Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis ve Ureaplasma urealyticum'un RNA Amplifikasyon Yanal Akış Testi ile Hızlı Tanımlanması

698 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/68413

⸱

20 Haziran 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First People's Hospital of Foshan

Bu makalede

Özet

Burada, RNA amplifikasyonu yanal akış testini gösteren bir protokol sunuyoruz ve Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis ve Ureaplasmaurealyticum'u hızlı bir şekilde tespit etmek için etkinliği değerlendiriyoruz.

Özet

Neisseria gonorrhoeae (NG), Chlamydia trachomatis (BT) ve Ureaplasma urealyticum (UU), cinsel yolla bulaşan hastalıklar (STD'ler) ile ilişkili yaygın patojenlerdir. NG, epididimit, prostatit, servisit ve kısırlık dahil olmak üzere genitoüriner sistemin çeşitli bozukluklarına neden olabilen gonore etkenidir. BT, non-gonokok üretrit ve pelvik inflamatuar hastalıktan sorumlu bir mikroorganizmadır. UU, non-gonokokal üretrit, servisit, prostatit ve infertilite ile ilişkilidir. NG, CT ve UU analizi için mevcut moleküler teknolojiler genellikle karmaşık ve zaman alıcıdır. Bu patojenler için hızlı moleküler testler, cinsel yolla bulaşan hastalıkların erken teşhisini kolaylaştırabilir. RNA amplifikasyon yanal akış testi (RGT), nükleik asit ekstraksiyonu gerektirmeyen bir yöntemdir. Bu işlemde, numuneler nükleik asit parçalarını serbest bırakmak için parçalanır ve bunlar daha sonra ters transkripsiyon ve transkripsiyon yoluyla amplifiye edilir. Amplifiye edilmiş RNA ürünü, görünür bantlar üretmek için yanal akış yoluyla bir nitroselüloz membran üzerinde hareketsiz hale getirilebilen bir RNA algılama probu-altın prob kompleksi oluşturan spesifik problar tarafından tanınır ve yakalanır. Tüm prosedür 1 saatten az sürer. Bu çalışmanın amacı, NG, BT ve UU'nun hızlı tespiti için RGT'nin etkinliğini değerlendirmektir. Toplam 1.416 örnek dahil edildi. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) floresan sondalama yöntemine kıyasla RGT ile analiz edildiğinde NG, CT ve UU'nun tutarlılığı sırasıyla %99.03 (307/310), %99.38 (159/160) ve %99.02 (303/306) idi. RGT ile analiz edildiğinde NG, BT ve UU'nun gen dizilemesine kıyasla tutarlılığı sırasıyla %99.17 (238/240), %98.95 (188/190) ve %98.30 (173/176) idi. Patojen izolasyon kültürü yöntemi ile karşılaştırıldığında, NG, BT ve UU testleri için tespit oranları %100.00 idi (9/9, 17/17, 8/8). Yüksek hassasiyet ve özgüllük, kullanım kolaylığı ve azaltılmış zaman gereksinimleri, bu testi NG, CT ve UU'nun hızlı ve doğru tespiti için ideal hale getirir.

Giriş

Cinsel yolla bulaşan enfeksiyonlar (CYBE), ciddi genital ve üreme morbidite ve mortalitesine yol açan önemli küresel halk sağlığı sorunlarını temsil eder1. Neisseria gonorrhoeae (NG), gonore hastalığının etken maddesidir ve dünya çapında yılda yaklaşık 87 milyon yeni vaka bildirilmektedir2. Bu patojen öncelikle ürogenital sisteminkolumnar epitelini istila ederek iltihaplanmaya neden olur 3. Başka bir mikroorganizma olan Chlamydia trachomatis (BT), gonokok dışı üretrit ve pelvik enfeksiyonlardan sorumludur ve her yıl yaklaşık 130 milyon yeni vakaya neden olmaktadır4. En basit ve en küçük kendi kendini kopyalayan hücre olan Ureaplasma urealyticum (UU), hasarlı servikal dokuyu kolayca istila eder ve gonokok dışı üretrit, servisit, prostatit ve kısırlık ile ilişkilidir5. Bu enfeksiyonların tümü hem kadın hem de erkek hastalarda sıklıkla asemptomatiktir, ancak derhal tedavi edilmezse ciddi komplikasyonlara yol açabilir. Maternal enfeksiyonlar, ölü doğum, düşük, erken doğum ve doğrudan fetal enfeksiyon dahil olmak üzere ciddi olumsuz gebelik sonuçlarına neden olabilir6. Bu nedenle, patojen tespiti için hızlı, hassas, spesifik ve kullanıcı dostu bir yöntemin geliştirilmesi büyük önem taşımaktadır.

Patojenlerin hızlı ve doğru tespiti, etkili hastalık teşhisi ve yönetimi için kritik öneme sahiptir. Patojenlerin izolasyonu, kültürü ve tanımlanmasını gerektiren geleneksel kültür yöntemleri, zaman alıcı ve düşük duyarlılığa sahip olma gibi önemli dezavantajlara sahiptir. Gen dizilimi yüksek bir doğruluk oranına sahip olmasına rağmen, karmaşık bir ortam ve ekipman gerektirir, bu da onu maliyetli ve aynı zamanda zaman alıcı hale getirir. NG, CT ve UU analizi için geleneksel moleküler teknolojiler yaygın olarak kabul görmüştür; Bununla birlikte, bu yöntemler genellikle karmaşık ve zaman alıcıdır, karmaşık enstrümantasyon, eğitimli teknisyenler ve uzun işlem süreleri gerektirir. Bu nedenle, konvansiyonel yaklaşımların sınırlamalarını ele almak için basit ve güvenilir bir moleküler tanı yöntemine acil bir ihtiyaç vardır. RNA amplifikasyon yanal akış testi (RGT), karmaşık prosedürlere ihtiyaç duymadan hızlı, hassas ve spesifik bir alternatif sunar 7,8. Bu yöntemde, numuneler, nükleik asit ekstraksiyonu olmadan nükleik asit fragmanlarını serbest bırakmak için doğrudan parçalanır ve bu fragmanlar, ters transkripsiyon ve transkripsiyon yoluyla amplifiye edilir. Amplifiye edilmiş RNA ürünü daha sonra spesifik problar tarafından tanınır ve yakalanır, bu da görünür bantlar9 oluşturmak için yanal akış yoluyla bir nitroselüloz membran üzerinde hareketsiz hale getirilebilen bir RNA algılama probu-altın prob kompleksi oluşturur. Tüm süreç 1 saatten az sürer ve bu da onu acil laboratuvar testleri için son derece uygun hale getirir.

Bu çalışmada, NG, CT ve UU'nun tespiti için RGT kullanımını değerlendirmek üzere 1,416 örneği işe aldık. Örnekler RGT, PCR floresan sondalama, gen dizileme ve patojen izolasyon kültürü yöntemleri kullanılarak analiz edildi. Sonuçlar, RGT yönteminin doğru ve konvansiyonel tanı yöntemleriyle tutarlı olduğunu gösterdi. Sonuç olarak, yüksek duyarlılık ve özgüllük, kullanım kolaylığı ve azaltılmış zaman gereksinimleri, bu testi NG, BT ve UU'nun hızlı ve doğru tespiti için ideal hale getirmekte ve cinsel yolla bulaşan hastalıkların ön tıbbi tanısında umut verici bir uygulama olduğunu göstermektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışma, Çin'in Guangdong Eyaleti, Foshan Birinci Halk Hastanesi Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından verilen etik yönergelere ve onaya uygun olarak yürütülmüştür (Etik İnceleme Belge No. LR (2025) 136). Toplam 1.416 genital sürüntü örneği (716'sı kadın hastalardan, 700'ü erkek hastalardan), önceki 14 gün içinde antibiyotik tedavisi görmemiş olan cinsel yolla bulaşan hastalıklardan klinik olarak şüphelenilen kişilerden prospektif olarak toplanmıştır (Ek Tablo 1). Her katılımcı için, eşleştirilmiş sürüntüler aynı anda elde edildi ve paralel olarak analiz edildi: biri test yöntemi (RGT) ve diğeri referans yöntemle (sırasıyla PCR floresan sondalama, gen dizilimi ve patojen izolasyon kültürü). Yöntemler arası uyum, Cohen'in Kappa katsayısı (κ) kullanılarak, yorumlama Landis ve Koch'un kriterlerine göre yönlendirilerek ölçüldü.

NOT: CT ve UU için tahlil protokolü, patojene özgü reaktiflerle sınırlı modifikasyonlarla, NG için tarif edilenlerle aynı prosedür adımlarını takip eder. Ayrıntılı reaktif formülasyonları adım 2.1'de verilmiştir (Ek Tablo 2, Ek Tablo 3 ve Ek Tablo 4).

1. Örnek toplama

  1. Uygulanabilir numune tipi: Genital sürüntüleri toplayın (kadın servikal sürüntüsü, erkek üretral sürüntüsü).
  2. Örnek toplama
    1. Genital swabı erkek üretral deliğine 2-3 cm veya kadın servikal deliğine yaklaşık 1-2 cm yerleştirin.
    2. Bir kez döndürün ve 10 saniye basılı tutun.
    3. Swabı çıkarın ve 1 mL normal salin içeren toplama tüpüne yerleştirin.
    4. Çubuğun kuyruğunu kırın ve atın, ardından tüp kapağını sıkın.
    5. Toplama süresini kaydedin ve testi hemen gerçekleştirin.
  3. Numune saklama ve taşıma
    1. Numuneleri oda sıcaklığında (RT) 4 saat içinde veya 2-8 °C'de bir buz torbası ile 24 saat içinde taşıyın.
    2. İşlenmiş numunelerin kalan hücre peletlerini -20 °C'de 3 ay veya testlerin zamanında yapılamaması durumunda -80 °C'de 6 aya kadar saklayın.

2. Hazırlık

  1. Reaktif
    1. NG nükleik asit tahlilinin reaktifleri için Ek Tablo 2'ye bakın.
    2. CT nükleik asit tahlili reaktifleri için Ek Tablo 3'e bakın.
    3. UU nükleik asit tahlilinin reaktifleri için Ek Tablo 4'e bakın.
    4. Depolama: Tüm reaktifleri -40 °C ila -15 °C arasındaki sıcaklıklarda ve algılama kartlarını 2 °C ila 30 °C arasındaki sıcaklıklarda saklayın.
      NOT: Amplifikasyon tamponu ve algılama çözümü, günlük algılama gereksinimlerine bağlı olarak kullanımdan önce RT'ye dengelenmelidir. RT'ye ulaştıktan sonra 4 °C'de saklanmalıdırlar ve bir sonraki algılama için kullanılabilirler. Tekrarlanan dondurma ve çözdürme işlemlerinden kaçının. Amplifikasyon enzimi, deney işlemi dışında -20 °C'de saklanmalıdır. Depolama sıcaklığındaki bir artış, enzim aktivitesinin azalmasına veya kaybolmasına neden olabilir.
  2. Deneysel ortam gereksinimleri
    1. Deneyi fiziksel olarak ayrılmış dört bölgede gerçekleştirin:
      1. Reaktif hazırlama alanı: Pozitif hava basıncıyla 22 ± 1°C'de koruyun (Yüksek verimli partikül hava (HEPA) filtreli hava akış hızı ≥ 0,3 m/s). Önceden alıntılanmış reaktifleri UV ile sterilize edilmiş dolaplarda saklayın.
      2. Numune hazırlama alanı: Tüm numune işleme işlemlerini %70 etanol ile ön işleme tabi tutulmuş Sınıf II biyolojik güvenlik kabininde gerçekleştirin.
      3. amplifikasyon alanı: Termal döngüleyicileri titreşim önleyici masalarda çalıştırın.
      4. Ürün analiz alanı: UV ile sterilize edilmiş bir tezgah kullanın (kullanım öncesi/sonrası 30 dakika maruz kalma).
    2. Çapraz kontaminasyonu önlemek için her bölümdeki personeli ve hava akışını aşağıdaki gibi düzenleyin:
      1. Reaktif hazırlamadan ürün analiz bölgelerine kadar tek yönlü hava akışını koruyun.
      2. Numune hazırlama alanında negatif basınç sağlayın (bitişik bölgelere göre -5 Pa).
      3. Personel hareketini kısıtlayın; Bölge geçişlerinden önce eldivenleri %75 etanol ile dekontamine edin.
      4. Kilitleme sistemli hava kilitli kapıları takın (açıklıklar arasında en az 30 s gecikme).
    3. Bölgeye özel sarf malzemeleri (örn. santrifüj tüpleri, pipet uçları vb.) kullanın ve sarf malzemelerini tek bir kullanımdan sonra atın.
    4. Temizliği ve kalite kontrolünü koruyun:
      1. Tezgahları her gün %10 sodyum hipoklorit ve ardından %75 etanol veya damıtılmış su ile temizleyin.
      2. Endotoksin testi (Limulus amebosit lizat testi, <0.25 EU/mL) ile tüketilebilir steriliteyi doğrulayın.
      3. Çökeltme plakaları (Triptik soya agar [TSA] agar, ≤5 koloni oluşturan birim (CFU)/4 saat maruz kaldıktan sonra plaka) kullanarak hava kalitesini haftalık olarak izleyin.
  3. Personel nitelikleri
    1. Bu deneyin doğruluğunu ve güvenilirliğini sağlamak için PCR teknolojisi ile ilgili sertifikalara veya niteliklere sahip olmak.

3. RNA'yı çıkarmak için hücreleri parçalayın

  1. Numune işleme
    1. Hücreleri sürüntü kafasından çözeltiye çıkarmak için örnek toplama tüpünü 10 saniye boyunca 2.600 kez / dakikada girdaplayın.
    2. 1000 μL'ye ayarlanmış kalibre edilmiş bir pipet kullanarak 1 mL çözeltiyi 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.
    3. 12.000 × g'da 25 °C'de 2 dakika santrifüjleyin.
    4. Peleti bozmadan süpernatanı 950 μL aspire edin. 50 μL'ye ayarlanmış 200 μL'lik kalibre edilmiş bir pipet kullanarak 10 kez yukarı ve aşağı pipetleyerek peletleri 25 μL artık çözelti içinde yeniden süspanse edin.
  2. Numune ve kalite kontrol malzemelerinin parçalanması
    1. Ön dengeleme hücre lizis tamponu ve 25 ° C'de 15 dakika boyunca negatif kontrol.
    2. Tüm tozların tüpün dibine çökelmesini sağlamak için kalite kontrol malzemelerini 1000 × g'da 25 °C'de 10 saniye boyunca santrifüjleyin.
    3. Kalite kontrol malzemelerine 30 μL lizis tamponu ve numunelere 20 μL ekleyin.
    4. 25 °C'de 10 dakika inkübe edin.
      NOT: Hücre lizis tamponunu kullanırken, iyice karıştırmak önemlidir. 15 kez pipetleyerek (200 μL uç) karıştırın ve hem partikülleri hem de sıvıyı çökeltiye ekleyin. UV ile muamele edilmiş Sınıf II biyogüvenlik kabininde pozitif kontrolü ve ardından %10 sodyum hipoklorit dekontaminasyonunu gerçekleştirin.

4. RNA izotermal amplifikasyonu

  1. Amplifikasyon tamponunun ön dengelenmesi
    1. Amplifikasyon tamponunu çözün ve 25 °C ± 1 °C'de 15 dakika dengeleyin.
  2. Kontrol kurulumu
    1. Her deneysel çalıştırmaya hem pozitif hem de negatif kontrolü dahil edin.
  3. Tüp etiketleme
    1. Amplifikasyon tüplerini numune sayısına göre etiketleyin.
  4. Reaksiyon montajı
    1. Kalibre edilmiş 20 μL'lik bir pipet kullanarak her tüpe 17 μL amplifikasyon tamponu pipetleyin. 2 μL numune veya kontrol lizatını doğrudan tampon damlacığına ekleyin.
      NOT: Lizatın tüp duvarına temas etmeden tampona girdiğinden emin olun (gerekirse 5 saniye boyunca 500 × g'da kısaca santrifüjleyin). Aerosol kontaminasyonunu önlemek için tüpleri hemen kapatın.
  5. Termal aktivasyon
    1. Tüpleri aşağıdaki program altında önceden ısıtılmış bir termal döngüleyicide inkübe edin:
      Adım 1: 2 dakika boyunca 95 °C (denatürasyon)
      Adım 2: 2 dakika boyunca 42 °C (astar tavlaması).
  6. Enzimatik amplifikasyon
    1. Her tüpe 1 μL amplifikasyon enzimi ekleyin ve tüpü 5 kez hafifçe vurarak karıştırın, ardından kısa bir santrifüjleme yapın (5 saniye boyunca 500 × g ). Tüpleri hemen 42 °C'de 45 dakika önceden ısıtılmış ikinci bir termal döngüleyiciye aktarın.
      NOT: Sıcaklık dalgalanmalarını önlemek için biri 95 °C'ye ve diğeri 42 °C'ye ayarlanmış ayrı inkübatörler kullanın. Çok numuneli çalıştırmalar için, amplifikasyon enzimini son amplifikasyon tüpüne eklerken kalan amplifikasyon tüplerini 42 °C'de tutun.

5. Yanal akış deneyi

  1. Algılama çözeltisi ön dengelemesi
    1. Algılama solüsyonunu 10 dakika boyunca 42 ° C'de inkübatöre aktarın.
  2. Homojenizasyon
    1. Algılama solüsyonunu, renk homojen olana kadar 15 saniye boyunca 2.600 kez / dk'da girdaplayın.
  3. Sıcaklık bakımı
    1. Kullanmadan önce algılama solüsyonunu 25 °C ± 2 °C'de ≤30 dakika tutun.
  4. Reaksiyon başlatma
    1. Kalibre edilmiş 20-200 μL'lik bir pipet kullanarak her amplifikasyon tüpüne 30 μL algılama solüsyonu ekleyin.
      NOT: Kabarcık oluşumunu önlemek için pipet ucu, dağıtım sırasında tüp duvarına 45°'lik bir açıyla temas etmelidir.
  5. Hibridizasyon
    1. Solüsyonu 5 kez yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın ve önceden ısıtılmış bir inkübatörde 53 °C'de 10 dakika inkübe edin.
  6. Tahlil cihazı hazırlığı
    1. Algılama kartlarını folyo torbalardan çıkarın.
      NOT: S'ye dokunmaktan kaçınınampuygulama bölgesi.
  7. Örnek uygulama
    1. Tüm karışımı 20-200 μL'lik bir pipet kullanarak algılama kartının numune portuna aktarın.
    2. Algılama kartını hemen 15 dakika boyunca 42 °C'lik bir inkübatöre yerleştirin.

6. Sonuç analizi

  1. Okuma için kontrollü ortam
    1. Sinyal yoğunluğunu stabilize etmek için görsel yorumlama sırasında algılama kartlarını önceden ısıtılmış bir inkübatörde 53 °C'de tutun.
  2. Görsel yorumlama protokolü
    1. 10-20 dakika içinde algılama kartlarındaki bantları görsel olarak inceleyerek test sonuçlarını doğrudan okuyun.
      NOT: Sonuç 20 dakika sonra geçersiz hale gelir.
  3. RGT sonuç yorumlaması için yorumlama matrisi için Ek Tablo 5'e bakın.
    NOT: Sonucun görsel olarak yorumlanması Şekil 1'de gösterilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

RGT ve PCR floresan sondalama yöntemlerinin tutarlılığı


Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışmada, NG, CT ve UU dahil olmak üzere CYBE patojenlerini tespit etmek için RGT kullanıldı. Sıkı operasyonel protokoller altında gerçekleştirildiğinde, RGT testi, PCR floresan sondalama, gen dizilimi ve patojen izolasyon kültürü teknikleri gibi yerleşik tanı yöntemleriyle güçlü bir uyum göstermiştir. RGT testinin duyarlılığı ve özgüllüğü, yerleşik kriterler10,11 ile karşılaştırmalı analizlerle kanıtlandığı gibi, daha önce b...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma için sunulan reaktifler ve teknik rehberlik için Wuhan Zhongzhi Bio-technologies Inc.'e teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
% 10 (a / h)   sodyum hipokloritLaboratuvarda hazırlanışı.Laboratuvarda hazırlık.Ekipman veya yüzeylerdeki patojenlerin dekontaminasyonu ve inaktivasyonu için seyreltilmiş ağartma çözeltisi.
% 75 (h / h) etanolAnte Food Co., Ltd (Anhui, Çin)http://www.antegroup.com/product_detail_cn/id/81.htmlYüzey dezenfeksiyonu için kullanılan sulu etanol çözeltisi
Ayarlanabilir hacimli Pipet (0.5– 10 & mu; L)DLAB Bilimsel Co., Ltd.7010101004Mikrolitre ölçekli hacimlerin doğru şekilde işlenmesi için tek kanallı mikropipet.
Ayarlanabilir Hacimli Pipet (100– 1000 μ L)DLAB Bilimsel Co., Ltd.7010101014Büyük hacimli sıvı kullanımı için kalibre edilmiş tek kanallı pipet.
Ayarlanabilir hacimli Pipet (10– 100 ve mu; L)DLAB Bilimsel Co., Ltd.7010101008Moleküler biyoloji protokollerinde yaygın olarak kullanılan, ara hacimler için optimize edilmiş tek kanallı pipet.
Ayarlanabilir Hacimli Pipet (20– 200 μ L)DLAB Bilimsel Co., Ltd.7010101009Orta hacimli transferler için tek kanallı pipet, reaktiflerin hassas bir şekilde alıntılanması için uygundur.
Biyogüvenlik kabini (HF Safe-1200)HealForce Bio-Meditech Holdings Limited (Hong Kong, Çin)HF Safe-1200Patojenik mikroorganizmaların veya hücre kültürlerinin işlenmesi sırasında personel, numune ve çevre korumasını sağlayan Sınıf II biyogüvenlik kabini.
Santrifüj TüpleriHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, Çin)Guangzhou Yuexiu Tıbbi Cihaz Dosyalama No. 20210414Nükleik asit ekstraksiyonu, hücre peletleme ve diğer laboratuvar prosedürleri için.
Chamydia trachomatis (CT) Nükleik Asit Testi (RNA Amplifikasyonu-Yanal Akış Testi)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, Çin)A.10.309-STD-RG-002Genital ve idrar yolu sürüntü örneklerinde Chamydia trachomatis nükleik asit RNA'sının kalitatif tespiti için.
CO2 İnkübatörThermo Fisher Scientific (Asheville, ABD) LLCSN:Hücre kültürü için kullanılır, kontrollü sıcaklık (37 ° C; C), optimum hücre büyümesini sağlamak için nem ve CO2 konsantrasyonu (tipik olarak %5).
Kültür Tabağı Corning Incorporated (Corning, ABD)50 mm ve akut; 9 mmYapışık hücre kültürü ve genişlemesi için.
Chamydia trachomatis'e Nükleik Asit için Tespit Kiti (CT) (PCR-Floresan Problama)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdÇin Tıbbi Cihaz Kayıt Sertifikası No. 20143402234Genital ve idrar yolu sürüntü örneklerinde Chamydia trachomatis nükleik asidinin kalitatif tespiti için.
Neisseria Gonorrhoeae'ye Nükleik Asit için Tespit Kiti (NG) (PCR-Floresan Problama)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdÇin Tıbbi Cihaz Kayıt Sertifikası No. 20173401080Genital ve idrar yolu sürüntü örneklerinde Neisseria gonorrhoeae nükleik asidinin kalitatif tespiti için.
Nükleik Asitten Ureaplasma Urealyticum'a (UU) (PCR-Floresan Problama) için Tespit KitiFosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdÇin Tıbbi Cihaz Kayıt Sertifikası No. 20173400536Genital ve idrar yolu sürüntü örneklerinde Ureaplasma Urealyticum nükleik asidinin kalitatif tespiti için.
DMEM ortamıThermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, ABD)11965092Chlamydia trachomatis kültürü için.
Filtre Pipet Uçları (10 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, Çin)TF-10-BXLDeneylerde hassas pipetleme için.
Filtre Pipet Uçları (200 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, Çin)TF-200-BXLDeneylerde hassas pipetleme için.
Genital sürüntüHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, Çin)Hz112Genital mukozal yüzeylerden klinik örnekler toplamak için steril pamuk uçlu swablar.
Gibco Fetal Sığır Serumu (FBS)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, ABD)10270106Chlamydia trachomatis kültürü için.
Cam slaytlarHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, Çin)Guangzhou Yuexiu Tıbbi Cihaz Dosyalama No. 20210414Gram boyama protokolleriyle uyumlu, hücre smear veya doku kesitleri hazırlamak için solmaya karşı önleyici işlemli standart cam slaytlar.
Goldenstar RT6 cDNA Sentez Kiti Ver2Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd (Pekin, Çin)TSK302Sİki aşamalı RT-PCR'nin ilk adımında cDNA'nın ilk zincirinin sentezi için. RNA'dan cDNA sentezi için gerekli tüm reaktifleri içerir.
Gram Leke KitiBaso Diagnostics,Inc. (Zhuhai, Çin)BA4012Neisseria Gonorrhoeae'yi ayırt etmek için kristal viyole, iyot, renk giderici ve safranin içeren bir boyama kiti.
IBM SPSS Statistics (V25.0)International Business Machines Corporation (New York, ABD)Sürüm 25.0Veri analizi için.
Kızılötesi sterilizatörHuaxixinrui (Qingdao) Analitik Cihazlar Co., Ltd.MJ-200WBiyogüvenlik kabinlerinde çapraz kontaminasyonu en aza indirerek aşılama döngülerinin veya forsepslerin anında dekontaminasyonu için.
Aşılama döngüsüBKMAM Biotechnology Co., Ltd. (Hunan, Çin)110306002Mikrobiyal numune transferi, çizgileme veya aşılama için.
Ters Mikroskop (IX-51)Olympus Corporation (Tokyo, Japonya)Labortory'nin Varlık Kodu:  71807101Kültür kaplarında yapışık hücreleri veya canlı hücre dinamiklerini gözlemlemek için.
MALDI Biotyper otomatik mikrobiyal kütle spektrometresi sistemiBruker Daltonics GmbH & Co. KG (Bremen, Almanya)Ulusal Tıbbi Cihaz İthalat Kayıt No. 20182222017Klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarında bakteri ve mantarların tür tanımlamasını sağlayan, protein profillemesi yoluyla hızlı mikrobiyal tanımlama için MALDI-TOF kütle spektrometresi tabanlı bir sistem.
McCoy hücre hatlarıLaboratuvarda korunmuştur.Laboratuvarda korunmaktadır.Chlamydia trachomatis kültürü için.
Mikroplaka Termostatik İnkübatör Leopard70-4 (4 Plaka Kapasiteli)Leaptec Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.Leopard70-4Ortam sıcaklığından 70 ° C'ye kadar bir sıcaklık aralığına sahip, 4 standart mikroplakaya kadar barındırabilen bir mikroplaka inkübatör; C,  Kuluçka adımları için kullanılır.
Mikroskop (OLYMPUS CX43)Olympus Corporation (Tokyo, Japonya)https://lifescience.evidentscientific.com.cn/zh/microscopes/upright/cx43-33/Klinik numune gözlemi için (örn. hücre morfolojisi, lekeli numuneler).
Mini Metal Banyo MiniG-R100Leaptec Bilimsel Aletler (Pekin) Co., Ltd.MiniG-R100Küçük hacimli numunelerde ısıtma, inkübasyon veya reaksiyonları sonlandırma gibi deney sırasında hızlı sıcaklık regülasyonu için.
Neisseria gonorrhoeae (NG) Nükleik Asit Testi (RNA Amplifikasyonu-Yanal Akış Testi)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, Çin)A.10.309-STD-RG-001Genital ve idrar yolu sürüntü örneklerinde Neisseria gonorrhoeae nükleik asit RNA'sının kalitatif tespiti için.
Nükleik Asit Ekstraksiyon ReaktifiWuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, Çin)A.10.105-SC-001Nükleik asitlerin ekstraksiyonu, zenginleştirilmesi ve saflaştırılması için.
Numune Taşıma OrtamıQIAGEN N.V. (Venlo, Hollanda)5128-1220Bu besiyeri, klinik örneklerin toplanması, korunması ve taşınması için özel olarak formüle edilmiştir ve Chlamydia trachomatis  ve  Neisseria gonorrhoeae  sonraki tanı testleri için.
Termostatik SantrifüjBeckman Coulter, Inc. (Brea, ABD)SN: MRZ21L037Hücre, mikrobiyal veya nükleik asit peletleme için.
TM ortaŞanghay Yihua Tıp Bilimi & Technology Co., Ltd (Şangay, Çin)Şangay Pu Tıbbi Cihaz Dosyalama No. 20140081TM ortamı, gonore teşhisine yardımcı olmak için klinik örneklerden Neisseria gonorrhoeae'nin izolasyonu, yetiştirilmesi ve tanımlanması için kullanılabilir.
Tripsin-EDTA (% 0.25)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, ABD)25200072Alt kültürleme veya deneysel prosedürler sırasında yapışık hücrelerin nazikçe ayrışması için.
Ureaplasma urealyticum (UU) Nükleik Asit Testi (RNA Amplifikasyonu-Yanal Akış Testi)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, Çin)A.10.309-STD-RG-003Genital ve idrar yolu sürüntü örneklerinde Ureaplasma Urealyticum nükleik asit RNA'sının kalitatif tespiti için.
Ureaplasma urealyticum ve Mycoplasma hominis Seçici İzolasyon Kültürü, Tanımlama ve İlaç Duyarlılık KitiHebei Zhongaisheng Biotechnology Co., Ltd.(Hebei, Çin)Hebei Tıbbi Cihaz Kayıt No. 20152400168Ureaplasma urealyticum ve Mycoplasma hominis'in seçici izolasyonu, kültürü, tanımlanması ve ilaç duyarlılığının belirlenmesi için.
Vorteks karıştırıcıXinkang Medical Instrument Co. Ltd (Jiangsu, Çin)XK80-ASıvı numuneleri hızlı çalkalama ile homojenleştirmek için laboratuvar cihazı.
300504406

Kaynaklar

  1. Hufstetler, K., Llata, E., Miele, K., Quilter, L. A. S. Clinical updates in sexually transmitted infections, 2024. J Womens Health (Larchmt). 33 (6), 827-837 (2024).
  2. Sunkavalli, A., McClure, R., Genco, C. Molecular regulatory mechanisms drive emergent pathogenetic properties of Neisseria gonorrhoeae. Microorganisms. 10 (5), 922(2022).
  3. Quillin, S. J., Seifert, H. S. Neisseria gonorrhoeae host adaptation and pathogenesis. Nat Rev Microbiol. 16 (4), 226-240 (2018).
  4. Rowley, J., et al. Chlamydia, gonorrhoea, trichomoniasis, and syphilis: global prevalence and incidence estimates, 2016. Bull World Health Organ. 97 (8), 548-562 (2016).
  5. Rittenschober-Boehm, J., et al. Intrauterine detection of Ureaplasma species after vaginal colonization in pregnancy and neonatal outcome. Neonatology. 121 (2), 187-194 (2024).
  6. Liu, T., et al. Analysis of Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium and Neisseria gonorrhoeae infections among obstetrics and gynecological outpatients in southwest China: a retrospective study. BMC Infect Dis. 22 (1), 283(2022).
  7. Song, J., Zhang, L., Zeng, L., Xu, X. Visualized lateral flow assay for dual viral RNA fragment detection. Anal Chem. 95 (30), 11187-11192 (2023).
  8. Dighe, K., Moitra, P., Alafeef, M., Gunaseelan, N., Pan, D. A rapid RNA extraction-free lateral flow assay for molecular point-of-care detection of SARS-CoV-2 augmented by chemical probes. Biosens Bioelectron. 200, 113900(2002).
  9. Liu, C. C., Yeung, C. Y., Chen, P. H., Yeh, M. K., Hou, S. Y. Salmonella detection using 16S ribosomal DNA/RNA probe-gold nanoparticles and lateral flow immunoassay. Food Chem. 141 (3), 2526-2532 (2013).
  10. Pereyre, S., Caméléna, F., Hénin, N., Berçot, B., Bébéar, C. Clinical performance of four multiplex real-time PCR kits detecting urogenital and sexually transmitted pathogens. Clin Microbiol Infect. 28 (5), 733.e7-733.e13 (2022).
  11. Morris, S. R., Bristow, C. C., Wierzbicki, M. R., et al. Performance of a single-use, rapid, point-of-care PCR device for the detection of Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, and Trichomonas vaginalis: a cross-sectional study. Lancet Infect Dis. 21 (5), 668-676 (2021).
  12. Pflüger, L. S., Nörz, D., Grunwald, M., et al. Analytical and clinical validation of a multiplex PCR assay for detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis including simultaneous LGV serotyping on an automated high-throughput PCR system. Microbiol Spectr. 12 (3), e0275623(2024).
  13. Huang, Y., et al. Droplet digital PCR (ddPCR) for the detection and quantification of Ureaplasma spp. BMC Infect Dis. 21 (1), 804(2021).
  14. Ma, Y., et al. Comparison of analytical sensitivity of DNA-based and RNA-based nucleic acid amplification tests for reproductive tract infection pathogens: implications for clinical applications. Microbiol Spectr. 11 (5), e0149723(2023).
  15. Van Der Pol, B., et al. Multicenter comparison of nucleic acid amplification tests for the diagnosis of rectal and oropharyngeal Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections. J Clin Microbiol. 60 (1), e0136321(2022).
  16. Luo, H., et al. An isothermal CRISPR-based diagnostic assay for Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis detection. Microbiol Spectr. 11 (6), e0046423(2023).
  17. Tu, Q., et al. Point-of-care detection of Neisseria gonorrhoeae based on RPA-CRISPR/Cas12a. AMB Express. 13 (1), 50(2023).
  18. Caruso, G., Giammanco, A., Virruso, R., Fasciana, T. Current and future trends in the laboratory diagnosis of sexually transmitted infections. Int J Environ Res Public Health. 18 (3), 1038(2021).
  19. Yang, J. L., et al. Comparison of an rRNA-based and DNA-based nucleic acid amplification test for the detection of Chlamydia trachomatis in trachoma. Br J Ophthalmol. 91 (3), 293-295 (2007).
  20. Luo, Z. G., Li, R. P., Wang, Y. B., Shang, X. J., Zhu, J. Y. Real-time fluorescence constant-temperature simultaneous amplification and testing of nucleic acid for detection of Mycoplasma genitalium infection in the genitourinary tract. Zhonghua Nan Ke Xue. 25 (6), Chinese 535-538 (2019).
  21. Zhang, T., et al. Light-up RNA aptamer signaling-CRISPR-Cas13a-based mix-and-read assays for profiling viable pathogenic bacteria. Biosens Bioelectron. 176, 112906(2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

H zl Molek ler TestlerCinsel Yolla Bula an Hastal klarPatojen TespitiTers TranskripsiyonGen Dizileme
Video yakında
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.