Yöntem makalesi

Gelişmekte Olan ve Olgun Arabidopsis Tohumlarında Endosperm Hücre Tabakasının Mikroskobik Analizi için Sağlam Dokunun Hazırlanması

DOI:

10.3791/68217

⸱

16 Mayıs 2025

 ,  , 
1Department of Life Sciences, School of Agriculture, Meiji University, 2Organization for the Strategic Coordination of Research and Intellectual Properties, Meiji University, 3Plant Functional Biotechnology, Agro-Biotechnology Research Center, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, The University of Tokyo

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, Arabidopsis thaliana tohumlarında endosperm hücre tabakasının sağlam örneklerinin hazırlanmasını açıklar. Yöntem, yalnızca enjeksiyon iğnesi ve hassas forseps gibi yaygın laboratuvar ekipmanı gerektirir ve hem gelişmekte olan hem de olgun tohumlardaki endosperm hücrelerinin yüksek çözünürlüklü floresan canlı hücre görüntülemesini sağlar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Arabidopsis tohumlarında, embriyo ile testa arasında bulunan tek bir canlı hücre tabakası olan endosperm, tohum olgunlaşması, uyku hali ve çimlenmenin düzenlenmesinde kritik bir rol oynar. Sağlam endosperm hücrelerinin mikroskobik analizi, endospermin hücresel ve moleküler düzeydeki fizyolojik fonksiyonlarını anlamak için gereklidir. Bununla birlikte, Arabidopsis tohumlarının küçük boyutu ve endosperm hücre tabakasının testisin altındaki konumu nedeniyle numune hazırlama zor olmuştur. Bu makale, hem gelişmekte olan hem de olgun tohumlarda mikroskobik gözlem ve analiz için uygun bozulmamış endosperm hücre tabakası örneklerinin hazırlanmasını detaylandırmaktadır. Bu yöntem, fiksasyon veya kesit alma gerektirmeden geniş alanların ve çok sayıda sağlam endosperm hücresinin gözlemlenmesini sağlar. Ek olarak, protokol yalnızca enjeksiyon iğneleri, hassas forsepsler ve stereo mikroskoplar gibi standart laboratuvar ekipmanlarını kullanır. Bu yaklaşım, sağlam endosperm hücrelerinde yeşil floresan proteini (GFP) gibi floresan sinyallerin yüksek çözünürlüklü canlı hücre görüntülemesini başarıyla sağlar. Bu yöntem, farklı Arabidopsis mutantlarının endosperm hücrelerinde hücre içi lokalizasyonun ve çeşitli proteinlerin hareketinin yanı sıra organellerin morfolojisinin gözlemlenmesine izin verir. Bu protokol, yeni endosperm fonksiyonlarının aydınlatılmasına katkıda bulunur ve bu esansiyel dokunun hücresel ve moleküler çalışma potansiyelini genişletir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bitkiler sapsız organizmalar olduğundan, tohum çimlenmesi kaderlerini belirleyen çok önemli bir olaydır. Çimlenme kararı, birincil tohum uyku hali seviyeleri, sıcaklık, ışık yoğunluğu ve dalga boyu ve nitrojen konsantrasyonu 1,2,3,4,5,6 gibi hem iç hem de çevresel faktörler tarafından sıkı bir şekilde düzenlenir. Tohumlar, birden fazla doku tipinden oluşan karmaşık yapılara sahiptir7. Arabidopsis kuru tohumlarında, bir fide haline gelen embriyo, tek bir endosperm tabakası ve en dış tabakalar olan testa ile çevrilidir. Testa, çok sayıda ölü hücre katmanından oluşurken, embriyo ve endosperm kuru tohumlarda bile canlı kalır. Endosperm genellikle embriyo büyümesi için besin sağlayan bir depolama dokusu olarak kabul edilir ve testa ile birlikte kök çıkıntısına karşı mekanik direnç sağlar 8,9,10,11,12,13.

Son zamanlarda yapılan birkaç çalışma, endospermin optimal tohum çimlenmesinin düzenlenmesinde önemli bir rol oynadığını göstermiştir 14,15,16,17. Örneğin, endosperm hücrelerindeki fotoreseptör fitokrom B (PHYB), çimlenme tepkilerini düzenleyerek kırmızı ( R ) veya uzak kırmızı ( FR) ışığı algılar15 . Endosperm aynı zamanda sıcaklığı algılayan bir doku olarak da işlev görür ve yüksek sıcaklıklarda çimlenme tepkilerini baskılar16. Endospermin kalite kontrolü, özellikle uzun süreli depolanmış tohumlarda optimal tohum çimlenmesi için kritik öneme sahiptir17.

Endospermin fizyolojik fonksiyonlarını daha da aydınlatmak için canlı hücre görüntüleme artık gereklidir. Floresan etiketli proteinleri eksprese eden sağlam endosperm hücrelerinin mikroskobik analizi, endospermin tohum çimlenmesini düzenlediği moleküler mekanizmaların araştırılmasına olanak tanır. Bununla birlikte, sağlam endosperm hücrelerini mikroskobik gözlem için hazırlamak, özellikle Arabidopsis tohumlarında zordur. Tohumların çapı yaklaşık 0,4 mm'dir ve endosperm, embriyo ile testa arasında bulunan tek hücreli bir tabakadır ve hassas manipülasyonu zorlaştırır. Sonuç olarak, önemli fizyolojik rollerine rağmen, endosperm nadiren canlı hücre görüntüleme kullanılarak gözlenmiştir.

Bu makale, hem gelişmekte olan hem de olgun tohumlarda canlı hücre görüntülemeye uygun sağlam endosperm hücre tabakası örneklerinin hızlı bir şekilde hazırlanması için bir protokol sunmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, canlı endosperm hücre tabakası örneklerinin hazırlanması için biri gelişmekte olan tohumlar ve diğeri olgun tohumlar için olmak üzere iki farklı prosedür oluşturulmuştur. Testanın sağlamlığına bağlı olarak biraz farklı yaklaşımlar gereklidir. Kullanılan reaktiflerin ve ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Gelişmekte olan tohumlardan sağlam endosperm örneklerinin hazırlanması

  1. Siliklerin toplanması
    1. Arabidopsis bitkilerini çiçek açana kadar toprakta veya taşyünü üzerinde büyütün.
    2. Tamamen açılmış çiçekleri renkli ipliklerle işaretleyin (çiçeklenmeden 0 gün sonra, 0 DAF).
      NOT: Çiçekleri işaretlemek için yeşil, sarı veya kahverengi iplikler kullanmaktan kaçının, çünkü bu renkleri büyüyen veya olgun bitkilerden ve siliklerden ayırt etmek zordur.
    3. Pedicelde ( Şekil 1(1)'de gösterilmiştir) işaretli gelişmekte olan silislikleri kesin ve bunları 1,5 mL'lik tüplerde toplayın.
      NOT: 12-16 DAF arası geliştirilen silisler, bu protokol kullanılarak hazırlanmak için uygundur.
  2. Gelişmekte olan tohumların diseksiyonu
    NOT: Numunelerin kurumasını önlemek için ıslak filtre kağıdı üzerinde aşağıdaki adımlar gerçekleştirilmelidir. Manipülasyonlar stereo mikroskop altında yapılmalıdır.
    1. İki forseps kullanarak bir valfi ( Şekil 1(2)'de gösterilmiştir) replumdan ( Şekil 1(1)'de gösterilmiştir) ayırın: biri tutmak için kalın uçlara ve diğeri yırtmak için keskin uçlara sahip).
    2. Tohumlara zarar vermemek için uçları kapalıyken forseps kullanarak silislerden gelişmekte olan tohumları nazikçe toplayın (Şekil 1(2)).
    3. Tohumu çarpmadan forseps ile tutarak embriyoyu çevreleyen testa ve endosperm üzerinde enjeksiyon iğnesi (27 G, 0.40 mm × 19 mm) büyüklüğünde bir iz açın (Şekil 1(3)).
      NOT: Yara izi oluşturmak için en uygun yer, kotiledonların ve kökün birleştiği yerdir.
    4. Tohumu forseps ile sıkıştırarak embriyoyu dışarı itin (Şekil 1(4)). Testa ve endospermden oluşan boş tohum zarfını ezmeyin ve yuvarlak şeklini korumaya çalışın.
    5. Enjeksiyon iğnesini yara izindeki boş tohum zarfına içten dışa doğru delerek yerleştirin (Şekil 1(5)).
    6. İğneyi yerinde tutun, uçları kapalıyken forseps kullanarak testanın yüzeyini çizin ve boş tohum zarfının bir tarafını açılmasına izin verecek şekilde kesin (Şekil 1(6)).
    7. Boş tohum zarfını keskin uçlu forseps kullanarak bir tabaka halinde açın (Şekil 1(7)). Örnek şimdi endosperm ve testa katmanlarından oluşan iki katmanlı bir tabaka olarak izole edilmelidir (Şekil 1(8)).
      NOT: Aşağıdaki 3. adımda montaj ortamı olarak su kullanıldığında numune kıvrılma eğilimindeyse, tabaka biçimindeki numuneyi iki parçaya bölün. Yaklaşık 18 DAF'ta siliklerden hasat edilen tohumlar (bu aşamada, testa kahverengidir ancak henüz tamamen kuru değildir) bu protokol kullanılarak da işlenebilir, ancak tohumların hazırlanmadan önce birkaç dakika emilmesi gerekir.

2. Olgun tohumlardan sağlam endosperm örneklerinin hazırlanması

  1. Olgun tohumların emilmesi
    1. Kuru Arabidopsis tohumları içeren 1,5 mL'lik bir tüpe 1 mL çift damıtılmış su ekleyin.
    2. Tohumları oda sıcaklığında en az 40 dakika emilmiş halde tutun (Şekil 2(1)).
      NOT: Kuru tohumların ve tohumların emiledikten sonraki 40 dakika içinde testa ve endospermde yara izi bırakması ve 2.2.1 ve 2.2.2 adımlarında boş tohum zarfına zarar vermeden embriyoyu tohumun içinden çıkarması zordur, oysa daha uzun bir emme süresi manipülasyonu kolaylaştırır.
    3. Emilmiş tohumları ıslak filtre kağıdına aktarmak için 1000 μL'lik bir mikropipet kullanın.
  2. Olgun tohumların diseksiyonu
    NOT: Numunelerin kurumasını önlemek için ıslak filtre kağıdı üzerinde aşağıdaki adımlar gerçekleştirilmelidir. Manipülasyonlar stereo mikroskop altında yapılmalıdır.
    1. Tohumu çarpmadan forseps ile tutarak embriyoyu saran testa ve endosperm üzerinde yaklaşık 0.2 mm büyüklüğünde bir iz enjeksiyon iğnesi kullanarak açın (Şekil 2(2)).
    2. Tohumu forseps ile sıkıştırarak embriyoyu dışarı itin (Şekil 2(3)). Testa ve endospermi içeren boş tohum zarfını ezmeyin. Yuvarlak şeklini korumaya çalışın.
    3. Boş tohum zarfının üst ve alt taraflarını bir silindir haline getirmek için bir enjeksiyon iğnesi ile kesin (Şekil 2(4)).
    4. Silindirik şekilli boş tohum zarfını iki parçaya ayırmak için merkezi ekseni boyunca kesin (Şekil 2(5)). Örnekler, endosperm tabakası ve testa tabakasından oluşan iki tabakalı tabakalar halinde izole edilmelidir (Şekil 2(6)).

3. Mikroskobik gözlem

  1. Endosperm örneklerini bir cam slayt üzerine tabaka halinde yerleştirin ve bunları su veya perflorodekalin (PFD) içine monte edin.
    NOT: Numune ile lamel arasında hava kabarcıkları kalırsa, yapraklar18,19 gibi hava cepleri içeren numunelerin görüntülenmesi için özellikle yararlı olduğu bildirilen perflorodekalin (PFD) faydalı olacaktır. PFD'nin en düşük yüzey gerilimine sahip olduğu bilinmektedir ve bu da numune yüzeyindeki hava boşluklarını kolayca doldurmasına olanak tanır. Bununla birlikte, hızlandırılmış görüntüleme için, hücresel sıvılığı korumak için olgun tohumlardaki su içeriğinin bol olması gerektiğinden, montaj ortamı olarak suyun kullanılması önerilir.
  2. Numunenin üzerine nazikçe bir lamel yerleştirin. Endosperm tabakasının lamel ile baktığından emin olun.
    NOT: Numunenin ve montaj ortamının kurumasını önlemek için lamel kenarlarını kapatmak için oje veya gres kullanılabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil 1'de gösterilen protokol kullanılarak, endosperm örnekleri, 14 DAF'ta siliklerden hasat edilen gelişmekte olan tohumlardan hazırlandı (bu aşamada, testa hala yeşildir). Geniş bir alanda çok sayıda endosperm hücresi ve bunların hücre içi yapıları gözlendi (Şekil 3A). Bu deneyde, C-terminalinde (PHYB-GFP) GFP ile kaynaşmış PHYB eksprese eden tohumlar kullanılmıştır. PHYB'nin kırmızı ışıkla aktivasyon üzerine çekirdeğe yer değiştirdiği ve tohum çimlenmesinde ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Endospermin tohum çimlenmesindeki rolleri, gen ekspresyon analizi ve lipitlerin ve fitohormonların miktar tayinigibi ayrılmış tohum dokuları kullanılarak yapılan genetik ve biyokimyasal analizlerle ortaya çıkarılmıştır 9,14,25,26,27. Boş tohum zarfını (endosperm ve testa) farklı Arabidopsis mutantlarından izole edilen...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden herhangi bir mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kyoto Üniversitesi'nden Dr. Matsushita ve Oka'ya, 35S promotörü tarafından yönlendirilen phyB mutantını eksprese eden PHYB-GFP'yi sağladıkları için teşekkür ederiz. Bu çalışma kısmen Yenilikçi Alanlarda Bilimsel Araştırma için Yardım Hibesi, Önerilen Araştırma Alanında Araştırma (19H05713 - K.Y.) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1.5 mL Mikrosantrifüj TüpleriWatoson Bio Lab131-815C
Lamel (18 x 18 mm)Matsunami Glass Ind.,Ltd.
DDWFiltre Kağıdını monte etmek için su
No.526 (400 x 400 mm)ADVANTEC VIETNAM CO., LTD.02453400 
Genki-kun Seru Senyo yodo kopu N-150 (55 L)Katakura & Co-op Agri CorporationBitki Büyümesi için Topraklar
Cam slayt (26mm x 76 mm)Matsunami Glass Ind.,Ltd.S1215
Grodan AO 36 x 36 x 40 mm KüplerGrodanTaşyünü
İris  MakasPremium Plus  Japonya Co., Ltd.FC-0212
Kuyumcu forsepsi, Dumont No. 5 (4 1/4 inç)DumontF6521Leica Application
Suite X (LAS X) Sterallis 8 Leica
Yazılımı  Mikroskoplar için Daldırma YağıÇok Düşük Otofloresan Daldırma YağıTHMOIL-10LF
LIOR hassas forseps 110mm & nbsp; SL-14KENIS Ltd. Şti.KN33450438Tutmak için Forseps 
NAIL HOLICKOSEOje
İğneleri 27G 3/4 (19 mm) RB Misawa Medikal Sanayi A.Ş.
Nichipet Air 1000 uLNichiryo00-NAR-1000A 1000 & mikro kesmek için bir Enjeksiyon İğnesi; L Mikropipet
PerflorodekalinAPOLLO SCIENTIFICPC5960monte etmek için reaktifler
TOKYO RIKAKIKAI CO., LTD.
Schappe Bükülmüş #60Fujix Co., Ltd.İplik
SPINKOTE Yağlayıcı 2 ozBECKMAN COULTER306812Gres
Sterallis 8LeicaKonfokal Lazer Tarama Mikroskobu
Stereomikroskop Stemi 305 kam WCarl Zeiss NTS Ltd.491903-0017-000
Beyaz ışık LEDPANASONICFL40SSW/37
C218181 Bitki Büyümesi için Microsystems  için Leica Kırmızı ışık/uzak kırmızı ışık LED panelini 10147599

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bentsink, L., Jowett, J., Hanhart, J. C., Koornneef, M. Cloning of DOG1, a quantitative trait locus controlling seed dormancy in Arabidopsis. Proc Natl Acad Sci USA. 103 (45), 17042-17047 (2006).
  2. Toh, S., et al. High temperature-induced abscisic acid biosynthesis and its role in the inhibition of gibberellin action in Arabidopsis seeds. Plant Physiol. 146 (3), 1368-1385 (2008).
  3. Seo, M., Nambara, E., Choi, G., Yamaguchi, S. Interaction of light and hormone signals in germinating seeds. Plant Mol Biol. 69 (4), 463-472 (2009).
  4. Shinomura, T., et al. Action spectra for phytochrome A- and B-specific photoinduction of seed germination in Arabidopsis thaliana. Proc Natl Acad Sci USA. 93 (15), 8129-8133 (1996).
  5. Liu, Y., et al. Nitric oxide-induced rapid decrease of abscisic acid concentration is required in breaking seed dormancy in Arabidopsis. New Physiol. 183 (4), 1030-1042 (2009).
  6. Yan, D., et al. NIN-like protein 8 is a master regulator of nitrate-promoted seed germination in Arabidopsis. Nat Commun. 7, 13179(2016).
  7. Yan, D., Duermeyer, L., Leoveanu, C., Nambara, E. The functions of the endosperm during seed germination. Plant Cell Physiol. 55 (9), 1521-1533 (2014).
  8. Lopes, A. M., Larkins, A. B. Endosperm origin, development, and function. Plant Cell. 5 (10), 1383-1399 (1993).
  9. Penfield, S., et al. Reserve mobilization in the Arabidopsis endosperm fuels hypocotyl elongation in the dark, is independent of abscisic acid,and requires PHOSPHOENOLPYRUVATE CARBOXYKINASE1. Plant Cell. 16 (10), 2705-2718 (2004).
  10. Leubner-Metzger, G., Fründt, C., Meins, F. Jr Effects of gibberellins, darkness and osmotica on endosperm rupture and class I β-1,3-glucanase induction in tobacco seed germination. Planta. 199, 282-288 (1996).
  11. Sargant, E. Recent work on the results of fertilization in angiosperms. Ann Bot. 14 (4), 689-712 (1900).
  12. Groot, P. S., Karssen, M. C. Gibberellins regulate seed germination in tomato by endosperm weakening: A study with gibberellin-deficient mutants. Planta. 171 (4), 525-531 (1987).
  13. Groot, P. S., Kieliszewa-Rokicka, B., Vermeer, E., Karssen, M. C. Gibberellin-induced hydrolysis of endosperm cell walls in gibberellin-deficient tomato seeds prior to radicle protrusion. Planta. 174, 500-504 (1988).
  14. Lee, P. K., Piskurewicz, U., Turečková, V., Strnad, M., Lopez-Molina, L. A seed coat bedding assay shows that RGL2-dependent release of abscisic acid by the endosperm controls embryo growth in Arabidopsis dormant seeds. Proc Natl Acad Sci USA. 107 (44), 19108-19113 (2010).
  15. Lee, P. K., et al. Spatially and genetically distinct control of seed germination by phytochromes A and B. Genes Dev. 26 (17), 1984-1996 (2012).
  16. Piskurewicz, U., Sentandreu, M., Iwasaki, M., Glauser, G., Lopez-Molina, L. The Arabidopsis endosperm is a temperature-sensing tissue that implements seed thermoinhibition through phyB. Nat Commun. 14, 1202(2023).
  17. Shinozaki, D., Takayama, E., Kawakami, N., Yoshimoto, K. Autophagy maintains endosperm quality during seed storage to preserve germination ability in Arabidopsis. Proc Natl Acad Sci USA. 121 (14), e2321612121(2024).
  18. Littlejohn, R. G., Gouveia, D. J., Edner, C., Smirnoff, N., Love, J. Perfluorodecalin enhances in vivo confocal microscopy resolution of Arabidopsis thaliana mesophyll. New Phytol. 186 (4), 1018-1025 (2010).
  19. Littlejohn, R. G., Love, J. A simple method for imaging Arabidopsis leaves using perfluorodecalin as an infiltrative imaging medium. J Vis Exp. (59), e3394(2012).
  20. Chen, M., Schwab, R., Chory, J. Characterization of the requirements for localization of phytochrome B to nuclear bodies. Proc Natl Acad Sci USA. 100 (24), 14493-14498 (2003).
  21. Matsushita, T., Mochizuki, N., Nagatani, A. Dimers of the N-terminal domain of phytochrome B are functional in the nucleus. Nature. 424 (6948), 571-574 (2003).
  22. Buskirk, V. K. E., Decker, V. P., Chen, M. Photobodies in light signaling. Plant Physiol. 158 (1), 52-60 (2012).
  23. Logan, C. D., Leaver, J. C. Mitochondria-targeted GFP highlights the heterogeneity of mitochondrial shape, size and movement within living plant cells. J Exp Bot. 51 (346), 865-871 (2000).
  24. Paszkiewicz, G., Gualberto, M. J., Benamar, A., Macherel, D., Logan, C. D. Arabidopsis seed mitochondria are bioenergetically active immediately upon imbibition and specialize via biogenesis in preparation for autotrophic growth. Plant Cell. 29 (1), 109-128 (2017).
  25. Lefebvre, V., et al. Functional analysis of Arabidopsis NCED6 and NCED9 genes indicates that ABA synthesized in the endosperm is involved in the induction of seed dormancy. Plant J. 45 (3), 309-319 (2006).
  26. Okamoto, M., et al. CYP707A1 and CYP707A2, which encode abscisic acid 8' hydroxylases, are indispensable for proper control of seed dormancy and germination in Arabidopsis. Plant Physiol. 141 (1), 97-107 (2006).
  27. Endo, A., et al. Tissue-specific transcriptome analysis reveals cell wall metabolism, flavonol biosynthesis and defense responses are activated in the endosperm of germinating Arabidopsis thaliana seeds. Plant Cell Physiol. 53 (1), 16-27 (2012).
  28. Lee, P. K., Lopez-Molina, L. A seed coat bedding assay to genetically explore in vitro how the endosperm controls seed germination in Arabidopsis thaliana. J Vis Exp. (81), e50732(2013).
  29. Uno, K., Sugimoto, N., Sato, Y. N-aryl pyrido cyanine derivatives are nuclear and organelle DNA markers for two-photon and super-resolution imaging. Nat Commun. 12, 2650(2021).
  30. Shinozaki, D., et al. Autophagy increases zinc bioavailability to avoid light-mediated reactive oxygen species production under zinc deficiency. Plant Physiol. 182 (3), 1284-1296 (2020).
  31. Laxmi, A., Pan, J., Morsy, M., Chen, R. Light plays an essential role in intracellular distribution of auxin efflux carrier PIN2 in Arabidopsis thaliana. PLOS One. 3 (1), e1510(2008).
  32. Rigal, A., Doyle, M. S., Robert, S. Live cell imaging of FM4-64, a tool for tracing the endocytic pathways in Arabidopsis root cells. Methods Mol Biol. 1242, 93-103 (2015).
  33. Shimomura, O., Johnson, H. F., Saiga, Y. Extraction, purification and properties of Aequorin, a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan, Aequorea. J Cell Comp Physiol. 59 (3), 223-239 (1962).
  34. Holzinger, A., Buchner, O., Lütz, C., Hanson, R. M. Temperature-sensitive formation of chloroplast protrusions and stromules in mesophyll cells of Arabidopsis thaliana. Protoplasma. 230, 23-30 (2007).
  35. Mano, S., et al. Distribution and characterization of peroxisomes in Arabidopsis by visualization with GFP: dynamic morphology and actin-dependent movement. Plant Cell Physiol. 43 (3), 331-341 (2002).
  36. Nelson, K. B., Cai, X., Nebenführ, A. A multicolored set of in vivo organelle markers for co-localization studies in Arabidopsis and other plants. Plant J. 51 (6), 1126-1136 (2007).
  37. Goto, C., Tamura, K., Fukao, Y., Shimada, T., Hara-Nishimura, I. The novel nuclear envelope protein KAKU4 modulates nuclear morphology in Arabidopsis. Plant Cell. 26 (5), 2143-2155 (2014).
  38. Geldner, N., et al. combinatorial analysis of membrane compartments in intact plants with a multicolor marker set. Plant J. 59 (1), 169-178 (2009).
  39. Jang, I. -C., Henriques, R., Seo, S. H., Nagatani, A., Chua, N. -H. Arabidopsis phytochrome interacting factor proteins promote phytochrome B polyubiquitination by COP1 E3 ligase in the nucleus. Plant Cell. 22 (7), 2370-2383 (2010).
  40. AI-Sady, B., Ni, W., Kircher, S., Schäfer, E., Quail, H. P. Photoactivated phytochrome induces rapid PIF3 phosphorylation prior to proteasome-mediated degradation. Mol Cell. 23 (4), 439-446 (2006).
  41. Lam, K. S., et al. BFA-induced compartments from the Golgi apparatus and trans-Golgi network/early endosome are distinct in plant cells. Plant J. 60 (5), 865-881 (2009).
  42. Yoshimoto, K., et al. Processing of ATG8s, ubiquitin-like proteins, and their deconjugation by ATG4s are essential for plant autophagy. Plant Cell. 16 (11), 2967-2983 (2004).
  43. Xu, G., Zhang, X. Mechanisms controlling seed size by early endosperm development. Seed Biol. 2, 1(2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

B t n Dokular n Haz rlanmasCanl H cre G r nt lemeTohum imlenmesiStereo MikroskopFloresan Protein G r nt lemeMitokondriyal MobiliteTohum Diseksiyonu

İlgili makaleler