Bu protokol, tümör ve hastalık araştırmaları için uygun bir patolojik tanı platformu sağlayan, tutkal bazlı TMA yapımı için düşük maliyetli bir üretim ve verimli doğrulama yöntemini tanımlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bu protokol, tümör ve hastalık araştırmaları için uygun bir patolojik tanı platformu sağlayan, tutkal bazlı TMA yapımı için düşük maliyetli bir üretim ve verimli doğrulama yöntemini tanımlar.
Doku mikroarray teknolojisi (TMA), birden fazla doku örneğinin aynı anda tespiti ve analizi için yüksek verimli bir platformdur ve verimli tümör ve hastalık biyobelirteç araştırmalarını kolaylaştırır. Bununla birlikte, geleneksel TMA yapım yöntemleri genellikle operasyonel karmaşıklık, zaman alıcı prosedürler ve değişken doğruluk gibi sınırlamalarla karşı karşıyadır. Bu zorlukların üstesinden gelmek için tutkal bazlı bir TMA yapım yöntemi geliştirilmiştir ve gelişmiş doku çekirdeği fiksasyonu ve gelişmiş yapısal stabilite sunar. Sistematik doğrulama, histolojik değerlendirme (HE boyama), hedef proteinlerin immünohistokimyasal profillemesi ve floresan in situ hibridizasyon (FISH) analizini içeriyordu. Sonuçlar, tutkal bazlı yöntemin mükemmel dilim bütünlüğünü koruduğunu, sinyal-gürültü oranını iyileştirdiğini ve partiden partiye tutarlı tekrarlanabilirlik sağladığını gösterdi. Yaklaşım manuel operasyonla sınırlı olsa da, orta verimli TMA üretimi için güvenilir ve uygun maliyetli bir seçenek sunar. Bu yöntem, özellikle büyük ölçekli otomasyona göre esnekliğe ve örneklem çeşitliliğine değer veren araştırma ortamları için uygundur ve TMA'nın akademik ve tanısal ortamlarda faydasını genişletir.
Doku Mikrodizisi (TMA), doku örneklerinianaliz etmek için yüksek verimli bir tekniktir 1,2,3. Çoklu donör doku çekirdekleri elde edilir ve donör parafin blokları, teorik olarak aynı performans koşulları altında eşzamanlı diferansiyel ve karşılaştırmalı moleküler analiz için alıcı doku bloklarına aktarılır 2,4. Bir doku mikrodizisi (TMA) oluşturmanın klasik yolu, bir donör doku örneğinden doku çekirdeklerini çıkarmak ve bunları bir alıcı parafin bloğuna sırayla düzenlemek için bir delg....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm donör blokları, 2016 ve 2018 yılları arasında Nanjing Tıp Üniversitesi'ne bağlı Huai'an No.1 Halk Hastanesi'nde toplanan arşiv patolojik örneklerinden elde edildi. Numuneler kullanımdan önce kimliksizleştirildi ve onaylanmış protokollere uygun olarak işlendi (Nanjing Tıp Üniversitesi'ne bağlı Huai'an No.1 Halk Hastanesi etik kurulu, KY-2024-250-01).
1. Donör dokusunun değerlendirilmesi ve etiketlenmesi
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışmada, tutkal yöntemi kullanılarak yüksek kaliteli doku mikrodizileri oluşturulmuştur. Yöntemin etkinliğini doğrulamak için, H&E boyama, spesifik proteinlerin immünohistokimyasal tespiti ve floresan in situ hibridizasyon (FISH) analizi dahil olmak üzere bir dizi deney gerçekleştirildi. İnşaat sürecinin kritik bir bileşeni, görsel inceleme ile değerlendirilen, beklenen konumlarda ve birbirinden uzak mesafelerde doku çekirdek noktalarının varlığıdır. TMA bloklarının görsel olarak incelenmesi, çekirdekle.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Doku mikrodizileri (TMA) oluşturmak için yenilikçi bir yöntem olan yapıştırıcı yöntemi, yapım prosedürlerinin kolaylığı ve maliyet etkinliği nedeniyle önemli avantajlar göstermiştir. Gelişmiş aletlere14,15 dayanan geleneksel iğne dizisi yöntemiyle karşılaştırıldığında, tutkal yöntemi, yalnızca temel aletlerle yapılabilen yapıştırma yoluyla numune sabitlemesini mümkün kılar ve teknik eşiği büyük ölçüde azaltır. Geleneksel gömme yö.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Bu deneye destekleri ve katkıları için ekip üyelerine teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Meme kanseri HER2 Tespit kiti | Anbiping | 2502001 | Meme kanseri HER2 Tespit kiti |
| CDHR4 antikoru | Abcam | ab166914 | CDHR4 antikoru |
| CDK1 antikoru | Abcam | ab265590 | CDK1 antikoru |
| CRTAC1 antikoru | Abcam | ab254691 | CRTAC1 antikoru |
| DNASE1L3 antikoru | Abcam | ab203669 | DNASE1L3 antikoru |
| Gömme makinesi | PSJ MEDICAL | BM450A | Gömme makinesi |
| Tam otomatik doku kurutucu | Leica Biosystems | ASP3005 | Tam otomatik doku kurutucu |
| Cam mikroskop slaytları | Citotest | 250124A1 | Cam mikroskop slaytları |
| Tutkal | TIZO | 200 | Tutkal |
| GPR146 antikoru | Abcam | ab117104 | GPR146 antikoru |
| IGSF10 antikoru | Abcam | ab197671 | IGSF10 antikoru |
| ITIH1 antikoru | Abcam | ab233032 | ITIH1 antikoru |
| Düşük Profilli Mikrotom Bıçakları Thermo | Fisher | 3052835 | Düşük Profilli Mikrotom Bıçakları |
| Marker kalem | Deli | SK109 | Marker kalem |
| Mikrotom | Leica Biosystems | HistoCore BIOCUT | Microtome |
| Parafin mumu | Solarbio | YA0012 | Parafin mumu |
| SMAD9 antikoru | Abcam | ab262940 | SMAD9 antikoru |
| TARBP1 antikoru | Abcam | ab115896 | TARBP1 antikoru |
| ZCCHC24 antikoru | Abcam | ab88756 | ZCCHC24 antikoru |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında