Bu makale, transgenik Solanum nigrum üretmek için Agrobacterium tumefaciens'in aracılık ettiği genetik dönüşüm yönteminin ayrıntılı bir protokolünü sunmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bu makale, transgenik Solanum nigrum üretmek için Agrobacterium tumefaciens'in aracılık ettiği genetik dönüşüm yönteminin ayrıntılı bir protokolünü sunmaktadır.
Solanum nigrum, patates ve domatesin yetim bir solanlı akrabasıdır ve taze meyvesi besleyici ve lezzetli bir meyvedir. S. nigrum bitkisinin tamamı ilaç olarak kullanılabilir. Bununla birlikte, vahşi S. nigrum bazı istenmeyen özellikleri barındırır. Neyse ki, genetik mühendisliği teknikleri, özellikle CRISPR / Cas9 gibi gen düzenleme teknolojileri, bu eksiklikleri gidererek S. nigrum'u hızla geliştirmek için değerli fırsatlar sunmaktadır. Çoğu bitkide, gen düzenleme teknolojisi yoluyla bitki ıslahı, Agrobacterium tumefaciens aracılı genetik dönüşüm yoluyla sağlanır. Bu yazıda S. nigrum'da A. tumefaciens'in aracılık ettiği genetik transformasyon protokolleri ayrıntılı olarak anlatılmıştır. S. nigrum fidelerinin kotiledonları ve hipokotilleri, genetik transformasyon için eksplant olarak kullanılmıştır. S. nigrum kanamisine dirençli olduğundan, DsRed geni transgenik bitkileri tanımlamak için görsel bir belirteç olarak kullanılmıştır. S. nigrum'un genetik transformasyonu bu operasyon protokollerine göre verimli bir şekilde tamamlanabilir. T1 transgenik bitkilerin tespiti, PCR tanımlamasına gerek kalmadan kırmızı floresan yayıp yaymadıklarına göre doğrudan tanımlanabilir.
Solanum nigrum (siyah itüzümü olarak bilinir, 2n = 6x = 72), patates ve domates1'in solanlı bir akrabasıdır. Meyve, olgunlaştıktan sonra siyaha dönen küresel bir meyvedir. Taze meyve besleyici ve lezzetli bir meyvedir. S. nigrum'un tüm bitkisi, kan stazını dağıtma, şişliği azaltma, ısıyı temizleme ve detoksifiye etme etkileri ile ilaç olarak kullanılabilir. S. nigrum, yaygın bir kolesterol öncüsünden iki farklı özel metabolit sınıfı sentezler: yapraklarındaki steroidal saponinler ve meyvelerindeki steroidal glikoalkaloidler (SGA'lar). S. nigrum'dan türetilen steroida....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
1. Aseptik fide yetiştiriciliği
NOT: Aşağıdaki adımlar süper temiz bir tezgah üzerinde gerçekleştirilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Transgenik S. nigrum üretmek için Agrobacterium tumefaciens'in aracılık ettiği genetik dönüşüm.
S. nigrum fidelerinin kotiledonlarını ve hipokotillerini A. tumefaciens ile enfekte ettikten sonra, DsRed'in raportör gen olarak kullanılması nedeniyle Agrobacterium enfeksiyonunun başarılı olup olmadığını belirleyebildik. Enfeksiyondan 3-4 hafta sonra y.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Şimdiye kadar, A. tumefaciens'in aracılık ettiği S. nigrum için genetik transformasyon yöntemleri farklı laboratuvarlarda kurulmuştur8,9,10,11. Bu transformasyon yöntemlerinin çoğu, 8,9,10,11 seçim maddesi olarak kan.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Bu çalışma, Liaocheng Üniversitesi (318012028) Araştırma Fonu ve Shandong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (ZR2020MC034) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 2X SanTaq PCR Master Karışımı (Mavi Boya ile) | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | B532061 | 2X SanTaq PCR Karışımı, MgCl?, dNTP'ler, Taq DNA Polimeraz, PCR tamponu, yükleme boyası ve PCR arttırıcı içerir. |
| 6-BA | Sangon Biyoteknoloji (Şangay) Co., Ltd. | C14819266 | Yapay sitokininler |
| Agar | Tianjin Damao Kimyasal Reaktif Ortaklığı Kurumsal (Sınırlı Ortaklık) | CAS NO: 9002-18-0 | Katılar |
| AS | Sangon Biotech (Şangay) Co., Ltd. | K914BA0002 | 'nin verimli ekspresyonunu indükleyin |
| . | Antibiyotik | ||
| Cef | Sangon Biotech (Şangay) Co., Ltd. | I526BA0010 | Antibiyotik |
| gibberellin | Sangon Biotech (Şangay) Co., Ltd. | K514BA0009 | Tohum çimlenmesini teşvik eder |
| kanamisin | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | I614BA0013 | Antibiyotik |
| LB ortamı | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | B540113 | Bakterileri büyütün |
| MicroPulser (Gene Pulser Xcell) | Bio-Rad, US | 617BR1 06783 | Gene Pulser Xcell |
| MS katı orta | phytotech Co., Ltd., US | HCA0519228A | Murashige & Vitaminler ile Skoog Bazal Ortam, M519 |
| plastik kutu | LiaoSu, Çin | T909H | Bitki dikim kutusu |
| rifampisin | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | S180305 | Antibiyotik |
| sükroz | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | CAS NO: 57-50-1 & nbsp; | Karbon kaynağı olarak |
| Tanon-5200Multi makine | Tanon Co., Ltd., Çin | 5200Multi | Liaocheng |
| 'de toplanan | yabani Solanum nigrum | ||
| . | J921BA0014 | Bitki büyüme düzenleyicileri |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında