Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Mitokondri ile ilişkili endoplazmik retikülüm zar sıkılığının indüklenebilir FRET biyosensörleri kullanılarak tespiti

132 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/67914

⸱

7 Ağustos 2026

 ,  , 
1Genetics and Aging Research Unit, MassGeneral Institute for Neurodegenerative Disease, Henry and Allison McCance Center for Brain Health, Department of Neurology, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School,

Bu makalede

Özet

ER (CFP etiketli) veya mitokondri (YFP etiketli) bölgelerini hedef alan indüklenebilir FRET biyosensörlerinin FRET değerlerini in vitro ölçerek mitokondri ile ilişkili ER membranlarının (MAM) sıkılığını değerlendirmek için bir yöntem tanımlıyoruz; bu yöntem Aβ oluşumunu etkileyen ve bu yöntem, potansiyel AD tedavileri olarak sentetik veya doğal MAM modüle edici ajanların ilk taramasında kullanılabilir.

Özet

Birçok çalışma, ER-mitokondri temaslarının veya mitokondri ilişkili zarların (MAM) sayısı, uzunluğu ve boşluk genişliğinin (kalınlığının) biyolojik rollerini etkilediğini göstermiştir. Önceki çalışmamız, yaklaşık 7 nm genişliğindeki boşluk ile karakterize edilen sıkı MAM'lerin stabilizasyonunun amiloid β (Aβ) seviyelerinde artışa yol açtığını, oysa yaklaşık 40 nm genişliğindeki gevşek MAM'lerin bulunmasının, Alzheimer hastalığının (AD) üç boyutlu (3D) sinir modelinde Aβ üretimini azalttığını göstermiştir. Farklı boşluk genişliklerine sahip MAM'lerin etkilerini araştırmak için, ER ve mitokondri hedefli FRET (Förster Rezonans Enerjisi Transferi) biyosensörleri-ER-CFP (cyan floresan protein) ve Mito-YFP (sarı floresan protein) sırasıyla sıkı MAM'leri (<10 nm boşluk genişliği) gevşek veya MAM'sız MAM'lere kıyasla nicelendirmek için geliştirildi. FRET, donör florofor (CFP) ve akseptör florofor (YFP) birbirine 10 nm içinde olduğunda oluşur; bu da bu sistemi MAM yakınlığının değerlendirilmesi için uygun kılar. Bu protokol, sıkı MAM oluşumunun boyutunu ölçmek için spektral oranmetrik FRET kullanımını özetlemektedir.

Giriş

Mitokondri ile ilişkili endoplazmik retikülüm temasları (MERC'ler), biyokimyasal olarak mitokondri ilişkili ER zarları (MAM'ler) olarak izole edilen, Alzheimer hastalığı (AD)1 dahil olmak üzere çeşitli nörodejeneratif bozukluklarda rol oynamaktadır. Yakın zamanda önerilen "MAM hipotezi", MAM'lerin amiloid β (Aβ) oluşumunda merkezi bir rol oynadığını ve böylece AD'nin patojenik zincirini başlattığını öne sürer. Bu zincirleme nörofibriller düğümlerin (NFT), kalsiyum dishomeostazının venöroinflamasyonun oluşumunu içerir. MAM'lar, endoplazmik retikülüm ve dış mitokondriyal zarda (OMM) kolesterol açısından zengin, lipid raft benzeri mikrodomainlerden oluşur ve bu mikrodomainler, hem yapısal hem de fonksiyonel çeşitliliklerine katkıda bulunan spesifik bağlama proteinleriyle birbirine bağlıdır. ER-mitokondri temaslarının stabilizasyonu, ER kalsiyum sinyalizasyonu ve apoptoz 4,5 dahil olmak üzere çeşitli hücresel süreçleri etkiler. Mitokondrilerin %5-%20'sinin acil servis ile fiziksel temas kurarakMAM'ları kurduğu tahmin edilmektedir 6. Birçok çalışma, MAM bölgelerindeki ER ile mitokondri arasındaki sayı, uzunluk ve boşluk genişliğinin (kalınlığının) işlevsel rollerinin önemli belirleyicileri olduğunu göstermiştir. Fare karaciğerinin kriyo-elektron mikroskobu ve in vivo analizleri, hepatositlerin metabolik durumunun hem MAM'lerin kalınlığını (14 nm ile 20 nm arasında) hem de uzunluğunu (145 nm ile 270 nm arasında) modüle ettiğinigöstermiştir 7.

MAM'ler ayrıca kanser ve metabolik bozukluklar dahil olmak üzere çeşitli hastalıklar için potansiyel terapötik hedefler olarak ortaya çıkmaktadır. MAM kalınlığı veya boşluk genişliği hücre hayatta kalmasını düzenler. Sıkı (6 nm ± 1 nm boşluk genişliği) ve gevşek MAM'leri (24 nm ± 3 nm boşluk genişliği) stabilizasyonu için tasarlanan yapısal MAM stabilizatörleri MAM 1X ve MAM 9X, sıkı MAM'lerin stabilizasyonunun AD'nin yeni bir 3D sinir kültürü modelinde Aβ üretimini dramatik şekilde artırdığını göstermiştir. Buna karşılık, gevşek MAM'lerin stabilizasyonu hiçbir etkiyaratmadı 8. Bu nedenle, sıkı MAM'ların stabilizasyonunu gevşek MAM'lara dönüştürmek, amiloid patolojisini düşürmek için faydalı olabilir. Yapısal ve fonksiyonel karmaşıklıklar ile MAM stabilizasyonu derecesinin kesin nicel analizinin olmaması, ilaç keşfi için MAM'leri hedeflemeyi zorlaştırır. ER'ye bağlı mitokondrilerin aksonal hızının yeni bir canlı hücre görüntülemesi ve kimografi temelli analizi, mitokondrilerin aksonal hızının, ER ile daha sıkı temasın mitokondriyal aksonal hızı serbest mitokondrilere kıyasla önemli ölçüde azalttığı için MAM stabilizasyonunu nicel olarak ölçmek için bir metrik olarakkullanılabileceğini göstermiştir; 8,9. hAPP eksprese eden Nöro 2A (N2AAPP) hücrelerinde MAM'ların indüklenebilir bir stabilizatörükullanılarak 8, MAM boşluklarının sıkılaştırılmasının Aβ oluşumunu doza bağlı olarakartırdığını gördük 8. İndüklenebilir MAM stabilizatörleri, CFP (cyan floresan proteini)-epitop etiketli ER-hedefleme ve YFP (sarı floresan proteini)-epitop etiketli mitokondri hedefleyen biyosensörleri kodlayan ifade plazmidleridir; bunlar rapamisin indüklenebilir FK506 rapamisin bağlanması (FRB) veya 12-kDa FK506-bağlayıcı protein (FKBP) domainlerine entegre edilmiştir. Biyosensörler sırasıyla ER-CFP ve Mito-YFP olarak gösterildi. CFP, >10 nm uzaklıkta olduğunuzda alıcı florofor YFP'ye enerji aktaran donör bir florofordur. İndüklenebilir biyosensörleri ifade eden hücreler (N2AAPP), rapamisin tedavisi 8 sırasında Aβ üretimini artırdıve bu da sıkı MAM'ların Aβ üretimini artırdığını gösterdi. Bu yöntemler, MAM'lerin küçük molekül modülatörlerinin taraması ve onların etkili konsantrasyonunu, patojenik ("Aβ artış") MAM'ları tedavi amaçlı ("Aβ düşüren") olarak tamamen destabilizasyon yapmadan ER ve mitokondri temaslarını tamamen destabilize etmeden dönüştürecek olan sıkı MAM'ların optimal seviyesinin stabilizasyonunu sağlamak için faydalı olacaktır.

Deneysel model
Bu çalışma, APP751 (N2AAPP) bileşen olarak ifade eden Neuro2A(N2A) hücrelerini kullandı. Bu hücreler, naif N2A hücrelerine kıyasla koşullu ortama (CM) tespit edilebilir Aβ seviyeleri salgılar. N2A APP hücreleri, daha önce tanımlandığı gibi %10 FBS, 100 U/mL penisilin (100 μg/mL penisin), 100 μg/mL streptomisin ve 2 mM L-glutamat takviyesi ile desteklenmiş DMEM'detutuldu.

İfade plazmidi
Memeli A-kinaz anchor proteini 1 [AKAP1(34-63)] ve CFP (cyan floresan protein) etiketli ER hedefleme dizisi fosfatidilinositol-3-fosfataz Sac1 fosfatazının [Sac1(521-587)] kendi kendine bölünen Tav2A dizisi ile birleşerek bir ekspresyon plazmidi üretildi; bu dizide pYFP-AKAP1-Tav2A-Sac1-CFP olarak belirtilir. Tav2A ile birleşen ekspresyon plazmidi ayrıca FK506 rapamisin bağlanma (FRB) alanını kodlayan nükleotit dizileriyle çevrilidir [EMWHEGLEEASRLYFGERNVKGMFEVLEPL HAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNV (K 2095P)DLTQAWDLYYHVFRRISKQ] veya 12-kDa FK506 bağlayıcı protein (FKBP) alanını (MGVEKQVIRPGNGPKPAPGQTVHCTGFGDD GDLSQFWSTKDEGQPSFQGGGGGGGGGGGGGGGGGGGDDDDYAYGAGGFPAWGIQPNSVLDFEIEVLSVQ). FRB-YFP-AKAP1(34-63)-Tav2A-Sac1(521-587)-CFP-FKBP füzyon plazmidi, burada MAM-Tav2A olarak belirtilmiştir ve oranlı FRET analizi için FRB-YFP-AKAP1(34-63) ve Sac1(521-587)-CFP-FKBP ekvimolyar ekspresyon seviyelerini elde etmek amacıyla oluşturulmuştur. Sac1(521-587)-CFP-FKBP, ER-CFP olarak belirtilir, donör florofordur, Mito-YFP-FRB ise, Mito-YFP olarak gösterilir ve ~10 nm8 ile ayrıldığında FRET üreten alıcı florofordur. Bu nedenle, FRET tabanlı biyosensörler sıkı MAM'leri (6-10 nm, boşluk genişliği) tespit eder. FRB ve FKBP, rapamisin eklendiğinde MAM boşluk genişliklerinin doz bağımlı bir şekilde daralmasını sağlamak için tanıtıldı; bu durum artan FRETsinyalinin 8. ölçülmesiyle ölçülebilirdi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. Transfeksiyon

  1. N2AAPP hücrelerini MAM-Tav2A ekspresyon plazmidi ile transfekte edin (14-18 saat).
    1. Başlamadan önce, 1. plaka cam kapak kapakları içeren 6 kuyu başına10adet 6 N2A APP hücresi × ve hücreleri büyüme ortamında 12-16 saat boyunca tuttur.
    2. Üretici protokolüne uygun olarak Lipofektamin transfeksiyon reaktifiyle 1-3 μg MAM-Tav2A plazmidini (Ek Dosya 1) transfekte et.
    3. 12-16 saat transfeksiyondan sonra ilaç tedavisi yapın.
      NOT: FRET arka planı olarak kullanılacak olarak yalnızca donörü (ER-CFP) veya akseptörü (Mito-YFP) kodlayan bir ekspresyon plazmid ile transfekte edilen hücreler her zaman alınmalıdır.

2. Uyuşturucu tedavisi

  1. MAM-Tav2A eksprese edenN2A APP hücrelerini Rapamisin (Rapa) veya Rapalog (Log) (3-6 saat) ile tedavi edin.
    1. Tedaviden önce, stok çözeltileri (10 mM) Rapa ve Log hazırlayın.
    2. Medyayı 0 nM, 100 nM veya 250 nM Rapa veya Log içeren yeni medya ile değiştirin.
    3. 3 saatlik tedaviden sonra, hücreleri sabitlemek için %3,3 paraformaldehit (PFA) ekleyin.
    4. Slaytları floresans konfokal mikroskopisi için bir damla antiifade reaktifi yerleştirerek hazırlayın.
    5. Kapak kaymalarını damlanın üzerine monte edin ve forsepsle nazikçe basın.
      NOT: Cam kapak kapakları kırılgandır ve dikkatli olunmalıdır. Cam kapak örtülerine alternatif olarak, cam alt plakalar kullanın. Cam taban plakalarının kullanılmasının en büyük eksikliği, antiifade reaktifinin kullanılamamasıdır; bu da floroforların ağartılması nedeniyle görüntülemeyi zorlaştırır. DAPI (4′,6-diamidino-2-fenilindol) içeren antiifade reaktifini KULLANMAYIN çünkü mavi floresansı CFP ile YFP arasındaki FRET'i etkileyecektir.

3. Flüoresans Rezonans Enerjisi Transferi (FRET) için Konfokal Mikroskopi

  1. Slaytları ters bir mikroskobin altına yerleştirin ve hücreler görünür hale gelene kadar mikroskobun odaklığını ayarlayın.
  2. 440 nm lazer kullanarak floroforu uyarın ve donör CFP (FKBP-CFP-ER) için 468-503 nm emisyon veya alıcı YFP (FRB-YFP-Mito) için 525-565 nm emisyon ile görüntü alın.
  3. Sinyal yoğunluğunu dahili floresan filtre kullanarak arka plan sinyali dağınık olana kadar ayarlayın (neredeyse tamamen siyah olmalı).
    NOT: NIS Element AR yazılımı kullanılarak floresan görüntüler yakalamak için konfokal mikroskop kullanılmıştır. 60x büyütme ve 512 piksel çözünürlükte kullanıldı.
  4. Görselleri .nds dosyası olarak kaydet.
  5. Spektral oranlı metrik FRET analizi yapın.

4. Ratiometrik FRET analizi (6 - 12 saat)

NOT: Donör ER-CFP (468-503 nm) ve akseptör Mito-YFP (525-565 nm) tarafından floresan emisyonu konfokal mikroskop kullanılarak tespit edildi. ImageJ yazılımı, arka plan çıkarma sonrası ortalama piksel floresans yoğunluğunu niceltmek için kullanıldı. YFP ile CFP emisyon yoğunluğu oranı hesaplandı ve spektral FRET analizi için okuma olarak kullanıldı.

  1. Açık Görüntü J (Fiji).
  2. .nds dosyasını Image J'ye sürükle ya da File -> Open tuşuna basıp Image'i seçin.
  3. Aşağıdaki ekranda Split Channels kutusunu seçin.
  4. C = 0 paneline tıklayın.
  5. Analyze -> Measure seçeneğine tıklayın.
    NOT: Daha sonra hesaplama için Ortalama Değeri yazın.
  6. Process -> Math -> çıkarma seçeneğine tıklayın.
  7. Ortalama değeri girin.
  8. C = 1 paneli için 4. adımı tekrarlayın.
  9. Freehand seçim aracına tıklayın.
  10. İlgilendiği bir hücreyi daireye alıp Ctrl+T tuşlarına basarak bunu ROI'ya kaydet.
  11. Seçim getirdiğiniz şeyi göstermek için ROI'nin altındaki Show All seçeneğine tıklayın.
  12. Tüm seçilmiş hücreleri seçin ve Ölçüt, Bu değerleri Excel'e kaydet seçeneğine tıklayın.
  13. C = 1 paneline tıklayın ve Show All seçeneğine tıklayın.
  14. Tüm hücreleri seçin ve tekrar Ölçüt'e tıklayın, bu değerleri Excel'te ayrı bir sütuna kaydedin.
  15. Excel'de, alıcının (C0/C1) üzerine donör sinyalinin değerlerini koymak için bir fonksiyon oluşturun. Bu FRET oranıdır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

MAM-Tav2A'yı ifade eden FACS ile zenginleştirilmişN2A APP hücrelerinin ratiometrik FRET analizi, rapamisin tedavisi sonrası Aβ40 seviyelerinde doza bağlı bir artışgöstermiştir 8. Rapamisin, memelilerin hedef rapamisin (mTOR) sinyal yolunu inhibe ederek etki eder; bu da mikrogliyada TREM2 (Myeloid Hücrelerde İfade Edilen Tetikleyici Reseptör 2) ifadesini aşağı regule eder ve Alzheimer hastalığı 5XFAD fare modellerinde Aβ ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

MAM'lerin modülasyonu, kanser, metabolik bozukluklar ve nörodejeneratif hastalıklar dahil olmak üzere çeşitli bozukluklar için potansiyel sonuçları olan gelişmekte olan bir araştırmaalanıdır 13. Dynein-antagonist LDC-3/Dynarrestin, antidiyabetik ilaç metformin ve kanser anti-kanser ajanı sulforafan dahil olmak üzere birçok farmakolojik ajan, MAM'ları bozmakta olup, şu anda kanser ve metabolik bozukluklar için pre-klinik ve klinik denemeler aşamasındadır. Bu farmak...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Teşekkürler

Massachusetts Genel Hastanesi (MGH) Profesörü Dr. Rudolph E. Tanzi'ye el yazması hakkında verdiği içgörülü yorumlar için içtenlikle teşekkür ederiz. MGH Yardımcı Doçenti Dr. Masato Maesako'ya FLIM testleri konusundaki uzmanlığını paylaştığı için teşekkür ediyoruz. Philadelphia, Thomas Jefferson Üniversitesi Profesörü Dr. Gyorgy Hajnoczky'ye ER-CFP veya Mito-YFP kodlayan ifade plazmidlerini cömertçe sağladığı için teşekkür ederiz. Bu çalışma, Cure Alzheimer's Fund to RB tarafından desteklendi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
BSAFisher Scientific501781532
Konfokal mikroskopOlympus FV3000RS (Tokyo, Japonya)N/A
GlutaMAX takviyesi ile DMEMGibco/Thermo Fisher Scientific10564011
EDTALife Technologies41116134
Falcon 6 Kuyu PlakaVWR International41122107
GAPDH Poliklonal AntikorThermo Fisher ScientificPA1-988
JelatinVWR International9000-70-8
Genetikin (G418 Sülfat)Gibco/Thermo Fisher Scientific10131035
GFP monoklonal AntikorInvitrogenMA5-15256
Graphpad Prism N/APrism 9, sürüm 9.5.0N/A
HeparinSigma-AldrichH0200000
ImageJ YazılımImageJ 1.53aN/A
Ters konfokal mikroskopNikon (C2 Eclipse Ti2)N/A
Lipofectamine2000Invitrogen11668027
MS ExcelMicrosoft Excel, sürüm 2302N/A
NaClFisher Scientific7647145
NuPAGE 4-12% Bis-Tris jelInvitrogenNP0321BOX
Penisilin/Streptomisin/Amfoterik BLonza17-745E
PhotoshopAdobe Photoshop CC 20.0.10N/A
Tris-HCL, pH 7.6Boston BioProducts42000000
Triton X-100Sigma-AldrichT8787
Tripsin-EDTAGibco/Thermo Fisher Scientific25200056
Tween 20Fisher Scientific501657287

Kaynaklar

  1. Martino Adami, P. V., et al. Perturbed mitochondria-ER contacts in live neurons that model the amyloid pathology of Alzheimer's disease. J Cell Sci. 132 (20), 229906(2019).
  2. Area-Gomez, E., Schon, E. A. On the pathogenesis of Alzheimer's disease: The MAM hypothesis. FASEB J. 31 (3), 864-867 (2017).
  3. Fujimoto, M., Hayashi, T. New insights into the role of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane. Int Rev Cell Mol Biol. 292, 73-117 (2011).
  4. Prudent, J., et al. MAPL SUMOylation of Drp1 stabilizes an ER/mitochondrial platform required for cell death. Mol Cell. 59 (6), 941-955 (2015).
  5. Carpio, M. A., et al. controls apoptosis by Ca2+ through ER-mitochondrial contact sites. Cell Rep. 34 (10), 108827(2021).
  6. Degechisa, S. T., Dabi, Y. T., Gizaw, S. T. The mitochondrial associated endoplasmic reticulum membranes: A platform for the pathogenesis of inflammation-mediated metabolic diseases. Immun Inflamm Dis. 10 (7), e647-e658 (2022).
  7. Csordás, G., Weaver, D., Hajnóczky, G. Endoplasmic reticulum-mitochondrial contactology: Structure and signaling functions. Trends Cell Biol. 28 (7), 523-540 (2018).
  8. Zellmer, J. C., et al. Stabilization of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes regulates Aβ generation in a three-dimensional neural model of Alzheimer's disease. Alzheimers Dement. 21 (2), e14417(2024).
  9. Zellmer, J. C., Lomoio, S., Tanzi, R. E., Bhattacharyya, R. Quantitative analysis of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane (MAM) stabilization in a neural model of Alzheimer's disease (AD). J Vis Exp. (215), e66129(2025).
  10. Bhattacharyya, R., et al. The neuronal-specific isoform of BIN1 regulates beta-secretase cleavage of APP and Abeta generation in a RIN3-dependent manner. Sci Rep. 12 (1), 3486-3500 (2022).
  11. Shi, Q., et al. Microglial mTOR activation upregulates Trem2 and enhances β-amyloid plaque clearance in the 5XFAD Alzheimer's disease model. J Neurosci. 42 (27), 5294-5313 (2022).
  12. Wilmington, S. R., Matouschek, A. An inducible system for rapid degradation of specific cellular proteins using proteasome adaptors. PLoS One. 11 (4), e0152679(2016).
  13. Magalhaes Rebelo, A. P., et al. Chemical modulation of mitochondria-endoplasmic reticulum contact sites. Cells. 9 (7), 1637-1655 (2020).
  14. De Vos, K. J., et al. VAPB interacts with the mitochondrial protein PTPIP51 to regulate calcium homeostasis. Hum Mol Genet. 21 (6), 1299-1311 (2012).
  15. Yang, M., et al. Mitochondria-associated ER membranes: The origin site of autophagy. Front Cell Dev Biol. 8, 595(2020).
  16. Filadi, R., et al. Mitofusin 2 ablation increases endoplasmic reticulum-mitochondria coupling. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (17), E2174-E2181 (2015).
  17. Filadi, R., et al. On the role of Mitofusin 2 in endoplasmic reticulum-mitochondria tethering. Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (12), E2266-E2267 (2017).
  18. Xie, Q., et al. ABT737 reverses cisplatin resistance by regulating ER-mitochondria Ca2+ transduction in human ovarian cancer cells. Int J Oncol. 49 (6), 2507-2519 (2016).
  19. Tsunoda, T., et al. Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 1 modulates the acquisition of cisplatin resistance in bladder cancer cell lines. Oncogene. 24 (8), 1396-1402 (2005).
  20. Tubbs, E., et al. Sulforaphane improves disrupted ER-mitochondria interactions and suppresses exaggerated hepatic glucose production. Mol Cell Endocrinol. 461, 205-214 (2018).
  21. Bhattacharyya, R., et al. Axonal generation of amyloid-beta from palmitoylated APP in mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes. Cell Rep. 35 (7), 109134(2021).
  22. Alhazmi, H. A., Albratty, M. An update on the novel and approved drugs for Alzheimer disease. Saudi Pharm J. 30 (12), 1755-1764 (2022).
  23. Rountree, S. D., et al. Effectiveness of antidementia drugs in delaying Alzheimer's disease progression. Alzheimers Dement. 9 (3), 338-345 (2013).
  24. Hadwen, J., et al. Transcriptomic RNAseq drug screen in cerebrocortical cultures: Toward novel neurogenetic disease therapies. Hum Mol Genet. 27 (18), 3206-3217 (2018).
  25. Ray, B., et al. Rivastigmine modifies the α-secretase pathway and potentially early Alzheimer's disease. Transl Psychiatry. 10 (1), 47(2020).
  26. Bailey, J. A., Ray, B., Greig, N. H., Lahiri, D. K. Rivastigmine lowers Aβ and increases sAPPα levels, which parallel elevated synaptic markers and metabolic activity in degenerating primary rat neurons. PLoS One. 6 (7), e21954(2011).
  27. Ziegler, D. V., Martin, N., Bernard, D. Cellular senescence links mitochondria-ER contacts and aging. Commun Biol. 4 (1), 1323(2021).
  28. Neikirk, K., et al. Call to action to properly utilize electron microscopy to measure organelles to monitor disease. Eur J Cell Biol. 102 (4), 151365(2023).
  29. Liu, X., et al. Mitochondrial 'kiss-and-run': Interplay between mitochondrial motility and fusion-fission dynamics. EMBO J. 28 (20), 3074-3089 (2009).
  30. Szymanski, J., et al. Interaction of mitochondria with the endoplasmic reticulum and plasma membrane in calcium homeostasis, lipid trafficking and mitochondrial structure. Int J Mol Sci. 18 (7), ijms18071576(2017).
  31. Tikhomirova, M. S., et al. A role for endoplasmic reticulum dynamics in the cellular distribution of microtubules. Proc Natl Acad Sci U S A. 119 (15), e2104309119(2022).
  32. Stacchiotti, A., et al. Perspective: Mitochondria-ER contacts in metabolic cellular stress assessed by microscopy. Cells. 8 (1), 8010005(2018).
  33. Cieri, D., et al. SPLICS: A split green fluorescent protein-based contact site sensor for narrow and wide heterotypic organelle juxtaposition. Cell Death Differ. 25 (6), 1131-1145 (2018).
  34. Giacomello, M., Pellegrini, L. The coming of age of the mitochondria-ER contact: A matter of thickness. Cell Death Differ. 23 (9), 1417-1427 (2016).
  35. Dai, J., et al. Impaired axonal transport of cortical neurons in Alzheimer's disease is associated with neuropathological changes. Brain Res. 948 (1), 138-144 (2002).
  36. Trimmer, P. A., Borland, M. K. Differentiated Alzheimer's disease transmitochondrial cybrid cell lines exhibit reduced organelle movement. Antioxid Redox Signal. 7 (9-10), 1101-1109 (2005).
  37. Quinti, L., et al. Neurotherapeutics in the Era of Translational. Smith, R. A., Kaspar, B. K., Svendsen, C. N. , Academic Press. 311-331 (2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

BiyolojiSayı 234Sayı 234Bu Ay JoVE'deSayı

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.