Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Sıçanlarda Tıkayıcı Miyokard Enfarktüsü Modeli Geliştirmek İçin Sol Ön İnen Koroner Arter Ligasyonu

1K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/68143

⸱

3 Ekim 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology, Khalsa College of Pharmacy, 2Khalsa College of Veterinary and Animal Sciences, 3Department of Molecular Biology and Biochemistry, Guru Nanak Dev University, 4Universal Diagnostics, 5Histopathology Department, Fortis Memorial Research Institute

Bu makalede

Özet

Protokol, sıçanlarda sol ön inen koroner arteri kalıcı olarak bağlayarak bir miyokard enfarktüsü (MI) modelinin geliştirilmesini göstermektedir. MI sonrası hayvanın hayatta kalması, iskemik bölgedeki kardiyomiyositleri kurtarmak, enfarktüs genişlemesini önlemek ve miyokard sonrası inflamasyonu ve fibrozu azaltmak için gereklidir.

Özet

İskemik kalp hastalığı ve inme dahil olmak üzere kardiyovasküler hastalık (KVH), tüm dünyada önemli bir mortalite ve morbidite nedenidir. Miyokard enfarktüsü, uzun süreli iskemiye bağlı olarak ortaya çıkan iskemik kalp hastalığının klinik bir sendromudur. İskemik miyokard fonksiyonel, metabolik ve yapısal değişikliklere uğrar ve nekroz nedeniyle miyokardın bir kısmında geri dönüşü olmayan hasara yol açar. Miyokard enfarktüsünün deneysel modelleri, MI sırasında ve sonrasında meydana gelen akut ve kronik hücresel, moleküler ve morfolojik değişiklikleri anlamak ve tedavi için yeni hedefler veya stratejiler geliştirmek ve optimize etmek için çok önemlidir. Sol ön inen koroner arterin (LAD) kalıcı olarak kapatılmasını kullanan küçük hayvanlarda MI'nın cerrahi modeli neredeyse insan MI'sına benzer. Bu çalışmanın amacı, sıçanlarda LAD koroner arterinin silinmez bir şekilde kapanmasını içeren cerrahi olarak indüklenen bir MI modeli oluşturmaktır. Deneysel protokol, 80 mg/kg ketamin ve 12 mg/kg i.p. ksilazin ile ilk anestezi indüksiyonunu, alveollerin çökmesini önlemek için ekstrinsik pozitif ekspirasyon sonu basıncı (PEEP) kullanılarak ventilatör destekli ventilasyon altında trakeotomi yapılmadan otoskop kullanılarak endotrakeal kanülün entübasyonunu içerir. Ameliyat sırasında iskelet kaslarında oluşan lezyonları sınırlayan bir torakotomi prosedürü benimsendi. Bu yaklaşım minimal invazivdir, tekrarlanabilir ve ameliyat sonrası mortaliteyi azaltır. Bu modelde hayvanlar, kısa vadeli patobiyolojik değişiklikleri, özellikle MI sonrası inflamasyonu, enfarktüs iyileşmesinin doğal bir süreci olarak anjiyogenezi ve nihayetinde enfarktüslü miyokardda fibrozu anlamak için MI'dan 4 gün sonra hayatta kaldılar.

Giriş

Başlıca iskemik kalp hastalığı (İHD) ve inmeden oluşan kardiyovasküler hastalık (KVH), dünya çapında önemli bir mortalite ve morbidite nedenidir. Dünya Kalp Federasyonu'na göre 20.5 yılında 2021 milyon kişi kalp-damar hastalıklarından öldü 1,2. Kalp krizi olarak da bilinen miyokard enfarktüsü (MI), İHD'nin akut klinik bir sendromudur. MI sırasında, miyokard dokusu, genellikle bir koroner arterdeyırtılmış bir aterosklerotik plak üzerinde oluşan tıkayıcı bir trombüsün neden olduğu uzun süreli iskeminin bir sonucu olarak geri dönüşü olmayan hasara uğrar 3.

Perkütan koroner girişim (PCI) veya trombolitik ajanlar kullanılarak zamanında reperfüzyon, iskemik miyokardı nekrozdan kurtarmak için temel tedavidir 3,4. Gelişmiş ülkelerde, PCI'nin daha fazla uygulanması nedeniyle, MI sonrası mortalite azalmıştır, ancakGüney Asya 5 gibi gelişmekte olan ülkelerde MI insidansı artmaktadır. MI'dan sonra, miyokardın nekroza uğrayan bir kısmı, geri dönüşümlü olarak hasar görmüş miyokard hücrelerinden oluşan bir bölge ve bir iskemik bölge ile çevrilidir. İskemik miyokard, ventriküler dilatasyona ve disfonksiyona yol açabilen ve sonuçta kalp yetmezliğine ilerleyebilen MI sonrası ventriküler yeniden şekillenmeye uğrar6.

Şu anda, kök hücre tedavisi7 yoluyla hasarlı kardiyomiyositlerin rejenerasyonunu teşvik etmek ve iskemik bölge8 içinde anjiyogenezi uyararak miyokardiyal onarımı kolaylaştırmak için kapsamlı araştırmalar yürütülmektedir. Bununla birlikte, her iki yaklaşımın da klinik başarısı için stratejilerde önemli gelişmeler gereklidir. Bu nedenle, miyokard enfarktüsü veya iskemiyi taklit eden deneysel modeller, MI sırasında ve sonrasında meydana gelen patolojik, hücresel, moleküler ve morfolojik değişiklikleri anlamak için çok önemlidir, böylece tedavi için yeni terapötik hedefler veya stratejiler belirlenebilir ve klinik çeviri için optimize edilebilir. Bu çalışmada, sıçanlarda sol ön inen (LAD) koroner arterin geri dönüşümsüz olarak kapatılması ile deneysel bir MI modeli geliştirilmiştir. İlk olarak, anestezi uygulanmış hayvanlarda ventilatör destekli ventilasyon altında trakeotomi yapılmadan endotrakeal entübasyon, atelektaziyi (akciğerlerdeki hava keseciklerinin sönmesi/çökmesi) önlemek için ekstrinsik pozitif ekspirasyon sonu basıncı (PEEP) uygulanarak yapıldı. Ameliyat sırasında iskelet kaslarının yaralanmasını önlemek için göğüs boşluğunu açmak için minimal invaziv bir prosedür benimsendi. Ligasyonun yeri, yeterli enfarktüs üreten ve Tıkayıcı Miyokard Enfarktüsünün (OMI) klinik durumunu taklit eden LAD'nin ilk diyagonal dalının kökenini içerir. Ligasyonun yeri orta LAD bölgesi olduğu için ameliyat sonrası mortalite oranı ve cerrahi sonrası komplikasyonlar daha düşüktür9. Bu modelde hayvanlar, MI sonrası miyokardiyal dokuda meydana gelen kısa vadeli değişiklikleri anlamak ve MI'yı tedavi etmek için yeni hedeflerin ve stratejilerin belirlenmesi için MI'dan 4 gün sonra hayatta kaldı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Deneysel işlemler, Kurumsal Hayvan Etik Kurulu'nun (IAEC) onayından sonra protokole göre gerçekleştirildi [Protokol No. (IAEC/KCP/2023/009)]. Deney hayvanlarının taşınması ve bakımında Kontrol ve Denetim Amaçlı Komite (CCSEA) ve Hindistan Hükümeti Çevre, Orman ve İklim Değişikliği Bakanlığı'nın yönergeleri takip edildi.

1. Endotrakeal kanülün anestezisi ve entübasyonu (Süre: 10-15 dk)

  1. Her iki cinsiyetten, 200 - 240 g ağırlığında, 6 aydan büyük Wistar farelerini kullanın. Sıçanların ağırlığını kaydedin. İntraperitoneal yoldan vücut ağırlığına göre Ketamin (80 mg / kg) ve Xylazine (12 mg / kg) uygulayarak sıçanı uyuşturun.
    NOT: Dissosiyatif bir anestezik olan ketamin, hızlı anestezi üretir ancak kısmi kas immobilizasyonu10. Bu nedenle, kas gevşemesi sağlamak ve cerrahi anestezi durumuna ulaşmak için Xylazine ile kombinasyon halinde kullanılır11.
  2. Anestezinin boyutunu sağlamak için kuyruğu sıkıştırın. Sıçan refleks gösteriyorsa, Ketamindozunun 1 / 3'ünü uygulayın. Homeotermik ısınma sağlamak için ameliyat masasının üzerine koymak için Vantilatöre bir ısıtma yastığı bağlayın.
  3. Sıçanı ısıtma yastığı üzerinde dorsal dekübit pozisyonuna yerleştirin (Şekil 1A). Yapışkan bantlar uygulayarak fareyi bu pozisyonda tutun ve ameliyat masasını eğimli bir konuma getirin.
  4. Ventilatör solunum parametrelerini tidal hacim 8 mL/kg (2-3 mL/dak), solunum hızı dakikada 77 nefes (bpm) ve tepe basıncı (tepe inspiratuar basınç) 15 cmH2O'daayarlayın. Akciğerlerin çökmesini önlemek için, pozitif ekspiratuar son basıncı (PEEP) 2 cm H2O'ya ayarlayın.
  5. Endotrakeal entübasyon yapmak için dili kavrayın ve künt cımbızla kaldırın. Ses tellerini görüntülemek için ağza bir otoskop (Şekil 1B) yerleştirin ve endotrakeal kanülü (Şekil 1B ve Şekil 2A) ses tellerinden geçirin. Epiglotu net bir şekilde görmek için boğazın etrafına yukarıdan bir el feneri yansıtın.
  6. Endotrakeal kanülü ventilatör tüpüne bağlayın (Şekil 1A ve Şekil 2B) ve doğru entübasyonu onaylamak için göğüs hareketlerini izleyin. Karnın şişmesi özofagus entübasyonu şüphesini gösterir, entübasyonu adım 1.8'e göre tekrarlayın.
  7. Tüm kurulum tamamlandıktan sonra, LAD ligasyonu için cerrahi bir stereomikroskop kullanın (Şekil 1A) ve sıçan vücut ısısını 37 ° C'de tutmak için operasyon sırasında bir ısıtma lambası kullanın.
  8. Sıçanın boynuna ve göğüs bölgesine epilasyon kremi sürün ve 10-20 dakika bekletin. Sıçanın kürkünü boyundan göğüs bölgesine kadar nazikçe çıkarın.

2. Miyokard enfarktüsünün cerrahi indüksiyonu (Süre: 20 - 25 dk)

  1. Ksifoid süreçteki cildi koparmak için cımbız kullanın ve makas yardımıyla hafif bir kesi (yaklaşık 1 cm) yapın, ardından ksifoid süreçten başlayarak sternokleidomastoid kasa doğru uzunlamasına kesin.
    1. Şiddetli kanamayı önlemek için fasyaya zarar vermekten kaçının. Kanama varsa, kanayan bölgeye hafifçe bastırmak için sarılı mendil kullanın.
  2. Sternokleidomastoid kasın tabanından 5.-6. kaburgaya kadar, sternumun sol tarafı boyunca fasya ve göğüs kaslarını kesin.
  3. Sternumun sol tarafına doğru 3. ve 4. interkostal boşlukta bir delik açmak için forseps kullanın. Delik oluştururken kalbe veya akciğerlere zarar vermeyin (yaklaşık 6-8 mm). Bu adımda peep'i uygulayın.
  4. İnterkostal kaslarla birlikte 4., 5. ve 6. kaburgaları kesmek için kaburga kesimli bir kıskaç kullanın ve kalan interkostal kasları forseps ile ayırın (Şekil 2C).
  5. Kaburgaları ayrı tutmak ve kalbi ortaya çıkarmak için kaburga ekartörünü yavaşça yerleştirin (Şekil 2D). Sol kulakçığı net bir şekilde görmek için, cımbız ve kavisli makas kullanarak perikard ve timusu kalbin ön tarafından ayırın.
  6. Dikişle ligasyon için sol ön inen (LAD) koroner arterin yerini belirleyin.
    1. Perikardın dikkatlice çıkarılmasından sonra, LAD'yi interventriküler oluk boyunca kalbin tabanından apekse çapraz olarak uzanan belirgin bir yüzeysel arter olarak tanımlayın. LAD iki dal grubuna ayrılır: ilk olarak, interventriküler septumu delen septal dallar (S1 ve S2). Çapraz dallar (D1 ve D2) olarak adlandırılan ikinci dal grubu, sol ventrikülün önünü deler.
    2. LAD'nin üç bölgesini, yani proksimal, orta ve distal bölgeleri tanımlayın. Proksimal LAD: LAD'nin orijininden septal veya diyagonal olabilen birinci dala kadar olan bölgesi; Orta LAD: birinci dal ile ikinci çapraz dal arasındaki bölge; Distal LAD: İkinci diyagonal dalın ötesindeki bölge distal LAD olarak bilinir (Şekil 2E).
    3. LAD, daha kalın duvarlara sahip pulsatil kırmızımsı bir arter olarak görünür. Yerini doğrulamak için mikro forseps ile hafifçe bastırın ve bir nabız hissedilir.
  7. 8-0'ı geçerek LAD'nin kalıcı olarak kapatılmasını gerçekleştirin birinci diyagonal dal D1'in orijinine yakın orta LAD bölgesinde ipek sütür bir iğne tutucu kullanılarak ve sütür nazikçe çekilerek kalbe herhangi bir zarar gelmesini önler (Şekil 2E).
  8. Forseps kullanarak, aynı yönde iki düğüm bağ yapın (cerrah düğümü). Forseps yardımıyla iki taraflı yönde birden fazla düğüm yaparak bağı sabitleyin.

3. Sahte cerrahi

  1. 2.1-2.6 arasındaki adımları gerçekleştirin. Sol taraflı torakotomi yaptıktan sonra kalbi açığa çıkarın, ipek bir dikiş atın ve bağlamadan sol ana koroner arterin (LAD) altına çekin.

4. Tedavi ilacının uygulanması (Süre: 2-5 dk)

  1. LAD ligasyonundan sonra, tedavi grubunda kuyruk veninden intravenöz olarak 0.06 mg / kg Doksazosin enjekte edin (Şekil 3)

5. Cerrahi işlem sonrası göğüs boşluğunun kapatılması (Süre: 5 dk)

  1. Kaburgaların ve interkostal kasların orijinal konumlarına dönmesi için ekartörleri çıkarın. Sol ve sağ interkostal kasları 6-0 ipek sütür kullanarak dikerek göğüs boşluğunu kapatın. Cildi kapatmak için 4-0 Prolen sütür ile dikiş atın (Şekil 2F).

6. Ameliyat sonrası bakım ve izleme (Süre: 40 dk - 60 dk)

  1. Anesteziden kurtulmak için ameliyat edilen sıçanı 40 dakika veya daha uzun süre takip edin. Kuyruğu kaldırarak veya sıkıştırarak tam iyileşmeyi sağlayın.
  2. Bağlantıyı ventilatörden geçici olarak çıkarın ve torasik bölgenin normal hareketini inceleyerek sıçanın kendi kendini düzenleyen nefes almasını sağlayın.
  3. Ventilatörü kapatın ve endotrakeal kanülü çıkarın. Uzuvlara tutturulmuş yapışkan bantları çıkarın.
  4. Ameliyat sonrası ağrıyı hafifletmek için intraperitoneal yoldan Tramadol (12.5 mg / kg) enjekte edin.
  5. Vücut ısısını en az 30 dakika boyunca 37 °C'de tutmak için fareyi ısıtma yastığının üzerinde tutun. Sıçanı düzensiz nefes alma veya zorluk gibi hastalıklı durumlar veya herhangi bir tehlikeli enfarktüs belirtisi açısından sürekli izleyin.
  6. Sıçan serbestçe hareket edebildiğinde, anesteziden tamamen iyileşmiş durumda olduğunu düşünün. Sıçan gönüllü olarak hareket edemese de, ventilatörden çıkarıldıktan sonra 45 dakika içinde kafeste tutun.
  7. Fareyi ilk 4 gün boyunca her gün gözlemleyin. 4. günde, bir CO2 ötenazi odası kullanarak fareyi kurban edin.

7. Miyokard enfarktüsünün biyokimyasal belirteçlerinin analizi

  1. Hayvanlardan alınan kan örneklerinde troponin düzeyini ameliyattan 6 saat ve 4 gün sonra Miyokard enfarktüsünün biyobelirteci olarak değerlendirin.
    1. Numune toplama ve hazırlama: EDTA kaplı veya heparin kaplı tüplerde 6 saatlik enfarktüsten sonra kuyruk damarından kan örneği (200 μL) ve 4 günlük MI'dan sonra retro-orbital ponksiyon (1 mL) ile alın.
      NOT: Troponin T testi için Antikoagüle tam kan örneği tercih edilir.
    2. Kitte verilen kardiyak pipetleri ve tek kullanımlık dozaj şırıngalarını kullanarak test şeridine 150 μL numune uygulayın.
    3. Oda sıcaklığında 15-20 dakika inkübe edin ve ardından sonuçları 15-20 dakika içinde algılama bölgesinde bir sinyal çizgisinin (kırmızımsı çizgi) görünümüne göre yorumlayın. Aşağıdaki parametreleri kullanın: Algılama çizgisi yok, yalnızca kontrol çizgisi = negatif; görünür algılama çizgisi ve kontrol çizgisi = pozitif (Şekil 6B).
  2. Standart F analizörünü kullanarak bir serum örneğinde Troponin I'i tespit edin.
    1. Numune toplama ve hazırlama: EDTA kaplı veya heparin kaplı tüplerde 6 saatlik enfarktüsten sonra ve 4 günlük MI'dan sonra retro-orbital ponksiyon (1 mL) ile kuyruk damarından kan örnekleri (200 μL) alın.
    2. Testten önce kitin ve kan örneğinin oda sıcaklığında olmasına izin verin. Folyo poşetin arkasındaki son kullanma tarihini kontrol edin. Folyo poşeti açın ve test cihazını kontrol edin (Şekil 4).
    3. Test cihazını analizörün test yuvasına yerleştirin. Analizör barkod verilerini okur ve test cihazının geçerli olup olmadığını kontrol eder (Şekil 4).
    4. Sabit hacimli bir damlalık (100 μL) ile 100 μL numune toplayın. Toplanan numuneyi ekstraksiyon tampon tüpüne dağıtın. Ardından, kullanılmış sabit hacimli damlalığı (100 μL) atın.
    5. Numuneyi karıştırın ve tek kullanımlık damlalık (100 μL) ile 2x-3x tamponlayın. Daha sonra 100 μL numune karışımı toplayın.
    6. Numuneyi test cihazının numune kuyusuna uyguladıktan sonra hemen analizörün TEST BAŞLAT düğmesine basın. Analizör, test sonucunu 10 dakika içinde otomatik olarak gösterecektir.
      NOT: Troponin I (TnI) mevcutsa, evropiyum mikropartikülüne bağlanacaktır. Bu kompleks, test hattındaki yakalama antikoru tarafından yakalanacak ve floresan ışığının yoğunluğu analizör tarafından tespit edilecektir.

8. Enfarktüs alanının analizi

  1. İnfraksiyondan 4 gün sonra sıçanları kurban ettikten sonra, 2,3,5-Trifeniltetrazolyum klorür (TTC) boyasının makroskopik yöntemini kullanarak enfarktüs alanını belirleyin.
    1. Kalbi hayvan vücudundan çıkarın ve gece boyunca 4 °C'de tutun. Hem kulak kepçelerini, hem aort kökünü hem de sağ ventrikülü çıkarın. Donmuş sol ventrikülü cerrahi bir bıçak kullanarak 2-4 mm kalınlığında dilimler halinde kesin. Ventriküler dilimleri 37 °C'de% 1 TTC çözeltisi (pH 7.8'de tutulan 0.1 M Tris tamponu kullanılarak hazırlanmış) içinde 20 dakikalık bir süre inkübe edin.
    2. Bir dehidrojenaz enzimi ve bir kofaktör NADH içeren canlı miyokard, formazan oluşumu nedeniyle TTC ile tuğla kırmızısına boyanırken, enfarktüs geçiren miyokard alanı lekesiz kaldığı için boyama modelini analiz edin.
  2. Enfarktüslü alanı hacim yöntemiyle belirleyin.
    1. Ventriküler dilimleri iki cam slayt arasına yerleştirin ve üzerine 1 cm'de 100 kare yerleştirilmiş şeffaf plastik bir ızgara yerleştirin.
    2. Her iki taraftaki karelerin sayısını sayarak her ventriküler dilimin ortalama alanını hesaplayın. Benzer şekilde, her iki taraftaki lekeli ve lekesiz alanlara düşen kare sayısını hesaplayın. Lekesiz donuk sarı alan enfarktüslü kısmı, kırmızı alan ise canlı kısmı temsil ediyordu.
    3. Enfarktüs boyutunu toplam sol ventrikül hacminin yüzdesi (%LVV) olarak ifade edin.

9. Histopatolojik analiz

  1. Hematoksilen ve eozin boyama
    1. Histopatolojik bulgular için, LAD ligasyonundan 4 gün sonra hayvanı kurban edin, kalbi çıkarın, fosfat tamponu (PBS, pH 7.4) ile yıkayın ve hemen formalin solüsyonunda (%10) saklayın.
    2. Dokuyu bir dizi artan alkol konsantrasyonunda (% 70, % 80,% 95 ve% 95 ve mutlak alkol) 1 saat boyunca dehidre ederek doku işleme gerçekleştirin, böylece dokudan su çıkarılır ve alkol dokuya girer. Ksilene daldırarak alkolün dokudan temizlenmesini gerçekleştirin.
    3. Temizledikten sonra, dokuyu forseps kullanarak paslanmaz çelik bir kalıpta erimiş parafin mumuna aktarın. Temizleme maddesi yayılır ve erimiş balmumu dokuya sızar. Parafini katılaştırmak için kalıbı soğuk plaka üzerinde soğutun. Balmumu tamamen soğuyup sertleştiğinde (30 dakika), parafin bloğunu kalıptan kolayca çıkarın.
    4. Gömülü doku içeren parafin bloklarını bir mikrotom kullanarak 4 μm kalınlığında bölümler halinde kesin. Parafin bölümlerinin şeridini 40-45 °C'deki bir su banyosuna yerleştirin. Bölümleri bir kızak üzerine monte edin ve sürgüyü havayla kurutun veya hafifçe ısıtın. Ardından, bölümleri ksilen ile yıkayarak ve mutlak alkol ve su ile yeniden sulandırarak deparafinize edin.
    5. 15 dakika hematoksilen ile boyayın. Lekeli kısımları suyla yıkayın ve 20 saniye boyunca% 1 asitli alkol karışımı ile işlemden geçirin.
    6. Su ile yıkadıktan sonra, bölümleri 2 dakika boyunca karşı leke (% 1 sulu eozin çözeltisi) ile boyayın. Histopatolojik değişiklikleri 10x ve 40x büyütmede görselleştirmek için slaytları mikroskop altında gözlemleyin.
  2. Masson trikrom boyama
    1. Aşağıdaki reaktifleri hazırlayın.
      1. Bouin Çözeltisi: 75 mL doymuş Pikrik asit, 25 mL %40 Formaldehit ve 5 mL Buzlu asetik asit ekleyin. Weigert'in Demir Hematoksilen Çözeltisi: 100 mL %95 alkol içinde 1 g Hematoksilen içeren stok çözeltisi A'yı hazırlayın. 4 mL su, 1 mL konsantre hidroklorik asit ve 95 mL damıtılmış su içinde% 29 Ferrik klorür içeren stok çözeltisi B'yi hazırlayın. Kullanım için eşit miktarda stok çözeltisi A ve B ekleyin. Karışım sadece 3 aydan fazla stabil değildir.
      2. Biebrich Scarlet-Acid Fuschin Çözeltisi: 90 mL %1 sulu Biebrich Scarlet, 10 mL %1 sulu Asit fuschin ve 1 mL Buzlu asetik asit ekleyin. Fosfomolibdik-Fosfotungstik Asit Çözeltisi: 25 mL %5 Fosfomolibdik asit ve 25 mL %5 Fosfotungstik asit ekleyin. Anilin Mavisi Çözeltisi: 100 mL damıtılmış suya 2,5 g Anilin mavisi ve 2 mL buzlu asetik asit ekleyin. %1 Buzlu Asetik Asit Çözeltisi.
    2. Parafine gömülü kalp bölümlerini ksilen kullanarak deparafinize edin, ardından farklı alkol konsantrasyonlarında rehidrasyon yapın.
    3. Nihai renk yoğunluğunu artırmak için kalp bölümlerini 56 ° C'de 30 dakika boyunca Bouin solüsyonu ile inkübe edin. Sarı renk çıkana kadar bölümleri akan musluk suyunda durulayın.
    4. Dokuyu hematoksilen ile 1 dakika boyayın, ardından 2-3 dakika akan musluk suyuyla yıkayın. Bölümleri 15 dakika boyunca Biebrich kırmızı-asit fuksin çözeltisi ile boyayın.
    5. %5 fosfomolibdik - fosfotunstik asit ile 5-8 dakika farklılaştırın. Bölümü doğrudan (durulamadan) 6-8 dakika boyunca anilin mavisi çözeltisine aktarın.
    6. Damıtılmış su ile yıkayın. Daha sonra %1'lik asetik asit çözeltisi ile farklılaştırın. %95 etanol ile dehidre edin, ksilen ile berraklaştırın, lam üzerine monte edin ve mikroskop altında inceleyin12.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Sıçanlarda açık göğüs torasik prosedürlerini içeren LAD ligasyon prosedürü sırasında ventilasyona yardımcı olmak için endotrakeal entübasyon gereklidir. Başarılı entübasyon, cerrahi öncesi bazal solunum parametreleri ve cerrahi işlem sırasında stabil solunum, tidal hacim ve dakika hacminin korunması ile doğrulanır (Şekil 5).

LAD ligasyon prosedürünün başarısı, kardiyak Troponin T ve Troponin I'in miyokard hasarının13 biyokimyasal belirteçle...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışmamız, sıçanlarda sol ön inen koroner arterin (LAD) kalıcı olarak kapatılması yoluyla Miyokard Enfarktüsünün indüksiyonunu temsil etmektedir. Bu cerrahi protokolde, intraperitoneal yolla uygulanan anestezik Ketamin 80 mg/kg, hızlı anesteziye neden olurken, intraperitoneal Xylazine 12 mg/kg uygulaması ile birlikte yeterli kas gevşemesi sağladı, böylece tüm cerrahi prosedürü etkili bir şekilde kolaylaştırdı ve minimum yan etki ile kısa bir süre sonra ameliyat sonrası sorunsuz iyile...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Tüm yazarlar her türlü çıkar çatışmasını açıklamıştır.

Teşekkürler

Dr. Ravi Kumar Dhawan, Müdür, Khalsa Eczacılık Fakültesi, Amritsar, tüm cerrahi ekipmanların satın alınmasında rehberlik ve destek sağladığı için; Fon sağlamak için Khalsa Koleji Yönetim Konseyi Yönetimi; Dr. Harish Kumar Verma, Müdür, Khalsa Veterinerlik ve Hayvan Bilimleri Fakültesi, Amritsar, Ketamin ve Ksilazin hediye numunesi sağladığı için; Dr. Rekha Singh, Histopatoloji Bölümü, Fortis Memorial Araştırma Enstitüsü, Histopatoloji tesisleri ve derecelendirme için Gurugram; Bay Hemaant Arora, MD, Troponin I değerlendirmesi için Evrensel Teşhis sağlayan tesis; Dr Rachna Hora, Doçent, Moleküler Biyoloji ve Biyokimya Anabilim Dalı'nda kurutma teknikleri için.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
18 Gauge intravenöz kanülKent bilimsel, ABD
20 Gauge intravenöz kanülKent bilimsel, ABD
4-0 Polipropilen sütürKhanna Cerrahi
6-0 ipek sütürNanak Cerrahi
8-0 İpek sütürNanak Cerrahi
Adson forsepsNanak Cerrahi
Anestezi cihazıOrkide Bilimsel
Anestezi indüksiyon odasıOrkide Bilimsel
Kavisli makasNanak Cerrahi
Endotrakeal entübasyon tüpüKent Scientific, ABD
Tüy dökücü kremNanak Cerrahi
Isıtma yastığıKent bilimsel, ABD
Kancalı forsepsNanak Cerrahi
KetaminKVAS, Amritsar'dan hediye örneği
Mikro iğne tutucuNanak Cerrahi
Nitril eldivenler Nanak Cerrahi
Ameliyat masası
OtoskopNanak Cerrahi
Pean forsepsNanak Cerrahi
Kaburga ekartörüNanak Cerrahi
Düz cımbızNanak Cerrahi
Boğaz kıskacıNanak Cerrahi
Cerrahi saç başlığıNanak Cerrahi
Cerrahi maskeNanak Cerrahi
Cerrahi StereomikroskopOlimpos Magnus24B1187Kol bom standlı stereo zoom MSZ-TR mikroskop, zoom oranı: 1:7 objektif zoom: 0,65 - 4,5x Göz merceği 10x/22 mm Büyütme: 10x göz merceği LED halka aydınlatması ile 6,5 - 45x
Dişsiz forsepsNanak Cerrahi
TramadolAmandeep hastanesi, ASR'den hediye örneği
CımbızNanak Cerrahi
VantilatörRoVent (Kent Scientific,  ABD)Karavan-04-220Hacim ve basınç kontrollü ve sıcaklık ısıtma ve izleme özelliğine sahip Otomatik Vantilatör
KsilazinKVAS, Amritsar'dan hediye örneği

Kaynaklar

  1. World Heart Report. , World Heart Federation. https://world-heart-federation.org/wp-content/uploads/World-Heart-Report-2023.pdf (2023).
  2. Lindstrom, M., et al. Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risks Collaboration, 1990-2021. J Am Colleg Cardiol. 80 (25), 2372-2425 (2022).
  3. Byrne, R. A., et al. ESC guidelines for the management of acute coronary syndromes. Eur Heart J. 44 (38), 3720-3826 (2023).
  4. Widimsky, P., et al. Long distance transport for primary angioplasty vs immediate thrombolysis in acute myocardial infarction. Final results of the randomized national multi-center trial-PRAGUE-2. Eur Heart J. 24 (1), 94-104 (2003).
  5. Roth, G. A., et al. Global, regional, and national age-sex-specific mortality for 282 causes of death in 195 countries and territories, 1980-2017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017. Lancet. 392, 1736-1788 (2018).
  6. Frangogiannis, N. G. The mechanistic basis of infarct healing. Antioxid Redox Signal. 8, 1907-1939 (2006).
  7. Gill, J. K., Rehsia, S. K., Verma, E., Sareen, N., Dhingra, S. Stem cell therapy for cardiac regeneration: past, present, and future. Can J Physiol Pharmacol. 102, 161-179 (2024).
  8. Robich, M. P., et al. Myocardial therapeutic angiogenesis: a review of the state of development and future obstacles. Expert Rev Cardiovasc Ther. 9 (11), 1469-1479 (2011).
  9. Ahn, D., et al. Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in C57BL/6 mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 286, H1201-H1207 (2004).
  10. Domino, E. F. Taming the ketamine tiger. 1965. Anesthesiology. 113, 678-684 (2010).
  11. Van Pelt, L. F. Ketamine and Xylazine for surgical anesthesia in rats. J Am Vet Med Assoc. 171, 842-844 (1977).
  12. Li, C., et al. Silver nanoparticles/chitosan oligosaccharide/ poly(vinyl alcohol) nanofiber promotes wound healing by activating TGFβ1/Smad signaling pathway. Silver nanoparticles/chitosan oligosaccharide/ poly(vinyl alcohol) nanofiber promotes wound healing by activating TGFβ1/Smad signaling pathway. Int J Nanomedicne. 11, 373-387 (2016).
  13. Thygesen, K., et al. Fourth universal definition of myocardial infarction. Eur Heart J. 40, 237-269 (2018).
  14. Radha, R., Shahzadi, S. K., Al-Sayah, M. H. Fluorescent Immunoassays for Detection and Quantification of Cardiac Troponin I: A Short Review. Molecules. 26, 4812(2021).
  15. Srikanth, G. V. N., Parkash, P., Tripathy, N. K., Dixit, M., Nityanand, S. Establishment of a rat model of myocardial infarction with a high survival rate: A suitable model for evaluation of efficacy of stem cell therapy. J Stem Cells Regen Med. 5 (1), 30-36 (2004).
  16. Lugrin, J., Parapanov, R., Kueger, T., Liaudet, L. Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery. J Vis Exp. (150), e59591(2019).
  17. Kast, S., et al. Simplification of rat intubation on inclined metal plate. Adv Physiol Educ. 28, 29-32 (2004).
  18. Maruyama, K., et al. Anterior descending coronary artery in mice to generate a model of myocardial infarction. STAR Protoc. 2, 100775(2021).
  19. Pop, I. C., et al. Induction of a chronic myocardial infarction in the laboratory animal - experimental model. Clujul Medical. 86 (4), 334-339 (2013).
  20. Durant, E., Singh, A. Acute first diagonal artery occlusion: a characteristic pattern of ST elevation in noncontiguous leads. Am J Emerg Med. 33 (9), 1326.e3-1326.e5 (2015).
  21. McLaren, J., et al. From ST-Segment Elevation MI to Occlusion MI: The New Paradigm Shift in Acute Myocardial Infarction. JACC Adv. 3 (11), 101314(2024).
  22. Kasturi, S., Bandimida, S., Gajiwal, N., Thakkar, A. A Challenging Case of Bifurcation Lesion in Left Anterior Descending Artery: Managed Successfully with Everolimus-Eluting Bioresorbable Vascular Scaffold and Kissing Balloon Technique under Optical Coherence Tomography Guidance. Heart India. 3 (3), 79-81 (2015).
  23. Meyers, H. P., et al. Comparison of the ST-elevation myocardial infarction (STEMI) vs. NSTEMI and occlusion MI (OMI) vs. NOMI paradigms of acute MI. J Emerg Med. 60, 273-284 (2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Koroner Arter LigasyonuS an MI Modeliskemik Kalp HastalTorakotomi Prosed rMI Sonras nflamasyonEnfarkt yile mesiKardiyak FibrozisAnjiyogenez S reci
Video yakında
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.