Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Kemoterapiye Bağlı Periferik Nöropatinin Sıçan Modelinde Kannabidiol ile Allodini ve Hiperaljezinin Önlenmesi

856 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/68079

⸱

20 Haziran 2025

 ,  ,  ,  , 
1Center for Substance Abuse Research, Department of Neural Sciences, Temple University, 2Department of Psychology, Program in Neuroscience Temple University

Bu makalede

Özet

CBD'nin paklitaksel ile birlikte uygulanması, sıçanlarda kemoterapiye bağlı periferik nöropatinin gelişmesini önler. Bu protokol, kannabinoid kullanımını, kemoterapötik uygulama yoluyla sıçanlarda allodinik bir fenotipin indüklenmesini, mekanik ve termal allodinin değerlendirilmesini ve allodini ve hiperaljeziyi ayırt etmek için yüksek hızlı videografi kullanılmasını açıklar.

Özet

Bu çalışma, psikoaktif olmayan kanabinoid kannabidiolün (CBD) bu sendromun gelişimini in vivo olarak modüle etme yeteneğini değerlendirmek için kemoterapiye bağlı periferik nöropatinin (CIPN) sıçan modelinin faydasını göstermektedir. Yöntem, hayvanlarda allodinik bir fenotip oluşturmak için kemoterapötik ajan paklitaksel kullanır. Bu çalışma, CBD'nin nasıl ele alınacağını ve çözüleceğini, kemoterapötik ajanın nasıl uygulanacağını, mekanik ve soğuk duyarlılığın nasıl değerlendirileceğini ve hayvanlarda nosifensif davranışı ölçmek için yüksek hızlı videografinin nasıl uygulanacağını açıklamaktadır. Ana hatlarıyla belirtilen prosedürleri kullanarak, veriler CBD'nin tedavi edilen hayvanlarda allodinik fenotipin gelişmesini önlediğini desteklemektedir. CBD ile tedavi edilen hayvanlarda mekanik veya termal duyarlılıkta 0. günden (paklitaksel öncesi taban çizgisi) 7. güne (duyarlılık sonrası) kadar hiçbir fark gözlenmezken, araçla tedavi edilen hayvanlar önemli ölçüde daha hassas hale geldi. Tedaviye verilen bu yanıt, verilerin toplandığı en son zaman noktasına (7 hafta) kadar dayanıklıdır. Yüksek hızlı videografinin eklenmesi, bu davranışsal fenotipin daha ayrıntılı ve tarafsız bir değerlendirmesine izin verir (örneğin, analjezi ve anti-allodinin sınıflandırılması). Bu, hem bu modelin kannabinoid ilaç karakterizasyonu için faydasını hem de CBD'nin nöropatik ağrıyı hafifletmedeki potansiyel rolünü göstermektedir.

Giriş

Kemoterapiye bağlı periferik nöropati (CIPN) bir tür duyusal nöropatidir. Kemoterapi tedavisinin yaygın bir yan etkisidir ve özellikle taksan ve platin bazlı ilaçlar 1,2 ile yaygındır. CIPN'nin bazı semptomları arasında kronik ağrı, uyuşma, karıncalanma ve dokunma ve sıcaklığa karşı aşırı hassasiyetbulunur 1,2. Bu ağrılı semptomlar sadece hastanın günlük yaşamını değil, aynı zamanda kanser tedavisini de etkiler. Bazı kanser hastaları, bu sendromla ilişkili yaşam kalitesindeki düşüşü yönetebilmek için dozda bir azalma veya kemoterapinin tamamen sonlandırılmasını ister3. Şu anda, CIPN için klinik olarak kullanılan yaygın tedaviler semptomatik rahatlamada tam olarak etkili değildir ve önemli kötüye kullanım potansiyeli oluşturan opioidleri içerir4. Bugüne kadar CIPN için bir tedavi yoktur, bu nedenle güvenli ve etkili bir alternatif bulmak çok önemlidir 5,6.

Kannabidiolün (CBD) daha önce farelerde modellendiği gibi CIPN gelişimini önlemede etkinliği olduğu gösterilmiştir 7,8. Bu, eşit derecede etkili ilaçlar veya potansiyel olarak zararlı opioidler yoluyla rahatlamaya ihtiyaç duymayan hastalar için CIPN'nin potansiyel olarak uzun vadeli allodinik semptomlarından kaçınmak için umut verici bir yol göstermektedir. CBD kullanan kişilerin çoğu, özellikle nöbetleri yönetmek gibi terapötik amaçlar için, hafif yan etkiler yaşar ve ilaç genellikle iyi tolere edilir9. Olumsuz etkilerin çoğu doza bağlıdır ve genellikle vücut uyum sağladıkça iyileşir.

Yaygın olarak kullanılan bu CIPN10 modelinde, sıçanlara, daha önce11 bildirildiği gibi, kemoterapötik müdahaleden sonra bazı hastalarda gözlenen allodinik fenotipi özetleyen nöropatiyi indüklemek için paklitaksel uygulanır. Bu indüksiyonun amacı, bu sendrom için mekanizmaları veya müdahaleleri araştıran araştırmacılar için uygun olan, bu tip duyusal nöropatiyi in vivo olarak değerlendirmek için translasyonel olarak ilgili bir platforma sahip olmaktır. Mekanik hassasiyet, von Frey testi kullanılarak ölçülür ve termal hassasiyeti10,11 ölçmek için soğuk sıcaklık zorlukları kullanılır. Bu, hastalar için klinik olarak en önemli iki yaşam kalitesi son noktasında CIPN'yi azaltmada CBD'nin profilaktik potansiyelinin ölçülmesine izin verir. Daha ileri değerlendirme, nosifensif davranışların yüksek hızlı videografi destekli analiziniiçeriyordu 12,13. Zararsız ve zararlı uyaranlara verilen davranışsal tepkilerin bu genişletilmiş analizi, kemoterapi uygulamasının allodinik ve hiperaljezik etkileri arasındaki ayrımın yanı sıra CBD'nin bu etkileri modüle etme yeteneğine izin verir.

Bu protokol, CIPN fenotipinin nasıl indükleneceğini, sıçanlarda mekanik ve termal aşırı duyarlılığın nasıl değerlendirileceğini ve ölçüleceğini ve allodini ve hiperaljezinin tarafsız ve daha ayrıntılı bir değerlendirmesi için videografinin nasıl uygulanacağını açıklar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu protokol onaylanmıştır ve hayvan araştırmaları için onaylanmış protokoller kapsamında Temple Üniversitesi'nin Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin yönergelerini takip etmektedir. Bu çalışmada erişkin erkek Sprague-Dawley cinsi sıçanlar (250-300 g) kullanıldı. Kullanılan reaktifler ve ekipmanla ilgili ayrıntılar Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. CIPN indüksiyonu için kannabinoidlerin ve kemoterapötik ajanların hazırlanması

NOT: Şekil 1 , kannabidiolün çözündürme sürecini göstermektedir.

  1. CBD'nin çözündürülmesi ve paklitakselin seyreltilmesi için aşağıdaki malzemeleri birleştirin.
    1. % 100 etanol (EtOH), Chremophor (Etoksillenmiş hint yağı), normal salin, amber cam şişeler (x2), 50 ml konik tüp (x2), CBD toz stoğu, paklitaksel klinik stok (6 mg / mL).
  2. 1: 1: 18 EtOH'lik bir son çözücü hazırlığı için her 50 mL konik tüpe uygun bir hacimde EtOH ekleyin: etoksillenmiş hint yağı: normal salin.
  3. Test edilecek hayvan sayısı için 5 mg / kg'lık bir konsantrasyon oluşturmak için uygun miktarda CBD'yi toplayın.
  4. CBD'yi EtOH içinde hazırlanan iki 50 mL konik tüpten birinde çözün.
  5. CBD tamamen çözülene kadar CBD-EtOH karışımını yüksek hızda vorteksleyin.
  6. Her 50 mL konik tüpe eşdeğer hacimde etoksillenmiş hint yağı ekleyin.
  7. Etoksillenmiş hint yağı EtOH ile çözelti içinde olana kadar her tüpü yüksek hızda vorteksleyin.
  8. 1: 1: 18'lik bir final oranı için her 50 mL konik tüpe uygun miktarda normal salin ekleyin.
  9. Tuzlu su çözelti içinde olana kadar girdap.
  10. Araç kontrol solüsyonunu ve CBD solüsyonunu amber cam şişelere aktarın.
  11. Test edilecek hayvan sayısı için uygun hacimde kehribar şişelerde nihai konsantrasyonu 1 mg / mL'ye getirmek için stok paklitaksel çözeltisini 1: 6 oranında normal salin içinde seyreltin.
  12. Amber şişeleri alüminyum yakalı lastik şişe kapaklarıyla kapatın.
    NOT: Deney başlamadan önce hazırlanırsa, araç, araç + CBD ve paklitaksel şişeleri 4-8 ° C'de 7 güne kadar saklanabilir. Enjeksiyondan önce soğutulmuş şişelerin oda sıcaklığına dengelenmesini bekleyin. Ayrıca, hazır kannabinoid reaktiflerinin, hemen kullanım için değilse, kaba yapışmasını veya çözeltiden çökelmesini önlemek için camda saklanmasının kritik öneme sahip olduğunu unutmayın.

2. Sıçanlarda allodinik fenotipin indüklenmesi

  1. Paklitaksel enjeksiyonu için gerekli malzemeleri aşağıda belirtildiği gibi birleştirin:
    1. Hazırlanan 1 mg / mL paklitaksel stok çözeltisi, 1 mL tek kullanımlık şırınga (x n sıçan), 25 G şırınga iğneleri (x n sıçan), kemoterapötik atık kesici alet kabı ve hayvan ağırlıklarını toplamak için ölçek.
  2. Fareleri benzersiz tanımlayıcılarla numaralandırın veya etiketleyin.
    NOT: Hayvanlar, deneyin başlamasından en az 1 hafta önce barınaklarına alışmış olmalıdır.
  3. Her hayvanın ağırlığını toplayın.
  4. Uygun hacimde paklitaksel (tüm hayvanlar) ve araç veya CBD (tedavi grubuna göre) ile şırıngalar hazırlayın. Bu durumda enjeksiyon hacmi hayvanların 1 μL/g ağırlığına karşılık gelmektedir.
  5. Paklitaksel ve araç veya paklitaksel ve CBD'yi interperitoneal olarak enjekte edin.
    1. Sıçanı enjeksiyon için dizginlemek için, vücudu kavramak için yüzük ve serçe parmakları kullanarak, işaret parmağı boynun etrafında başparmağı ve orta parmak omuz altında başparmağı ile buluşacak şekilde, sıçanı arkadan baskın olmayan bir şekilde kavrayın.
    2. Sıçanın arka ayaklarını vücuda karşı stabilize edin.
    3. Yaralanmayı önlemek için hayvana rahatsız edici düzeyde baskı uygulamamaya dikkat edin.
      NOT: Fareleri tutarken her zaman ısırma veya çizilme riski vardır. Bu riski azaltmak için, deneyci ısırmaya dayanıklı eldivenler şeklinde ek KKD giyebilir.
    4. Elle tutulur ve stabilize edilirken, hayvanı karnına şırınga tarafından kolayca erişilebilecek şekilde eğin.
    5. Hayvanın sağ alt çeyreğine 1 mg / mL paklitaksel enjekte edin ve şırıngayı kemoterapi atık kesici kabına atın.
    6. Aracı veya CBD'yi 1 μL / g ağırlığında hayvanın sol alt çeyreğine enjekte edin ve şırıngayı normal kesici alet kabına atın.
      NOT: Enjeksiyon bölgelerinin değiştirilmesi, hayvan sıkıntısını ve enjeksiyon bölgesinin potansiyel tahrişini azaltır.
    7. Bu, deneysel gün 1'i işaret ediyor. Allodinik fenotipi indüklemek için bu işlemi 2-4. günlerde tekrarlayın. Bu süre zarfında kemoterapötik kontamine kafesler için kurumsal kullanım protokollerini takip edin.
    8. Adım 3'te açıklandığı gibi 0. günde temel mekanik ve termal allodini ölçümlerini alın. Adım 4'te açıklandığı gibi temel oluşturmaya ek uyaranları dahil edin. Ağrı skorları oluşturmak için bu uyaranlar için 0. gün değerlerinin analizi gerekli olacaktır.
    9. Yetersiz kullanımdan kaynaklanan yanıt heterojenliği önlemek için hayvanlar kararlı, tekrarlanabilir bir referans değer gösterene kadar adım 2.5.8'i tekrarlayın.
      NOT: Allodinik fenotipi indükleme sürecini kesintiye uğratmayın. Deneyci art arda 4 gün içinde enjeksiyon yapamazsa, alternatif doz programları fenotipin benzer bir indüksiyonunu sağlayabilir. Ayrıca, 5 mg / mL nihai CBD konsantrasyonu ve 1 mg / mL paklitaksel konsantrasyonunu korurken, bu karışımlarda paklitakselin seyreltilmesini sağlamak için ilk aracın veya CBD çözeltisinin hacmini uygun şekilde ayarlayarak paklitaksel ve araç veya CBD enjeksiyonunu 2 yerine tek bir enjeksiyonda birleştirmek de mümkündür ve belki de önerilir. Deneyi yapan kişiye kazara maruz kalmamak için kemoterapi kesici-delici aletlerini tutarken uygun dikkatli olun.

3. Hassasiyet sonrası mekanik ve termal hassasiyetin değerlendirilmesi

NOT: Şekil 2 , bu çalışma için kullanılan şematik cihazı göstermektedir.

  1. Mekanik ve soğuk hassasiyet tahlilleri için aşağıdaki malzemeleri bir araya getirin:
    1. Von Frey filamentleri (4-100 g), kuru buz, 15 mL konik tüp, izolasyon odaları, tel zemin ızgarası, 1/4 inç cam panel ve kronometre.
  2. Deneysel 7. günde değerlendirmeye başlayın (ör., son kemoterapötik / tedavi durumu enjeksiyonundan 3 gün sonra).
  3. Von Frey ve ısı yalıtım odalarını monte edin.
    1. Mekanik hassasiyet için izolasyon odalarını (plastik bölmelerle ayrılmış 6 oda) tezgahın 20 cm yukarısında bir tel zemin ızgarası üzerine yerleştirin.
    2. Termal hassasiyet testi için izolasyon odalarını (tek odacıklı) tezgahın 20 cm yukarısında 1/4 inçlik bir cam yüzeye yerleştirin.
  4. Hayvanları mekanik allodini için ayrı ayrı izolasyon odalarına yerleştirin.
  5. Testin başlamasından önce 15 dakika boyunca izolasyon odalarına alışmaya izin verin.
  6. Mekanik hassasiyet için manuel von Frey testi yapın. Bu yöntem manuel von Frey testini tanımlar, ancak elektronik von Frey testi manuel testin yerini alabilir14.
    1. En düşük kuvvet gramına (örneğin, 4 g) karşılık gelen filament ile başlayın ve sağ arka pençenin orta plantar yüzeyine, filament 6 saniye boyunca c şeklinde tutulacak şekilde baskı uygulayın.
      NOT: Araştırmacılar sağ ve sol arka pençeler arasında çok az fark olduğunu bildiriyorlar, ancak deneyciler hayvanlar arasında tutarlı olmalıdır). Uyaran başına 5 denemeyi tekrarlayın.
    2. Test edilecek her hayvan için tekrarlayın.
    3. Filament boyutunu sırayla yukarı kaldırın ve 5 denemenin en az 2'sinde bir ağrı yanıtı gözlenene kadar (örneğin, pençe çekilmesi) 3.5.1-3.5.2 adımlarını tekrarlayın.
    4. Gözlemlenen pençe tepkisini uyandıran filament gram kuvveti kaydedin.
    5. Pençe çekilmesinin gözlemlenip gözlenmediğini görmek için bir sonraki alt filamenti yeniden test edin. Herhangi bir yanıt gözlenmezse, kaydedilen kuvvet gramı nihaidir.
    6. Hayvan bu adımda yanıt verirse, yeni bir filament gram kuvvet kaydedin ve bir sonraki alt filamenti yeniden test edin. Alt filamentler artık bir yanıt vermeyene kadar tekrarlayın. Temsili veriler Şekil 3A,C'de gösterilmiştir.
  7. Soğuğa duyarlılık testi yapın.
    1. Hayvanı mekanik hassasiyet izolasyon odasından çıkarın ve bir termal hassasiyet izolasyon odasına yerleştirin.
    2. 15 mL konik tüpü, son pelet tüpün üstünden uzanacak şekilde kuru buzla paketleyin.
    3. Kuru buzu, hayvanın sağ arka pençesine yakın camın üzerine yerleştirin.
    4. Bir kronometre ile, hayvanın sıcaklığa tepki olarak pençe çekilmesini göstermesine kadar geçen süreyi kaydedin. Temsili veriler Şekil 3B'de gösterilmektedir.
    5. Fareyi ev kafesinde yeniden barındırın.
    6. Tüm hayvanlar test edilene ve ev kafeslerine geri dönene kadar 3.7'nin tüm adımlarını tekrarlayın.
      NOT: Bu aşamada herhangi bir sıkıntı belirtisi için hayvanların davranışlarının ve ağırlıklarının izlenmesi gerektiğine dikkat etmek de önemlidir. Hayvanlar temel ağrı davranışı geliştirirse veya uzun süre boyunca vücut ağırlığını kaybediyorsa, çalışma sonlandırılmalı ve hayvanlara uygun hayvan işleme tekniğine göre ötenazi yapılmalıdır. Hayvanlar deney boyunca sıkıntı göstermezlerse, son test gününden sonra hayvanlara ötenazi yapılmalıdır.

4. Yüksek hızlı videografi ile mekanik hassasiyet değerlendirmesi

  1. Mekanik duyarlılık tahlili ve videografi için aşağıdaki malzemeleri aşağıda belirtildiği gibi birleştirin:
    1. İzolasyon odaları, Tel zemin ızgarası, Pamuklu çubuk, Makyaj fırçası, Pimler, yüksek hızlı kamera, kızılötesi ışıklar, uyumlu analiz yazılımına sahip dizüstü bilgisayar.
  2. Daha önce açıklanan mekanik hassasiyet testi11ile birlikte veya aşağıda açıklandığı gibi bağımsız bir test olarak değerlendirin.
  3. İzolasyon odalarını mekanik hassasiyet için (tek odacıklı) tezgahın 20 cm yukarısında bir tel zemin ızgarasına yerleştirerek monte edin.
  4. Kamerayı, izolasyon odasından 1 ila 2 fit uzakta yaklaşık 45 derecelik bir açıyla bir tripoda yerleştirin.
  5. Deney ve sonraki puanlama için odayı aydınlatmak için kızılötesi ışıkları tripodların üzerine yerleştirin.
  6. Mekanik uyaran değerlendirmesi için hayvanları ayrı ayrı izolasyon odasına yerleştirin.
  7. Testin başlamasından önce 15 m boyunca izolasyon odalarına alışmaya izin verin.
  8. Farklı uyaranlarla mekanik duyarlılık için somatosensoriyel testler yapın (Şekil 4).
    1. İzolasyon odasını her uyaran için 2000 kare/sn'de kaydetmek için Photron FastCAM Analysis yazılımına sahip bir dizüstü bilgisayar kullanın (kaydı başlatmak için ilgili düğmeye basın).
    2. Kayıt sırasında pamuğun ucu ile farenin arka pençesi arasında hafif temas sağlamak için pamuklu çubuğu kullanın ve kaydı tamamladıktan sonra durun.
    3. Arka pençeyi arkadan öne doğru silmek için makyaj fırçasını kullanın ve tamamladıktan sonra durun.
    4. Sıçanın arka pençesinde düşük ve yüksek basınçlı pim iğneleri yapmak için pimi kullanın. Düşük basınçlı iğneler için, pimi arka pençeye hafifçe dokundurun, kayıt sırasında temastan sonra geri çekin ve tamamlandıktan sonra durun.
    5. Yüksek basınçlı pim delikleri için, pimi arka pençeye keskin bir şekilde bastırın ve kayıt sırasında temastan sonra geri çekin ve tamamlandıktan sonra durdurun.
    6. Hayvanı ev kafesine geri koyun.
    7. Test edilecek her hayvan için tekrarlayın.
  9. Kaydedilen nosifensif davranışı manuel olarak değerlendirin via FastCAM yazılımıyla işlenen videoları kullanarak yüksek hızlı videografi15, gösterildiği gibi Şekil 5A,B.
    1. Pençe stimülasyonundan sonra pençe yüksekliğini (cm cinsinden) ağ tabanından en yüksek noktasına kadar ölçün. Bunu yazılımda yapmak için Boyutlar > Ölçümler'e gidin ve İki nokta'yı seçin.
      1. İlk yukarı hareket sırasında pençenin zirveye ulaştığı anı belirlemek için videoyu tüm pençe hareketi boyunca oynatın. Pençenin açıkça tanımlanabilir bir bölgesini seçin (örneğin, plantar yüzeyin merkezi, bir rakamın pençe ile kesişimi, topuk vb.) ve bunu başlangıç noktası olarak ayarlayın.
      2. Stimülasyondan önce o bölgenin konumunu bulmak için videoyu geri sarın ve y ekseni boyunca o konumdaki ikinci noktayı işaretleyin. Ölçüm çizgisinin y eksenine paralel kaldığından ve açılı olmadığından emin olun. Yükseklik, ekranın sol üst köşesinde görüntülenecektir15.
    2. İlk kaldırmadan en yüksek noktaya olan mesafeyi (cm cinsinden) hesaplayarak pençe hızını, bu iki nokta arasındaki süreye (saniye cinsinden) bölerek belirleyin. Bu ölçüm, yazılımda Boyutlar > Ölçümler seçilerek ve İki nokta seçilerek gerçekleştirilebilir.
    3. Pençenin ilk yukarı hareketini başlattığı kareleri belirlemek için videoyu tüm pençe hareketi boyunca oynatın. Bu hareket içinde farklı karelerde iki nokta seçerek ve mesafenin kare sayısına veya başlangıç ve bitiş kareleri arasında geçen süreye bölünen mesafeyi hesaplayarak pençe hızını ölçün15.
    4. Yörünge sıkma, pençe sallama, pençe koruması ve zıplama davranışları için videoları değerlendirin. Örneğin, bir hayvan uyaran uygulaması sırasında bu davranışlardan birini gösterecek olsaydı, nosifensive davranış puanı 1 olurdu.
      NOT: Orbital sıkılaştırma, uyaran uygulaması sırasında gözler tamamen açıktan kısmen veya tamamen kapalıya geçtiğinde puanlandı. Uyaran uygulaması sırasında yüksek frekanslı pençe titremesi gözlendiğinde pençe sallama puanlandı. Uyaran uygulaması sırasında üç veya daha fazla pençe tel ızgara zemininden çıktığında atlama puanlandı.
    5. Daha önce açıklandığı gibi bu hayvan kohortu için dağılım ve hata tahminleri oluşturmak için uyaranlardan elde edilen temel verileri kullanın15. Kısaca, olası davranışsal özelliklerin tamamını yakalamak için tedavi öncesi taban çizgisinde statik dokunma, dinamik dokunma, hafif iğne batması ve ağır iğne batmasına yanıt olarak çalışmalarda kullanılan her bir hayvanın videolarını kaydedin.
      1. Grup için tüm uyaranlarda (statik dokunma, pamuklu çubuk, hafif iğne batması, ağır iğne batması) her bir davranışsal özelliğin (hız, yükseklik, ağrı skoru) ortalama ve standart sapmasını hesaplayın.
    6. Adım 4.9.4'te oluşturulan değişkenleri ve daha önce açıklanan prosedürleri kullanarak her videoda gözlemlenen ham verilerden z skorları oluşturun16.
    7. İstatistiksel analiz yazılımı kullanarak temel bileşen analizini kullanarak tüm z-skorlarını tek boyutlu bir özdeğerde birleştirin17. Bu, üç boyutlu veri kümesinden dönüştürülmüş z-skorlarının kombinasyonunun tek bir ağırlıklı toplam değer16 olarak hesaplanmasına izin verir.
    8. İstatistiksel analiz yazılımı kullanarak zararlı ve zararsız uyaranlarla ilişkili davranışları ayırmak için bu çoklu davranışsal boyutları kapsayan PCA tarafından oluşturulan ağrı skorlarını çizin (Şekil 5C).
      NOT: Videografi destekli mekanik test, artırılmış boyutluluğu dahil ederek von Frey testini yineler. CIPN bağlamında, antiallodini ve analjezi arasındaki ayrıma ve tanımlamaya izin verir. Video puanlaması, duyusal testi yapan deneyciden bağımsız taraflarca da yapılabilir. Bu, hem deneyci yanlılığını azaltabilen hem de toplanan bilgilerin derinliğini artırabilen güçlü bir araçtır. Bu yöntemin özel donanım, yazılım ve istatistiksel tekniklere bağlı olduğuna dikkat etmek önemlidir. Önceki bölümlerde açıklanan daha erişilebilir yönteme ek olarak hizmet eder. Ayrıca, kamera tarafından oluşturulan dosyaların boyutu nedeniyle veri toplamanın zaman alıcı olduğu ve dosya depolama alanının sınırlayıcı bir faktör olabileceği unutulmamalıdır. Bu faktörler deneyin başlangıcında göz önünde bulundurulmalıdır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Sıçanlarda bu CIPN modeli tarafından ortaya çıkan davranışsal sonuçlar oldukça tekrarlanabilir ve tutarlıdır. Şekil 3A , kontrol ve CBD ile tedavi edilen hayvanlarda temel ve paklitaksel sonrası duyarlılık mekanik duyarlılık sonuçlarını göstermektedir. Başlangıçta, Sprague-Dawley sıçanları genellikle von Frey filamentleri tarafından uygulandığı gibi 26-60 g kuvvette pençe çekilmesi sergilemeye başlar. Bu, sıfırıncı günde her iki tedavi grubunda da gözlenebilir. Paklitaksel uygulandıktan sonr...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Kemoterapiye bağlı periferik nöropatinin sıçan modeli, mekanik ve termal duyarlılıkta belirli kemoterapi türlerini alan hastalar için en çok bildirilen yaşam kalitesi sorunlarından ikisini özetlemektedir. Bu modelle, nispeten ucuz ve verimli yöntemler, von Frey filament testi yoluyla bu hassasiyetleri ve kuru buza maruz kalma yoluyla termal hassasiyeti ölçebilir. Bu yöntem ayrıca, yukarıda açıklanan daha kolay uyarlanabilir yöntemlerden daha ayrıntılı ve tarafsız analiz için kul...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Yazarlar, bu projedeki destekleri için Ward ve Wimmer laboratuvarlarına teşekkür eder. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüsü [Grant R42 NS120548-02] tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
KannabidiolCaymen Kimyasal90080Ann Arbor, MI
ChremophorMillipore-Sigma238470St. Lous, MO
EtanolMillipore-SigmaE7023St. Lous, MO
FastCAM Analiz yazılımı Photonhttps://photron.com, açık kaynaklı
Yüksek hızlı kameraPhotron AX 50 
Kızılötesi ışıklar CMVision IP65 ve nbsp;
Normal SalinMillipore-SigmaS0817St. Lous, MO
PaklitakselTemple Üniversite Hastanesi EczaneN/APhiladelphia, PA
Sprague-Dawley sıçanları (250– 300 g) Taconic Laboratuvarları, Cranbury, NJ

Kaynaklar

  1. Zhang, X., Chen, W. W., Huang, W. J. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy. Biomed Rep. 6 (3), 267-271 (2017).
  2. Sałat, K. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy: part 1-current state of knowledge and perspectives for pharmacotherapy. Pharmacol Rep. 72 (3), 486-507 (2020).
  3. Velasco, R., Bruna, J. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy: An unresolved issue. Neurología (English Edition). 25 (2), 116-131 (2010).
  4. Zajaczkowską, R., et al. Mechanisms of chemotherapy-induced peripheral neuropathy. Int J Mol Sci. 20 (6), 1451(2019).
  5. Cavaletti, G., et al. Cannabinoids: An effective treatment for chemotherapy-induced peripheral neurotoxicity. Neurother. 18 (4), 2324(2021).
  6. Lowe, H., Toyang, N., Steele, B., Bryant, J., Ngwa, W. The endocannabinoid system: A potential target for the treatment of various diseases. Int J Mol Sci. 22 (17), 9472(2021).
  7. Ward, S. J., Ramirez, M. D., Neelakantan, H., Walker, E. A. Cannabidiol prevents the development of cold and mechanical allodynia in paclitaxel-treated female C57Bl6 mice. Anesth Analg. 113 (4), 947-950 (2011).
  8. Ward, S. J., et al. Cannabidiol inhibits paclitaxel-induced neuropathic pain through 5-HT(1A) receptors without diminishing nervous system function or chemotherapy efficacy. Br J Pharmacol. 171 (3), 636-645 (2014).
  9. Iffland, K., Grotenhermen, F. An update on safety and side effects of cannabidiol: A review of clinical data and relevant animal studies. Cannabis Cannabinoid Res. 2 (1), 139(2017).
  10. Bacalhau, C., Costa-Pereira, J. T., Tavares, I. Preclinical research in paclitaxel-induced neuropathic pain: A systematic review. Front Vet Sci. 10, 1-17 (2023).
  11. Ippolito, M. J., Hayduk, S. A., Kinney, W., Brenneman, D. E., Ward, S. J. KLS-13019, a novel structural analogue of cannabidiol (CBD) and GPR55 receptor antagonist, prevents and reverses chemotherapy-induced peripheral neuropathy (CIPN) in rats. J Pharmacol Exp Ther. 391 (2), 231-240 (2024).
  12. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. IV A novel behavioral assay for measuring cold sensation in mice. PLoS ONE. 7 (6), 1-08 (2012).
  13. Zeid, D., et al. Paternal morphine exposure in rats reduces social play in adolescent male progeny without affecting drug-taking behavior in juvenile males or female offspring. Mol Cell Neurosci. 126, 103877(2023).
  14. Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Front Mol Neurosci. 10 (284), 1-17 (2017).
  15. Burdge, J., Fried, N. T., Abdus-Saboor, I. Using high-speed videography for objective and reproducible pain measurement on a mouse pain scale. STAR Protoc. 2 (1), 1-16 (2021).
  16. Toussaint, A. B., et al. Chronic paternal morphine exposure increases sensitivity to morphine-derived pain relief in male progeny. Sci Adv. 8 (7), 1-17 (2022).
  17. Abdus-Saboor, I., et al. Development of a mouse pain scale using sub-second behavioral mapping and statistical modeling. Cell Rep. 28 (6), 1-33 (2019).
  18. Faraji, J., et al. Sex-specific stress and biobehavioral responses to human experimenters in rats. Front Neurosci. 16, 1-14 (2022).
  19. Bigelow, L. J., Pope, E. K., MacDonald, D. S., Rock, J. E., Bernard, P. B. Getting a handle on rat familiarization: The impact of handling protocols on classic tests of stress in Rattus norvegicus. Lab Anim. 57 (3), 259-269 (2023).
  20. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Missouri Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  21. Gadgil, S., et al. A systematic summary and comparison of animal models for chemotherapy induced (peripheral) neuropathy (CIPN). PLoS One. 14 (8), 1-17 (2019).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Kemoterapi Kaynaklı NöropatiKannabidiol TedavisiSıçan Nöropati ModeliPaklitaksel UygulamasıMekanik HassasiyetSoğuk HassasiyetiYüksek Hızlı VideografiNosifensif DavranışNöropatik AğrıAllodini Önleme

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.