostridioides difficile, toksinler üreterek insan gastrointestinal (GI) sistemine ciddi hasar verebilen, spor oluşturan, anaerobik bir bakteriyel patojendir. C. difficile, ~30.000 ölümle yılda yaklaşık yarım milyon vakadan sorumludur (CDC, 2015). C. difficile enfeksiyonu (CDI) tedavisi, zaten gergin olan sağlık sistemine önemli bir maliyet getirmektedir (~ 4,8 milyar dolar)1,2,3. En fazla risk altındaki bireyler, immünosupresyon, antibiyotik maruziyeti ve / veya yaşlılar, hem ABD'de hem de dünya çapında önemli ölçü....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Biyofilm tahlili için hücrelerin hazırlanması

DİKKAT: Clostridioides difficile bir insan patojenidir ve BSL-2 muhafazası gerektirir.

NOT: Bu çalışma için kullanılan sporlar, Tufts Üniversitesi Tıp Fakültesi'nden Dr. Carol Kumamoto'dan alınmıştır. C. difficile spor stokları daha önce tarif edildiği gibihazırlanmıştır 43,44,45. Sporlar daha sonra plakaları çıkarmak için PCR tüplerine 10 μL'lik hacimler halinde ayrılır. Deney için gerekli olan tüm ortam v....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yukarıda açıklanan protokolün amacı, 96 oyuklu plaka biyofilm oluşum modelini, C. difficile'nin yerleşik biyofilmlerine karşı aktiviteye sahip yeniden konumlandırılabilir bileşiklerin tanımlanması için bir ilaç tarama platformu olarak uyarlamak ve doğrulamaktır. Farklı hücre yoğunluklarının (104, 105, 106 ve 107 hücre / mL) biyofilm oluşumu üzerindeki etkisi belirlendi ve biyofilm oluşumu daha önce tarif edildiği gibi Kristal viyole boy.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C. difficile biyofilm oluşumu ve hastalıkta oynadığı rol tam olarak anlaşılamamıştır. Son bulgular hastalık nüksetmesinde biyofilmlerin rolü olduğunu göstermektedir28,34. Biyofilm oluşumu önemli bir virülans faktörüdür 22,23,24,25 ve Staphylococcus aureus ve Pseudomonas aeruginosa.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa edecek herhangi bir çatışması yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

J.A.R. çalışmayı ve protokolü tasarladı ve el yazmasını yazdı. A.S. ve P.Z. deneyleri yürüttüler ve protokolün iyileştirilmesine yardımcı oldular. Bu çalışma, San Antonio'daki Texas Üniversitesi'nden (UTSA) JAR'a kadar olan başlangıç fonları tarafından desteklendi ve A.S., UTSA MARC programı (T34GM145507) tarafından desteklendi. Yazarlar, Medicines for Malaria Venture'a (MMV, İsviçre) Küresel Sağlık Öncelikli Kutu kütüphanesini sağladığı için teşekkür eder.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
ASETİK ASİT SAF-CT ACS 500MLFisher ScientificA38S500
AGAR BAKTERİYOLOJİK GR 1KGFisher ScientificAC443570010
BioTek Synergy H1 plaka okuyucuFisher ScientificBTH1MG ŞİŞE
MAYA ÖZÜ 500GFisher ScientificDF0127179
BEYİN KALP İNFÜZYON SUYUFisher Scientific
Kristal Menekşe USP sınıfı 100GVWR97061-850Biyokütle tahlilleri için biyofilmlerin boyanması için
CytoOne 96 oyuklu TC plakası, düz dipli, şeffaf, iç sargılı, 50/kutuABD BilimselCC7682-7596
D-(+)-Glikoz, susuzFisher Scientific50712744
Moleküler Biyoloji için Dimetil Sülfoksit (DMSO)Millipore SigmaD8418-250ML
FIDAXOMICIN 250MGFisher ScientificAC468312500
L-SİSTEIN %98+1KGFisher ScientificAAA104350BC. difficile media
için METANOL 99.8 AKROSEAL 1LTFisher ScientificAC364390010
METRONIDAZOL, %99 5GRFisher ScientificAC210340050
Fosfat tampon tuzlu su (PBS) 10XFisher ScientificBP3991
PrestoBlue Hücre Canlılığı ReaktifiFisher ScientificA13262
SILVERSEAL OPAK YAPIŞKANLAR 100/CSFisher Scientific7000379Anne ve kız ilaç plakalarını depolamadan önce kapatmak için kullanılır
SODYUM TAUROKOLAT 100MG VWR100291-598
VANKOMİSİNFisher BilimselBP29581
CM1135R

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dubberke, E. R., Olsen, M. A. Burden of Clostridium difficile on the healthcare system. Clin Infect Dis. 55 (Suppl 2), S88-S92 (2012).
  2. Lessa, F. C., et al. Burden of Clostridium difficile infection in the United States. N Engl J Med. 372 (9), 825-834 (2015)....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Clostridioides DifficileBiofilm AssayDrug DiscoveryBiofilm FormationMetabolic AssayDrug SusceptibilityBiomass ReadoutDrug ScreeningRecurrent InfectionTherapeutic Target
Video Coming Soon

Related Articles