Sıçanlarda Akupunktur Tedavisi İçin Yeni Bir Fiksasyon Yöntemi

Özet

Burada, sıçanların sırtında akupunktur ve yakı yapmayı kolaylaştıran yeni bir sıçan fiksasyon yöntemini açıklıyoruz.

Özet

Araştırmacılar, akupunkturla ilgili hayvan deneylerinde hayvanların kontrol edilmesinin zor olduğu sorunuyla her zaman karşılaşırlar. Hayvanların tedavi alanlarından kaçmasını önlemek için zaten bazı yöntemler var. Ancak bu tespit yöntemlerinin etkisi insanda tedavi edilenden farklıdır. Bu nedenle, tedavi sırasında fareleri yüzüstü, sessiz ve uyanık tutmak için yeni bir fiksasyon yöntemi icat ettik.

Ekipman, gözenekli bir plastik emniyet platformu, kare pamuklu bir bez ve fareleri sabitlemek için birkaç emniyet kayışından oluşur. İlk olarak, emniyet kayışlarını emniyet platformuna geçirin. Her kayış için aynı sıradaki iki delikten geçirin ve aralarında iki delik bırakın. İlk kayışı yerleştirdikten sonra, diğer kayışı da aynı şekilde platforma yerleştirin ve iki kayış arasında dört sıralı bir boşluk bırakın. İkinci olarak, farenin kuyruğunu tutun ve iki emniyet kayışının oluşturduğu kanala yönlendirin. Farenin kafasını kare pamuklu bir bezle örtün. Üçüncüsü, başı ve ön ayakları sabitlemek için boyundaki emniyet kayışını sıkın. Ardından farenin arka bacaklarını tutun ve bel ve arka bacakları sabitlemek için diğer kayışı sıkın.

Bu yöntem anestezi gerektirmez. Cihaz basit ve kullanımı kolaydır. Etkinliğini ve güvenliğini değerlendirmek için prosedürü 60 sıçana uyguladık. Hepsi akupunktur tedavisini sorunsuz bir şekilde tamamladılar. 14 sıçan işlem sırasında kısa süreli mücadele gösterirken, herhangi bir yan etki gözlenmedi. Sonuçlar, yöntemin kullanım için etkili ve güvenli olduğunu göstermektedir.

Giriş

Hem cerrahi modelleme hem de in vitro girişim, uygun hayvan fiksasyon yöntemleri gerektirir. Bu, hayvanların en manevra kabiliyetine sahip ve nispeten rahat pozisyonda olmalarını sağlar. Akupunktur müdahalesi için hayvan fiksasyon yöntemine odaklanıyoruz. Akupunktur birçok hastalığın tedavisinde etkilidir ^1,2. Akupunktur mekanizmasının incelenmesi çok dikkat çekti. Şu anda, akupunktur ve yakı yurtiçinde ve yurtdışında sıcak araştırma konularıdır. Akupunktur tedavisinin patolojik mekanizmasının daha fazla araştırılması gerekmekte ve klinik deneylere ek olarak temel araştırma desteğine de ihtiyaç duyulmaktadır ^3,4. Akupunktur ve yakı ile ilgili temel araştırmalarda, hayvan fiksasyonu önemli bir teknik adımdır.

Şu anda yaygın olarak kullanılan fiksasyon yöntemleri arasında esaret, anestezi, sallanma, yüksek platform ve diğer fiksasyon yöntemleri bulunmaktadır. Bu yöntemlerin avantajları ve dezavantajları aşağıda özetlenmiştir.

Anestezi fiksasyon yönteminin uygulanmasında ilk adım, farelerin uyuşturulmasıdır. Bu yöntemi kullanırken, araştırmacılar farelerin ölme riskiyle karşı karşıyadır. Anesteziden sonra doğrudan kısıtlama olmadan ameliyat etmek de mümkündür⁵. Çorap-tavşan platformu sabitleme yöntemini kullanırken, araştırmacılar farenin kafasını kesilmiş bir çorabın içine sokar, ön ayaklarını deliklerden uzatır ve bacaklarını lastik bantlarla tavşan platformuna sabitler. Bu yöntem uzuvlarda akupunktur noktası seçimini kolaylaştırır. Araştırmacılar çorabı akupunktur bölgesine göre kesmelidir, ancak prosedür biraz karmaşıktır⁶. Bazı araştırmacılar, üç parçadan oluşan bir yakı sabitleme cihazı geliştirdiler: sabitleme koltuğu, sabitleme klipsi ve moxa-stick tutucu. Bu cihaz, araştırmacıların nispeten sabit bir sıcaklığı korurken aynı anda birden fazla akupunktur noktasında yakı yapmalarına olanak tanır. Bununla birlikte, bu yöntemin sabit durumu, insanların klinik tedavisinden önemli ölçüde farklıdır⁷. Fareleri bezle sarmak ve kelepçeler kullanarak askıya almak, kısıtlamanın etkisini önemli ölçüde azaltabilir. Bununla birlikte, akupunktur noktalarını ortaya çıkarmak için askıya alınan kumaşın önceden kesilmesi gerekir, bu da tedavi bölgesini⁸ açığa çıkarmayı elverişsiz hale getirir. Bazı araştırmacılar, fareleri ağ benzeri bir kafes örtüsüne sabitlemek için kayışlar, ipler ve kendinden kilitlenen Velcro kayışlı küçük bir ceket kullanır. Cihaz, düşük üretim maliyetleri, yüksek uygulanabilirlik ve basit kullanım sunar. Ancak kısıtlama işleminin tamamlanması için birden fazla kişiye ihtiyaç vardır⁹. Bazı araştırmacılar tel örgü ile bir vücut tutma silindiri inşa eder, farelerin bacaklarını tutma kelepçeleriyle sabitler ve bir tutma çubuğu kullanarak boyunlarını sabitler. Bu yöntem sağlam bir kısıtlama sağlar. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar fareler üzerinde daha iyi çalışabilirler çünkü tüm vücuttaki akupunktur noktaları açığa çıkar. Sorun şu ki, silindir farenin boyutuyla uyumsuz olabilir. Ek olarak, bu yöntem diğer tekniklere kıyasla daha fazla stres uygular, bu nedenle sıçanlar boğulmaya daha duyarlı olabilir¹⁰. Yüksek platform sabitleme yöntemi, farelerin yükseklik korkusundan yararlanır. Araştırmacılar, fareleri yerden 50 cm yükseklikteki yüksek platform pedalına yerleştiriyor. Sıçanlar, ek kısıtlamalara ihtiyaç duymadan doğal bir yüzüstü pozisyonda kalırlar. Bu yöntem, sıçanların başının ve sırtının iğnelenmesine izin verir. Bu yöntem, tedavi ortamını özgün bir şekilde simüle eder, bu nedenle deneysel sonuçlar iyi bir referans değerine sahiptir. Sıçanlar yükseklikten korktukları için, bu yüksekliklere yerleştirildiklerinde zihinsel durumları anormal hale gelir. Bu, yöntemi akıl hastalıkları üzerine araştırmalar için uygun hale getirmez ve deneysel sonuçları etkileyebilir¹¹. Bazı araştırmacılar, fareleri sabitlemek için ayarlanabilir bir kısıtlama platformu ve kayışlar kullanır ve geniş bir tedavi alanını açığa çıkarır. Bununla birlikte, klinik senaryoyu tekrarlamak zorlu olmaya devam etmektedir¹².

Fiksasyon yöntemlerinin klinik tedavi koşullarını doğru bir şekilde simüle edememesi sorununu ele almak için acil bir ihtiyaç vardır. İnsan klinik tedavisinin koşullarını çoğaltmak için her türlü çabayı gösterdik. Bu yazıda açıklanan yöntem, esaret yöntemi kategorisine girmektedir. Bu yöntemde kullanılan ekipman, prosedüre yardımcı olmak için pamuklu bir bezle birlikte bir kısıtlama platformu ve kısıtlama kayışları içerir. Ekipmanın kullanımı nispeten basittir. Diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, bu yöntem sıçanların sırtındaki akupunktur noktalarını daha iyi ortaya çıkarır ve tedavi verimliliğini artırır.

Cihazın güvenilirliğini test etmek için, deney için toplam 60 sıçan kullanıldı. 60 sıçanın tümü, her biri 30 sıçan içeren iki gruba ayrıldı: elektroakupunktur grubu ve sıcak akupunktur grubu. Sıçanlar tedavi sürecinde sakin kaldılar ve hareketlerinin prosedür üzerinde minimum etkisi oldu. Elektroakupunktur grubunda 22 sıçan mücadele etmeden sakin bir şekilde tedaviyi tamamladı. Operasyon sırasında toplam 8 sıçan mücadele etti ve 6'sı iğneleri yerinden çıkardı. Sıcak akupunktur grubundaki toplam 24 sıçan tedavi sırasında sakin kaldı. Diğer 6 sıçan mücadele edici davranış sergiledi, ancak hiçbiri moxa toplarını yerinden çıkarmadı. Mücadele eden bu fareler, örtüldükten ve rahatlatıldıktan sonra da sakinleşebilir. Sonuçta, tüm sıçanlar tedaviyi başarıyla tamamladı.

Protokol

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 82205287) tarafından desteklenmiştir. Bu çalışmada kullanılan deney protokolleri, deneyler yapılmadan önce Pekin Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Deneyleri ve Kullanımı Komitesi (No BUCM-2024052704-2223) tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır. Gösterilen tüm prosedürler Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmalıdır.

Çalışmada kullanılan ekipmanların detayları Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir. Protokol dört bölüme ayrılabilir: deney hazırlama, sabitleme işlemi, arıtma işlemi ve ekipmanın sökülmesi.

1. Deney hazırlığı (Şekil 1)

1. Gözenekli plastik kısıtlama platformunu hazırlayın. Emniyet platformu 500 mm uzunluğunda, 300 mm genişliğinde ve 5 mm yüksekliğindedir. Üzerindeki delik 7 mm uzunluğunda ve 3,2 mm genişliğindedir. İki bitişik delik arasındaki mesafe 7 mm'dir. Bu ekipman, fareleri sabitlemek için bir platform görevi görür.
2. Emniyet kayışları hazırlayın. Her bir emniyet kemeri 300 mm uzunluğunda ve 4,8 mm genişliğindedir. Emniyet kayışları tırtıklıdır ve uçlarında, yerleştirildikten sonra kilitlenebilen bir toka bulunur.
3. Kare pamuklu bir bezi hazır bulundurun. Kare pamuklu kumaş 30 cm, 30 cm ölçülerindedir. Deney hayvanlarının görüşünü engellemek için bunu kullanın.
4. Elektroakupunktur aletini hazırlayın. Elektroakupunktur prosedürlerini gerçekleştirmek için bu cihazı kullanın.
5. Akupunktur iğnelerini hazırlayın (0,25 mm çapında ve 25 mm uzunluğunda).
6. Bir çift laboratuvar sınıfı lateks eldiven bulundurun. Bu eldivenler deneyin temel koruyucu önlemini oluşturmaktadır.
7. Deney sırasında araştırmacıları fare ısırıklarından korumak için tasarlanmış bir çift kesme önleyici eldiven bulundurun.
8. Sonraki yakı tedavisi için kullanılan 5 mm çapında moxa topları yapmak için moxa kullanın.
9. Sıçanların haşlanmasını önlemek için, 2 cm 2 cm ölçülerinde kare kağıtlar kesin.
10. Elektroakupunktur tedavisi sırasında elektriksel iletkenliği sağlamak için steril gazlı bezi farenin kuyruğunu sarmak için uygulanmaya hazır tutun.
11. Fiksasyon öncesi hazırlık: Fareleri tutmadan önce, fareler tarafından ısırılmayı önlemek için laboratuvar sınıfı lateks eldivenler ve kesilmeyi önleyici eldivenler giyin.

Şekil 1: İşlem için gerekli cihazlar. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

2. Sabitleme işlemi

1. Emniyet platformundan iki emniyet kayışı geçirin. Her bir kayışı, kayışlar birbirinden dört sıra aralıklı olacak şekilde, iki delik aralıklı olarak aynı sıradaki iki delikten geçirin. Bu aralık, sıçanın vücut çapıyla eşleşir ve tedavi sırasında yanal hareketi kısıtlar (Şekil 2). Mesafeyi, farelerin şekline ve tedavi bölgelerine göre gerektiği gibi ayarlayın.
2. Bir elinizle farenin kuyruğunu kavrayın. Sıçan içgüdüsel olarak ileri doğru hareket edecektir (Şekil 3A).
3. Fareyi, iki emniyet kayışının oluşturduğu kanalın girişine yerleştirin. Sıçan kanalı kendi başına delecektir (Şekil 3B).
4. Farenin kafasını kare pamuklu bir bezle örtün ve farenin boynunu tutmak için aynı elinizi kullanın. Farenin kuyruğunu ve arka bacaklarını başka bir elinizle kavrayın. Bu yöntem, farenin duruşunun korunmasını sağlar (Şekil 3C).
5. Farenin başını ve boynunu hafifçe bastırmak için baş tarafını tutan elinizi kullanın. Emniyet kayışını tokanın içine sokmak için diğer elinizi kullanın ve sıkın. Başının hareketini kısıtlamak için emniyet kayışının başın kuyruk tarafında ve ön ayaklarında bulunduğundan emin olun (Şekil 3D, E).
6. Farenin kuyruğunu bir elinizle tutun. Emniyet kayışının farenin arka bacaklarının önüne yerleştirildiğinden emin olun. Ardından belin hareketini kısıtlamak için tokayı sıkın (Şekil 3F). Kısıtlanmış sıçan Şekil 3G'de gösterilmiştir.
7. Sıçanlarda akupunktur yapılırken, bu fiksasyon yöntemi tedavi sırasında stabilite sağlar. Sıçan hala şiddetli bir şekilde mücadele ediyorsa, başını bezle nazikçe örtün. Tüm görüş alanını korumak ve karanlık bir ortamda tutmak fareyi sakinleştirebilir.
   1. Örnek olarak DU20, BL17 ve BL23'ü seçin. Bu sabitleme mesafesinin seçilmesi akupunktur noktalarını daha iyi ortaya çıkarır: DU20 başının ortasındadır, BL17 iki emniyet kayışı arasındadır ve BL23 emniyet kemerinin kuyruk tarafındadır ve farenin belini sıkar.
   2. İğneyi akupunktur noktalarına doğru döndürün (Şekil 4A). Akupunktur tedavisini tamamlayan sıçan Şekil 4B, C'de gösterilmiştir.

Şekil 2: Emniyet platformu ve emniyet kayışının montajı. Emniyet kayışlarının takılı olduğu emniyet platformu şekilde gösterilmiştir. Her kayış, aynı sıradaki iki delikten sokulur, iki delik aralıklı olarak yerleştirilir ve kayışlar birbirinden dört sıra aralıklı olarak yerleştirilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3: Bir sıçanın fiksasyon süreci. (A) Farenin kuyruğunu tutun. (B) Farenin kanala doğru kaçmasına izin verin. (C) Farenin kafasını pamuklu bir bezle örtün. Boynuna bastırın ve kuyruğunu ve arka bacaklarını tutun. (D,E) Sırtındaki kayışı sıkın. (F,G) Belindeki kayışı sıkın. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4: Bir sıçan üzerinde akupunktur işlemi. Bu akupunktur prosedürü için akupunktur noktaları olarak DU20, BL17 ve BL23 seçildi. (A) İğneyi akupunktur noktalarına döndürün. (B,C) Tedaviyi tamamlayan sıçan burada gösterilmiştir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

3. Elektroakupunktur tedavisi

1. Akupunkturu tamamladıktan sonra elektroakupunktur aletini bağlayın. Elektroakupunktur cihazını açın, elektriksel stimülasyon şeklini seçmek için sürekli dalga düğmesine basın ve akım yoğunluğunu 1 mA'ya ve frekansı 2 Hz'e ayarlamak için düğmeyi çevirin (Şekil 5A).
2. Örnek olarak DU20, BL17 ve BL23'ü alarak, Şekil 5'te gösterildiği gibi üç çift elektrot bağlayın. Özellikle, BL17 ve BL23'ü bir çift olarak aynı tarafa bağlayın (Şekil 5B, C). Tuzlu suya batırılmış gazlı bezle sarılmış kuyruğu kafadaki DU20'ye bağlayın (Şekil 5D, E). Akım akış yönü, her üç elektrot çifti arasında tutarlıdır.
3. Tedavi süresini 15 dakikaya ayarlamak için zaman ayar düğmesini çevirin.

Şekil 5: Bir sıçan üzerinde elektroakupunktur işlemi. (A) Parametreyi sürekli dalgaya ayarlayın ve akım yoğunluğunu ve frekansı ayarlayın. (B,C) BL17 ve BL23'ü aynı tarafta eşleştirin. (D,E) Kuyruğu tuzlu suya batırılmış gazlı bezle sarın ve DU20'ye bağlayın. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

4. Sıcak akupunktur tedavisi

1. Sıcak akupunktur tedavisi gerekiyorsa şu öğeleri hazırlayın: moxa, akupunktur iğnesi (0,25 mm × 25 mm, daha önce kullanılanla aynı) ve birkaç kare kağıt. Ek olarak, tedavi başlamadan önce bazı moxa toplarını önceden hazırlayın (Şekil 1).
2. Kare bir kağıt parçası alın ve kağıdın orta noktasını delmek için dikkatlice bir iğne kullanın (Şekil 6A). Ardından, iğneyi belirlenen akupunktur noktasına yerleştirin (Şekil 6B).
   NOT: Açıklama amacıyla, bu çalışma BL23 akupunktur noktasını seçmiştir.
3. Moxa toplarını dikkatlice iğnenin üzerine yerleştirin ve ardından tutuşturun (Şekil 6C-E).

Şekil 6: Bir sıçan üzerinde sıcak akupunktur işlemi. (A) Kare bir kağıt alın ve merkezini bir iğne ile delin. (B) İğneleri akupunktur noktalarına yerleştirin. (C) Moxa toplarını iğnelerin üzerine koyun. (D,E) Tedaviyi tamamlayan sıçan burada gösterilmiştir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

5. Ekipmanın sökülmesi

1. Elektroakupunktur ekipmanının sökülmesi
   1. Elektroakupunktur tedavisinin tamamlanmasının ardından elektroakupunktur aletini kapatın. Ardından, elektrot klipsini akupunktur iğnelerinden dikkatlice çıkarın. Son olarak, akupunktur iğnelerini tedavi alanından nazikçe çekin.
2. Sıcak akupunktur ekipmanının sökülmesi
   1. Sıcak akupunktur tedavisinin ardından moxa toplarının külünü dikkatlice çıkarın ve suya koyarak atın. Ardından iğneleri yavaşça çekin ve ekli kağıtları çıkarın.
3. Sabitleme ekipmanının sökülmesi
   1. Sıçanın kafasını kare pamuklu bir bezle örtün ve aynı anda emniyet kayışlarını gevşetin. Emniyet kayışını gevşetin, ilk önce farenin belini sıkın. Ardından, farenin arka bacaklarını ve kalça bölgesini bir elinizle sıkıca kavrayın.
   2. Diğer elinizle farenin boynundaki kayışı serbest bırakın, ardından fareyi kuyruğunu tutarak emniyet kayışından yavaşça çekin.

Sonuçlar

Fiksasyon yönteminin etkinliğini değerlendirmek için, elektroakupunktur grubunda 30 sıçan ve sıcak akupunktur grubunda 30 sıçan olmak üzere iki gruba ayrılan toplam 60 sıçan üzerinde bir deneme yaptık. Tedavi operasyonları sırasıyla elektroakupunktur ve sıcak akupunkturu içeriyordu.

İğneleri akupunktur noktalarına yerleştirdikten sonra, akupunktur uzmanı deqi elde etmek için her iğne üzerinde kaldırma, itme ve döndürme manipülasyonları gerçekleştirdi. İşlem sı...

Tartışma

Sıçanlar karanlık ortamlarda yaşama eğilimindedir. Korunduklarında kendilerini güvende hissederler ve uyaranlara sakince tepki vererek daha düşük stres seviyeleri sergilerler. Burada açıklanan yöntem, bu sıçan özelliklerinden yararlanır. Bu fiksasyon yönteminin avantajları şu şekilde özetlenebilir: (i) Bu yöntem, deney hayvanlarının yaşadığı stres tepkisini ve ağrıyı en aza indirebilir. Hayvan etiğinin 3R ilkeleri, yani Azaltma, İyileştirme ve Değiştirme¹³ ile uyu...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Akupunktur iğneleri	Pekin ZhongYan TaiHe Tıbbi Alet Co., Ltd.	20222200133	Akupunktur iğnelerinin özellikleri 0,25 mm çapında ve 25 mm uzunluğundadır.
Linyi Şehri, Lanshan Bölgesi'ndeki kesme önleyici eldivenler Lvdazhou İşçi Koruma Ürünleri Fabrikası	H0315103941	Deney sırasında araştırmacıları fare ısırıklarından korumak için tasarlanmıştır.
Elektroakupunktur aleti	Suzhou Tıbbi Cihaz Fabrikası Ltd.	20172200675	Bu cihaz, elektroakupunktur prosedürlerini gerçekleştirmek için kullanılır.
Laboratuvar sınıfı lateks eldivenler	Zhonghong Pulin Medical Products Co., Ltd.	268237719221	Bu eldivenler deneyin temel koruyucu önlemini oluşturmaktadır.
Moxa	Pekin Tongrentang Xing'an Sağlık Teknolojisi Co., Ltd.	152200000000613	Moxa, daha sonraki yakı tedavisi için kullanılan 5 mm çapında moxa toplarının işlenmesi için malzeme görevi görür.
Gözenekli plastik kısıtlama platformu	Chuzhou Huaxin VinyIIndustry Co., Ltd.	341124000005877	Emniyet platformu 500 mm uzunluğunda, 300 mm genişliğinde ve 5 mm yüksekliğindedir. Üzerindeki delik 7 mm uzunluğunda ve 3,2 mm genişliğindedir. İki bitişik delik arasındaki mesafe 7 mm'dir. Bu ekipman, fareleri sabitlemek için bir platform görevi görür.
Emniyet kayışları	Zhejiang Litai Plastic Co., Ltd.	331003000001553	Her bir emniyet kemeri 300 mm uzunluğunda ve 4,8 mm genişliğindedir. Emniyet kayışı tırtıklıdır ve uçlarında, yerleştirildikten sonra kilitlenebilen bir toka bulunur.
Kare pamuklu kumaş	MUJI (SHANGHAI) Company Limited	WYLP20241105_1	Kare pamuklu kumaş 30 cm ve akut 30 cm ölçer. Deney hayvanlarının görüşünü engellemek için kullanılır.
Kare kağıtlar	DELI Group Co., Ltd.	7752-1114	Sıçanların haşlanmasını önlemek için, araştırmacılar 2 cm ve akut 2 cm ölçülerinde bazı kare kağıtları kestiler.
Steril gazlı bez	Jiangxi Zhonggan Medical Devices Co., Ltd.	20172140084	Steril gazlı bez, farenin kuyruğunu sarmak için uygulanır ve elektroakupunktur tedavisi sırasında elektriksel iletkenliği sağlar.