Yöntem makalesi

Bakterilerde Bakır Nanopartikül Kaynaklı Programlanmış Hücre Ölümünün İncelenmesi

DOI:

10.3791/67951

⸱

16 Mayıs 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Laboratory Medicine and Biotechnology, College of Medicine, Tzu Chi University, 2Graduate Institute of Microbiology, College of Medicine, National Taiwan University, 3Department of Biological Sciences, Missouri University of Science and Technology

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bakır nanopartiküller, reaktif oksijen türleri üreterek antimikrobiyal ajanlar olarak işlev görür. Burada, bakır nanopartiküllerin klinik olarak ilgili üç patojene karşı etkili olduğunu ve bu bakterisidal süreçte belirli programlanmış hücre ölüm yollarının yer aldığını gösteren prosedürler sunulmaktadır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Son zamanlarda, antibiyotiklerin aşırı ve yanlış kullanımı nedeniyle çoklu ilaca dirençli patojenler ve tedavi edilemeyen enfeksiyonlar ile ilgili endişeler artmıştır. Metalik ve metalik oksit nanopartiküller gibi nanomalzemeler, çoklu ilaca dirençli patojenlerle mücadele etmek için potansiyel yeni stratejiler olarak biyomedikal alanda popülerlik kazanmıştır. Bu çalışmada, giderek artan ilaç direnci gelişen üç yaygın hastane kökenli fırsatçı patojen olan Escherichia coli (E. coli), Acinetobacter baumannii (A. baumannii) ve Staphylococcus aureus (S. aureus) karşı bakterisit olarak bakır nanopartiküllerin (CuNP'ler) kullanımı araştırılmıştır. İki boyutta (20 nm ve 60 nm) CuNP'lerin sentezlenmesi ve koloni tahlilleri yoluyla bakterisidal etkinliklerinin değerlendirilmesi için ayrıntılı protokoller sunulmuştur. CuNP'lerin altında yatan antimikrobiyal etki mekanizmaları, reaktif oksijen türlerinin üretimindeki değişiklikler değerlendirilerek araştırıldı. Ek olarak, programlanmış hücre ölümü (PCD) yolaklarının bakteri öldürmeye potansiyel katılımını incelemek için insan protein fonksiyonlarını inhibe eden dört modülatör uygulandı. Bu yaklaşım sayesinde, bakıra bağımlı transkripsiyonel düzenleyiciler de dahil olmak üzere bakır homeostaz proteinleri üzerine yapılan araştırmalara dayanarak, bakıra dirençli suşların potansiyel olarak ortaya çıkması önerilmektedir. Bu bulgular, CuNP'lerin bakterisidal etkilerini ve antibiyotik direncinin ele alınmasındaki potansiyel rollerini incelemek için kapsamlı bir metodoloji sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İlaca dirençli bakteriler tıpta ciddi bir endişe nedenidir. Hızlı ortaya çıkmaları, geleneksel antibiyotiklerin etkinliğini azaltmış ve daha fazla klinik komplikasyona neden olmuştur. Halk sağlığı için büyük bir tehdit oluştururlar ve yeni antimikrobiyal ajanlar için acil bir ihtiyaç oluştururlar. Araştırma yollarından biri nanomalzemelerdir. Nanomalzemeler, mikroplarla canlılıklarını tehlikeye atacak şekilde etkileşime girmelerine izin veren benzersiz fizikokimyasal özelliklere sahiptir. Örneğin, gümüş nanopartiküller (AgNP'ler) bakterilerde oksidatif strese neden olarak protein fonksiyon bozukluğuna, zar bozulmasına, DNA hasarına ve nihayetinde hücre ölümüne neden olur1. Öte yandan altın nanopartiküller (AuNP'ler), antifungal özellikleri ile bilinir ve taşıyıcı olarak görev yaparak antibiyotiklerin bakterisidal etkisini artırabilir2.

Ek olarak, bakır nanopartiküller (CuNP'ler) de güçlü antimikrobiyal etkileri ve düşük üretim maliyetleri nedeniyle büyük ilgi görmüştür. Çalışmalar, CuNP'lerin enzimatik aktivitenin bozulması ve reaktif oksijen türlerinin (ROS) oluşumu yoluyla geniş spektrumlu bakterisidal aktivite sergilediğini göstermektedir.3. CuNP'lerin pozitif yükü, bakterilere nüfuz etmelerini kolaylaştırarak hücresel alımlarını arttırır4. Bu mekanizma, CuNP'leri enfeksiyonları önlemek için implantlar gibi yüzey kaplaması için umut verici bir seçenek haline getirir3. Bununla birlikte, ilginç bir bulgu, CuNP'lerin bakterisidal etkisinin boyuta bağlı görünmesidir. Bazı çalışmalar, daha küçük CuNP'lerin, muhtemelen üstün yüzey alanı-hacim oranları5 nedeniyle daha yüksek antibakteriyel aktivite sergilediğini bulmuştur.

ROS üretimi, lipid peroksidasyonu, protein disfonksiyonu, DNA parçalanması ve glukoneogenez/glikojenolizin inhibisyonu dahil olmak üzere hücrelerde ve bakterilerde yaygın hasara neden olur ve nekroz veya programlanmış hücre ölümü (PCD) ile ilgilidir6,7,8. Son çalışmalar, PCD sistemlerinin bakterilerde var olduğunu, ökaryotik sistemlerdekilere benzer etki modları ve efektörleri olduğunu ortaya koymuştur9. Bakteri toplulukları, bir toksin-antitoksin (TA) sistemi10 aracılığıyla oksidatif stres de dahil olmak üzere strese yanıt olarak PCD'yi indükleyebilir. Basit bir ifadeyle, toksin-antitoksin sistemi, temel hücresel süreçleri bozabilen toksinlerden ve normal büyüme koşulları altında toksisitelerini inhibe etmek için toksinlerle kararlı kompleksler oluşturabilen antitoksinlerden oluşur. Çoğu bakteri ve arke, genomlarında TA lokusları içerir ve genellikle kromozom dışı ve kromozomal DNA'nın çoklu kopyalarında bulunur. Tip II TA (MazE/MazF modülü olarak bilinir) özellikle ilgi çekici olan birkaç tür TA sistemi vardır. Stres koşulları altında, antitoksinler bozulur ve toksinlerin hücresel hedeflerini inhibe etmesine izin verir. E. coli ve S. aureus'ta, toksin MazF, oksidatif stres, yüksek sıcaklık ve amino asit açlığı gibi stres koşullarına yanıt olarak aktive edilir. Sonuç olarak, antitoksin MazE'nin ekspresyonu azalır ve toksin MazF10 serbest bırakılır. Çalışmalar, MazF'nin, küçük bir alt popülasyonun olumsuz koşullar altında hayatta kalmasına izin veren proteinlerin sentezini sağladığını, popülasyonun çoğunun ise mazEF aracılı hücre ölümüne maruz kaldığını bulmuştur. Bu hücre ölümü, ROS'un transkripsiyonel veya translasyonel inhibisyonu indüklediği ROS'a bağlı veya DNA hasarının ölüm yollarını11 tetiklediği ROS'tan bağımsız olabilir.

Bu çalışma, CuNP'lerin bakteriyel ölümü indüklediği mekanizmaları araştırmaktadır. Yalnızca TA sistemine odaklanmak yerine, bakterilerdeki potansiyel PCD yolaklarını araştırmak için daha önce araştırmamızda 7,12 kullanılan dört PCD modülatörü kullanıldı.

İki farklı boyuttaki (20 ve 60 nm) CuNP'lerin bakterisidal etkilerini farklı konsantrasyonlarda inceleyerek ve koloni tahlilleri, ROS tespiti ve PCD modülatörleri (SBI, Z-VAD, NSA ve Wortmannin) gibi yöntemleri kullanarak, bu araştırma, PCD'nin çok hücreli organizmalara özel olmadığını, aynı zamanda stres altındaki bakteri topluluklarında da meydana geldiğini vurgulamaktadır. Bu çalışma, ayrıntılı protokoller sağlayarak, araştırmacıların kendi sistemlerindeki CuNP etkinliğini ve bakterisidal mekanizmaları değerlendirmelerini sağlamayı amaçlamaktadır. Ayrıca, bu bulgular bakteriyel PCD'nin anlaşılmasını ilerletmekte ve antibiyotiğe dirençli bakterilerle savaşmak için CuNP bazlı tedavilerin geliştirilmesini desteklemektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Bakır nanopartikülün hazırlanması

  1. Ticari bir kaynaktan ticari bakır nanotozlar (25 nm ve 60-80 nm) elde edin.
  2. İki boyutta 1 mg / mL nanopartikül için dağıtıcı olarak 1.0 mM sodyum dodesil sülfat (SDS) kullanın.
  3. Nanopartikülleri ultrasonik bir banyo kullanarak oda sıcaklığında en az 30 dakika boyunca dağıtın. Tamamen dağılmış nanopartiküller daha sonra sonraki deneylerde kullanıma hazırdır.

2. Bakterilerin hazırlanması

  1. Amerikan Tip Kültür Koleksiyonundan E. coli (Migula) Castellani ve Chalmers suşu 25922 ve A. baumannii Bouvet ve Grimont suşunu edinin. S. aureus'u Biyokaynak Toplama ve Araştırma Merkezi'nden edinin.
  2. Bakterileri Luria-Bertani (LB) suyunda 37 ° C'de aerobik koşullar altında kültürleyin.
  3. Bakteri kültürlerini LB ortamında 600 nm'de (OD600) yaklaşık 0.5'lik bir optik yoğunluğa seyreltin.

3. Hücre canlılığı değerlendirmesi

  1. Koloni tahlili
    1. 0 μg/mL, 1 μg/mL, 5 μg/mL, 10 μg/mL, 50 μg/mL ve 100 μg/mL dahil olmak üzere iki boyutta CuNP'nin çeşitli konsantrasyonlarını hazırlamak için stok CuNP çözeltileri (1 mg/mL) kullanın.
    2. Adım 2.3'te hazırlanan bakteri kültürlerini mikrosantrifüj tüplerine bölün ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 3300 × g'da santrifüjleyin.
    3. Bakteri peletlerini koruyun ve nazik pipetleme ile sırasıyla iki boyutta CuNP'nin farklı konsantrasyonlarını ekleyin.
    4. Bakteriyel peletleri sırasıyla negatif ve pozitif kontroller olarak PBS ve% 70 alkol ile tedavi edin.
    5. Tedavi edilen tüm bakterileri 24 saat boyunca 37 ° C'de 200 rpm'de çalkalayarak inkübe edin.
    6. İnkübasyondan sonra, tedavi edilen tüm bakterileri PBS ile yıkayın ve LB agar plakalarına yayın. Plakaları 24 saat boyunca 37 ° C'lik bir inkübatöre yerleştirin.
    7. Ertesi gün her tedavi grubundaki koloni sayılarını sayın ve istatistiksel analiz yapın. İstatistiksel doğruluk için bunun üç nüsha halinde yapılması önerilir.
  2. Bakterisidal mekanizma çalışması
    1. Bakterileri adım 3.1.2'de tarif edildiği gibi hazırlayın ve 2 saat boyunca 5 μM SBI-0206965 (SBI), 1 saat boyunca 0.5 μM nekrosülfonamid (NSA), 30 dakika boyunca 100 nM wortmannin (Wort) veya 30 dakika boyunca 100 nM Z-VAD-FMK (Z-VAD) ile tedavi edin.
    2. Bakterileri, 5 μM SBI, 0.5 μM NSA, 100 nM Wort ve 100 nM Z-VAD varlığında veya yokluğunda, adım 3.1.1'de tarif edildiği gibi iki boyutta CuNP çözeltisinin farklı konsantrasyonlarıyla birlikte tedavi edin.
    3. Modülatör işlemlerinden sonra bakterileri santrifüjleyin (adım 3.2.1) ve süpernatanları çıkarın.
    4. Bakteri peletlerini adım 3.2.2'de hazırlanan çözeltilerde yeniden süspanse edin ve 24 saat boyunca 37 ° C'de 200 rpm'de çalkalayarak inkübe edin.
    5. Bakterileri sırasıyla% 70 etanol ve PBS ile pozitif ve negatif kontroller olarak tedavi edin. Her grup için aynı inhibitör koşulları altında CuNP boş kontrolü (0 μg/mL; sahte) olarak CuNP'leri olmayan bir çözelti kullanın. Tüm numuneleri 24 saat daha inkübe edin.
    6. İnkübasyondan sonra, kültürlere 1:10 hacim oranında hücre canlılığı reaktifi ekleyin. Kültürleri 37 ° C'de çalkalanarak 2 saat daha inkübe edin.
    7. 2 saatlik inkübasyondan sonra kültürleri (adım 3.1.2) santrifüjleyin. Floresan süpernatanları 96 oyuklu plakalara aktarın. Bir mikroplaka okuyucu ile 560 nm'lik bir uyarma dalga boyu ve 590 nm'lik bir emisyon dalga boyu kullanarak floresansı ölçün.
    8. Kalan süpernatanı 10-5 ve 10-4'e seyreltin ve kültürleme için LB agar plakalarına yayın.
    9. Ertesi gün tek kolonileri sayın.

4. Reaktif oksijen türlerinin tespiti

  1. Bakteri kültürlerini adım 2.3'te anlatıldığı gibi hazırlayın ve bunları mikrosantrifüj tüplerine bölün.
  2. Bakterileri çeşitli stres koşullarıyla ROS indükleyen pozitif kontrol grupları olarak tedavi edin (veriler sonuçlarda gösterilmemiştir). Tedaviler adım 4.2.1-4.2.4'te açıklanmıştır.
    1. Bakterileri 3 saat boyunca 405 nm UV ışığına maruz bırakın. Bakterileri 45 °C'de 2 saat inkübe edin.
    2. Daha sonra, bakterileri 4 ° C'de 2 saat inkübe edin.
    3. Bakterileri 30 dakika boyunca% 3 H2O2 ile tedavi edin.
    4. Negatif kontrol olarak bakterileri LB suyunda 37 ° C'de tutun.
  3. Adım 3.1.1'de tarif edildiği gibi çeşitli CuNP konsantrasyonları hazırlayın ve bakterileri 24 saat boyunca 1 μg/mL, 5 μg/mL, 10 μg/mL ve 100 μg/mL konsantrasyonlarda 20 nm veya 60 nm CuNP'lerle tedavi edin.
  4. Kalan nanopartikülleri çıkarmak için inkübe edilmiş bakterileri PBS ile iki kez yıkayın.
  5. PBS'de 2 μM'lik bir nihai konsantrasyonda 2',7'-diklorodihidrofloresein diasetat (H2DCFDA) boyası hazırlayın.
  6. Bakteri peletlerini 5 μM H2DCFDA içinde yeniden süspanse edin ve bir akış sitometresi kullanarak 520/30 nm emisyonda floresan yoğunluğunu ölçün.
    NOT: FL1 yeşil floresansının yoğunluğu, tedavi edilen kültürdeki ROS seviyesi ile ilişkilidir. İstatistiksel doğruluk için bunun üç nüsha halinde yapılması önerilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Üç patojende iki boyutlu CuNP'lerin antimikrobiyal aktiviteleri
CuNP'lerin bakterisidal aktivitelerini test etmek için üç fırsatçı patojen (E. coli, S. aureus ve A. baumannii) kullanıldı. Bakteriler 0 μg/mL, 1 μg/mL, 5 μg/mL, 10 μg/mL, 50 μg/mL ve 100 μg/mL 20 nm veya 60 nm CuNP ile tedavi edildi ve bakterisidal aktiviteler, koloni sayımlarından elde edilen minimum bakterisidal konsantrasyon (MBC) kullanılarak belirlendi. Sonuçlarımız, her üç suş için her iki boyutta CuNP'ni...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada E. coli, S. aureus ve A. baumannii'ye karşı iki boyutta ve çeşitli konsantrasyonlarda CuNP'lerin antimikrobiyal etkileri ve mekanizmaları araştırılmıştır. Belirlenen protokoller kullanılarak, CuNP ile indüklenen bakterisidal etkilerin oksidatif stres ve potansiyel PCD aktivasyonunu içerdiği gözlenmiştir. Bununla birlikte, metal homeostazı ve bakteriyel stres tepkileri arasındaki etkileşim büyük ölçüde keşfedilmemiştir. Önceki çalışmalar, CuNP duyar...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazar, finansal veya başka türlü herhangi bir çıkar çatışması beyan etmez.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tayvan'daki Tzu Chi Üniversitesi Çekirdek Tesis Merkezi'nden gelen destek için minnettarız.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Acinetobacter baumannii Bouvet ve Grimont suşu Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu (ATCC), Manassas, VA, ABD17978CuNP toksosite deneyi için bakteriler
Bio-Rad iMark Mikroplaka OkuyucuBio-Rad Laboratuvarları, Hercules, CA, ABD168-1130Bakteriyel canlılık deneylerinde absorbansı ölçmek için kullanılır.
hücre bazlı 2 ', 7'-diklorodihidrofloresein diasetat ve nbsp; (H2DCFDA)Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, ABDD6883İşlenmiş bakteri hücrelerinde reaktif oksijen türlerini (ROS) tespit etmek için kullanılır.
Bakır nanopartiküller (CuNP'ler) 25 nmSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD774081CuNP stok çözeltisini hazırlamak için kullanılır
Bakır nanopartiküller (CuNP'ler) 60-80 nmSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD774103CuNP stok çözeltisi hazırlamak için kullanılır
Escherichia coli (Migula) Castellani ve ChalmersAmerikan Tipi Kültür Koleksiyonu (ATCC), Manassas, VA, ABD25922CuNP toksosite deneyi için bakteriler
Gallios akış sitometresiBeckman Coulter, Brea, CA, ABDReaktif oksijen türlerinin tespiti de dahil olmak üzere birçok deneyde akış sitometrik analizi için kullanılır.
LB agarFocusBio, Miaoli, TayvanLBA500Bakteri kültürü için kullanılır
Luria-Bertani (LB) suyuBecton, Dickinson and Company, Sparks, MD, ABD244620Bakteri
Nekrosülfonamid (NSA)Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD480073Bakteriyel ölüm yolu çalışmalarında ön tedavi için bir modülatör olarak kullanılır.
PrestoBlue Hücre Canlılığı ReaktifiInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDP50200Floresan yoluyla hücre canlılığını değerlendirmek için kullanılır.
SBI-0206965 (SBI)BioVision, Milpitas, CA, ABD9580Bakteriyel ölüm yolu çalışmalarında ön tedavi için bir modülatör olarak kullanılır.
Sodyum dodesil sülfat (SDS)Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDL4509Agregasyonu azaltmak için bakır nanopartiküller için bir dağıtıcı olarak kullanılır.
Staphylococcus aureusAmerikan Tipi Kültür Koleksiyonu (ATCC), Manassas, VA, ABD
Biyokaynak Toplama ve Araştırma Merkezi (BCRC), Hsinchu, Tayvan		13567CuNP toksosite deneyi için bakteri
Varioskan LUX çok modlu mikroplaka okuyucuThermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABDVLBLATGD2Hücre canlılığı deneylerinde floresan ölçmek için kullanılır
Wortmannin (Wort)Abcam, MA, ABDab120148Bakteriyel ölüm yolu çalışmalarında ön tedavi için bir modülatör olarak kullanılır.
Z-VAD-FMK (Z-VAD)Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDV116Bakteriyel ölüm yolu çalışmalarında ön tedavi için bir modülatör olarak kullanılır.
kültüründe kullanılır

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Anees Ahmad, S., et al. Bactericidal activity of silver nanoparticles: A mechanistic review. Mater Sci Energy Technol. 3, 756-769 (2020).
  2. Zhang, Y., Shareena Dasari, T. P., Deng, H., Yu, H. Antimicrobial activity of gold nanoparticles and ionic gold. J Environ Sci Health C Environ Carcinog Ecotoxicol Rev. 33 (3), 286-327 (2015).
  3. Solioz, M. Copper and Bacteria: Evolution, Homeostasis and ToxicitySpringerBriefs in Molecular Science. Ch 2, Springer Cham. 11-19 (2018).
  4. Ma, X., Zhou, S., Xu, X., Du, Q. Copper-containing nanoparticles: Mechanism of antimicrobial effect and application in dentistry-a narrative review. Front Surg. 9, 905892(2022).
  5. Draviana, H. T., et al. Size and charge effects of metal nanoclusters on antibacterial mechanisms. J Nanobiotechnology. 21 (1), 428(2023).
  6. Hasanuzzaman, M., et al. Regulation of ROS metabolism in plants under environmental stress: A review of recent experimental evidence. Int J Mol Sci. 21 (22), ijms21228695(2020).
  7. Lai, M. J., et al. Effect of size and concentration of copper nanoparticles on the antimicrobial activity in Escherichia coli through multiple mechanisms. Nanomaterials (Basel). 12 (21), 12213715(2022).
  8. Sai, D. L., Lee, J., Nguyen, D. L., Kim, Y. P. Tailoring photosensitive ROS for advanced photodynamic therapy. Exp Mol Med. 53 (4), 495-504 (2021).
  9. Peeters, S. H., de Jonge, M. I. For the greater good: Programmed cell death in bacterial communities. Microbiol Res. 207, 161-169 (2018).
  10. Allocati, N., Masulli, M., Di Ilio, C., De Laurenzi, V. Die for the community: An overview of programmed cell death in bacteria. Cell Death Dis. 6 (1), e1609(2015).
  11. Kolodkin-Gal, I., Sat, B., Keshet, A., Engelberg-Kulka, H. The communication factor EDF and the toxin-antitoxin module mazEF determine the mode of action of antibiotics. PLoS Biol. 6 (12), e319(2008).
  12. Lai, M. J., Huang, Y. W., Wijaya, J., Liu, B. R. Copper Overview. Fernández, G. D. Ch 4, IntechOpen. (2024).
  13. Macomber, L., Imlay, J. A. The iron-sulfur clusters of dehydratases are primary intracellular targets of copper toxicity. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (20), 8344-8349 (2009).
  14. Ramos-Zúñiga, J., Bruna, N., Pérez-Donoso, J. M. Toxicity mechanisms of copper nanoparticles and copper surfaces on bacterial cells and viruses. Int J Mol Sci. 24 (13), ijms241310503(2023).
  15. Ihara, M., Shichijo, K., Takeshita, S., Kudo, T. Wortmannin, a specific inhibitor of phosphatidylinositol-3-kinase, induces accumulation of DNA double-strand breaks. J Radiat Res. 61 (2), 171-176 (2020).
  16. Yang, Y. P., et al. Application and interpretation of current autophagy inhibitors and activators. Acta Pharmacol Sin. 34 (5), 625-635 (2013).
  17. Li, X., et al. The caspase inhibitor Z-VAD-FMK alleviates endotoxic shock via inducing macrophages necroptosis and promoting MDSCs-mediated inhibition of macrophages activation. Front Immunol. 10, 1824(2019).
  18. Solioz, M. Copper and Bacteria: Evolution, Homeostasis and ToxicitySpringerBriefs in Molecular Science. Chapter 3, Springer. Cham. 21-48 (2018).
  19. Greene, N. P., Koronakis, V. Bacterial metal resistance: Coping with copper without cooperativity. mBio. 12 (3), e0065321(2021).
  20. Butsyk, A., et al. Copper nanoparticle loaded electrospun patches for infected wound treatment: from development to in-vivo application. Polymers (Basel). 16 (19), polym16192733(2024).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Copper NanoparticlesReactive Oxygen SpeciesBacterial AutophagyColony AssayAntimicrobial NanomaterialsEscherichia ColiStaphylococcus AureusAcinetobacter BaumanniiAntibiotic Resistance

İlgili makaleler