Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Polikistik Karaciğer Hastalığı Olan Farelerden Primer Kolanjiositlerin İki Aşamalı Sindirim Yöntemi Kullanılarak İzolasyonu ve Kültürü

916 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/68202

⸱

16 Mayıs 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Oncology, Tianjin First Central Hospital, School of Medicine, Nankai University, 2The Province and Ministry Co-sponsored Collaborative Innovation Center for Medical Epigenetics, Key Laboratory of Immune Microenvironment and Disease (Ministry of Education), State Key Laboratory of Experimental Hematology, Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medical Sciences, Tianjin Medical University

Bu makalede

Özet

Bu protokol, vahşi tip farelerden ve polikistik karaciğer hastalığı olan farelerden yüksek saflıkta ve yüksek canlılığa sahip birincil kolanjiositleri izole etmek için optimize edilmiş iki aşamalı bir sindirim yöntemini tanımlar.

Özet

Bu protokolde, vahşi tip farelerden ve polikistik karaciğer hastalığı (PLD) olan farelerden yüksek saflıkta ve yüksek canlılığa sahip primer kolanjiyositleri izole etmek için iki aşamalı bir sindirim yöntemini optimize ettik. Fareler uyuşturulduktan sonra, karaciğerler inferior vena kava boyunca 50 mL Çözelti A ile perfüze edildi, ardından karaciğer dokusunu enzimatik olarak sindirmek için 37 ° C'de 30 mL Çözelti B izledi. Yapışık parankimal hücreleri çıkarmak için mekanik ayrışma, çalkalama ve mikrodiseksiyon yapıldı ve geriye sağlam bir safra ağacı bırakıldı. Safra ağacı daha sonra ince kıyılmış ve 37 °C'de 60 dakika çalkalanarak sindirilmiştir. Elde edilen tek hücreli süspansiyon, 70 μm'lik bir hücre süzgeci kullanılarak toplandı. Kolanjiositler immünomanyetik izolasyon kullanılarak saflaştırıldı. Hücre süspansiyonu, 4 ° C'de 45 dakika boyunca rotasyon altında bir anti-EpCAM antikoru ile inkübe edildi, ardından Protein G boncuklarının eklenmesi ve 4 ° C'de 45 dakika daha fazla rotasyon yapıldı. PBS ile üç yıkamadan sonra, kolanjiyositler manyetik bir ayırıcı kullanılarak toplandı. Saflaştırılmış birincil kolanjiyositler, Kolanjiyosit Kültür Ortamında yeniden süspanse edildi ve 1 mg / mL tip I sıçan kuyruğu kollajeni ile kaplanmış hücre kültürü kaplarına tohumlandı. Kolanjiyositlerin saflığı, kolanjiyosit spesifik belirteç sitokeratin-19 (CK19) için immün boyama ile doğrulandı. Bu çalışma, vahşi tip ve PLD farelerinden primer kolanjiyositlerin izole edilmesine odaklanmış olsa da, protokolün diğer hastalık faresi modellerine de uygulanabileceğinden eminiz. Bu ayrıntılı iki aşamalı sindirim yöntemi, kolanjiyopatilerin in vitro çalışmalarını ve hedefe yönelik tedavilerin geliştirilmesini kolaylaştırır.

Giriş

İntrahepatik safra ağacını döşeyen epitel hücreleri olan kolanjiositler, tek tabakalı bir tabaka oluşturur ve karaciğerin toplam hücre popülasyonunun yaklaşık %3-5'ini oluşturur1. Bu hücreler, karmaşık bir üç boyutlu duktal ağ oluşturmak için karaciğer içinde birbirine bağlanır2. Normal koşullar altında, kolanjiyositler salgı, emilim, yaralanma onarımı ve bağışıklık bariyeri görevi görme gibi hayati işlevleri yerine getirir ve böylece karaciğer fizyolojisi ve patolojisinde kritik bir rol oynar. Bununla birlikte, kolanjiyosit disfonksiyonu PLD, primer sklerozan kolanjit, kolanjiokarsinom ve kolestatik karaciğer hasarı dahil olmak üzere çeşitli hastalıklara yol açabilir 3,4,5.

Kolanjiyopati ile ilişkili hastalıklar arasında PLD, kolanjiyositlerden köken alan çok sayıda içi sıvı dolu kistin oluşumu ile kendini gösteren kalıtsal bir hastalık olarak öne çıkmaktadır. Bu kistlerin ilerleyici bir şekilde büyümesi hastaların yaşam kalitesini önemli ölçüde düşürür6. PLD için mevcut tedavi seçenekleri yetersiz kalmaktadır ve sıklıkla yüksek nüks oranları ve komplikasyonlarla ilişkilendirilirken sınırlı etkinlik sunmaktadır7. Bu, PLD yönetiminde karşılanmamış klinik talepleri ele almak için güvenli ve etkili terapötik stratejiler geliştirmeye yönelik acil ihtiyacı vurgulamaktadır.

PLD de dahil olmak üzere kolanjiyopatilerin mekanizmaları üzerine yapılan araştırmalar, uygun hücre hatlarının olmaması nedeniyle önemli ölçüde engellenmiştir. Bu sınırlamayı ele almak için, hastalık fare modellerinin kullanılması ve in vitro deneyler için bu modellerden primer kolanjiyositlerin izolasyonunun, kolanjiyopatilerin altında yatan moleküler mekanizmaları ortaya çıkarmak ve potansiyel terapötik stratejileri belirlemek için paha biçilmez olduğu kanıtlanmıştır.

Son çalışmamızda8, Pkd1 koşullu nakavt (KO) fareleri kullanarak bir PLD fare modelini başarıyla kurduk. Karaciğer kistleri, Pkd1 delesyonundan 1 ay kadar erken bir sürede gözlendi ve zamanla boyutları giderek arttı. Sıçanlardan ve insanlardan kolanjiyositleri izole etmek için protokoller iyi belgelenmiş olsa da 9,10, farelerden primer kolanjiyositleri izole etmek, küçük boyutları ve portal ven ve safra sisteminin karmaşık mimarisi nedeniyle özellikle zor olmaya devam etmektedir. Mevcut yöntemler, düşük hücre saflığı, zayıf canlılık, karmaşık prosedürler ve yüksek maliyetler dahil olmak üzere önemli sınırlamalarla karşı karşıyadır11,12.

Bu el yazması, iki aşamalı bir sindirim yöntemi kullanarak farelerden yüksek saflıkta birincil kolanjiyositleri izole etmek için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır. Bu optimize edilmiş yaklaşım, in vitro çalışmaları desteklemeyi, kolanjiyopatilerin altında yatan moleküler mekanizmaların araştırılmasını kolaylaştırmayı ve yeni terapötik stratejilerin geliştirilmesini ilerletmeyi amaçlamaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm fare bakımı ve deney protokolleri Tianjin Tıp Üniversitesi Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (Doc. No: TMUa-MEC 2022016).

1. Ekipman ve çözeltilerin hazırlanması

  1. Cerrahi aletleri (makas, forseps ve neşter sapları) hücre izolasyonundan en az 1 gün önce otoklavlayarak sterilize edin.
  2. Hücre izolasyonundan en az 1 gün önce, Tablo 1'de listelenen reaktifleri kullanarak Kolanjiyosit Kültür Ortamını hazırlayın. Kolanjiyosit Kültür Ortamını 0.22 μm'lik bir filtreden süzerek sterilize edin.
  3. Hücre izolasyonundan en az 1 gün önce, fare karaciğer perfüzyonu için Tablo 2'de listelenen reaktifleri kullanarak Çözelti A ve Çözelti B'yi hazırlayın. Çözelti A ve Çözelti B'yi 0.22 μm'lik bir filtreden otoklavlayarak veya filtreleyerek sterilize edin ve hafifçe karıştırarak steril NaOH kullanarak pH'larını 7.35'e ayarlayın.
    NOT: Kolanjiyosit Kültür Ortamı, Çözelti A ve Çözelti B, en az bir ay boyunca 4 ° C'de saklanabilir.
  4. Deneye başlamadan önce, Çözelti B'ye kollajenaz II tozu ekleyin ve 0.5 mg / mL'lik bir nihai konsantrasyon elde etmek için hafifçe karıştırın. Kullanmadan önce hem Çözelti A'yı hem de Çözelti B'yi 37 °C'lik bir su banyosunda önceden ısıtın.
  5. Deneye başlamadan hemen önce, steril PBS ile doldurulmuş 6 cm'lik tabaklar hazırlayın ve işlem sırasında soğuk tutmak için buzun üzerine koyun.

2. Karaciğer dokusu sindirim perfüzyonu

  1. Aşırı dozda izofluran inhalasyonu kullanarak fareyi uyuşturun. Anestezi uygulanmış fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve prosedürü kolaylaştırmak için yapışkan bantla sabitleyin.
  2. Karnı %75 etanol ile sterilize ettikten sonra farenin karın boşluğunu açın ve ardından dövülmüş bir iğne kullanarak inferior vena kavanın etrafına bir düğüm atın. 20 mL'lik bir şırınga kullanarak 24 G'lik bir intravenöz kateteri Çözelti A ile durulayın.
  3. İntravenöz kateteri slipknot'un altındaki inferior vena kavaya yerleştirin, slipknot'u sabitleyin ve kateteri yapışkan bantla yerine sabitleyin.
  4. Karaciğeri 50 mL Çözelti A ile 20 mL'lik bir şırınga kullanarak inferior vena kavadan perfüze edin ve perfüzyon solüsyonunu boşaltmak için hepatik portal veni kesin. Perfüzyon hızını 10 mL / dk'da tutun.
  5. Peristaltik bir pompa kullanarak 3.5 mL / dk'lık bir akış hızında kollajenaz II içeren 30 mL Çözelti B ile perfüzyona devam edin.
    NOT: Bu adım, karaciğer dokusunun sindirimi için tasarlanmıştır.
  6. Başarılı bir şekilde perfüze edilmiş karaciğer dokusunu çıkarın ve soğuk steril PBS ile doldurulmuş 6 cm'lik bir tabağa koyun.

3. Kolanjiyosit izolasyonu

NOT: Normal farelerde kolanjiyosit sayısı nispeten düşük olduğundan, işlem için 2-6 fareden oluşan bir grup kullanılması önerilir. Bununla birlikte, PLD gibi anormal kolanjiyosit proliferasyonuna sahip fare hastalığı modelleri için, tek bir fareden alınan kolanjiyositler yeterlidir. Aksi belirtilmedikçe, numunelerin ve reaktiflerin her zaman buz üzerinde tutulması gerekir ve tüm prosedürler bir biyolojik güvenlik kabininde gerçekleştirilmelidir.

  1. Kavisli forseps kullanarak karaciğer dokusunu mekanik olarak ayırın ve sallayın. Daha sonra, yapışmamış parankimal hücreleri çıkarmak ve sağlam bir safra ağacı bırakmak için diseksiyon mikroskobu altında mikrodiseksiyon yapın. Bir sonraki adıma geçmeden önce safra kesesi dokusunu çıkarın.
    Dokuyu 2 kez PBS ile yıkayın.
  2. Safra ağacını cerrahi bir bıçak kullanarak ince bir şekilde kıyın ve fare başına 3 mL Sindirim Solüsyonunda (Tablo 3) 37 ° C'de 60 dakika boyunca çalkalayarak (90 rpm) sindirin. 30 dakika işaretinde, iyice karıştırmak için karışımı bir pipet ucu kullanarak nazikçe pipetleyin.
    NOT: Sindirim Solüsyonu kullanılmadan önce taze olarak hazırlanmalıdır.
  3. Hücre süspansiyonunu 70 μm'lik bir hücre süzgecinden geçirin. Hücre süspansiyonunu süzgeçten hafifçe bastırmak için 5 mL veya 10 mL'lik bir şırınganın pistonunu kullanın. Süzgeci PBS ile yıkayın.
  4. Hücre süspansiyonunu 500 ° C'de 5 dakika boyunca 4 x g'da santrifüjleyin. Hücreleri RPMI ortamı ile 3x yıkayın.
  5. 500 ° C'de 5 dakika boyunca 4 x g'da tekrar santrifüjleyin.
  6. Süpernatanı atın ve hücreleri 40 U / mL DNaz I içeren 900 μL RPMI ortamında yeniden süspanse edin ve 2 μg anti-EpCAM antikoru ekleyin ve süspansiyonu bir döndürücü (20 rpm) üzerinde 4 ° C'de 45 dakika inkübe edin.
  7. 500 x g'da 4 °C'de 5 dakika santrifüjleyin.
  8. Süpernatanı atın ve hücreleri 40 U / mL DNaz I içeren 1 mL RPMI ortamında yeniden süspanse edin. Protein G boncuklarını 1 mL RPMI ortamı ile önceden yıkayın. Hücre süspansiyonuna 20 μL Protein G boncukları ekleyin ve 4 ° C'de 45 dakika daha rotasyonla (20 rpm) inkübe edin.
    NOT: Anti-EpCAM antikoru, hücre süspansiyonunu eklemeden önce bir boncuk-antikor kompleksi oluşturmak için Protein G boncukları ile önceden inkübe edilebilir.
  9. Manyetik bir ayırıcı kullanarak hücreleri PBS ile 3 kez yıkayın.
  10. Bir hemositometrede Tripan Mavisi boyamayı (% 0.04, 3 dakika) kullanarak hücre sayımı ve hücre canlılığı değerlendirmesi yapın.
    NOT: Boncukların kolanjiyositlerden çıkarılmasına gerek yoktur, kültür başladığında doğal olarak ayrılırlar ve hücre kültürüne müdahale etmezler.

4. Kolanjiyositler kültürü

NOT: Kolanjiyosit kültüründen önce taze tip I sıçan kuyruğu kollajen kaplı hücre kültürü kapları hazırlayın. Tüm reaktifleri buz üzerinde önceden soğutun.

  1. Üreticinin talimatlarına göre, 1x PBS'de 1 mg / mL tip I sıçan kuyruğu kollajeninin nihai konsantrasyonunu elde etmek için steril ddH2O, 10x PBS, 1 N NaOH ve tip I sıçan kuyruğu kollajenini karıştırın. Hücre kültürü kaplarını karışımla eşit şekilde kaplayın ve kolajenin katılaşmasını sağlamak için bulaşıkları 30 dakika boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C'de bir inkübatöre yerleştirin.
  2. Tip I sıçan kuyruğu kollajen kaplı hücre kültürü kaplarını önceden ısıtılmış PBS ile yıkayın.
  3. Kolanjiyositleri önceden ısıtılmış Kolanjiyosit Kültür Ortamında yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonunu 1 mg / mL tip I sıçan kuyruğu kollajen kaplı hücre kültürü kaplarına tohumlayın ve 37 ° C'de% 5 CO2 ile inkübe edin. Ortamı her 2 günde bir değiştirin.

5. Kolanjiyositlerin pasajı ve kriyoprezervasyonu

  1. Kolanjiyositleri PBS ile iki kez yıkayın, ardından hücreleri 37 ° C'de% 0.25 tripsin içinde 5-10 dakika inkübe edin.
  2. Tripsini nötralize etmek için eşit hacimde Kolanjiyosit Kültür Ortamı ekleyin, ardından 5 dakika boyunca 500 x g'da santrifüjleyin.
  3. Tip I sıçan kuyruğu kollajen kaplı hücre kültürü kaplarını Adım 4.1'de açıklandığı gibi hazırlayın.
  4. 4.2 ve 4.3 adımlarını izleyin.
  5. Kriyoprezervasyon gerekiyorsa, kolanjiyositleri Depolama Ortamında (9:1 FBS: DMSO) yeniden süspanse edin ve -80 °C'lik bir dondurucuda veya sıvı nitrojende saklayın. Hücreleri ileride kullanmak üzere gerektiği gibi çözün.

6. Kolanjiyosit doğrulaması

NOT: Kolanjiyositlerin saflığı, kolanjiyosit markörü CK19 için boyama ile değerlendirildi.

  1. Kolanjiyositleri 2 kez PBS ile yıkayın, ardından hücreleri 15 dakika boyunca% 4 paraformaldehit içinde sabitleyin.
  2. Kolanjiyositleri PBS ile yıkayın, ardından hücrelere 8 dakika boyunca% 1 Triton X-100 ile geçirgen hale getirin.
  3. Kolanjiyositleri PBS ile yıkayın, ardından hücreleri 1 saat boyunca% 5 BSA'da bloke edin.
  4. Kolanjiyositleri PBS ile yıkayın, daha sonra hücreleri gece boyunca 4 ° C'de CK19'a karşı birincil antikor (% 2 BSA ile 1:12 seyreltme) ile inkübe edin.
  5. Kolanjiyositleri 2x PBS ile yıkayın, daha sonra hücreleri eşek anti-sıçan Alexa Fluor 488 ikincil antikoru (PBS ile 1: 1.000 seyreltme) ile oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin.
  6. Kolanjiyositleri PBS ile yıkayın, 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol ile 15 dakika boyayın ve mikroskop altında gözlemleyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Kolanjiyositleri izole etmek için kullanılan iki aşamalı sindirim işlemi için iş akışı şeması Şekil 1'de gösterilmektedir. Tüm prosedür ~ 5 saat sürer. İlk olarak, karaciğerin soluklaşmasıyla belirtildiği gibi, karaciğer inferior vena kava yoluyla Çözelti A ile perfüze edilir. Karaciğer daha sonra doku sindirimini başlatmak için kollajenaz II içeren Çözelti B ile perfüze edilir. Bu ilk sindirim adımı zamana duyarlıdır ve başarılı sindirim, dokunun gözle görül...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu protokol, iki aşamalı bir sindirim işlemi kullanarak farelerden yüksek saflıkta primer kolanjiyositleri izole etmek için ayrıntılı bir yöntem sağlar ve kolanjiyopatilerin altında yatan moleküler mekanizmaların incelenmesini sağlar. Kolanjiyositlerin başarılı bir şekilde izole edilmesini sağlamak için birkaç kritik adım gereklidir.

İlk kritik adım, Çözelti A ve Çözelti B'yi kullanarak etkili perfüzyon ve sindirimin sağlanmasıdır. Çözelti A ile başarılı perfü...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Teşekkürler

Bu çalışma, Tianjin Belediye Eğitim Komisyonu'ndan (2022ZD054'ten NZ'ye) alınan hibelerle desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0.22 μ m filtrePALL4612
%0.25 TripsinGibco25200-056
10 mL şırıngaKONSMED10 mL 1.2*30TWLB
20 mL şırıngaKONSMED20 mL 1.2*30TWLB
24 G intravenöz kateterWEGO24GX19  mm/YG
3,3',5-triiyodo-L-tironinSigmaT55161.7 mg/mL stok
%4 paraformaldehitSolarbioP1110
5 mL şırıngaKONSMED5 mL 0.7*30TWLB
6 cm tabaklarThermo Scientific150462
70 & mikro; m hücre süzgeciCorning352350
anti-CK19 antikoruDSHBTROMA-III
anti-EpCAM antikoruDSHBG8.8
BSASolarbioA8020
CaCl2Sangon BiotechA5013302 M stok
Kimyasal olarak tanımlanmış lipid konsantresi (100x)Gibco11905-031
Kollajenaz IIWorthingtonLS004176
Kollajenaz XISigmaC76573.2 mg / mL stok
DeksametazonSigmaD175610 mg / mL stok
Diseksiyon MikroskobuLeicaEZ4
DMEM / F12 (1: 1)VivaCell biyolojik bilimlerC3130-0500
DMSOSigmaD2650
DNase ISigmaD451310 U/μ L stok
Eşek anti-sıçan Alexa Fluor 488 ikincil antikorInvitrogenA21208
EGTASolarbioE805050 mM (PH = 8) stok
Epidermal büyüme faktörü (1 mg / mL)SigmaSRP3196
EtanolaminSigmaE9508
Fetal Sığır SerumuVivaCell biyolojik bilimlerC04001-500
ForskolinSigmaF391720 mM stok
Gentamisin / amfoterisin çözeltisi (500x)GibcoR01510
HemositometreQIUJINGXB. K.25.
HEPESSigmaH4034
HyaluronidazSigmaH350610 mg / mL stok
İnsülin-transferrin-selenyum (100x)Gibco41400045
İzofluranRWDR510-22-10
KClSangon BiotechA100395
L-Glutamin (200 mM)SigmaG7513
Manyetik ayırıcıPromegaZ5342
MEM esansiyel olmayan amino asitler (100x)Gibco11140050
MEM vitamin çözeltisi (100x)Gibco11120052
MgCl2Sangon BiotechA1002881.5 M stok
Na Pirüvat  (100 mM)Gibco11360070
Na2HPO4Sangon BiotechA600487
NaOHSangon BiotechA6206171 N stok
PBSVivaCell biyolojik bilimlerC3580-0500
PBSSolarbioP1010
Penisilin-Streptomisin (100x)Gibco15140-122
Peristaltik pompaBaodingRongbaiYZ1515PPS
Protein G boncuklarıInvitrogen10004D
RotatorKylin-BellQB-528
RPMIVivaCell biyolojik bilimlerC3010-0500
Soya fasulyesi tripsin inhibitörüSigmaT652210 mg / mL stok
Dövülmüş iğneJinhuan MedicalHM601
Triton X-100SolarbioT8200
Tripan mavisiSigmaT614610 mg / mL stok
Tip I sıçan kuyruğu kollajenBD354236
NaCl Sangon Biotech A610476

Kaynaklar

  1. Wang, Z., et al. Human cholangiocytes form a polarized and functional bile duct on hollow fiber membranes. Front Bioeng Biotechnol. 10, 868857(2022).
  2. Li, P., et al. Three-dimensional human bile duct formation from chemically induced human liver progenitor cells. Front Bioeng Biotechnol. 11, 1249769(2023).
  3. Fabris, L., et al. Pathobiology of inherited biliary diseases: a roadmap to understand acquired liver diseases. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (8), 497-511 (2019).
  4. Jalan-Sakrikar, N., et al. Central role for cholangiocyte pathobiology in cholestatic liver diseases. Hepatology. , (2024).
  5. Ilyas, S. I., Gores, G. J. Pathogenesis, diagnosis, and management of cholangiocarcinoma. Gastroenterology. 145 (6), 1215-1229 (2013).
  6. Perugorria, M. J., et al. Polycystic liver diseases: advanced insights into the molecular mechanisms. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 11 (12), 750-761 (2014).
  7. Masyuk, T. V., Masyuk, A. I., LaRusso, N. F. Polycystic liver disease: Advances in understanding and treatment. Annu Rev Pathol. 17, 251-269 (2022).
  8. Ji, R., et al. Multi-omics profiling of cholangiocytes reveals sex-specific chromatin state dynamics during hepatic cystogenesis in polycystic liver disease. J Hepatol. 78 (4), 754-769 (2023).
  9. Tabibian, J. H., et al. Characterization of cultured cholangiocytes isolated from livers of patients with primary sclerosing cholangitis. Lab Invest. 94 (10), 1126-1133 (2014).
  10. Muff, M. A., et al. Development and characterization of a cholangiocyte cell line from the PCK rat, an animal model of autosomal recessive polycystic kidney disease. Lab Invest. 86 (9), 940-950 (2006).
  11. Nagaya, M., Katsuta, H., Kaneto, H., Bonner-Weir, S., Weir, G. C. Adult mouse intrahepatic biliary epithelial cells induced in vitro to become insulin-producing cells. J Endocrinol. 201 (1), 37-47 (2009).
  12. Karjoo, S., Wells, R. G. Isolation of neonatal extrahepatic cholangiocytes. J Vis Exp. (88), e51621(2014).
  13. Kudira, R., et al. Isolation and culturing primary chaolangiocytes from mouse liver. Bio Protoc. 11 (20), e4192(2021).
  14. Ueno, Y., et al. Evaluation of differential gene expression by microarray analysis in small and large cholangiocytes isolated from normal mice. Liver Int. 23 (6), 449-459 (2003).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Fare Karaciğer İzolasyonuİmmünomanyetik İzolasyonSafra AğacıHücre KültürüSitokeratin-19EpCAM AntikoruManyetik Ayırıcı

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.