Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Tek Hücreli RNA Dizilimi için Daurian Yer Sincaplarında Karaciğer Transplantasyonu Sonrası Yönetim ve Örnek Toplama

578 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/68443

⸱

16 Eylül 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Hepatic Surgery and Liver Transplantation Center of the Third Affiliated Hospital, Organ Transplantation Institute, Sun Yat-sen University; Organ Transplantation Research Center of Guangdong Province, Guangdong Province Engineering Laboratory for Transplantation Medicine, 2Guangdong Key Laboratory of Liver Disease Research, the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, 3Collage of Life Science, Shenyang Normal University, 4Institute of Organ Transplantation, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology; Key Laboratory of Organ Transplantation, Ministry of Education, Chinese Academy of Medical Sciences, NHC Key Laboratory of Organ Transplantation, 5The School of Life Science, Peking University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, Daurian yer sincabında (DGS; Spermophilus dauricus), tipik bir mevsimsel kış uykusuna yatan. Prognostik değerlendirmeler için karaciğer greftlerinin ve kan örneklerinin toplanması ve bunların tek hücre bazlı çalışmalar için işlenmesi için yöntemler içerir.

Özet

Greft fonksiyonel iyileşmesi ve greft-konak immün uyumu, karaciğer transplantasyonunu takiben önemli prognostik endişeleri temsil eder. Kritik olarak, sıçanları veya fareleri kullanan geleneksel kemirgen modelleri, koruma sırasında hipoterminin neden olduğu greft yaralanmalarının mekanizmaları hakkında sınırlı bilgi sunar. Bu boşluk alternatif modellere olan ihtiyacın altını çiziyor. Soğuğa adaptif Daurian yer sincabından (DGS; Spermophilus dauricus) uzun süreli soğuk korumayı sürdürebilir ve dolayısıyla nakil sonrası DGS'lerde yüksek hayatta kalma kabiliyetini destekleyebilir, sonuç olarak bu protokol, nakledilen DGS denekleri için gerekli olan temel ameliyat sonrası hayvan bakımını ve fizyolojik izlemeyi detaylandırır. Ayrıca, transkriptomik profilleme ve histopatolojik inceleme için tek hücreli RNA dizilimi (scRNA-seq) dahil olmak üzere, aşağı akış analitik teknikler için yüksek kaliteli karaciğer grefti örneklerinin hazırlanmasına yönelik standartlaştırılmış prosedürler sağlar. İyi hazırlanmış DGS greft örneklerinin başarılı bir şekilde üretilmesi, bu alışılmadık ancak son derece alakalı modeli incelemek için hem geleneksel hem de en son metodolojilerin uygulanmasında çok önemli bir ilk adımdır. Bu protokol, DGS için multi-omik bilgileri ele alır, böylece sadece kış uykusuna yatan kemirgenlerde değil, aynı zamanda diğer özel organizmalarda da cerrahi müdahaleler ve hastalık modellemesi üzerine gelecekteki araştırmaları kolaylaştırır.

Giriş

Son yirmi yılda, giderek daha fazla araştırmacı, kış uykusuna yatan türlerin üstün adaptasyon yeteneklerinin, biyolojik adaptasyonda yeni mekanizmaları ortaya çıkarmak için paha biçilmez fırsatlar sunduğunu ve organ koruma ve metabolik rehabilitasyon gibi çeşitli tıbbi alanlarda atılımlara ilham verebileceğini fark etti 1,2,3,4,5,6,7,8 . Bir kış uykusunda karaciğer uzun süreli soğuk koruma ve ortotopik transplantasyon için ilk kapsamlı cerrahi protokol olan Daurian yer sincabı (DGS; Spermophilus dauricus), yakın zamanda kurulmuştur. Görünüşe göre, DGS'nin soğuğa adaptif doğası, donör greftlerinin uzun süreli soğuk depolanmasına ve alıcı hayvanların transplantasyon sonrası yüksek sağkalımına olanak tanır. Bu nedenle, ameliyat sonrası hayvan iyileşmesini izlemek ve çeşitli histopatolojik ve omik çalışmalar için örnekler hazırlamak için bir takip protokolüne ihtiyaç vardır.

DGS'ler ve standart kemirgen modelleri arasındaki önemli fizyolojik farklılıklar ve alıcı hayvanlardaki karmaşık ve dinamik karaciğer nakli sonrası fizyolojik değişiklikler göz önüne alındığında, bunlardan yüksek kaliteli numuneler elde etmek, aşağı akış analizleri ve dolayısıyla nakil sonrası greft-konakçı fizyolojisinin anlaşılması için çok önemlidir. Kan ve karaciğer dokusu örneklerinin geleneksel yöntemlerle elde edilmesi, işlenmesi ve incelenmesi dışında, hepatosit olan karaciğer parankimal hücrelerinin ve endotel hücrelerini, yıldız hücrelerini, Kupffer hücrelerini ve diğer bağışıklık hücrelerini içeren parankimal olmayan hücrelerin (NPC'ler) başarılı bir şekilde ayrışması, hızla gelişen tek hücre tabanlı multi-omiklerle karmaşık post-operatif hücresel ve moleküler etkileşimlerin aydınlatılmasını sağlayacaktır. Bu amaçla, klasik kollajenaz perfüzyon bazlı yöntem 1950'lerin başından beri geliştirilmiş ve sürekli olarak rafine edilmiştir 9,10,11. Bununla birlikte, DGS karaciğerinin farklı anatomik yapısı, vasküler rekonstrüksiyona bağlı ameliyat sonrası yapışıklıklar ve karaciğer greftlerindeki ameliyatla tetiklenen fizyolojik değişikliklerin tümü, ekstraksiyon koşullarının ince ayarını gerektirir.

Bu protokol, karaciğer nakli sonrası DGS'lerde ameliyat sonrası yönetim ve örnek toplama için ayrıntılı bir kılavuz sağlar. Spesifik olarak, bu protokol, hepatositlerin karaciğer greftlerinden yüksek verim ve hücre canlılığı ile izolasyonunu sağlar ve tek hücreli RNA dizilimi (scRNA-seq) için izole edilmiş hepatositlerin müteakip işlenmesini detaylandırır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Pekin Üniversitesi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Kurumsal Komitesi (LSC-WangSQ-2) tarafından onaylandı. Bu çalışmada kullanılan DGS'ler, Zhangjiakou şehrinin otlaklarında yakalanan hamile dişi DGS'ler tarafından laboratuvarda üretildi. Deney sırasında hayvanlar yaklaşık 1-2 yaşındaydı. Donör ve alıcı olarak hem erkek hem de kadın, ağırlığı 180 g ile 400 g arasında değişen DG'ler kullanıldı. Alıcının ağırlığı, 50 g'dan daha az bir farkla, donörünkinden biraz daha fazlaydı. Kullanılan reaktifler ve ekipman Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Nakil sonrası bakım

  1. Karaciğer nakli sonrası DGS'leri sıcak ve temiz bir ortamda, 12:12 aydınlık/karanlık döngüsü altında, standart laboratuvar yemeği ve ad libitum sağlanan su ile saklayın.
  2. Vücut ağırlığını günlük olarak izleyin, karın kesiğini kanama açısından değerlendirin ve alıcının zihinsel durumunu ve aktivite seviyelerini gözlemleyin.
  3. Ameliyattan hemen sonra, 3 gün boyunca her 12 saatte bir deri altına sefuroksim (16 mg/kg) ve buprenorfin (0,05 mg/kg) enjeksiyonu uygulayın.
  4. Doku hasadından 24 saat öncesine kadar günde 1 mg / kg) intramüsküler olarak takrolimus enjekte edin.
    NOT: DGS'ler esas olarak vahşi yakalananlardan türetildiğinden, nakil immünolojik faktörleri göz ardı edilemez. DGS'ler arasında transplantasyon, allojenik transplantasyon (sinjeneik transplantasyon değil) olarak kabul edilir. Çalışmanın rejeksiyon gibi immünolojik faktörleri dışlaması gerekiyorsa, ameliyat sonrası dönemde takrolimusun standardize edildiğinden emin olun.

2. Karaciğer grefti numunesi hazırlama

  1. Çözeltilerin ve araçların hazırlanması
    1. 500 μM EGTA (Ca2+- veMg2+ içermeyen; pH 7.4) ile 50 mL HBSS hazırlayın. Kullanmadan önce 40 °C'lik bir su banyosunda önceden ısıtın.
    2. Kollajenaz IV'ü (0.4 mg / mL) 50 mL HBSS (Ca2+ veMg2+ ile) içinde çözün ve 40 °C su banyosunda 30 dakika inkübe edin.
    3. Percoll çözeltisi: Percoll'u 9:1(v/v) oranında 10× PBS ile karıştırın ve 15 mL'lik bir tüpe 9:1 (v/v) oranında 1× PBS ile seyreltin. Çözeltiyi buz üzerinde tutun.
      NOT: DGS başına 5 mL% 90 Percoll çözeltisi yeterlidir.
    4. Kullanmadan önce cerrahi aletleri 30 dakika boyunca %70 etanole batırın.
    5. Hızı ayarlanabilir peristaltik pompa, silastik boru ve su banyosundan oluşan perfüzyon sistemini monte edin. Hava kabarcıklarını temizlemek için boruyu ılık tuzlu suyla yıkayın ve boru çıkışına steril 0.22 μm'lik bir filtre takın.
      NOT: Hava kabarcıklarını temizlemeden önce, yeniden kullanılan boruyu 15 dakika boyunca %70 etanol çalıştırarak durulamak ve ardından artık etanolü ortadan kaldırmak için 15 dakika boyunca ddH2O ile tam bir durulama yapmak gerekir.
  2. Hayvan prosedürü
    1. Nakil sonrası DGS'yi 1 mL / 100 g vücut ağırlığı dozunda% 2.5 tribromoetanolün intraperitoneal enjeksiyonu ile uyuşturun. Tam anestezi sağlamak için ayak parmağı sıkışmasına tepki gibi refleks kaybı testleri yapın.
    2. Karın kürkünü tıraş edin ve DGS'yi ventral tarafı yukarı bakacak şekilde cerrahi tahtada tutun.
    3. Hayvanın karın bölgesine %70 etanol püskürtün ve ardından keskin makas ve dişli forseps ile deri ve karın zarında büyük bir çapraz kesi yaparak karın boşluğunu açın.
    4. Karaciğer grefti, portal ven (PV) ve inferior vena kava (IVC) açıkça ortaya çıkana kadar bağırsakları pamuklu çubukla karın boşluğunun sağ dışına doğru yavaşça hareket ettirin (Şekil 1A).
      NOT: Karaciğer naklini takiben karın boşluğunda ameliyat sonrası yapışıklıklar nedeniyle, nemli bir pamuklu çubuk kullanarak yapışıklıkları nazikçe inceleyin.
    5. 1-2 mL kan toplamak için anastomoz stomasının altındaki IVC'ye 5 mL'lik bir şırınga yerleştirin ve iğneyi damardan çektikten sonra hemostaz elde etmek için hemen kuru bir pamuklu çubukla delinme bölgesine hafif basınç uygulayın (Şekil 1B).
      NOT: Kanamayı en aza indirmek için iğne, yaklaşık 30 G olan 1 mL'lik bir şırıngadan bir iğne ile değiştirilebilir.
    6. Eğim yukarı yönlendirmeyle, damar yüzeyine göre 15°'lik bir açıyla 22-G'lik bir kateter kullanarak PV'yi hafifçe delin ve ardından kateterin iğnesini geri çekin. Başarılı delme onaylandıktan sonra, kanülü damar boyunca yavaşça 1-1,5 cm daha ilerletin. Vasküler bir kelepçe kullanarak kanülün konumunu sabitleyin (Şekil 1C).
      NOT: Kanül doğru yerleştirilirse, kanın geri akışı görülebilir. PV kanülasyonu başarısız olursa veya teknik zorluklarla karşılaşırsa, infrahepatik IVC'nin kanüllenmesine geçin ve PV'yi perfüzyon çıkış yolu olarak belirleyin.
    7. Perfüzyon pompasını 6-8 mL/dk'da ılık salinle çalıştırın, ardından yukarıda bahsedilen 0,22 μm filtreyi kanüle bağlayın.
    8. PV yoluyla perfüzyon başlatıldıktan sonra, kan drenajına izin vermek için IVC'de bir kesi yapın. Yeterli perfüzyon için 50-80 mL salin solüsyonu gereklidir (Şekil 1D).
      NOT: Başarılı perfüzyon, nakledilen karaciğer bu işlem sırasında soluk sarı-beyaz bir renge geçtiğinde doğrulanır. Bazı koyu kırmızı tıkanıklık alanları karaciğer yüzeyinde kalabilir ve muhtemelen iskemi-reperfüzyon hasarı gibi intraoperatif karaciğer travmasından kaynaklanarak tamamen temizlenemez.
    9. 50-80 mL ılık salin ile yeterli perfüzyondan sonra pompayı duraklatın.
    10. 2-0 ipek sütür kullanarak sol lateral lobu tabanından bağlayın, ardından ligasyon bölgesinin distalindeki lob eksizyonu. Benzer şekilde, medyan lob tabanından bağlanır ve aynı yöntem kullanılarak rezeke edilir (Şekil 1E,F).
      NOT: Parsiyel hepatektomi, nakledilen karaciğerin çoklu deneysel amaçlar için kullanımını en üst düzeye çıkarmak ve karaciğerin tam sindirimini kolaylaştırırken kollajenaz tamponu tüketimini azaltmak için yapılır.
    11. Rezeke edilen karaciğer dokusunu birkaç parçaya bölün: bir kısım NPC izolasyonu için kullanılır, ardından scRNA-seq kullanılır, diğer kısımlar histolojik kesit için %4 paraformaldehit içinde sabitlenir veya diğer deneyler için sıvı nitrojen içinde dondurulur.
      NOT: Adım 2.2.11, zamandan tasarruf etmek için sonraki adımlarla aynı anda başka bir kişi tarafından gerçekleştirilebilir.
    12. NPC'lerin izolasyonu. Dokuları RPMI-1640 ortamında yaklaşık 1-2 mm3 parçaya bölün ve üreticinin talimatlarına göre gentleMACS ile enzimatik olarak sindirilin (bkz. Hücre canlılığı ve hücre konsantrasyonu, otomatik bir hücre sayacı kullanılarak belirlendi.
      NOT: Adım 2.2.12 ve adım 2.2.13-2.3.5 aynı anda devam eder.
    13. Diyaframı kesin ve suprahepatik IVC'yi klempleyin (Şekil 1G).
    14. Giriş borusunu önceden ısıtılmış EGTA tamponuna aktarın. Pompayı 6-8 mL/dk hızında yeniden başlatın.
    15. Hepatik parankim boyunca düzgün perfüzyon çözeltisi dağılımını kolaylaştırmak için IVC'yi 5-10 saniye boyunca periyodik olarak kelepçeleyin. Karaciğer klempleme sırasında gözle görülür şekilde şişer ve serbest bırakıldığında gevşer.
      NOT: Uzun süreli tıkanıklık, karaciğeri çevreleyen ince bağ dokusunu yırtma, hepatik kılcal yataktaki perfüzyonu veya sıvı dinamiğini bozma riski taşıdığından, uzun süreli drenaj kesintisinden kaçınmak çok önemlidir. Ayrıca, sürekli tıkanıklık, hücre canlılığını tehlikeye atabilir ve hepatositin mekanik kuvvetlere duyarlılığı nedeniyle verimi azaltabilir.
    16. 40-50 mL EGTA çözeltisi ile perfüzyonu takiben, 8-10 dakika boyunca 4-6 mL / dk hızında kollajenaz tampon perfüzyonunu başlatın. Atık kan damarını yukarıdaki adımlarda olduğu gibi kısaca klempleyin (Şekil 1H).
      NOT: 5-6 dakikalık kollajenaz perfüzyonundan sonra karaciğer gözle görülür şekilde yumuşar ve yüzey çatlakları ortaya çıkar. Bu morfolojik değişiklikler yoksa perfüzyon hızını 3-4 mL/dk'ya düşürün ve toplam sindirim süresini 12-13 dk'ya uzatın. 50 mL kollajenaz perfüzyonunun tamamlanmasının ardından karaciğer, yeterli sindirimin bir göstergesi olan gevrek, tofu benzeri bir kıvam sergiler (Şekil 1I).
    17. Pompayı durdurun ve kanülü çıkarın. Karaciğeri vücuttan kesin, 10 mL buz gibi soğuk DMEM/F12 ortamı ile 5 cm'lik bir kaba koyun.
  3. Hepatosit saflaştırma
    1. Hücreleri serbest bırakmak için karaciğeri yırtın ve hücre solüsyonunu üstüne 70 μm'lik bir filtre yerleştirilmiş 50 mL'lik bir koniğe aktarın.
    2. Hücre süspansiyonunu 4 °C'de 3 dakika boyunca 50 x g'da santrifüjledikten sonra, süpernatanı atın ve peleti 20 mL 1× PBS ile yeniden süspanse edin. Bu adımı 3 kez tekrarlayın. Son santrifüjlemeden sonra hücre peletini 5 mL DMEM/F12 ortamı ile yeniden süspanse edin.
    3. Hücre süspansiyonunu 15 mL'lik bir tüpte eşit hacimde% 90 Percoll çözeltisi ile hafifçe karıştırın. 4 °C'de 10 dakika boyunca 200 x g'da santrifüjleyin.
      NOT: Percoll santrifüjlemesinden sonra, karışım üç ayrı katmana ayrılır: üst katman (yaklaşık 0.5-1 mL) ölü hücreler içerirken, canlı hepatositler alt katmanda (yaklaşık 0.5-0.8 mL) yoğunlaşır (Şekil 2). Bu protokolle tipik olarak %>80 canlılığa sahip 5-8 ×10 7 canlı hepatosit verimi elde edilir. (Şekil 3A,B).
    4. Ölü hücreleri ve süpernatanı dikkatlice aspire edin, katmanların kuvvetli bir şekilde bozulmasından kaçının ve canlı hücreleri 10 mL DMEM/F12 ortamı ile yeniden süspanse edin. 4 °C'de 5 dakika boyunca 50 x g'da santrifüjleyin.
    5. Süpernatanı atın ve saflaştırılmış hepatositleri, %2 fetal sığır serumu ile desteklenmiş 1-5 mL 1× PBS ile 500-1200 hücre / μL'lik bir nihai konsantrasyona kadar yeniden süspanse edin.
    6. Hepatositleri ve NPC'leri 1:1 miktar oranında karıştırın, yani hücre süspansiyonu 10.000 hepatosit ve 10.000 NPC'nin karıştırılmasıyla hazırlandı.
  4. ScRNA dizisi
    NOT: Adım 2.4.1-2.4.3, damlacık bazlı tek hücreli 3' gen ekspresyonu kütüphanesi hazırlama kiti12'nin kullanıcı kılavuzuna göre gerçekleştirilmiştir. Jel boncuk içinde emülsiyon (GEM) üretimi, cDNA kütüphanesi oluşturma ve standart protokolleri takip eden Illumina dizilemenin kritik adımlarını kapsayan damlacık bazlı mikroakışkan tek hücreli bölümleme ve barkodlama platformu kullanıldı.
    1. GEM üretimi ve barkodlama yapmak için 20.000 hepatosit ve NPC içeren bir hücre süspansiyonu kullanın. Hücre yakalama verimliliği %60'tan az değildir.
    2. cDNA amplifikasyonu için, GEM-RT sonrası numuneleri kullanım kılavuzunagöre temizleyin 12.
    3. Kütüphane inşaatı
    4. Örnek başına 150 Gb derinlik elde etmek için bir dizileme platformu kullanarak tek hücreli RNA kitaplıklarını sıralayın; Cell Ranger (v8.0.0) kullanarak ham temel çağrı dosyalarını FASTQ dosyalarına ayrıştırın.
    5. Ekspresyon ölçümü için FASTQ dosyalarını Ictidomys tridecemlineatus genomuna (NCBI erişimi: GCF_016881025.1) hizalayın ve deneysel iş akışını tamamlayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

4 °C'de 24 saat saklanan ve DGS'ye nakledilen greftlerin histolojik incelemesinde, postoperatif 3. ve 6. günlerde sham ile ameliyat edilen grupla karşılaştırılabilir şekilde minimal inflamasyon, nekroz veya kolestaz belirtileri ile normal karaciğer lobül mimarisi ortaya çıktı (Şekil 4A-C).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

DGS'lerde donör karaciğerinin soğuk korunmasını ve transplantasyonunu tanımlayan protokolü takiben, burada açıklanan prosedürler, en az 24 saat boyunca soğuk depolanmış bir karaciğer ile nakledilen DGS'lerin ameliyat sonrası izlenmesini ve özel farmakolojik yönetimini detaylandırmaktadır. Bu protokol, alıcının transplantasyondan 7 gün sonra hayatta kalmasını sağlar ve kış uykusuna yatanların organ koruma13,14 ve transplantasyon i...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların beyan edecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Bulaşıcı Olmayan Kronik Hastalıklar-Ulusal Bilim ve Teknoloji Büyük Projesi (2023ZD0507600), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Hibeleri (82170671, 92254301, 32230048, 82371794, 32301306), Ulusal Ar-Ge Programı (2024YFA0916804) ve Zhejiang Üniversitesi Eğitim Vakfı Akademisyeni Shusen Lanjuan Yetenek Vakfı tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1&kez; PBSHizmet biyografisiG4202 Serisi
10&kez; PBSHizmet biyografisiG4207 Serisi
%4 ParaformaldehitBiyokeskinBL539A
BuprenorfinShafei DiliH12020276
Kanül (22 G)BBRAUN4254090B
SefuroksimSelleckE4838
Hücre kültürü kabı (60 mm)YUVA705001
Kollajenaz IVSigma-AldrichC5138 (İngilizce)
Konik tüp (15 mL)YUVA601052
Konik tüp (50 mL)YUVA602052
Pamuklu çubukEv gereçleri mağazası
Countstar Otomatik Hücre SayımıRuiyuKont Yıldızı Rigel S2
DMEM/F12GibicoC11330500BT
EGTASigma-AldrichE4378 (İngilizce)
FBS'ninGibco10099-141
Filtre (0.22 μ m)Merck MilliporeSLGP033RB
Filtre (70 μ m)Biyoloji15-1070
nazik MAC'lerMiltenyi130-093-235
HBSS (Ca2+ ve Mg2+ ile)Hizmet biyografisiG4204 Serisi
HBSS (Ca2+ ve Mg2+ olmadan)Hizmet biyografisiG4203 Serisi
NPC'lerin ayrışma kitiMiltenyi130-096-730
PercollCytiva17-0891-09
Peristaltik pompaYuyanBT100 Serisi
RPMI-1640 SerisiGibicoC11875500BT
TuzluSRBSRB009 Serisi
SequencerIllumina NovaSeq X Artı
Silastik boruTygonE-3603 Hakkında
İpek sütürETİKONSA845G
Şırınga (1 mL)Lige BilimiLG05-124 SerisiSadece şırınga iğnesine ihtiyaç duyulacaktır
Şırınga (2 mL)Lige BilimiLG05-124 SerisiSadece şırınga variline ihtiyaç duyulacaktır
TakrolimusSelleckS5003 Serisi
Transfer pipetiBiyoloji30-0138A1
Tribromoetil alkolSigma-AldrichT48402 Serisi
Su banyosuBahşetmekSAP2

Kaynaklar

  1. Ou, J., et al. IPSCs from a hibernator provide a platform for studying cold adaptation and its potential medical applications. Cell. 173 (4), 851-863 (2018).
  2. Zhang, X., et al. 5-aminolevulinate improves metabolic recovery and cell survival of the liver following cold preservation. Theranostics. 12 (6), 2908-2927 (2022).
  3. Zhang, X., et al. Cold-induced Foxo1 nuclear transport aids cold survival and tissue storage. Nat Commun. 15 (1), 2859(2024).
  4. Zhang, L., et al. Cross-species metabolomic profiling reveals phosphocholine-mediated liver protection from cold and ischemia/reperfusion. Am J Transplant. 24 (11), 1979-1993 (2024).
  5. Chen, L., et al. Synergy of 5-aminolevulinate supplement and cx3cr1 suppression promotes liver regeneration via elevated igf-1 signaling. Cell Rep. 42 (8), 112984(2023).
  6. Arnold, C. Hibernation science harnessed to treat obesity and modify metabolism. Nat Med. 30 (10), 2700-2703 (2024).
  7. Bao, Z., et al. Fatty acid metabolization and insulin regulation prevent liver injury from lipid accumulation in Himalayan marmots. Cell Rep. 42 (7), 112718(2023).
  8. Carey, H. V., Andrews, M. T., Martin, S. L. Mammalian hibernation: Cellular and molecular responses to depressed metabolism and low temperature. Physiol Rev. 83 (4), 1153-1181 (2003).
  9. Miller, L. L., Bly, C. G., Watson, M. L., Bale, W. F. The dominant role of the liver in plasma protein synthesis; a direct study of the isolated perfused rat liver with the aid of lysine-epsilon-c14. J Exp Med. 94 (5), 431-453 (1951).
  10. Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. Isolation and primary culture of rat hepatic Cells. J Vis Exp. (64), e3917(2012).
  11. Breuer, E., Humar, B. Isolation of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice. J Vis Exp. (190), e64493(2022).
  12. User guides. , X Genomics. https://cdn.10xgenomics.com/image/upload/v1725314293/support-documents/CG000731_ChromiumGEM-X_SingleCell3v4_UserGuide_RevB.pdf (2024).
  13. Hadj-Moussa, H., Storey, K. B. Bringing nature back: Using hibernation to reboot organ preservation. FEBS J. 286 (6), 1094-1100 (2019).
  14. Ratigan, E. D., McKay, D. B. Exploring principles of hibernation for organ preservation. Transplant Rev (Orlando). 30 (1), 13-19 (2016).
  15. Merriman, D. K., Lahvis, G., Jooss, M., Gesicki, J. A., Schill, K. Current practices in a captive breeding colony of 13-lined ground squirrels (Ictidomys tridecemlineatus). Lab Anim (NY). 41 (11), 315-325 (2012).
  16. Vaughan, D. K., Gruber, A. R., Michalski, M. L., Seidling, J., Schlink, S. Capture, care, and captive breeding of 13-lined ground squirrels, Spermophilus tridecemlineatus. Lab Anim (NY). 35 (4), 33-40 (2006).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Daurian Yer SincabGreft Fonksiyonel yile mesimm nokompatibiliteSo uk KorumaCerrahi Sonras Bak mFizyolojik zlemeTranskriptomik ProfillemeHistopatolojik nceleme

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.